The evaluation of olive oil antioxidants, hydroxytyrosol and tyrosol, in vivo biological activities is challenged due to scarce data on their metabolic disposition and activities of their glucuronides, main metabolites found in humans in different biological matrices after olive oil consumption. In addition, the in vivo gene expression activity of virgin olive oil (VOO) as a dietary component has been never investigated in humans.Therefore, this Thesis was focused on three main aspects: (i) analysis of bioavailability of hydroxytyrosol and tyrosol glucuronides in humans; (ii) evaluation of the impact of glucuronidation on antioxidant activities of olive oil phenolics; and (iii) identification mechanisms underlying beneficial action of VOO analyzing induced in vivo transcriptome response in humans. To complete with the objectives, the glucuroconjugated standards, required for bioavailability and antioxidant activities studies were synthesized, and the preparative methodological studies for VOO-transcriptomic experiment were carried out. As a result of experimental work performed within this Dissertation, the glucuronidation was shown to account for 75% of recovered in urine olive oil phenols, and to have negative impact on their antioxidants activities, diminishing their free radical and inhibitory against LDL oxidation activities. The transcriptome studies revealed 10 genes as potential targets of VOO action against atherosclerosis.La avaluació in vivo de les activitats biològiques dels polifenols del oli d'oliva (OVV) hidroxitirosol i tirosol es un repte degut a les dades molt limitades que tenim de la seva depuració metabòlica i de les activitats biològiques dels seus principals metabòlits en matrius biològiques: els seus glucuronoconjugats. A més a més s'ha avaluat l'expressió gènica induïda en humans per la ingesta de OOV. Així la present tesi doctoral s'ha focalitzat en els següents aspectes: l'avaluació de la biodisponibilitat del hidroxitirosol i tirosol en humans; l'impacte de la glucuronoconjugació sobre les activitats antioxidants dels polifenols del OOV; i la identificació dels mecanismes subjacents a las accions benèfiques per la salut humana, analitzant la resposta transcriptòmica in vivo resultant de la ingesta OOV. Per complir amb els objectius de la tesi, ha estat necessari, sintetitzar patrons dels glucurònids i realitzar diversos estudis metodològics per tal d'estandarditzar l'avaluació de l'expressió gènica. S'ha demostrat que la glucuronoconjugació es un 75% dels polifenols recuperats en orina i que aquesta comporta la pèrdua de la capacitat bescanviadora de radicals i de la seva capacitat antioxidant (test ex-vivo d'oxidació de la LDL i DPPH). Els estudis transcriptòmics han detectat 10 gens rellevants pels efectes antiateroscleròtics induïts per OVV.

Mesoamerica is one of the main centers of New World civilization. It represents today a large geographical area exhibiting one of the highest genetic, cultural, and archeological diversity in the Americas. Moreover, its geographic position has been a key factor for acting as a natural corridor between North and Central-South America, thus becoming a direct witness not only of the initial and subsequent human migration waves but also of the many civilizations that flourished later on. Therefore, Mesoamerica deserves special attention in the study of American history. Following a molecular anthropological approach, this thesis evaluates the genetic diversity of a representative sample of the extant Native American gene pool within Mexico, and by constructing continental datasets, it also intends to contribute to the reconstruction of Mesoamerican history and the peopling of the Americas. For that purpose, this work focuses on the study of uniparental markers located in the human mitochondrial DNA and Y-chromosome, which constitutes the main part of the analyses. Additionally, autosomal STR variation, linguistic diversity, and ethnographic data were also investigated. Our results, based on both mtDNA and Y-chromosome, show a clear differentiation of the Native Mexican groups that belong to Mesoamerica, suggesting that population dynamcs occurring within this cultural area were unique during the America's colonization process and thus uniquely shaped the native Mexican genome. / Mesoamerica merece especial atención dentro del estudio de