Solano-violeta (Solanum violaefolium) é uma ornamental rasteira usada pra cobrir solos de áreas sombreadas. Um vírus que induz manchas anelares nas folhas, tentativamente designado de mancha anular do S. violaefoliumm (S. violaefolium ringspot vírus - SvRSV), transmitido pelo ácaro Brevipalpus phoenicis foi encontrado nesta planta em jardins de Piracicaba, SP. Trata-se de um vírus baciliforme que se acumula no lúmen do retículo endoplasmático induzindo viroplasma citoplasmático, assemelhando-se a outros vírus do tipo citoplasmático, dos transmitidos por ácaros Brevipalpus (Acari: Tenuipalpidea). Este trabalho relata algumas de suas propriedades biológicas e a caracterização molecular parcial. SvRSV foi ser transmitido mecanicamente e pelo B. phoenicis a várias outras espécies botânicas, sempre causando lesões localizadas. Destas, Datura stramonium mostrou-se a melhor como hospedeira experimental. As propriedades físicas do SvRSV in vitro foram: temperatura de inativação - 40-45 ºC; ponto final de diluição - 10-3-10-4; longevidade in vitro- 12 dias. Posteriormente, observou-se também infestação destas plantas por B. obovatus que em ensaios preliminares transmitiu o SvRSV. Em secções ultrafinas, as partículas do SvRSV mostraram-se ligeiramente mais delgadas que as de outros vírus do tipo citoplasmático, transmitidos por Brevipalpus, e por outro lado formavam eventualmente partículas mais longas, às vezes de ca. 1 µm. Como os demais vírus, do tipo citoplasmático, transmitido por Brevipalpus, induz a formação de um viroplasma denso e vacuolado no citoplasma. Em casos favoráveis foram observadas fases do processo de morfogênese por “brotação” a partir do material do viroplasma. Dada sua labilidade não foi possível conseguir sua purificação apesar das inúmeras tentativas, usando diferentes protocolos. Logrou-se a extração de dsRNA a partir de D. stramonium e a partir dele, obter-se dois fragmentos do genoma viral, identificados como parte da proteína de movimento e da replicase, após seu sequenciamento. Foram produzidos pares de “primer” baseado nestas seqüências que amplificaram especificamente, por RT-PCR, fragmentos de DNA de tamanho esperado, a partir do RNA total extraído de lesões foliares de S. violaefolium e D. stramonium infetados. Sondas baseadas nas seqüências obtidas hibridizaram com ss- e dsRNA de lesões de D. stramonium. Ensaios preliminares de RT-PCR e hibridização não resultaram em reação com alguns outros vírus transmitidos por Brevipalpus, do tipo citoplasmático, inclusive o da leprose dos citros (CiLV-C). / Solanum violaefolium is an ornamental Solanaceae, with prostrate, trailing growth cultivated in shaded areas. Plants exhibiting necrotic ringlike spots on the leaves have been found in several gardens and parks at Piracicaba – SP. The ringspot symptoms on the leaves is caused by a vírus, named S. violaefolium ringspot virus (SvRSV), and is transmisible by mite Brevipalpus phoenicis (Acari: Tenuipalpidae). Short bacilliform particles are present within the cisternae of endoplasmic reticulum (ER) and often electron dense viroplasm is present in the cytoplasm, characterist of the cytoplasmatic type of Brevipalpus-borne virus. The present study reports some of its biological properties and partial molecular caracterization. SvRSV is easily transmitted to many plant species either by viruliferous B. phoenicis or mechanically, always causing local lesions. Datura stramonium was proved to be better as experimental host. Its physical properties in vitro were: inactivation thermal point – 40-45 ºC; final diluition point - 10-3-10-4; longevity in vitro – 12 days. Afterwards, its was observed that S. violaefolium plants were infested by B. obovatus that transmitted SvRSV in preliminary assays. Thin sections revealed that SvRSV particles are slightly thinner and sometimes appear very long. In some favorable sections intermediate steps of viral particle morphogenesis by a budding process of the dense material of the viroplasm toward the lumen of ER could be seen. Due to the fragility of the particles, several attempts to purify the virus have failed, despite many protocols tried. It was possible, however, to extract dsRNA from infected tissue of D. stramonium, and two segments of viral genome, respectively with homology to movement protein (mp) and replicase (rep) of some known viruses were obtained. Primers were designed based in these sequences, which amplified by RT-PCR, fragments of DNA of expected size from total RNA extracts from leaves lesions of infected S. violaefolium and D. stramonium. Probes based on obtained sequences hibridizated with ss- and dsRNA from lesions of S. violaefolium and D. stramonium. Preliminary assays of RT-PCR and hybridization did not result in positive reaction with other cytoplasmatic type of Brevipalpus-borne viruses, including citrus leprosis (CiLVC).

