Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:07Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-02-25Bitstream added on 2014-06-13T20:10:39Z : No. of bitstreams: 1 santiago_kb_me_botfm.pdf: 713656 bytes, checksum: 6c11a051494cb69b7ad351c1bf845a90 (MD5) / Ministério da Saúde / O sangue e seus componentes devem ser coletados, processados e transfundidos sob extremo rigor. Os itens verificados pelo controle de qualidade devem apresentar um percentual de conformidade superior a 75%, e os estéreis deverão apresentar conformidade superior a 99,5%. O objetivo do presente trabalho foi controlar a qualidade da triagem hematológica e dos hemocomponentes: concentrado de hemácias (CH), plasma fresco congelado (PFC), crioprecipitado (CRIO) e concentrado de plaquetas (CP) produzidos no Hemocentro do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade Estadual Paulista da cidade de Botucatu. Este estudo foi dividido em duas etapas, na primeira foram realizados os controles da qualidade da triagem hematológica e analisadas 747 amostras de sangue obtidas de doadores voluntários de sangue. A metodologia utilizada nesta etapa envolveu a realização de hematócrito de ponta de dedo pelo método clássico de centrifugação utilizando equipamento Hemato Stat II e a determinação de hematócrito usando a técnica de referência automatizada (equipamento Horiba ABX). No período da segunda etapa, foram controladas 643 amostras, distribuídas em CH (282), PFC (150) Crio (20) CP standard (181) e CP aférese (10).Para o controle de qualidade dos CHs foram analisados os aspectos, volume e hematimetria. Para os produtos plasmáticos foram os aspectos, volume e fatores da coagulação (TP, TTPA, FV, FVIII e fibrinogênio). E para o controle dos CPs foram os aspectos, volume, pH, contagem do numero de plaquetas e cultura microbiológica. No controle de qualidade da triagem hematológica o resultado obtido para comparação entre as duas técnicas apresentou uma discrepância de 48,1% entre elas. Para o CH, os parâmetros aspectos e hematimetria apresentaram-se satisfatórios em relação ao preconizado pela RDC 153 (> 75% de conformidade) e para o parâmetro volume... / Quality is to conform to what is specified, to conform to the rules. The blood and their components should be collected, processed and transfused under the most rigorous conditions. The items checked by quality control must present a compliance rate of over 75%, and the sterile line must be more than 99.5%. The objective of the present work was to control the quality of the hematological screening and of the blood components: red blood cells concentrated (RBCC), fresh frozen plasma (FFP), cryoprecipitate (Cryo) and platelets concentrates (PC) produced in the Hemocenter of the Hospital of Clinics of the Faculty of Medicine, Universidade Estadual Paulista, in Botucatu. This study was divided in two stages. In the first stage, the quality controls of hematological screening were applied, and blood samples from 747 voluntary donors were analysed. The methodology used in this stage involved the realization of finger tip hematocrit by the classic method of centrifugation, using Hemato Stat II equipment, and of hematocrit determination, using the technique of automated reference (equipment Horiba ABX). During the second stage, 643 samples were controlled and distributed in: RBCC (282), FFP (150), Cryo (20), PC (181) and apheresis PC (10). For quality control of RBCC, the aspects, volume and hemocytometry were analyzed. For the plasmatic products, the aspects, volume and factors of coagulation (PT, APTT, FV, FVIII and fibrinogen) were analysed.And for the control of PCs they were, the aspects, volume, pH, counting of the number of platelets and microbiological culture. In quality control of the hematological screening, the result obtained by comparison among the two techniques, presented a discrepancy of 48,1% among them. For RBCC, the parameters aspects and hemocytometry were satisfactory in relation to the extolled by RDC 153 (> 75% of conformity) and for the parameter volume... