>Magister Scientiae - MSc / Introduction The blood-testis barrier (BTB) is formed by tight junctions between adjacent Sertoli cells. The barrier formed by these tight junction helps to create a specialized environment for spermatogenesis and provide an immunological barrier to protect developing germ cells. Methamphetamine (Meth) is known as neurotoxin however, its effects on the male reproductive system, especially on Sertoli cells and, the BTB are not well established. Therefore, this study aimed to determine the effects of Meth on the TM4 mouse testis Sertoli cell line and on the integrity of the BTB permeability. Materials and Methods This study investigated the effect of selected concentrations of Meth (0.1 μM, 1 μM, 10 μM, 20 μM and 100 μM) on TM4 mouse testis Sertoli cell line for 24 until 96 hours, using two treatments: an “acute” study (24 hrs exposure) and a “chronic” study, where treatment occurred on a daily basis over 96 hrs. The following parameters were investigated: viability, cell proliferation, mitochondrial activity, monolayer permeability.

The immune-reactive sperm are kept separate from the body by epithelial barriers such as the blood-testis barrier (BTB). While these barriers are beneficial for the protection of sperm from toxicants, they can make treating these areas difficult due to preventing the entry of pharmacological agents. This is especially an issue in the treatment of HIV and Ebola infection based on the ample evidence that these viruses are able to survive and spread from within the male genital tract (MGT), but only a few antiviral drugs are known to access the MGT. Transporters that line the epithelial barriers of the MGT, especially the BTB, are important for determining whether or not a drug is able to penetrate into the MGT through transepithelial transport. Several nucleoside analogs (NSA), which are used to treat HIV infection and leukemias, are known to be able to accumulate in seminal plasma, which makes them a useful tool for understanding transepithelial transport for the BTB. The purpose of these studies is to characterize the transport profile for the MGT, in particular the BTB, to gain a better understanding of how xenobiotics, especially ones based on nucleosides, can access the MGT. The chief finding of this work is the discovery of a transepithelial transport pathway expressed by Sertoli cells that allows for the entry of nucleosides (necessary for germ cell development) and NSA into the MGT. This pathway depends on equilibrative nucleoside transporter (ENT) 1 uptake and ENT2 efflux and occurs in both rats and humans. These studies provide the foundation for being able to predict the penetration of novel drugs into the MGT.

Die Transkriptionsfaktoren der p53 Familie besitzen diverse Aufgaben sowohl während der Tumorentstehung als auch während der Entwicklung. In seiner ursprünglichen, evolutionär konservierten Rolle hat p63, ein Mitglied der p53 Familie, die Aufgabe die genetische Stabilität von Keimzellen zu gewährleisten und beeinflusst zudem die Keimbahnentwicklung. Mit Hilfe von „knockout“ (KO) Mausmodellen wurde bereits der Einfluss der 3 Transkriptionsfaktoren p53, p63 und p73 auf die weibliche und männliche Keimbahn untersucht. Während p53KO und p63KO Mäuse fruchtbar sind, führt der gemeinsame Verlust aller p73 Isoformen oder der Verlust der transkriptionell aktiven Isoform TAp73 hingegen zur Infertilität der Tiere. Weibliche TAp73KO Tiere sind deshalb infertil, da es bei ihnen zu einer Inhibition der Ovulation kommt, die Blastozystenentwicklung gestört ist und Spindeldefekte in den