la historia del Nuevo Mundo debido a que es una de las principales áreas geográficas con mayor diversidad genética, cultural y arqueológica en América. Un factor clave es su posición geográfica, ya que ha actuado como un corredor natural de unión entre Norte y Centro-Suramérica, convirtiéndose en testigo directo no solo de las primeras y subsecuentes oleadas migratorias, sino también del posterior florecimiento de grandes civilizaciones mesoamericanas. Siguiendo un enfoque antropomolecular, la presente tesis doctoral evalúa la diversidad genética de una muestra representativa del pool genético actual de las poblaciones nativas de México. Asi mismo, por medio de la construcción de bases de datos a nivel continental, pretende contribuir a la reconstrucción de la historia Mesoamericana y del Poblamiento de América. Con este objetivo, se analizaron marcadores uniparentales localizados en el ADN mitocondrial y el cromosoma Y, lo cual constituye el principal componente del trabajo. Complementarianente, también se analizó la variabilidad observada a nivel de STRs autosómicos, clasificacion lingüística y caracterisitcas etnográficas, lo cual aporta un enfoque multidisciplinario a la investigación. Nuestros resultados, basados tanto en ADNmt como en cromosoma Y, muestran una clara diferenciacion de los grupos nativos pertenecientes a Mesoamerica en comparacion con el resto, sugieriendo la presencia de una dinámica poblacional única y enfatizando la relevancia de esta área cultural en el proceso de colonización de América.

La aplicación de pesticidas en el Delta del Ebro (NE de España) durante el periodo de cultivo de arroz se ha asociado a episodios de mortalidad de ostras (Crassostrea gigas) que ocurren anualmente durante la primavera. Sin embargo no hay estudios previos que hayan realizado una evaluación directa de los niveles de pesticidas en agua y efectos en las ostras cultivadas en las bahías del Delta del Ebro. En el presente trabajo de Tesis, se monitorizaron parámetros físico-químicos y contenido de pesticidas en agua, el contenido de metales pesados en ostras y hasta 19 marcadores bioquímicos en ostras transplantadas durante el periodo de máxima aplicación de pesticidas (de Mayo a Junio) en dos años consecutivos (2008 y 2009) con el objetivo de establecer posibles conexiones entre ellos y con los episodios de mortalidad de las ostras. Los resultados de los niveles de metales en las ostras son similares a los encontrados en zonas no contaminadas indicando que los metales presentes en el agua de las bahías son bajos. Los patrones de acumulación de metales diferenciaron dos fuentes de contaminación: una procedente de las actividades agrícolas dentro del propio Delta del Ebro para el As, Cu, Zn y otra procedente del río Ebro, relativa a las actividades industriales aguas arriba (Hg y Pb) o al plomo procedente de las actividades cinegéticas (Pb). Los niveles de pesticidas encontrados en el agua de las bahías, fueron elevados y similares a los encontrados en áreas impactadas por lo que se estudió su relación con las respuestas fisiológicas observadas en las ostras. Las actividades de las colinesterasas analizadas en branquias se mostraron invariables en el tiempo y puntos de muestreo lo que indicó una escasa sensibilidad a la presencia de pesticidas organofosforados y carbamatos en agua. Sin embargo la actividad de la carboxilesterasa en branquias se mostró correlacionada con los residuos de pesticidas organofosforados y carbamatos presentes en agua pudiéndose considerar un buen indicador de exposición a pesticidas anticolinérgicos en ostras. Las respuestas de los biomarcadores estudiados evidenciaron claras diferencias entre las ostras en los dos años de estudio. En el año 2009 las ostras mostraron sus defensas antioxidantes inalteradas desde principios de Mayo hasta finales de Junio y como consecuencia presentaron mayores daños en los tejidos (medidos como peroxidación de lípidos y niveles de liposfucina) y mayores tasas de mortalidad. Sin embargo las ostras en 2008, aumentaron sus defensas antioxidantes de Mayo a Junio y presentaron bajos niveles de peroxidación de lípidos, daños en el ADN y bajas tasas de mortalidad. Algunos pesticidas en agua como la bentazona y el propanil junto con las altas temperaturas y niveles de salinidad se relacionaron con los daños en los tejidos de ostras pero las grandes