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Rosana Rossi Ferreira / Banca: Elenice Deffune / Banca: Ana Maria Bórmio de Rosis / Resumo: O sangue e seus componentes devem ser coletados, processados e transfundidos sob extremo rigor. Os itens verificados pelo controle de qualidade devem apresentar um percentual de conformidade superior a 75%, e os estéreis deverão apresentar conformidade superior a 99,5%. O objetivo do presente trabalho foi controlar a qualidade da triagem hematológica e dos hemocomponentes: concentrado de hemácias (CH), plasma fresco congelado (PFC), crioprecipitado (CRIO) e concentrado de plaquetas (CP) produzidos no Hemocentro do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade Estadual Paulista da cidade de Botucatu. Este estudo foi dividido em duas etapas, na primeira foram realizados os controles da qualidade da triagem hematológica e analisadas 747 amostras de sangue obtidas de doadores voluntários de sangue. A metodologia utilizada nesta etapa envolveu a realização de hematócrito de ponta de dedo pelo método clássico de centrifugação utilizando equipamento Hemato Stat II e a determinação de hematócrito usando a técnica de referência automatizada (equipamento Horiba ABX). No período da segunda etapa, foram controladas 643 amostras, distribuídas em CH (282), PFC (150) Crio (20) CP standard (181) e CP aférese (10).Para o controle de qualidade dos CHs foram analisados os aspectos, volume e hematimetria. Para os produtos plasmáticos foram os aspectos, volume e fatores da coagulação (TP, TTPA, FV, FVIII e fibrinogênio). E para o controle dos CPs foram os aspectos, volume, pH, contagem do numero de plaquetas e cultura microbiológica. No controle de qualidade da triagem hematológica o resultado obtido para comparação entre as duas técnicas apresentou uma discrepância de 48,1% entre elas. Para o CH, os parâmetros aspectos e hematimetria apresentaram-se satisfatórios em relação ao preconizado pela RDC 153 (> 75% de conformidade) e para o parâmetro volume... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Quality is to conform to what is specified, to conform to the rules. The blood and their components should be collected, processed and transfused under the most rigorous conditions. The items checked by quality control must present a compliance rate of over 75%, and the sterile line must be more than 99.5%. The objective of the present work was to control the quality of the hematological screening and of the blood components: red blood cells concentrated (RBCC), fresh frozen plasma (FFP), cryoprecipitate (Cryo) and platelets concentrates (PC) produced in the Hemocenter of the Hospital of Clinics of the Faculty of Medicine, Universidade Estadual Paulista, in Botucatu. This study was divided in two stages. In the first stage, the quality controls of hematological screening were applied, and blood samples from 747 voluntary donors were analysed. The methodology used in this stage involved the realization of finger tip hematocrit by the classic method of centrifugation, using Hemato Stat II equipment, and of hematocrit determination, using the technique of automated reference (equipment Horiba ABX). During the second stage, 643 samples were controlled and distributed in: RBCC (282), FFP (150), Cryo (20), PC (181) and apheresis PC (10). For quality control of RBCC, the aspects, volume and hemocytometry were analyzed. For the plasmatic products, the aspects, volume and factors of coagulation (PT, APTT, FV, FVIII and fibrinogen) were analysed.And for the control of PCs they were, the aspects, volume, pH, counting of the number of platelets and microbiological culture. In quality control of the hematological screening, the result obtained by comparison among the two techniques, presented a discrepancy of 48,1% among them. For RBCC, the parameters aspects and hemocytometry were satisfactory in relation to the extolled by RDC 153 (> 75% of conformity) and for the parameter volume... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

The utilization and management of blood is an imperative undertaking when considering the cost, risk and limited resources involved. Mountain States Health Alliance, with the guidance and dedication from Dr. Andrew Fletcher and his team, were able to sustain a 20% reduction in blood utilization overall since the inception of the project to present. Mountain States was also able to save approximately $250,000 over a one-year period due to the change in policy and procedure of ordering blood as well as the close and thoughtful monitoring of the entire health system’s blood usage. This change in policy not only produced monetary and resource savings, it also reduced the risk of adverse transfusion reactions and created a more patient-centered approach to supplying and ordering blood for the patients of the health system. As the health care system as a whole is continuously struggling to keep up with demands for more efficient use of resources, this model can be and has been adapted to other resources such as pharmacy and radiology, and will continue to be useful in effecting efficiency across healthcare facilities.