Oozyten auftreten. Eine Erklärung für die Infertilität von männlichen TAp73KO Mäusen wurde hingegen noch nicht gegeben. In der vorliegenden wissenschaftlichen Studie beschreiben wir eine bisher unbekannte Funktion des Transkriptionsfaktors TAp73: seinen Einfluss auf die Entwicklung und den Erhalt der adulten männlichen Keimbahn. Untersuchungen an Mausmodellen zeigen, dass „total“ p73KO und Isoform-spezifische TAp73KO Mäuse im Alter von 6 Wochen oder älter einen starken Verlust von sich entwickelnden Keimzellen in den testikulären Tubuli aufweisen. ΔNp73KO Tiere zeigen diesen Phänotyp nicht und ihre Testis Morphologie entspricht der der Wildtyp (WT) Tiere. Der Phänotyp der p73KO und TAp73KO Testes lässt sich durch eine starke Reduktion in der Zahl der späten Stadien der Spermatozyten und Spermatiden charakterisieren, wohingegen die Zahl der basalen Spermatogonien und pachytänen Spermatozyten des Keimepithels nicht betroffen ist (reguläre Zellzahl und Proliferation). Die Depletion von p73 oder TAp73 führt zu einer Anhäufung von apoptotischen und unreifen Keimzellen im Lumen des Epididymis, was auf eine atypische, verfrühte Ablösung der Keimzellen aus dem Keimepithel schließen lässt. Diese Beobachtung wird dadurch bestätigt, dass die Sertoli-Zellen, welche die Keimzellen stützen und ernähren, im Elektronenmikroskop verkürzte cytoplasmatische Arme sowie eine verstärkte Vakuolisierung aufweisen. Außerdem zeigt das Keimepithel große strukturelle Veränderungen, die dadurch gekennzeichnet sind, dass die Keimzellen nicht mehr dicht zu einem Epithel gepackt sind und die Sertoli-Keimzell-Verbindung gestört ist. Der Verlust der Epithelstruktur begleitet von der Reduktion der Keimzellen scheint das Ergebnis eines Defekts der Blut-Testis-Schranke (BTS) zu sein. Dies wird durch einen in vivo BTS Permeabilitätstest und die gestörte Morphologie der Sertoli-Sertoli „tight junctions“ deutlich. Der funktionelle Verlust der BTS führt zur Zerstörung der epithelialen Polarität und der Umgebung der sich entwickelnden Keimzellen. Somit wird auch die basal-luminal gerichtete Migration der Keimzellen entlang der Keimzelltaschen der Sertoli-Zellen verhindert. Der molekulare Hintergrund für das Ungleichgewicht in der Reorganisation der Zell-Zell Verbindungen wurde mit Hilfe der quantitativen Expressionsanalyse des Gesamtgenoms untersucht. Dabei wurde Testis Gewebe von TAp73KO mit WT Mäusen verglichen, um TAp73-Zielgene zu finden. Die Depletion von TAp73 führt zur Induktion von Genen, die an der Adhäsion und Zellmigration beteiligt sind; Integrine und Proteaseinhibitoren wie Timp1 und die Serpine zeigen eine Hochregulation in der Expression. Es ist bekannt, dass diese Proteine bei der Reorganisation von Zell-Zell Verbindungen im Testis involviert sind. Die Studie zeigt, dass TAp73 vorwiegend in den Keimzellen exprimiert wird und dass diese parakrin auf die Sertoli-Zellen zu wirken scheinen, da die Überexpression von TAp73 Zielgenen in isolierten Sertoli-Zellen in der Langzeitkultur zurückgeht. Zusammenfassend konnte zum ersten Mal gezeigt werden, dass die Funktion von TAp73 für die adulte Spermatogenese unerlässlich ist. TAp73 reguliert im Testis ein Transkriptionsprogramm von Genen, die an Adhäsion und Migration beteiligt sind, sichert den Zusammenhalt des Keimepithels und verhindert den frühzeitigen Verlust von Keimzellen. Somit wird die ungestörte Keimzellentwicklung ermöglicht. Umgekehrt führt die Depletion von TAp73 zu starken Defekten in Zell-Zell Verbindungen von sich entwickelnden Keimzellen im Keimepithel, was die Infertilität von p73KO und TAp73KO Mäusen erklärt.