diferencias entre los dos años y la alta tasa de mortalidad registrada en el año 2009 parecen indicar que además de los factores abióticos podrían estar afectando otros factores como el uso de ostras sensibles a las enfermedades. Resultados obtenidos en el Institut de Recerca de Sant Carles de la Ràpita (IRTA) confirmaron una mayor incidencia de infecciones víricas en ostras en el 2009 lo que apoya la hipótesis de que la combinación de factores abióticos junto con una mayor propensión a las enfermedades fueron las causas de las mortalidades registradas en el 2009. / The use of pesticides in the Ebro Delta has been associated to Crassostrea gigas mortality. In the present Thesis physico-chemical parameter and pesticide levels in water, together with a battery of biomarkers and metal body burdens in oysters were monitored in oysters transplanted from May to June in 2008 and 2009 with the aim of establishing possible connections between them and the mortality of oysters. Metal accumulation patterns differed two sources: one from agricultural activities, (for As, Cu, Zn )and the another from industrial activities in the upper part of the Ebro River (Hg and Pb) or from hunting activities (Pb). Carboxylesterase activity in gills showed to be a good indicator of exposure to anticholinergic pesticides in oysters. Biomarkers responses evidenced clear differences between years. Oysters transplanted in 2008 increased their antioxidant defences from May to June and presented low oxidative damage and mortality rates. Conversely oysters transplanted in 2009 showed unaffected antioxidant defences from May to June and consequently increased levels of tissue damage and mortality rates. Bentazone and propanil together with high temperatures and salinity levels were related with tissue damage in oysters but the observed large differences between years and the high mortalities in 2009 suggest that in addition to abiotic factors, other factors such as the use of oysters susceptible to diseases could be affecting.

La eritropoyetina o EPO es una hormona glicoproteica. En los seres humanos adultos, se produce principalmente en el riñón, en respuesta a la reducción de oxígeno en los tejidos (hipoxia tisular). La EPO estimula la eritropoyesis, es decir, estimula a las células madre de la médula ósea para que aumenten la producción de eritrocitos. La molécula de EPO está formada por una cadena peptídica de 165 aminoácidos que contiene dos puentes disulfuro, un O-glicano (Ser-126), y tres N-glicanos (Asn-24, 38, 83). En conjunto, la glicosilación de esta proteína representa aproximadamente el 40% del peso total (29.4 kDa). La EPO sintetizada con tecnología recombinante (rEPO) se administra como fármaco, desde el año 1989, para el tratamiento de anemias, insuficiencia renal, cancer etc. También se ha observado la utilización de rEPO en deportistas con el fin de aumentar el suministro de oxígeno a los tejidos y así incrementar el rendimiento en deportes de resistencia. En el año 2001, se comercializó una "nueva proteína estimuladora de la eritropoyesis" llamada NESP. Esta proteína es un análogo hiperglicosilado de la EPO que posee dos N-glicanos adicionales (Asn-30, 88). El número y composición de los N-glicanos es muy importante para el metabolismo de estas glicoproteínas, ya que el contenido de carbohidratos (número de ácidos siálicos) determina su vida media. Los métodos que se utilizan actualmente para diferenciar la eritropoyetina endógena urinaria (uEPO) de sus análogos recombinantes (rEPO, NESP) están basados en las diferencias que existen entre sus perfiles isoelectroforéticos (IEF). Se cree que estas diferencias provienen de las células y/o especies en las que se expresan estas glicoproteínas. En este estudio, se llevo a cabo la caracterización estructural de diferentes preparaciones de EPO recombinante. Para ello, se utilizaron las técnicas más comunes en el campo de la glicoproteómica además de otras nuevas, desarrolladas para poder analizar los glicanos de muestras procedentes de geles 2-DE. Los perfiles de glicosilación total de cada una de estas glicoproteínas mostraron características estructurales que pueden facilitar la detección de rEPO y NESP en atletas que abusan de estas sustancias. Un ejemplo es la presencia de Neu5Gc únicamente en fármacos que han sido expresados en células CHO. La metodología desarrollada en