Blod består av olika komponenter; erytrocyter, trombocyter, leukocyter och plasma.Plasma är en proteinrik vätska som bland annat innehåller koagulationsfaktorer. Vidberedning av donerat helblod kan dessa blodkomponenter separeras från varandra,för att sedan bearbetas vidare och-, eller användas för komponenten relevantaändamål. Plasma kan användas till transfusion vid bland annatkoagulationsrubbningar, alternativt användas som råvara förläkemedelsframställning. För att säkerställa kvaliteten på framställd plasma utförskomponentkontroller, som säkerställer att framställningsprocesser leder till önskvärtresultat. Plasma kontrolleras för innehåll av erytrocyter, trombocyter och leukocyter.Olika analysmetoder kan användas för detta, där BD Plasma Count Kit i dagslägetanvänds för att bestämma leukocytpartikelkoncentration (LPK),trombocytpartikelkoncentration (TPK) och erytrocytpartikelkoncentration (EPK).Sysmex XN Blood Bank mode (BB-mode) är en mjukvara som möjliggör analys avkomponentkontroller, och är i jämförelse en mindre resurskrävande (personal, tid,ekonomi) metod. Syftet med arbetet var därför att utvärdera denna metod;undersöka preanalytiska faktorer, verifiera provstabilitet och jämföra mednuvarande metod (BD Plasma Count Kit). Totalt 50 plasmakontroller analyseradesmed båda metoderna, till två av dessa kontroller tillsattes leukocyter.Reproducerbarhet för BB-mode mättes vid normal nivå och högre nivå, provernaanalyserades 10 gånger på varandra följda mätningar. Regressionsanalys förnuvarande metod och BB-mode utfördes för LPK, TPK och EPK. Svag korrelationförelåg för LPK (R2=0,8232), god korrelation för TPK (R2=0,9648) och dåligkorrelation för EPK (R2=0,5211). Analys av komponentkontroller (LPK, TPK ochEPK) med BB-mode gav inte samma resultat som BD Plasma Count Kit(signifikansnivå 0,05). BB-mode visar potential till förenklad analys avkomponentkontroller för plasma, men fler studier krävs. / Blood can be divided into different components: erythrocytes, thrombocytes,leucocytes, and plasma. Plasma is a fluid with proteins suspended in it. Some ofthese proteins Is coagulation factors, which makes plasma a viable treatment optionfor coagulation disorders. It could also be used for pharmaceutical production,where said coagulation factors is the main target. Quality controls (QC) of theproduced plasma ensure that the processes lead to the desired results. Residual cellsin plasma are used, and concentrations of erythrocytes, thrombocytes and leucocytesis measured in plasma. BD Plasma Count Kit is the method used today, but a newaddition to the haematology analysers Sysmex XN-series called Sysmex XN BloodBank mode (BB-mode) aims to analyse QC for blood products. The method wouldbe less resource consuming (time, personnel, economy) than the method used today.Therefore, the aim of this study is to evaluate analysis of quality controls for plasmaon BB-mode. This includes a comparison with BD Plasma Count Kit, as well asinvestigation of pre-analytical factors. A total of 50 samples were comparedbetween the methods, two of which were leucocyte spiked. Regression analysisshowed weak correlation between the methods for leucocyte concentration(R2=0,8232), good correlation for thrombocyte concentration (R2=0,9648), and poorcorrelation for erythrocyte concentration (R2=0,5211). However, the methods didnot show the same results for neither of the parameters (significance 0,05). BBmodeshow potential to use for QC on plasma, but further testing is needed.

A transfusão de concentrado de hemácias é uma atividade que proporciona muitos benefícios aos pacientes que necessitam aumentar a capacidade de transporte de oxigênio, mas também possui riscos inerentes. A disponibilidade de unidades de concentrado de hemácias compatíveis para pacientes que são fenótipo negativos para antígenos de alta frequência e possuem os respectivos anticorpos, bem como para pacientes com uma complexa combinação de aloanticorpos contra antígenos comuns, permanece como um desafio na medicina transfusional. Painéis nacionais e internacionais de doadores e bancos de unidades de concentrados de hemácias congeladas de doadores raros têm sido estabelecidos para facilitar o fornecimento de hemácias compatíveis para esses pacientes. É previsto que, com o aumento de movimentos populacionais através do mundo e chance em potencial de desenvolvimento de anticorpos raros ou mistura de anticorpos, a necessidade da disponibilidade de doadores de sangue raro continuará no futuro. Em média, 1800 unidades de hemocomponentes de sangue raro são transportadas anualmente para serem transfundidas, podendo este número ser maior devido à dificuldade em manter registro único de todos os dados. Um banco de sangue de fenótipos raros é formado por um sistema de informações e composto pelo cadastro de dados de doadores de sangue fenotipados e genotipados e que apresentam antígenos pouco comuns na população, pelo cadastro de unidades de hemocomponentes congelados e pela possibilidade de busca de doadores compatíveis, após a inserção dos resultados de fenotipagem/genotipagem do receptor. A possibilidade de acesso rápido a um cadastro nacional com informações referentes aos doadores de sangue com fenótipo raro poderá proporcionar vários benefícios, como uma maior rapidez na localização de concentrados de hemácias compatíveis para pacientes aloimunizados e diminuição dos custos para sua triagem. Futuramente, esses dados poderão compor o cadastro mundial de doadores com fenótipos raros, o que aumentariam as chances de se localizar fenótipos compatíveis com esses pacientes. A organização de programas de fenotipagem a nível nacional e a disponibilização destes dados poderão trazer avanços significativos, tanto para reestruturação de laboratórios de imuno-hematologia como para a capacitação técnica dos profissionais que atuam nesta área. Esse cadastro poderá