Orientador: Wellerson Rodrigo Scarano / Banca: Ana Paula Alves Favareto / Banca: Patricia Fernanda Felipe Pinheiro / Resumo: As células de Sertoli, encontradas no epitélio seminífero, formam a barreira hematotesticular através de suas junções comunicantes e de oclusão, responsável por proporcionar um ambiente protegido e coordenar o processo espermatogênico, fundamental para a manutenção da fertilidade masculina. A dinâmica de formação da barreira hematotesticular está diretamente relacionada com o equilíbrio entre síntese e degradação de moléculas especializadas, e sofre influência através de regulação androgênica e de fatores de crescimento específicos como o TGF-β2, sendo particularmente sensível aos fatores ambientais. A exposição à desreguladores endócrinos (DEs), capazes de interferir na modulação da barreira, pode levar a infertilidade. Atualmente o fator masculino pode ser responsável por 30-50% dos casos de infertilidade, sendo de grande importância o estabelecimento da relação entre a exposição aos DEs e o processo de formação dos gametas. Este estudo objetivou correlacionar a ação de dois desreguladores endócrinos, o Monobutil ftalato (MBP) e o Bisfenol A (BPA), em diferentes períodos de exposição, a partir de uma dose de baixa toxicidade, sobre a linhagem HSec de células de Sertoli humanas (in vitro) e sua possível ação sobre proteínas da barreira hematotesticular e proteínas regulatórias envolvidas na modulação da degradação e síntese dessa barreira. Para tal, as células da linhagem HSec foram cultivadas em meio específico para a expansão e submetidas à exposição ao MBP e ao BPA em baixas doses por 6 e 48 horas. Em seguida, as células foram isoladas e submetidas à extração de proteínas. Foram analisadas as proteínas: Ocludina, Ncaderina, β-catenina e Receptor de Andrógeno (AR) por Western Blot. Os resultados foram comparados para os dois agentes nos diferentes períodos de exposição em relação às células não expostas, mostrando que os dois agentes foram capazes de reduzir a... / Abstract: Sertoli cells, found in the seminiferous epithelium, form the blood-testis barrier via their gap and tight junctions, responsible for providing a protected environment and coordinate the spermatogenic process, essential for male fertility maintenance. The dynamics of the blood-testis barrier formation is directly related to the balance between synthesis and degradation of specialized molecules, and is influenced by androgen regulation and specific growth factors such as TGF-β2, being particularly sensitive to environmental factors. Exposure to endocrine disruptors (EDs), which interfere in the barrier modulation, can lead to infertility. Currently the male factor may be responsible for 30-50% of infertility cases, being the establishment of the relationship between exposure to EDs and the process of gametes formation of great importance. This study aimed to correlate the action of two EDs, monobutyl phthalate (MBP) and bisphenol A (BPA) in different periods of exposure, from a dose of low toxicity on the HSec lineage of human Sertoli cells (in vitro) and its possible action on proteins of blood-testis barrier and regulatory proteins involved in modulation of degradation and synthesis of this barrier. To this end, cells were cultured in HSec lineage specific medium and exposed to MBP and BPA in low doses for 6 and 48 hours. Then, cells were isolated and subjected to protein extraction. Proteins analyzed were: occludin, Ncadherin, β-catenin and Androgen Receptor (AR) by Western blot. The results were compared for the two agents in different exposure times to non-treated cells, showing that both agents were able to reduce the expression of important BTB proteins, presenting potential for disrupting the structure and maintenance of the barrier and, consequently, sperm production and male fertility / Mestre

Made available in DSpace on 2015-10-06T13:03:04Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-25. Added 1 bitstream(s) on 2015-10-06T13:19:00Z : No. of bitstreams: 1 000847999.pdf: 2110688 bytes, checksum: 3cfbc2629db1b4c973c6917a12690b53 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / As células de Sertoli, encontradas no epitélio seminífero, formam a barreira hematotesticular através de suas junções comunicantes e de oclusão, responsável por proporcionar um ambiente protegido e coordenar o processo espermatogênico, fundamental para a manutenção da fertilidade masculina. A dinâmica de formação da barreira hematotesticular está diretamente relacionada com o equilíbrio entre síntese e degradação de moléculas especializadas, e sofre influência através de