este trabajo, podría emplearse también, para el control de calidad de estos fármacos y para el diagnóstico de ciertas patologías. / Erythropoietin (EPO) is a glycoprotein hormone secreted primarily by adult kidneys in response to tissue hypoxia. It is involved in the maturation and ultimately regulation of the level of red blood cells. The EPO molecule comprises a single polypeptide chain of 165 aminoacids with two disulfide bonds, 1 O-linked (Ser-126), and 3 N-linked (Asn-24, 38, 83) glycans representing about 40% of the total mass (29.4 kDa). The recombinant analogue (rEPO), available since 1989 has found widespread use in the treatment of anaemia, renal failure, cancer etc. Besides, rEPO is illicitly used by athletes to boost the delivery of oxygen to the tissue and enhance performance in endurance sports. In 2001, a novel erythropoiesis-stimulating protein (NESP) was also marketed. NESP possesses two additional N-glycans (Asn-30, 88). The number and composition of the N-glycans is very important in the metabolism of this glycoprotein because the carbohydrate content (sialylation degree) determines its half-life time. Current tests to differentiate between urinary endogenous (uEPO) and its recombinant analogues (rEPO, NESP) are based on differences in their iso-electric focussing (IEF) profiles. Those differences are believed to stem from the cells/species in which they are expressed. In this study, the structural characterisation of different rEPO preparations was conducted using standard techniques in the field and developing new ones to address glycans from 2-DE sample preparations. Overall glycosylation profiling of each glycoprotein revealed structural features that may pave the way to the unambiguous detection of rEPOs and NESP abuse, such as the presence of Neu5Gc in CHO cell derived drugs only, and the developed methodology may be also employed for maintaining pharmaceutical quality control and for diagnosing pathologic conditions.

Carbohydrate-binding proteins of non-immunological origin -lectins- have been recognized over the last decades as decisive players in numerous biological processes, ranging from cellcell communication, fertilization, pathogen-cell adhesion to metastasis. Consequently, there is an increasing interest in finding powerful and nanosized tools to screen for these molecules and to study their carbohydrate interactions in detail. Here, two complementary approaches are described to characterize lectin-carbohydrate interactions with high sensitivity, low sample consumption, and without the need for sample labelling: SPR and CREDEX-MS. In SPR, we have developed an approach where the sugar is immobilized onto a sensor surface through a tailor-made peptide module that allows (1) to capture the lectin, (2) to characterize the interaction through kinetic and thermodynamic parameters, and (3) to identify the interacted protein by mass spectrometry. In CREDEX-MS, based on proteolytic excision of proteincarbohydrate complexes and mass spectrometric analysis, the peptides comforming the carbohydrate binding domain are identified. / Las lectinas (proteínas de origen no inmune capaces de reconocer azúcares) se han revelado en las últimas décadas como participantes cruciales en multitud de procesos biológicos, tales como la comunicación célula-célula, la fertilización, la adhesión del patógeno a la célula y la metástasis, entre muchos otros. Por lo tanto, existe un gran interés en el desarrollo de técnicas analíticas potentes para el estudio de las interacciones lectina-carbohidrato. En este trabajo, se describen dos aproximaciones complementarias mediante las cuales se pueden caracterizar las interacciones lectinas-azúcar con gran sensibilidad, poca utilización de muestra y sin la necesitad de ningún marcaje. En la técnica basada en resonancia de plasmón superficial (SPR), el azúcar es inmovilizado sobre una superficie a través de un módulo peptídico, lo cual permite (1) capturar la lectina, (2) caracterizar su interacción mediante parámetros cinéticos y termodinámicos y (3) identificar posteriormente la proteína mediante espectrometría de masas. Complementariamente, la técnica CREDEX-MS, basada en la excisión proteolítica del complejo proteína-azúcar y posterior análisis por espectrometría de masas, nos permite identificar los péptidos que forman parte del dominio de unión al azúcar.