ser utilizado futuramente como estratégia para seleção de concentrado de hemácias a serem congeladas no país. / The transfusion of red blood cells is an activity that provides many benefits to the patients who need to increase the oxygen-carrying capacity, but also has inherent risks. The availability of RBC units compatible for patients who are negative phenotype for high frequency antigens and have their antibodies as well as for patients with a complex combination of alloantibodies against common antigens remains a challenge in transfusion medicine. National and international donor panels and banks of frozen concentrated units of rare donor red blood cells have been established to facilitate the provision of compatible erythrocytes in these patients. It is expected that with the increase of population movements across the globe and likely potential development of rare antibodies or antibody mixture, the need for the availability of rare blood donors will continue in the future. On average, 1800 units of rare blood components are transported annually to be transfused, this number may be higher because of the difficulty in maintaining single record of all data. A rare phenotypes blood bank consists of an information system and consists of the registration of blood donors phenotyped and genotyped data who presenting unusual antigens in the population, the register of frozen blood products units and the possibility of seeking donors compatible, after insertion of the results of phenotyping / genotyping receiver. The possibility of quick access to a national database with information pertaining to blood donors with rare phenotype can provide several benefits, such as greater speed in locating concentrates compatible red blood cells to alloimmunized patients and lower costs for their screening. In the future, these data may select global register of donors with rare phenotypes, which would increase the chances of finding phenotypes consistent with these patients. The organization of phenotyping programs at national level and the availability of these data can bring significant advances for both restructuring immuno-hematology laboratories as for the technical training of professionals working in this area. This register could be used as future strategy for red blood cell selection to freeze in the country.

O curto tempo de armazenamento dos hemocomponentes é um dos fatores que dificulta e limita a quantidade de sangue que pode ser efetivamente armazenada, o que é uma desvantagem na medicina veterinária, pois o acesso a doadores é restrito e a demanda é contínua e cada vez maior na prática de clínicas e hospitais veterinários. Durante o armazenamento do sangue em baixas temperaturas, seja sob a forma de sangue total ou concentrado de eritrócitos, há uma queda intensa de metabólitos importantes para a viabilidade e funcionalidade dos eritrócitos. O desenvolvimento de meios e soluções de preservação sanguínea possibilitou o armazenamento dos eritrócitos e, consequentemente, facilitou o trabalho dos bancos de sangue. Portanto, a busca por melhores formas e soluções para preservação capazes de evitar ou diminuir estes efeitos prejudiciais durante o seu armazenamento é contínua, para que ao final se obtenha uma melhor qualidade do sangue transfundido. O presente trabalho avaliou o concentrado de eritrócitos felino armazenado na solução de CPDA-1 e CPD/SAGM durante 35 dias. Os dados laboratoriais foram comparados entre grupos e ao longo do tempo. Neste experimento foram utilizadas 10 bolsas de concentrado de eritrócitos felino divididos em dois grupos de cinco para avaliação de cada um dos aditivos. Os parâmetros laboratoriais K+, Na+, Cl-, lactato, HCO3-, amônia, glicose e pH foram avaliados nos dias 1, 7, 14, 21, 28 e 35 após a coleta. Vários parâmetros (K+, lactato, HCO3, glicose e cloreto) demonstraram que a solução CPD/SAGM manteve o metabolismo energético do eritrócito mais estável. Com este trabalho, foi possível entender melhor as alterações metabólicas sofridas pelos eritrócitos felinos durante o armazenamento. Concluímos que, apesar da solução CPD/SAGM se mostrar mais eficaz in vitro, são necessários mais estudos com relação aos hemocomponentes em gatos e à sua viabilidade pós-transfusional. / The short shelf life of blood products is one factor that complicates and limits the amount of blood that can be effectively stored, and it is a disadvantage in veterinary practice, because the access to donors is restricted and the demand is continuous and increasing at veterinary clinics and hospitals. During blood storage at low temperatures, either as whole blood or as packed red cells, there is a significant decrease of metabolites that are important for the viability and functionality of erythrocytes. The development of blood preservation solutions has enabled the storage of red blood cells and improved the service at the blood banks. Therefore, the search for better ways and blood preservation solutions to avoid or reduce these harmful effects during the storage conditions is continuous, in order to obtain the best blood product to be transfused. This study evaluated 10 bags of feline erythrocyte concentrate divided into two groups, stored in CPDA-1 and CPD/SAGM solutions during 35 days. The laboratory data were compared between groups and over time. K+, Na+, Cl-, lactate, HCO3-, ammonia, glucose and pH were assessed on days 1, 7, 14, 21, 28, and 35 after collection. On various parameters (K+, Cl-, HCO3-, glucose and lactate) solution of CPD/SAGM kept the energy metabolism of red blood cells more stable. With these results we can better understand the biochemical changes of feline erythrocytes during storage. We conclude that, although the CPD/SAGM solution shown to be more effective, more studies are needed to improve knowledge of feline blood components and post-transfusion viability.

