Made available in DSpace on 2014-07-29T15:16:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao mestrado Thiago Rocha.pdf: 3202693 bytes, checksum: 0519000d8f7c06ef3d8a404097ad8a82 (MD5) Previous issue date: 2012-02-29 / The mechanism of acute toxicity of the commercial formulation glyphosate, Roundup Transorb® (RDT), was investigated in the guppy (Poecilia reticulata) gills using proteomic technologies associated with analyses of histopathological indexes (HI´s), followed by quantification of histopathological lesions of the gills. Additionally, the present study describes a protocol for the analysis of fish behavior using measurements of the Index of morphofunctional behavior (Imb) and Total (Itb). The results indicate that the acute toxicity of RDT may change P. reticulata behavior as a consequence of changes in the expression of proteins associated with cyto-histopathological lesions of the gills. RDT LC50,96h for guppy females was 7.54 ± 0.93 μL.L-1, indicating that the species is moderately sensitive to this herbicide. Acute exposure to RDT sublethal concentration of 3.8 μL.L-1 induced time-dependent histopathological lesions of the gills in different epithelial and muscle cell types. HI´s were related to increase in severity and frequency of histopathological lesions and suggest that RDT may cause regressive, circulatory, and progressive disorders in the guppy gills. Two-dimensional electrophoresis associated with mass spectrometry and biocomputing permitted to verify 48 spots of proteins/isoforms regulated by RDT, which are involved in different cell processes, such as energy metabolism, regulation and maintenance of cytoskeleton, metabolism of nucleic acids and proteins in response to stress. The study of behavior biomarkers (BM´s) indicates that Imb and Itb were viable in the analysis of P. reticulata behavioral changes induced by RDT. Furthermore, proteomic and histological changes in the gills of P. reticulata induced by RDT may be histopathological and proteomic BM´s to biomonitor water pollution caused by glyphosate-based herbicides. / O mecanismo de toxicidade aguda da formulação comercial de glifosato, Roundup Transorb® (RDT), foi investigado para as brânquias do guaru (Poecilia reticulata) por meio de tecnologias proteômicas associadas às análises dos índices histopatológicos (HI´s), seguido da quantificação das lesões histopatológicas branquiais. Além disso, o presente trabalho também descreve um protocolo para análise do comportamento de peixes utilizando mensurações dos Índices de Comportamento Morfofuncional (Icmf) e Total (Ict). Os resultados indicam que a toxicidade aguda do RDT pode alterar o comportamento de P. reticulata como reflexo das mudanças de expressão das proteínas associadas às lesões cito-histopatológicas branquiais. A CL50,96h do RDT para as fêmeas do guaru foi de 7,54 ± 0,93 μL.L-1, a qual indica que esta espécie é moderadamente sensível a esse herbicida. A exposição aguda à concentração subletal de 3,8 μL.L-1 de RDT induziu lesões histopatológicas branquiais de modo tempo dependente em diferentes tipos celulares epiteliais e muscular. Os HI´s foram relacionados com o aumento da severidade e da frequência das lesões histopatológicas e apontam que o RDT pode causar distúrbios regressivos, circulatórios e progressivos nas brânquias do guaru. A eletroforese bidimensional associada à espectrometria de massa e bioinformática permitiu verificar 48 spots de proteínas/isoformas reguladas pelo RDT, as quais estão envolvidas em distintos processos celulares, tais como metabolismo energético, regulação e manutenção do citoesqueleto, metabolismo de ácidos nucléicos e proteínas de resposta ao estresse. O estudo dos biomarcadores (BM´s) comportamentais indica que o Icmf e o Ict foram viáveis na análise das alterações comportamentais de P. reticulata induzidas pelo RDT. Ademais, as modificações proteômicas e histológicas nas brânquias de P. reticulata induzidas pelo RDT podem ser BM´s histopatológicos e proteômicos no biomonitoramento da poluição aquática por herbicidas baseados em glifosato.