regulação androgênica e de fatores de crescimento específicos como o TGF-β2, sendo particularmente sensível aos fatores ambientais. A exposição à desreguladores endócrinos (DEs), capazes de interferir na modulação da barreira, pode levar a infertilidade. Atualmente o fator masculino pode ser responsável por 30-50% dos casos de infertilidade, sendo de grande importância o estabelecimento da relação entre a exposição aos DEs e o processo de formação dos gametas. Este estudo objetivou correlacionar a ação de dois desreguladores endócrinos, o Monobutil ftalato (MBP) e o Bisfenol A (BPA), em diferentes períodos de exposição, a partir de uma dose de baixa toxicidade, sobre a linhagem HSec de células de Sertoli humanas (in vitro) e sua possível ação sobre proteínas da barreira hematotesticular e proteínas regulatórias envolvidas na modulação da degradação e síntese dessa barreira. Para tal, as células da linhagem HSec foram cultivadas em meio específico para a expansão e submetidas à exposição ao MBP e ao BPA em baixas doses por 6 e 48 horas. Em seguida, as células foram isoladas e submetidas à extração de proteínas. Foram analisadas as proteínas: Ocludina, Ncaderina, β-catenina e Receptor de Andrógeno (AR) por Western Blot. Os resultados foram comparados para os dois agentes nos diferentes períodos de exposição em relação às células não expostas, mostrando que os dois agentes foram capazes de reduzir a... / Sertoli cells, found in the seminiferous epithelium, form the blood-testis barrier via their gap and tight junctions, responsible for providing a protected environment and coordinate the spermatogenic process, essential for male fertility maintenance. The dynamics of the blood-testis barrier formation is directly related to the balance between synthesis and degradation of specialized molecules, and is influenced by androgen regulation and specific growth factors such as TGF-β2, being particularly sensitive to environmental factors. Exposure to endocrine disruptors (EDs), which interfere in the barrier modulation, can lead to infertility. Currently the male factor may be responsible for 30-50% of infertility cases, being the establishment of the relationship between exposure to EDs and the process of gametes formation of great importance. This study aimed to correlate the action of two EDs, monobutyl phthalate (MBP) and bisphenol A (BPA) in different periods of exposure, from a dose of low toxicity on the HSec lineage of human Sertoli cells (in vitro) and its possible action on proteins of blood-testis barrier and regulatory proteins involved in modulation of degradation and synthesis of this barrier. To this end, cells were cultured in HSec lineage specific medium and exposed to MBP and BPA in low doses for 6 and 48 hours. Then, cells were isolated and subjected to protein extraction. Proteins analyzed were: occludin, Ncadherin, β-catenin and Androgen Receptor (AR) by Western blot. The results were compared for the two agents in different exposure times to non-treated cells, showing that both agents were able to reduce the expression of important BTB proteins, presenting potential for disrupting the structure and maintenance of the barrier and, consequently, sperm production and male fertility

Orientadores: Luis Antonio Violin Dias Pereira, Lúcia Elvira Alvares / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-24T14:05:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Barbieri_MainaraFerreira_M.pdf: 6077469 bytes, checksum: c80011c6f6fca680e92ac99691a9c348 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: A origem da albumina nos órgãos do trato reprodutor masculino tem sido questionada ao longo dos anos sendo sua presença tecidual constantemente atribuída a um mecanismo de extravasamento do plasma sanguíneo para o espaço extravascular intersticial, atribuindo-se ao fígado o papel de sítio de síntese desta proteína no período pós-natal. O padrão de distribuição da proteína albumina nos tecidos epiteliais de órgãos do trato reprodutor masculino reserva questionamentos quanto à veracidade de seu alcance luminal pelo rompimento de suas barreiras hematoteciduais. Carreador de esteroides; estimulador de células de Leydig; mediador do mecanismo parácrino de comunicação entre células de Sertoli e germinativas; promotor de proliferação celular e mediador de mudanças estruturais em membranas celulares, com suposta participação na reação acrossômica e capacitação do espermatozoide são possíveis papéis atribuídos à albumina no trato reprodutor masculino. A associação da proteína albumina a componentes glicídicos não é usual para mamíferos, porém há respaldo a