Orientador: Aricio Xavier Linhares / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-04T02:54:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Thyssen_PatriciaJacqueline_D.pdf: 2658711 bytes, checksum: 6ae5d4aeb98843b0a14d74606d3f57c1 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: A correta identificação e avaliação da idade de insetos envolvidos com a decomposição de cadáveres é de suma importância para a estimativa do intervalo pós-morte (IPM) na área das ciências forenses, particularmente quando o IPM é baseado em informações sobre o ciclo de vida de insetos necrófagos. Entretanto, a análise destes parâmetros em insetos, especialmente quando se encontram em seus estágios imaturos, é difícil mesmo para taxonomistas bem treinados. Além das minúsculas diferenças morfológicas que há entre várias espécies, algumas variáveis tais como temperatura e substâncias tóxicas podem afetar o seu tempo de desenvolvimento gerando um erro no cálculo do IPM. Entre os insetos envolvidos neste processo, as larvas de dípteros da família Calliphoridae são freqüentemente as mais predominantes consumidoras de carcaça e estão presentes em todos os estágios de decomposição. Assim, este estudo teve como objetivo caracterizar morfologicamente e avaliar o tempo de desenvolvimento e as exigências térmicas das formas imaturas de duas espécies de dípteros em diferentes temperaturas: Hemilucilia segmentaria (Fabricius) e Hemilucilia semidiaphana (Rondani) (Calliphoridae). Todos os experimentos foram realizados em câmaras climáticas com temperaturas controladas em 10, 15, 20, 25, 30 e 35ºC, com fotoperíodo de 12 horas e umidade relativa de 70%. Dieta artificial própria para larvas foi oferecida para que estas completassem seu desenvolvimento. Neste estudo, além da descrição e caracterização morfológica tradicional, também foram utilizadas as técnicas da reação em cadeia da polimerase, associada ao polimorfismo baseado no comprimento do fragmento de restrição (PCR-RFLP), para a identificação das duas espécies / Abstract: The correct identification and age determination of insect species involved in cadaver decomposition is of particular importance in estimating the post-mortem interval (PMI) in forensic sciences, particularly since the PMI is based on information on the life cycle of necrophagous insects. However, the correct identification of several insects species, especially in their immature stages, is difficult even for experienced taxonomists. In addition to the minuscule morphological differences between several species, there are some variables such as temperature and toxic substances that may affect the developmental time of insects, generating errors in the estimate of the PMI. Among the insects that are involved in cadaver decomposition, maggots of blowflies (Calliphoridae) are often the most important consumers of carrion and are present in all stages of decomposition. Thus, this study aimed to characterize morphologically and to evaluate the developmental time and the thermal requirements of the immature stages of two species of blowflies reared in different temperatures: Hemilucilia segmentaria (Fabricius) e Hemilucilia semidiaphana (Rondani) (Calliphoridae). All experiments were done in growth chambers with temperatures set at 10, 15, 20, 25, 30 and 35ºC, photophase of 12 hours and relative humidity at 70%. The maggots were reared using an artificial diet for their complete development. In addition to traditional morphological description and characterization of the immatures, the usefulness of the polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) to identify the two species mentioned above was also assessed in this study / Doutorado / Parasitologia / Doutor em Parasitologia

Objetivou-se neste trabalho isolar, identificar e sintetizar o feromônio sexual de Phyllocnistis citrella Stainton, 1856 (Lepidoptera: Gracillariidae), bem como avaliar a sua eficiência em condições de campo, visando a racionalização de controle desta praga dentro de um contexto de Manejo Integrado das Pragas de citros. A pesquisa foi desenvolvido parte no Laboratório de Biologia de Insetos do Departamento de Entomologia, Fitopatologia e Zoologia Agrícola da Escola Superior de Agricultura "Luiz de Queiroz" (ESALQ), Piracicaba, da Universidade de São Paulo (USP), parte no Laboratório de Ecologia Química "Maeda-Duffey" do Departamento de Entomologia da Universidade da Califórnia (Davis-EUA) e parte no Departamento de Agricultura dos Estados Unidos da América (USDA, Peoria, EUA). Diariamente, glândulas de feromônio de um grupo de 200 fêmeas com dois dias de idade, foram extraídas em um intervalo de no máximo duas horas, iniciando uma hora antes da fotofase. As extremidades dos abdômens foram imersas em solvente hexano por cerca de 1 h. Foram acumulados 5.000 equivalentes-fêmea e este extrato natural foi transferido para ampolas de vidro, as quais foram seladas e enviadas para Davis, EUA (Universidade da Califórnia). Usando a antena do macho como detector biológico, três picos ativos no detector eletroantenográfico (EAD) foram identificados a partir do extrato natural das glândulas de feromônio do minador-dos-citros, P. citrella. Baseando-se nos dados do cromatógrafo gasoso acoplado ao espectrômetro de massa (GC-MS) e cromatógrafo gasoso acoplado ao espectrômetro de infra-vermelho (GC-IR), os semioquímicos foram identificados como um novo feromônio, (Z,Z,E)-7,11-13-hexadecatrienal (trieno), um atraente previamente identificado, (Z,Z)-7,11-hexadecadienal (dieno) e (Z)-7- hexadecenal (monoeno) na proporção de 30:10:1, respectivamente. A identificação foi confirmada com os compostos sintéticos, os quais apresentaram tempos de retenção idênticos àqueles dos produtos naturais em três colunas capilares com fases polares e não polares. Em condições de campo, as armadilhas contendo o feromônio sintético, capturaram significativamente mais machos do que aquelas contendo fêmeas virgens. Os tratamentos com 2 (trieno+dieno, 3:1) e 3 compostos (trieno + dieno + monoeno, 30:10:1), nas concentrações alta (500 µg) e baixa (50 µg ), não diferiram significativamente quanto a captura. Assim, comprovou-se que Z7Z11E13-16Ald e Z7Z11-16Ald são os constituintes essenciais do feromônio de P. citrella e poderão ser utilizados em pomares de citros para monitorar esta praga, tornando o seu controle mais econômico e efetivo, racionalizando as pulverizações e preservando os inimigos naturais no agroecossistema. / The objectives of this work were to isolate, identify, and synthesize the sex pheromone of Phyllocnistis citrella Stainton, 1856 (Lepidoptera: Gracillariidae), as well as to evaluate its efficiency in field conditions, to rationalize the control of this pest within a Citrus Integrated Pest Management scope. The research was developed at the Insect of Biology Laboratory, of the Department of Entomology, Plant Pathology and Agricultural Zoology of the Escola Superior de Agricultura "Luiz de Queiroz" (ESALQ), Piracicaba, University of Sao Paulo (USP), at Maeda-Duffey Laboratory, of the Department of Entomology of the Universityof California, Davis (UCD-USA), and at the United States Department of Agriculture, (USDA, Peoria, USA). Pheromone glands from groups of 200 two-day-old virgin females were excised within 2 h, starting 1 h before the photophase. The abdominal tips were immersed in hexane for ca. 1 h. A total of 5,000 glands-equivalent was pooled, the extract was transferred to glass ampoules, which were sealed, and shipped to Davis. Using male antenna as the sensing element, three EAD-active peaks were identified from gland extracts of P. citrella. Based on GC-MS and GC-IR data, the semiochemicals were identified as a novel pheromone, (Z,Z,E)- 7,11-13-hexadecatrienal, a previously identified attractant, (Z,Z)-7,11-hexadecadienal, and (Z)-7-hexadecenal in a ratio of 30:10:1, respectively. Identification was confirmed with synthetic compounds, which gave retention times identical to those of the natural products in three capillary columns with polar and non-polar phases. In field conditions, traps baited with the synthetic sex pheromone, attracted significantly more males than traps baited with virgin females. Binary and tertiary mixture with the major constituents in high and low concentrations did not differ significantly in the captures. Thus, it was confirmed that Z7Z11E13-16Ald e Z7Z11-16Ald are the essential constituents of the sex pheromone of P. citrella and they can be used on citrus crops for monitoring this pest, rationalizing and improving its control and maintaining the natural enemies in the environment.

Objetivou-se neste trabalho isolar, identificar e sintetizar o feromônio sexual de Phyllocnistis citrella Stainton, 1856 (Lepidoptera: Gracillariidae), bem como avaliar a sua eficiência em condições de campo, visando a racionalização de controle desta praga dentro de um contexto de Manejo Integrado das Pragas de citros. A pesquisa foi desenvolvido parte no Laboratório de Biologia de Insetos do Departamento de Entomologia, Fitopatologia e Zoologia Agrícola da Escola Superior de Agricultura “Luiz de Queiroz” (ESALQ), Piracicaba, da Universidade de São Paulo (USP), parte no Laboratório de Ecologia Química “Maeda-Duffey” do Departamento de Entomologia da Universidade da Califórnia (Davis-EUA) e parte no Departamento de Agricultura dos Estados Unidos da América (USDA, Peoria, EUA). Diariamente, glândulas de feromônio de um grupo de 200 fêmeas com dois dias de idade, foram extraídas em um intervalo de no máximo duas horas, iniciando uma hora antes da fotofase. As extremidades dos abdômens foram imersas em solvente hexano por cerca de 1 h. Foram acumulados 5.000 equivalentes-fêmea e este extrato natural foi transferido para ampolas de vidro, as quais foram seladas e enviadas para Davis, EUA (Universidade da Califórnia). Usando a antena do macho como detector biológico, três picos ativos no detector eletroantenográfico (EAD) foram identificados a partir do extrato natural das glândulas de feromônio do minador-dos-citros, P. citrella. Baseando-se nos dados do cromatógrafo gasoso acoplado ao espectrômetro de massa (GC-MS) e cromatógrafo gasoso acoplado ao espectrômetro de infra-vermelho (GC-IR), os semioquímicos foram identificados como um novo feromônio, (Z,Z,E)-7,11-13-hexadecatrienal (trieno), um atraente previamente identificado, (Z,Z)-7,11-hexadecadienal (dieno) e (Z)-7- hexadecenal (monoeno) na proporção de 30:10:1, respectivamente. A identificação foi confirmada com os compostos sintéticos, os quais apresentaram tempos de retenção idênticos àqueles dos produtos naturais em três colunas capilares com fases polares e não polares. Em condições de campo, as armadilhas contendo o feromônio sintético, capturaram significativamente mais machos do que aquelas contendo fêmeas virgens. Os tratamentos com 2 (trieno+dieno, 3:1) e 3 compostos (trieno + dieno + monoeno, 30:10:1), nas concentrações alta (500 µg) e baixa (50 µg ), não diferiram significativamente quanto a captura. Assim, comprovou-se que Z7Z11E13-16Ald e Z7Z11-16Ald são os constituintes essenciais do feromônio de P. citrella e poderão ser utilizados em pomares de citros para monitorar esta praga, tornando o seu controle mais econômico e efetivo, racionalizando as pulverizações e preservando os inimigos naturais no agroecossistema. / The objectives of this work were to isolate, identify, and synthesize the sex pheromone of Phyllocnistis citrella Stainton, 1856 (Lepidoptera: Gracillariidae), as well as to evaluate its efficiency in field conditions, to rationalize the control of this pest within a Citrus Integrated Pest Management scope. The research was developed at the Insect of Biology Laboratory, of the Department of Entomology, Plant Pathology and Agricultural Zoology of the Escola Superior de Agricultura “Luiz de Queiroz” (ESALQ), Piracicaba, University of Sao Paulo (USP), at Maeda-Duffey Laboratory, of the Department of Entomology of the Universityof California, Davis (UCD-USA), and at the United States Department of Agriculture, (USDA, Peoria, USA). Pheromone glands from groups of 200 two-day-old virgin females were excised within 2 h, starting 1 h before the photophase. The abdominal tips were immersed in hexane for ca. 1 h. A total of 5,000 glands-equivalent was pooled, the extract was transferred to glass ampoules, which were sealed, and shipped to Davis. Using male antenna as the sensing element, three EAD-active peaks were identified from gland extracts of P. citrella. Based on GC-MS and GC-IR data, the semiochemicals were identified as a novel pheromone, (Z,Z,E)- 7,11-13-hexadecatrienal, a previously identified attractant, (Z,Z)-7,11-hexadecadienal, and (Z)-7-hexadecenal in a ratio of 30:10:1, respectively. Identification was confirmed with synthetic compounds, which gave retention times identical to those of the natural products in three capillary columns with polar and non-polar phases. In field conditions, traps baited with the synthetic sex pheromone, attracted significantly more males than traps baited with virgin females. Binary and tertiary mixture with the major constituents in high and low concentrations did not differ significantly in the captures. Thus, it was confirmed that Z7Z11E13-16Ald e Z7Z11-16Ald are the essential constituents of the sex pheromone of P. citrella and they can be used on citrus crops for monitoring this pest, rationalizing and improving its control and maintaining the natural enemies in the environment.