Proteins and protein interactions are involved in virtually all processes of life. Here we study interactions between globular domains and short linear motifs, which form a small interface ideal for transient interactions. Despite the small number of contacts involved, these domain-motif interactions (DMIs) are known to be highly specific in vivo. We have identified hundreds of instances of DMIs in high-resolution 3-dimensional (3D) structures to analyze the molecular basis of their high specificity. Furthermore, we have derived structural parameters to identify DMIs in 3D structures in a more general, motif-independent way. An important class of DMIs are kinase-substrate interactions. By combining the phosphorylation motif with different kinds of contextual information, we could predict substrates of the human kinase Aurora A. Lastly, we have incorporated DMIs into our database of 3D interacting domains (3did) to disseminate our results to the scientific community for future research. Los procesos moleculares subyacentes a la mayoría de funciones biológicas implican la participación directa de una infinidad de proteínas y múltiples interacciones entre ellas. En esta tesis estudiamos un tipo particular de estas interacciones, de carácter transitorio y altamente específicas, dónde un dominio globular en una proteína reconoce un corto péptido lineal en otra (DMIs). En concreto, identificamos múltiples casos de DMIs en estructuras tridimensionales (3D) de alta resolución y analizamos las bases moleculares de su especificidad. Además, derivamos parámetros estructurales globales que nos permiten identificar nuevos casos de DMIs. Así mismo, y como caso práctico, combinamos el motivo de fosforilación propio de la quinasa humana Aurora A con diversas clases de información contextual para predecir y validar 90 nuevos substratos. Por último, incorporamos las caracterizadas DMIs en nuestra base de datos de interacciones en 3D (3did) con el fin de diseminar nuestros resultados entre la comunidad científica.

Las hormonas tiroideas (HT) son esenciales para el desarrollo normal del cerebro. El desbalance tiroideo en la etapa fetal y postnatal puede producir retraso neuroconductual. La exposición a compuestos organoclorados (OCs) puede alterar los niveles de HT y tirotropina (TSH). El objetivo principal es estudiar el efecto de los OCs en el sistema tiroideo, y la asociación entre las HT y TSH, y el desarrollo neuroconductual y crecimiento en poblaciones sanas. Métodos: A partir de modelos de regresión y modelos GAM se estimó: 1) la relación entre los OCs, y las HT y TSH, y 2) la asociación de las HT, TSH y el consumo de yodo, con el neurodesarrollo y crecimiento, en mujeres embarazadas y niños sanos de diferentes regiones de España. Resultados: La exposición ambiental, tanto prenatal como postnatal, a OCs altera los niveles de HT, especialmente los de triyodotironina. Las concentraciones de tiroxina y TSH se asocian con el neurodesarrollo. El consumo de yodo durante el embarazo se relaciona con el peso al nacer. Conclusiones: La variabilidad en la exposición ambiental a OCs tiene un efecto en los niveles de HT. La variabilidad, dentro de los rangos de referencia, de las concentraciones de tiroxina y TSH tiene un efecto negativo en el neurodesarrollo. / Thyroid hormones (THs) are essential for normal brain development. The thyroid misbalance during prenatal and postnatal period can cause mental retardation. Esposure to organochlorine compounds (OCs) can alter THs and thyrotropin (TSH) levels. The main objective is to study the effect of OCs on thyroid system, as well as the association between TH and TSH, and neurodevelopment and growth in healthy populations. Methods: The association between OCs and THs and TSH, and the association between THs, TSH and iodine consumption, and neurodevelopment and growth was estimated in healthy pregnant women and children from several areas of Spain. Regression and GAM models were used. Results: TH levels (particularly triiodothyronine levels) are affected by prenatal and postnatal exposure to OCs. Thyroxine and TSH concentrations are related to neurodevelopment. Iodine consumption during pregnancy is associated with birthweight. Conclusions: Differences in exposure to OCs have an effect on TH levels. Variations in thyroxine and TSH levels, within reference levels, have a negative effect on neurodevelopment.