essa hipótese através das PES (glicoproteínas pré-albumínicas epidídimo-específicas de ovinos) e dados de nosso grupo de pesquisa através do epítopo reconhecido pelo anticorpo monoclonal (Amc) TRA 54 (testicular germ cells immunized to rat). Essa dissertação de mestrado retoma a polêmica discussão centrada na presença, origem, localização e função da albumina no trato reprodutor masculino e se propôs, através de uma abordagem cronológica pós-natal (períodos neonatal, pré-púbere, púbere, adulto e idoso) a rediscutir os fundamentos teóricos associados à principal proteína sérica de mamíferos bem como o dúbio perfil de expressão dessa proteína em Ratos analbuminêmicos Nagase (NAR). Nesse estudo, a presença da proteína albumina foi evidenciada por immunoblotting em todos os grupos e períodos do desenvolvimento pós-natal, apresentando padrão distinto de bandeamento para testículos e epidídimos NAR. A localização celular da proteína albumina foi identificada em camundongos, por imunohistoquímica, principalmente no tecido intersticial e nas células da linhagem germinativa. Testículos de ratos Sprague Dawley adultos apresentaram marcação adicional para células de Sertoli. Testículos e epidídimos de NAR mantiveram reatividade intersticial, sugerindo, ainda que em níveis extremamente baixos, a expressão de albumina. Para epidídimos, foi identificado amplo espectro de perfis de imunomarcação das células epiteliais e estereocílios. Ductos deferentes apresentaram, na região proximal ao epidídimo, imunomarcação citoplasmática e, na região distal, marcação de estereocílios e espermatozoides luminais. Perfis de imunomarcação citoplasmática também foram observados em vesícula seminal, próstata e uretra peniana, principalmente, no período adulto. Por fim, a presença de transcritos de RNAm detectados por ensaios de RT PCR (reação em cadeia de polimerase via transcriptase reversa) para testículos e epidídimos foi confirmada desde o período neonatal até idoso, mostrando-se também presente para ducto deferente a partir da puberdade. A abordagem do desenvolvimento pós-natal revelou um pico de maior expressão da albumina no período adulto com início do declínio registrado no período idoso. Como ressalva final, a confirmação da presença de RNAm para órgãos do trato reprodutor masculino não invalida a hipótese da também presença de albumina circulante, sintetizada, em primeira instância, pelas células hepáticas / Abstract: The origin of the albumin in the male reproductive tract has been questioned over the years and their presence tissue constantly assigned to a mechanism for extravasation of plasma into the interstitial extravascular space, assigning the role of the liver as the site of synthesis of this protein in the postnatal period. The distribution pattern of the albumin protein in the epithelial tissues of organs of the male reproductive tract reserves inquiries as to the veracity of their luminal reach through the disruption of their tissue blood-barriers. Carrier steroids; stimulator of Leydig cells; mediator of paracrine mechanism of communication between Sertoli and germ cells; promoter of cell proliferation and mediator of structural changes in cell membranes, with alleged involvement in the acrosome reaction and capacitation of sperm are possible roles of albumin in the male reproductive tract. The association of the albumin protein to glycidyl components is unusual for mammals, but there is support to this hypothesis by the PES (prealbumins epididymis-specific glycoproteins of sheep) and data from our research group through the epitope recognized by the monoclonal antibody (mAb) TRA 54 (testicular germ cells immunized to rat). This dissertation takes up the controversial discussion centered on the presence, source, location and function of albumin in the male reproductive tract and proposed, through a chronological postnatal approach (neonatal, prepubertal, puberal, adult and elderly periods) to revisit the theoretical foundations associated with major serum protein of mammals as well as the dubious expression profile of this protein in Nagase analbuminemic rats (NAR). In this study, the presence of albumin protein was detected by immunoblotting in all groups and periods of postnatal development, with distinct banding pattern in testis and epididymis of NAR. The cellular localization of the albumin protein has been identified in mice by immunohistochemistry mainly in the interstitial tissue and in germline cells. Testes of Sprague Dawley rats showed additional labeling of Sertoli cells. Testes and epididymides of NAR maintained interstitial reactivity, suggesting the expression