O curto tempo de armazenamento dos hemocomponentes é um dos fatores que dificulta e limita a quantidade de sangue que pode ser efetivamente armazenada, o que é uma desvantagem na medicina veterinária, pois o acesso a doadores é restrito e a demanda é contínua e cada vez maior na prática de clínicas e hospitais veterinários. Durante o armazenamento do sangue em baixas temperaturas, seja sob a forma de sangue total ou concentrado de eritrócitos, há uma queda intensa de metabólitos importantes para a viabilidade e funcionalidade dos eritrócitos. O desenvolvimento de meios e soluções de preservação sanguínea possibilitou o armazenamento dos eritrócitos e, consequentemente, facilitou o trabalho dos bancos de sangue. Portanto, a busca por melhores formas e soluções para preservação capazes de evitar ou diminuir estes efeitos prejudiciais durante o seu armazenamento é contínua, para que ao final se obtenha uma melhor qualidade do sangue transfundido. O presente trabalho avaliou o concentrado de eritrócitos felino armazenado na solução de CPDA-1 e CPD/SAGM durante 35 dias. Os dados laboratoriais foram comparados entre grupos e ao longo do tempo. Neste experimento foram utilizadas 10 bolsas de concentrado de eritrócitos felino divididos em dois grupos de cinco para avaliação de cada um dos aditivos. Os parâmetros laboratoriais K+, Na+, Cl-, lactato, HCO3-, amônia, glicose e pH foram avaliados nos dias 1, 7, 14, 21, 28 e 35 após a coleta. Vários parâmetros (K+, lactato, HCO3, glicose e cloreto) demonstraram que a solução CPD/SAGM manteve o metabolismo energético do eritrócito mais estável. Com este trabalho, foi possível entender melhor as alterações metabólicas sofridas pelos eritrócitos felinos durante o armazenamento. Concluímos que, apesar da solução CPD/SAGM se mostrar mais eficaz in vitro, são necessários mais estudos com relação aos hemocomponentes em gatos e à sua viabilidade pós-transfusional. / The short shelf life of blood products is one factor that complicates and limits the amount of blood that can be effectively stored, and it is a disadvantage in veterinary practice, because the access to donors is restricted and the demand is continuous and increasing at veterinary clinics and hospitals. During blood storage at low temperatures, either as whole blood or as packed red cells, there is a significant decrease of metabolites that are important for the viability and functionality of erythrocytes. The development of blood preservation solutions has enabled the storage of red blood cells and improved the service at the blood banks. Therefore, the search for better ways and blood preservation solutions to avoid or reduce these harmful effects during the storage conditions is continuous, in order to obtain the best blood product to be transfused. This study evaluated 10 bags of feline erythrocyte concentrate divided into two groups, stored in CPDA-1 and CPD/SAGM solutions during 35 days. The laboratory data were compared between groups and over time. K+, Na+, Cl-, lactate, HCO3-, ammonia, glucose and pH were assessed on days 1, 7, 14, 21, 28, and 35 after collection. On various parameters (K+, Cl-, HCO3-, glucose and lactate) solution of CPD/SAGM kept the energy metabolism of red blood cells more stable. With these results we can better understand the biochemical changes of feline erythrocytes during storage. We conclude that, although the CPD/SAGM solution shown to be more effective, more studies are needed to improve knowledge of feline blood components and post-transfusion viability.