During cell division, a macromolecular machine is assembled to segregate the two sets of chromosomes carrying the genetic material into the two daughter cells. This machine, the mitotic spindle, is a bipolar array composed of microtubules and proteins that control their dynamics and organization. Kinesins are molecular motors that can apply forces to the microtubules and arrange them in space to assemble a bipolar spindle. Here we characterized the human kinesin Hklp2 as an important player in bipolar spindle assembly and maintenance. Hklp2 is a kinesin that localizes to the spindle microtubules and the chromosomes in mitosis. Its localization to the microtubules depends on TPX2, a crucial factor in microtubule nucleation. Hklp2 localization to the chromosomes necessitates the presence of cell proliferation marker Ki67 whose function is currently unknown. Hklp2 helps the separation of the centrosomes during the establishment of spindle bipolarity and plays a role in the subsequent maintenance of bipolarity during metaphase. This role is probably achieved through a cross-linking of the microtubules. Interestingly, the populations of the kinesin present on the microtubules and the chromosomes have different functions. / Durante la división celular, tiene lugar el ensamblaje de la maquinaria macromolecular encargada de segregar los dos conjuntos de cromosomas en las dos células hijas. Esta maquinaria, el huso mitótico, es una matriz bipolar compuesta de microtúbulos y de proteínas que controlan la dinámica y la organización. Las quinesinas son motores moleculares que pueden ejercer fuerzas sobre los microtúbulos y organizarlos en el espacio para dar lugar al huso bipolar. Este estudio aporta evidencias del papel importante de la quinesina humana Hklp2 en el ensamblaje y en la estabilidad del huso mitótico. Hklp2 es una quinesina que se localiza en los microtúbulos del huso y en los cromosomas durante la mitosis. Su localización en los microtúbulos depende de TPX2, un factor importante en la nucleación de microtúbulos. Para que Hklp2 se localice en los cromosomas, este necesita la presencia del marcador de proliferación Ki67, la función del cual se desconoce actualmente. Hklp2 participa en la separación de los centrosomas durante el establecimiento de la bipolaridad del huso mitótico y posteriormente juega un papel importante en el mantenimiento de esta bipolaridad durante la metafase. Esta función probablemente se consiga haciendo lazos entre los microtúbulos. Las poblaciones de la quinesina presente en los microtúbulos y en los cromosomas tienen funciones diferentes.

Xkid is a Xenopus chromokinesin required for metaphase chromosome alignment and for meiosis I to meiosis II transition in oocytes. The aim of this work was to study the regulation of Xkid by phosphorylation using the Xenopus oocyte and egg extract systems. To achieve this, a reliable method to express proteins in egg extract by addition of in vitro transcribed mRNAs was established. Xkid was found to be efficiently phosphorylated in meiosis and mitosis at the cdk1 site. Although phosphoXkid localized efficiently to the mitotic chromosomes, phosphorylation at the cdk1 site had no role in the binding of Xkid to the chromosomes but prevented the protein to localize to the spindle microtubules like the endogenous protein. The dominant negative effect on spindle assembly of a phospho mimicking form of Xkid indicated that phosphorylation plays an important role in the regulation of Xkid function. Several partners for Xkid were identified. / Xkid es una cromoquinesina del sistema de Xenopus, necesaria para el alineamiento de los cromosomas en la placa metafásica y para la transición entre la meiosis I y meiosis II en los oócitos. El objectivo de este trabajo era estudiar la regulación de Xkid por fosforilación en los oócitos y en el extracto de huevos de Xenopus. Para poder cumplirlo se estableció un método para la expresión de proteínas añadiendo al extracto de huevos ARN mensajeros sintetizados in vitro. Los resultados obtenidos sugieren que Xkid es eficientemente fosforilada en el sitio cdk1 durante la meiosis y la mitosis. Aunque la forma de Xkid fosforilada se localiza eficientemente a nivel de los cromosomas mitóticos, esta fosforilación no parece tener ningún papel regulador sobre esta localización. En cambio, parece interferir con la localización de Xkid sobre los microtúbulos mitóticos. El efecto dominante negativo de la forma de Xkid que mimetiza la fosforilación durante la formación del huso mitótico, sugiere además que la fosforilación desempeña un papel importante en la regulación de la función de Xkid. Finalmente, varias proteínas que interaccionan con Xkid han sido identificadas.