of albumin even at extremely low levels. To epididymis a broad spectrum of immunostaining of epithelial cells and stereocilia profiles were identified. Vas deferens showed cytoplasmic immunostaining in the region proximal to epididymis, and in the distal region, stereocilia and luminal spermatozoa labeling. Cytoplasmic immunostaining profiles were also observed in the seminal vesicle, prostate and penile urethra, especially in adult period. Finally, the presence of mRNA transcripts detected by RT PCR (reverse transcriptase polymerase chain reaction) assays to testis and epididymis was confirmed from neonates to the elderly, being also present in vas deferens from puberty. The approach of postnatal development revealed a peak with the highest expression of albumin in the adult period beginning to decline at elderly. As a final caveat, the presence of mRNA confirmed for organs of the male reproductive tract does not invalidate the hypothesis of the also presence of circulating albumin in reproductive tissue, which must be synthesized at first instance, by liver cells / Mestrado / Biologia Tecidual / Mestra em Biologia Celular e Estrutural

Orientadores: Rejane Maira Góes, Maria Etelvina Pinto Fochi / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-27T12:07:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Reame_Vanessa_M.pdf: 2703536 bytes, checksum: ca5e54abedb9ba4eb714ecc22d220f3a (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: A obesidade está associada a vários prejuízos para a saúde, mas os efeitos sobre o sistema genital e reprodução masculina ainda são pouco compreendidos. Um estudo concluído recentemente em nosso laboratório comparou os efeitos do ambiente obesogênico (AO) em diferentes fases do desenvolvimento de ratos sobre a produção espermática na idade adulta. Todos os grupos expostos ao AO apresentaram prejuízos espermáticos. Para esclarecer esses achados, no presente trabalho, nós investigamos se os diferentes períodos de exposição ao AO resultaram em alterações funcionais nas células de Sertoli e modificaram permanentemente o ambiente parácrino intratesticular. Foram utilizados ratos Wistar adultos expostos à obesidade materna na gestação (O1), na gestação/ lactação (O2), ou sujeitos ao AO após desmame (O3), da lactação até a idade adulta (O4) ou da gestação até a idade adulta (O5) e grupo controle (C). A obesidade materna ou o AO foram induzidos por dieta com 20% de lipídeos (ração controle: 4% de lipídeos), por 15 semanas. As análises em microscopia de luz não mostraram alterações morfológicas nas células de Sertoli e no número dessas células expressando o receptor de andrógeno nos estágios VII e VIII do ciclo do epitélio seminífero. Entretanto, a percentagem de túbulos com descolamento prematuro de células germinativas foi acentuada em O5, moderada nos grupos O1, O2 e O3 e menor em O4. A testosterona sérica diminuiu 60% em O3 e O5, 27 % em O2, ~45% em O4 e não variou no O1. A dosagem de citocinas e de fator de crescimento, com o uso de ensaios multiplex, indicou aumento do TNF-'alfa' e a diminuição do FGF-2 no testículo dos grupos O1, O3 e O4, diminuição da IL-1'alfa' e IL-1'beta' no grupo O2, e diminuição da IL-1'alfa' no grupo O5. Nenhum grupo apresentou alteração para a IL-6. Adicionalmente, as análises por imunocitoquímica e por Western blotting mostraram que a expressão de conexina 43 diminuiu para o grupo exposto ao AO por toda a vida. As alterações no TNF-'alfa' e na IL-1'alfa1 pode ter aumentado a permeabilidade da barreira hematotesticular e juntamente com a queda na testosterona, podem explicar o descolamento de células germinativas e o prejuízo na eficiência e produção espermática. Esses dados indicam que o AO modula os fatores parácrinos testiculares de maneira diferencial, dependendo do período de exposição / Abstract: Obesity is associated with several health damage, but the effects on the reproductive system and male reproduction are still poorly understood. A study recently in our laboratory compared the effects of the obesogenic environment (OE) at different stages of development of rats on sperm production in adulthood. All the groups exposed to OE showed sperm damage. To clarify these findings in the present study, we investigated whether the different periods of exposure to OE resulted in functional changes in Sertoli cells and permanently changed the intratesticular paracrine environment. Wistar adult rats exposed to maternal obesity during pregnancy (O1), during pregnancy / lactation (O2), or subject to OE after weaning (O3), lactation to adulthood (O4) or from pregnancy to adulthood ( O5) and control