A transfusão de concentrado de hemácias é uma atividade que proporciona muitos benefícios aos pacientes que necessitam aumentar a capacidade de transporte de oxigênio, mas também possui riscos inerentes. A disponibilidade de unidades de concentrado de hemácias compatíveis para pacientes que são fenótipo negativos para antígenos de alta frequência e possuem os respectivos anticorpos, bem como para pacientes com uma complexa combinação de aloanticorpos contra antígenos comuns, permanece como um desafio na medicina transfusional. Painéis nacionais e internacionais de doadores e bancos de unidades de concentrados de hemácias congeladas de doadores raros têm sido estabelecidos para facilitar o fornecimento de hemácias compatíveis para esses pacientes. É previsto que, com o aumento de movimentos populacionais através do mundo e chance em potencial de desenvolvimento de anticorpos raros ou mistura de anticorpos, a necessidade da disponibilidade de doadores de sangue raro continuará no futuro. Em média, 1800 unidades de hemocomponentes de sangue raro são transportadas anualmente para serem transfundidas, podendo este número ser maior devido à dificuldade em manter registro único de todos os dados. Um banco de sangue de fenótipos raros é formado por um sistema de informações e composto pelo cadastro de dados de doadores de sangue fenotipados e genotipados e que apresentam antígenos pouco comuns na população, pelo cadastro de unidades de hemocomponentes congelados e pela possibilidade de busca de doadores compatíveis, após a inserção dos resultados de fenotipagem/genotipagem do receptor. A possibilidade de acesso rápido a um cadastro nacional com informações referentes aos doadores de sangue com fenótipo raro poderá proporcionar vários benefícios, como uma maior rapidez na localização de concentrados de hemácias compatíveis para pacientes aloimunizados e diminuição dos custos para sua triagem. Futuramente, esses dados poderão compor o cadastro mundial de doadores com fenótipos raros, o que aumentariam as chances de se localizar fenótipos compatíveis com esses pacientes. A organização de programas de fenotipagem a nível nacional e a disponibilização destes dados poderão trazer avanços significativos, tanto para reestruturação de laboratórios de imuno-hematologia como para a capacitação técnica dos profissionais que atuam nesta área. Esse cadastro poderá ser utilizado futuramente como estratégia para seleção de concentrado de hemácias a serem congeladas no país. / The transfusion of red blood cells is an activity that provides many benefits to the patients who need to increase the oxygen-carrying capacity, but also has inherent risks. The availability of RBC units compatible for patients who are negative phenotype for high frequency antigens and have their antibodies as well as for patients with a complex combination of alloantibodies against common antigens remains a challenge in transfusion medicine. National and international donor panels and banks of frozen concentrated units of rare donor red blood cells have been established to facilitate the provision of compatible erythrocytes in these patients. It is expected that with the increase of population movements across the globe and likely potential development of rare antibodies or antibody mixture, the need for the availability of rare blood donors will continue in the future. On average, 1800 units of rare blood components are transported annually to be transfused, this number may be higher because of the difficulty in maintaining single record of all data. A rare phenotypes blood bank consists of an information system and consists of the registration of blood donors phenotyped and genotyped data who presenting unusual antigens in the population, the register of frozen blood products units and the possibility of seeking donors compatible, after insertion of the results of phenotyping / genotyping receiver. The possibility of quick access to a national database with information pertaining to blood donors with rare phenotype can provide several benefits, such as greater speed in locating concentrates compatible red blood cells to alloimmunized patients and lower costs for their screening. In the future, these data may select global register of donors with rare phenotypes, which would increase the chances of finding phenotypes consistent with these patients. The organization of phenotyping programs at national level and the availability of these data can bring significant advances for both restructuring immuno-hematology laboratories as for the technical training of professionals working in this area. This register could be used as future strategy for red blood cell selection to freeze in the country.