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:10:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Tatiana S Fiuza.pdf: 214501 bytes, checksum: abb8f10f906147d3c8811901c4bb08ab (MD5) Previous issue date: 2009-01-22 / The purpose of this work is to perform the pharmacognostic studies of the species Hyptidendron canum (Pohl ex Benth.) Harley (Lamiaceae) and Eugenia uniflora L. (Myrtaceae), investigate the population variability of the constituents of the essential oil from H. canum leaves and inflorescences, and assess the bioactivity of the crude ethanol extracts and fractions from leaves of this plants against microorganisms (bacteria and the fungus Candida albicans) and on Oreochromis niloticus Linnaeus. For the variability study of the H. canum essential oil, samples obtained from leaves and inflorescences from Hidrolândia, Silvânia, Bela Vista and Goiânia cities were analyzed by gas chromatography and gas chromatography with mass spectrometry. The anatomic analysis and the phytochemical screening of the leaves from the two species were performed using conventional techniques. The antimicrobial activity was assessed with Gram-positive and Gram-negative bacteria and with the Candida albicans fungus using the well diffusion test and the agar dilution method to determine the minimal inhibitory concentration (MIC). The biological activities of the crude ethanol extract and ethyl acetate, hexanic and chloroformic fractions of the leaves from the two species were tested in O. niloticus fish hepatopancreas and gill. The H. canum essential oils analysis indicated high chemovariability in the oils from different locations. The phytochemical screening and the thin layer chromatography (TLC) analysis of the H. canum leaves evidenced the presence of flavonoids, saponins, terpenes and lignans, while the E. uniflora leaves evidenced the presence of tannins, steroids, triterpenes, anthraquinonic heterosides, saponinic and flavonoids. As for the antimicrobial activity testing, the crude ethanol extracts from both species presented antimicrobial activity against all the microorganisms tested and the E. uniflora ethyl acetate fraction presented satisfactory activity against resistant Pseudomonas aeruginosa. The H. canum crude extract and fractions presented vasoactive activity in the hepatopancreas and gill of the tilapias, causing varying degrees of vasodilation and vascular congestion. An apparent proliferation of blood capillaries was detected in the hepatopancreas of the fish that ingested the hexanic fraction. The E. uniflora crude extract and the ethyl acetate, chloroform and hexanic fractions caused vasodilation, vascular congestion and tissue alterations in the O. niloticus hepatopancreas and gills / O presente trabalho teve por objetivo realizae o estudo farmacognóstico das espécies Hyptidendron canum (Pohl ex Benth.) Harley (Lamiaceae) e Eugenia uniflora L. (Myrtaceae), investigar a variabilidade populacional dos constituintes do óleo essencial das folhas e inflorescências da H. canum e avaliar a bioatividade dos extratos etanólicos brutos e das frações das folhas das referidas plantas contra icrorganismos (bactérias e fungo) e em Oreochromis niloticus Linnaeus. Para o estudo da variabilidade do óleo essencial da H. canum, as folhas e inflorescências foram coletadas nos municípos de Hidrolândia, de Silvânia, de Bela Vista e de Goiânia e seus óleos essenciais foram analisados por cromatografia gasosa e cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massa. A análise anatômica e a prospecção fitoquímica das folhas das duas espécies foram realizadas utilizando as técnicas convencionais. A atividade antimicrobiana foi avaliada com bactérias Gram-positivas e Gramnegativas e com o fungo Candida albicans, usando o teste de difusão em poço e o método de diluição em ágar, para determinar a concentração inibitória mínima (CIM). As atividades biológicas do extrato etanólico bruto e das frações acetato de etila, hexânica e clorofórmica das folhas das duas espécies foram avaliadas no hepatopâncreas e brânquias do peixe O. niloticus L. A análise dos óleos essenciais da H. canum indicou elevada quimiovariabilidade nos óleos dos diferentes locais. A triagem fitoquímica e a cromatografia em camada delgada (CCD) das folhas da H. canum evidenciaram a presença de flavonóides, saponinas, terpenos e lignanas e das folhas da E. uniflora, a presença de taninos, esteróides, triterpenos, heterosídeos antraquinônicos, saponínicos e flavonóides. Na avaliação da atividade antimicrobiana, observou-se que os extratos etanólicos brutos das duas espécies demonstraram atividade antimicrobiana contra todos os microrganismos testados, e a fração acetato de etila da E. uniflora apresentou boa atividade contra Pseudomonas aeruginosa resistentes aos antibióticos convencionais. O extrato bruto e as frações da H. canum apresentaram atividade vasoativa no hepatopâncreas e brânquias das tilápias, promovendo, em maior ou menor grau, vasodilatação e congestão vascular. Detectou-se ainda aparente proliferação dos capilares sanguíneos no hepatopâncreas dos peixes tratados com a fração hexânica. Verificou-se que tanto o extrato bruto, quanto as frações acetato de etila, clorofórmica e hexânica da E. uniflora promoveram, no hepatopâncreas e nas brânquias de O. niloticus, vasodilatação, congestão vascular e alterações teciduais