group (C) were used. The maternal obesity or OE were induced by diet with 20% lipids (control diet: 4% lipid) for 15 weeks. The analysis by light microscopy showed no morphological changes in Sertoli cells and in the number of these cells expressing the androgen receptor in the seventh and eighth stages of the cycle of seminiferous epithelium. However, the percentage of tubules with premature separation of germ cells was accentuated in O5, moderate in groups O1, O2 and O3 and lower in O4. Serum testosterone decreased by 60% in O3 and O5, 27% in O2, ~ 45% in O4 and did not change in O1. The dosage of cytokines and growth factor with the use multiplex assays, showed an increase of TNF-'alpha' and the reduction of FGF-2 in the testis of groups O1, O3 and O4, reduced IL-1'alpha' and IL-1'beta' in O2 group, and decreased IL-1'alpha' in the O5 group. Neither group showed a change for IL-6. Additionally, analysis by immunocytochemistry and Western blotting showed that the expression of connexin 43 decreased to the group exposed to OE for all life. Changes in TNF-'alpha' and IL-1'alpha' may have increased the permeability of Blood-Testis barrier and along with the drop in testosterone may explain the detachment of germ cells and the loss in efficiency and sperm production. These data indicate that the OE modulates testicular paracrine factors differentially, depending on the exposure period / Mestrado / Biologia Celular / Mestra em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Wellerson Rodrigo Scarano / Resumo: Citocinas e proteínas quinases são fundamentais para o controle do processo espermatogênico, estando diretamente envolvidas na dinâmica da barreira hematotesticular. Diferentes mecanismos de controle são modulados por receptores como o GPR30, que ativa rapidamente diferentes vias de sinalização, responsáveis pelos processos de proliferação, sobrevivência e morte celular. Os desreguladores endócrinos (DEs) possuem grande afinidade pelo GPR30, além de potencial para ativar vias de estresse oxidativo e a abertura da barreira. Antagonistas funcionais dos DEs, como o Panax ginseng, podem ser protetores contra seus efeitos. Considerando a importância das vias de sinalização que regulam a espermatogênese e a constante exposição ambiental aos DEs a que estamos submetidos, este trabalho objetiva estudar a possível modulação da via não genômica ativada por GPR30 e do estresse oxidativo em células de Sertoli expostas a baixas doses do DE Monobutil Ftalato (MBP) bem como o potencial papel citoprotetor do GIM-1 (metabólito do P. ginseng) sobre essas células. Para tal, as células de Sertoli humanas (HSec) foram mantidas sobre matriz artificial, simulando o ambiente in vivo. A exposição ao MBP e ao GIM-1 foi realizada nos tempos de 30min, 1, 12, e 48 horas, em doses pré-estabelecidas pelo ensaio do MTT (teste de toxicidade) em 4 grupos: controle, MBP, GIM-1 e MBP + GIM-1. A morfologia celular foi avaliada pela coloração com Hematoxilina e Eosina, evidenciando efeitos deletérios do MBP sobre... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Cytokines and kinases protein are essential to control the spermatogenic process, being directly involved in the blood-testis barrier control. Activation of these mechanisms is modulated by receptors such as GPR30, which rapidly activates different signaling pathways responsible for proliferation and cell death processes. Endocrine Disruptors (EDs) have high affinity for GPR30, causing oxidative stress and possible barrier rupture. Functional antagonists of EDs, such as Panax ginseng, may be protective against their effects. Considering the importance of the signaling pathways that regulate spermatogenesis and the constant environmental exposure to the EDs to which we are subject, this work aims to study the possible modulation of the non-genomic pathway activated by GPR30 and oxidative stress in Sertoli cells exposed to low doses of the ED Monobutyl Phthalate (MBP) and the possible cytoprotective role of GIM-1 (P. ginseng metabolite) on these pathways. To this end, HSec human lineage cells were maintained on artificial matrix, simulating in vivo environment. Exposure to MBP and GIM-1 was performed at 30 min, 1, 12 and 48 hours at pre-set MTT (toxicity assay) levels in 4 groups: control, MBP, GIM-1 and MBP + GIM-1. Morphology and cell adhesion were evaluated by staining with Hematoxylin and Eosin, evidencing deleterious effects of MBP above cell distribution and adhesion in basement membrane; GIM-1 group was similar to Control and MBP+GIM-1 showed an intermediate aspect. In o... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor