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Função luteal e luteólise em cadelas: aspectos morfo-funcionais

Luz, Marcelo Rezende [UNESP] January 2004 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2004Bitstream added on 2014-06-13T20:26:16Z : No. of bitstreams: 1 luz_mr_dr_botfmvz.pdf: 553785 bytes, checksum: e550b3849c2b7afd2cf5f088ee9c930a (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Os mecanismos luteotróficos e luteolíticos que controlam a função luteal em cadelas têm sido investigados. Este estudo avaliou as concentrações plasmáticas de PGFM e progesterona ao longo da gestação e do diestro, e do estradiol a partir do dia 40 da gestação ou diestro; a produção in vitro de PGF2α através de cultivos de explantes de endométrio, corpo lúteo e placenta, com ou sem estímulo por PDBu; a ocorrência de apoptose nas células luteais; e o envolvimento da enzima caspase-3 na luteólise em cadelas. Foram utilizadas 17 cadelas sem-raça-definida, divididas em dois grupos: diestro e gestação. Foi verificado que a queda das concentrações plasmáticas de progesterona em cadelas é um fenômeno lento e gradativo, que ocorreu a partir do terço inicial da gestação ou do diestro. As concentrações basais de progesterona foram atingidas nos dias 64 e 66 da gestação e diestro, respectivamente. Altas concentrações de PGFM e estradiol foram detectadas na segunda metade do diestro e da gestação. Ocorreu aumento progressivo de PGFM na segunda metade da gestação, e não no diestro, que culminou com um pico préparto. Os cultivos in vitro evidenciaram que o endométrio possui grande capacidade de produção de PGF2α, estimulado ou não por PDBu, superior aos explantes de corpo lúteo e de placenta, e mais pronunciado nos explantes de endométrio de cadelas gestantes comparados aos de cadelas em diestro. As análises histológicas por HE e CEC evidenciaram raras células apoptóticas no corpo lúteo das cadelas gestantes e em diestro, com células luteais íntegras detectadas nos corpos lúteos de cadelas no final da gestação, pós-parto imediato e aos 65 dias do diestro. Material sugestivo de corpus albicans foi evidenciado nos ovários oriundos das cadelas aos 75 e 85 dias do diestro. As concentrações de UAF/μg/ptn de caspase-3 não diferiram entre as... . / Luteotrophic and luteolytic mechanisms that control the luteal function in bitches are being investigated. This study evaluated the PGFM and progesterone plasma concentrations throughout pregnancy and diestrus, and plasma estradiol concentrations from day 40 of pregnancy or diestrus on; the in vitro production of PGF2α from explants of endometrium, corpus luteum and placenta cultures, with or without PDBu stimulation; the occurrence of apoptosis in the luteal cells; and the involvement of the enzyme caspase-3 in the luteolysis in bitches. Seventeen crossbred bitches, divided into 2 groups were used: diestrus and pregnancy. It was observed that the decrease of the plasma progesterone concentrations in bitches is a slow and gradual process, wich happened since the initial third of pregnancy or diestrus. The basal values of progesterone occurred at days 64 and 66 of pregnancy and diestrus, respectively. High plasma concentrations of PGFM and estradiol were detected at the second half of pregnancy, and not of diestrus, and culminate with a pre-partum peak. The in vitro cultures showed that endometrium has a big capacity of PGF2α production, stimulated or not by PDBu, and superior to corpus luteum or placenta explants, and also much more pronounced in the endometrium explants from pregnant compared to diestrus bitches. The histological analysis by HE and CEC showed rare apoptotic cells in the corpus luteum from pregnant and diestrus bitches, with intact luteal cells detected in corpora lutea from bitches in final pregnancy, immediate post-partum period and at 65 days of diestrus. Material suggestive of corpus albicans was evidenced in the ovaries of bitches on days 75 and 85 of diestrus. The concentrations of UAF/μg/ptn of caspase-3 did not differ between pregnant or diestrus bitches, and was also detected in the material suggestive of corpus albicans.
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Perfil hormonal e metabolismo de cálcio em cadelas gestamtes e no puerpério