O curto tempo de armazenamento dos hemocomponentes é um dos fatores que dificulta e limita a quantidade de sangue que pode ser efetivamente armazenada, o que é uma desvantagem na medicina veterinária, pois o acesso a doadores é restrito e a demanda é contínua e cada vez maior na prática de clínicas e hospitais veterinários. Durante o armazenamento do sangue em baixas temperaturas, seja sob a forma de sangue total ou concentrado de eritrócitos, há uma queda intensa de metabólitos importantes para a viabilidade e funcionalidade dos eritrócitos. O desenvolvimento de meios e soluções de preservação sanguínea possibilitou o armazenamento dos eritrócitos e, consequentemente, facilitou o trabalho dos bancos de sangue. Portanto, a busca por melhores formas e soluções para preservação capazes de evitar ou diminuir estes efeitos prejudiciais durante o seu armazenamento é contínua, para que ao final se obtenha uma melhor qualidade do sangue transfundido. O presente trabalho avaliou o concentrado de eritrócitos felino armazenado na solução de CPDA-1 e CPD/SAGM durante 35 dias. Os dados laboratoriais foram comparados entre grupos e ao longo do tempo. Neste experimento foram utilizadas 10 bolsas de concentrado de eritrócitos felino divididos em dois grupos de cinco para avaliação de cada um dos aditivos. Os parâmetros laboratoriais K+, Na+, Cl-, lactato, HCO3-, amônia, glicose e pH foram avaliados nos dias 1, 7, 14, 21, 28 e 35 após a coleta. Vários parâmetros (K+, lactato, HCO3, glicose e cloreto) demonstraram que a solução CPD/SAGM manteve o metabolismo energético do eritrócito mais estável. Com este trabalho, foi possível entender melhor as alterações metabólicas sofridas pelos eritrócitos felinos durante o armazenamento. Concluímos que, apesar da solução CPD/SAGM se mostrar mais eficaz in vitro, são necessários mais estudos com relação aos hemocomponentes em gatos e à sua viabilidade pós-transfusional. / The short shelf life of blood products is one factor that complicates and limits the amount of blood that can be effectively stored, and it is a disadvantage in veterinary practice, because the access to donors is restricted and the demand is continuous and increasing at veterinary clinics and hospitals. During blood storage at low temperatures, either as whole blood or as packed red cells, there is a significant decrease of metabolites that are important for the viability and functionality of erythrocytes. The development of blood preservation solutions has enabled the storage of red blood cells and improved the service at the blood banks. Therefore, the search for better ways and blood preservation solutions to avoid or reduce these harmful effects during the storage conditions is continuous, in order to obtain the best blood product to be transfused. This study evaluated 10 bags of feline erythrocyte concentrate divided into two groups, stored in CPDA-1 and CPD/SAGM solutions during 35 days. The laboratory data were compared between groups and over time. K+, Na+, Cl-, lactate, HCO3-, ammonia, glucose and pH were assessed on days 1, 7, 14, 21, 28, and 35 after collection. On various parameters (K+, Cl-, HCO3-, glucose and lactate) solution of CPD/SAGM kept the energy metabolism of red blood cells more stable. With these results we can better understand the biochemical changes of feline erythrocytes during storage. We conclude that, although the CPD/SAGM solution shown to be more effective, more studies are needed to improve knowledge of feline blood components and post-transfusion viability.

Nesta dissertação, foi proposto o desenvolvimento de uma metodologia molecular por PCR em tempo real (qPCR) utilizando pool de DNA para a detecção de alelos que codificam antígenos importantes do sistema de grupo sanguíneo Diego. Esta ferramenta molecular será útil uma vez que são escassos os reagentes sorológicos para detecção desses antígenos e, quando existem, não permitem uma investigação em larga escala devido à pouca confiabilidade e alto custo. O sistema Diego (DI) possui 22 antígenos, sendo o antígeno Diª mais importante na prática transfusional. Eles são carreados pela proteína da Banda 3 que é proteína mais abundante na s hemácias, com 106 cópias. O antígeno possui uma maior prevalência, em indígenas americanos e asiáticos (6%-52%), já que é considerado um marcador antropológico de ancestrais mongóis; no entanto, a incidência desse antígeno tem aumentado dentre outras populações, como em caucasianos e afrodescendentes, e detectado em doadores de sangue, o que pode resultar em aloimunização de pacientes e dificultando o seu manejo terapêutico. Em contrapartida, a frequência do antígeno Dib em todas as populações é extremamente alta (>99,99%) e encontrar o raro fenótipo Di (a+b-) é ainda mais laborioso do que a busca pelo antígeno Diª. Sabe-se ainda muito pouco sobre a frequência dos antígenos Wrª e Wrb nas diferentes populações, mas estimase que a prevalência seja de 0,01% e >99,99% respectivamente. Foram utilizadas 410 amostras de doadores de sangue e 230 amostras de pacientes para genotipagem em qPCR utilizando pool de DNA para detecção dos alelos DI*01, DI*02, DI*02.03 e DI*02.04. A amplificação individualizada foi realizada quando a reação com pool demonstrou a amplificação de um dos alelos de interesse, DI*01 ou DI*02.03. Procedeu-se também com a clonagem dos alelos após à amplificação com as amostras controle, porém, ocorreu somente a clonagem dos alelos DI*02 e DI*02.03. Os fragmentos clonados apresentaram amplificação excelente e serão utilizados como controle positivo em testes moleculares futuros. Não foi possível a clonagem do DI*01 pelo problema da zigozidade da amostra controle. Houve 100% de concordância entre o resultado da genotipagem e as informações de fenotipagem das amostras controle. O alelo DI*01 ocorreu em 0,6% dos doadores de sangue e 1,7% em afrodescendentes, que corresponde a uma frequência genotípica DI*01/DI*02 de 1,2% e 1,3% respectivamente. Procedeu-se com as análises estatísticas comparativas entre o resultado desta pesquisa e de outras na população brasileira sobre os diferentes genótipos para entender se havia uma diferença estatística considerável. Ainda que a frequência para o genótipo DI*01/DI*02 seja mais baixa em doadores e mais alta em afrodescendentes do que o publicado em outros trabalhos brasileiros, a análise dos dados demonstrou que não havia diferença estatística com a maioria deles. A incidência aumentada do alelo DI*01 na população afrodescendente demonstra o aspecto da miscigenação. Conclui-se que a metodologia proposta funciona e tem aplicabilidade imediata em doadores de sangue e na busca de fenótipos raros. A incidência do alelo para Diª em doadores de sangue está abaixo do que um estudo anterior detectou em Ribeirão Preto (COZAC, 2004), que pode ser explicado pelas diferenças no censo populacional entre os estudos e pela coleta de amostra de universitários (62%). Não foram encontrados os genótipos DI*01/DI*01, DI*02.03/DI*02.03 e DI*02.03/DI*02.04 nas populações estudadas. / This work proposed the development of a molecular methodology by Real Time-PCR (qPCR) using DNA pool for the detection of alleles that encode important antigens of the Diego blood group system. This molecular tool will be useful since the serological reagents for the detection of these antigens are scarce and, when they exist, do not allow a large scale investigation due to the low reliability and high cost. The Diego (DI) system has 22 antigens, the Diª antigen is the most important in transfusion practice. They are carried by the Band 3 protein which is the most abundant protein on the erythroid surface, about 106 copies. The antigen has a higher prevalence in american indians and asians (6%-52%), since it is considered an anthropological marker of Mongolian ancestors; however, the incidence of this antigen has increased among other populations, such as in caucasians and afrodescendants, and detected in blood donors, which may result in alloimmunization of patients and make difficult their therapeutic management. In contrast, the frequency of Dib antigen in all populations is extremely high (>99.99%) and finding the rare phenotype Di (a+b-) is even more laborious than the search for Diª antigen. The frequency of Wrª and Wrb antigens in different populations is not well-known, but it is estimated that the prevalence is 0.01% and >99.99% respectively. 410 blood donor samples and 230 patient samples were used for genotyping in qPCR using DNA pool to detect the alleles DI*01, DI*01, DI*02.03 and DI*02.04. The single amplification was performed when the pool reaction demonstrated the amplification of one of the alleles of interest, DI*01 or DI*02.03. The alleles were also cloned after the control samples amplification. Only the cloning of the DI*02 and DI*02.03 alleles occurred, they presented excellent amplification and will be used as positive controls in future molecular tests, it was not possible to clone DI*01 by the control sample zygosity though. There was 100% agreement between the genotyping results and the phenotype information of the control samples. The DI*01 allele occurred in 0,6% of the blood donors and 1,7% in afrodescendants, which corresponds to a genotypic frequency DI*01/DI*02 of 1,2% and 1,3% in respectively. The comparative statistical analyzes between this research results and others in the Brazilian population on the different genotypes was performed to understand if there was a considerable statistical difference. Although the frequency of the genotype DI*01/DI*02 is lower in donors and higher in afrodescendants than that published in other Brazilian studies, data analysis showed that there was no statistical difference with most of them. The increased incidence of the DI*01 allele in the afrodescendant population demonstrates the aspect of miscegenation. It is concluded in this work that the proposed methodology works and has immediate applicability in the screening of blood donors and search for rare phenotypes. The incidence of the allele encoding Di ª antigen in blood donors is below than previously detected in Ribeirão Preto (COZAC, 2004), which can be explained by the differences in the population census between the studies and by the sample collection of university students (62%). The genotypes DI*01/DI*01, DI*02.03/DI*02.03 and DI*02.03/DI*02.04 were not found in the populations studied.