Mitosis is the essential process during which a cell divides into two viable daughter cells. To allow a faithful segregation of the chromosomes into each daughter, the cell forms the bipolar spindle. The NIMA-like kinase family member Nek9 has been previously proposed to play a role in bipolar spindle assembly and in the chromosomal pathway of microtubule assembly. We aimed at gaining a better understanding of Nek9 function by characterizing Xenopus Nek9, xNek9, using the Xenopus egg extract system. We have shown that xNek9 may not act through the kinase cascade xNek9 – xNek6 in meiosis as described for human Nek9 in somatic cells and therefore may have different substrates. Furthermore, we have demonstrated by depletion, increased addition of Flag-hNek9 and a dominant-negative approach that xNek9 is important for bipolar spindle formation. In addition, we have shown that xNek9 depletion causes decreased microtubule density in bipolar spindles and slower RanGTP induced aster formation. We identified xNedd1, the adaptor protein for the γTuRC, as a novel interactor and substrate of xNek9. xNek9 depletion reduces the recruitment of xNedd1 to sperm nuclei induced aster and decreases the number and length of nucleated microtubules. These data suggest that one role of xNek9 in spindle assembly is exerted through xNedd1 regulation. We propose a model for xNek9 – xNedd1 interaction and a putative mechanism for the regulation of xNek9 – xNedd1 explaining how they fulfil their role in bipolar spindle assembly. / La mitosis es el proceso esencial durante el cual una célula se divide en dos células hijas viables. Para permitir una segregación fiable de los cromosomas en cada hija, la célula forma el huso bipolar. Nek9, el miembro de la familia de quinasas NIMA-like ha sido propuesto para desempeñar un papel en el la asamblea del huso bipolar y en la vía cromosómica de ensamblaje de los microtúbulos. Nuestro objetivo era lograr una mejor comprensión de la función Nek9 caracterizando Nek9 de Xenopus, xNek9, utilizando el sistema de extracto de huevos de Xenopus. Hemos demostrado que xNek9 probablemente no actuará a través de la cascada de las quinasas xNek9 - xNek6 en la meiosis como se describe para Nek9 humano en células somáticas y por lo tanto pueden tener diferentes sustratos. Además, hemos demostrado por el agotamiento, la adición incrementada de Flag-hNek9 y un enfoque dominante-negativas que xNek9 es importante para la formación del huso bipolar. Además, hemos demostrado que el agotamiento xNek9 causa una disminución de la densidad de los microtúbulos en los husos bipolares y una formación más lenta de asteres inducidos por RanGTP. Se identificó xNedd1, la proteína adaptadora para el γTuRC, como un interactor y sustrato novedoso de xNek9. El agotamiento de xNek9 reduce la contratación de xNedd1 a los asteres inducidas por núcleos de espermatozoides y disminuye el número y longitud de microtúbulos nucleados. Estos datos sugieren que un papel de xNek9 en el conjunto del huso se husorce a través de la regulación de xNedd1. Proponemos un modelo para la interacción xNek9 – xNedd1 y un supuesto mecanismo para la regulación de xNek9 – xNedd1 explicando cómo cumplen su papel en la ensamblaje del huso bipolar.