Machado, Luiz Henrique de Araújo [UNESP] January 2004 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2004Bitstream added on 2014-06-13T19:05:30Z : No. of bitstreams: 1 machado_lha_dr_botfmvz.pdf: 559975 bytes, checksum: c67694bef1bd87e9ce85ee1bef52625d (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O presente projeto pretendeu estudar o ciclo hormonal e o metabolismo de cálcio das cadelas durante a gestação e puerpério e testar a eficiência do método da quimioluminescência como uma alternativa ao RIA. Foram utilizadas 10 cadelas adultas com tamanho e peso semelhantes, mantidas sob as mesmas condições de manejo e alimentadas com ração de boa qualidade, sem qualquer suplementação até os 40 dias de gestação, após isto a ração foi substituída por ração de filhote até o final da lactação. As colheitas de sangue foram realizadas durante as fases gestacional e puerperal, nos momentos: M0 (início do diestro citológico), M1 (20 dias pós-M0), M2 (40 dias pós-M0), M3 (momento do parto), M4 (15 dias pósparto), M5 (45 dias pós-parto) e M6 (30 dias pós-desmame). O PTH, osteocalcina, calcitonina, progesterona, estradiol, T3 total, T4 total, T4 livre e calcitriol foram analisados pelo radioimunoensaio; T4 canino, T3 total, T3 livre, T4 total e T4 livre foram analisados pela quimioluminescência e o cálcio, fósforo, proteína total, albumina e fosfatase alcalina foram analisados pelo método colorimétrico. A osteocalcina e calcitonina foram testadas pelo método do RIA e não foram observadas diferenças entre os momentos. O T3 Livre testado pelo método de quimioluminescência e apresentou todos os valores abaixo do limite de detecção. As demais variáveis apresentaram diferenças significativas entre os momentos. Não foram observadas correlações que demonstrem envolvimento dos hormônios dosados com o metabolismo do cálcio e fósforo. Não houve correlação entre o número de filhotes e as demais variáveis estudadas; os resultados demonstram não ter havido tendência a hipocalcemia e correção hormonal; o estudo de correlações não demonstrou um padrão de acontecimento entre as diversas variáveis, principalmente entre o cálcio e as demais variáveis... . / The present project intended to study hormone cycle and calcium metabolism of bitches during gestation and the puerperal period and to test the efficiency of chemoluminescent immune assay as an alternative to RIA. Ten adult bitches of similar size and weight, maintained under the same environmental conditions and fed with high quality dry food without any supplementation until the fortieth day of gestation, then changed to puppy dry food until the end of lactation. Blood samples were collected during gestation and the puerperal period, on moments M0 (beginning of cytologic diestrus), M1 (20 days after M0), M2 (40 days after M0), M3 (at the time of parturition), M4 (15 days after parturition), M5 (45 days after parturition) and M6 (30 days after weaning). PTH, osteocalcin, calcitonin, progesterone, estradiol, total T3, total T4, free T4 and calcitriol were analyzed by RIA; canine T4, total T3, free T3, total T4 and free T4 were analyzed by chemoluminescence and calcium, phosphorus, total protein albumin and alkaline phosphatase were analyzed by colorimetric method. There was no difference between moments on values of osteocalcin and calcitonin. All values of free T3 were below the limit of detection of the test. The other variables studied presented no difference between moments. There was no correlation demonstrating the involvement of tested hormones on calcium and phosphorus metabolism. There was no correlation between litter size and the other parameters studied; the results showed no tendency to hypocalcaemia and hormone correction; the study of correlations did not suggest a pattern of happening among variables, specially between calcium and the other variables; osteocalcin is more specific as bone maker that alkaline phosphatase; nutritional correction may have been the responsible for the quiescence of minerals and related hormones, the same occurring to the values of total protein... (Complete abstract, click electronic address below).
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Avaliação hormonal, imunoistoquímica e da expressão gênica de receptores de estrógeno e progesterona em cadelas(Canis familiaris) nas diferentes fases do ciclo estral e com piometra

Oliveira, Priscila Carvalho de [UNESP] 29 January 2008 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-01-29Bitstream added on 2014-06-13T20:46:03Z : No. of bitstreams: 1 oliveira_pc_dr_botfmvz_prot.pdf: 11253881 bytes, checksum: 80384352fec6d86aac0dac8f5c7bb55d (MD5) / Os objetivos do presente estudo foram avaliar as concentrações hormonais séricas de progesterona e estradiol, a expressão gênica de receptores de estrógeno (ER-alfa e ER-beta) e progesterona (PR), bem como, expressão de receptores de estrógeno e progesterona por meio de técnicas de imunoistoquímica, em cadelas normais (grupo controle) e com piometra (grupo experimental) em diferentes fases do ciclo estral. Foram utilizadas 51 fêmeas caninas submetidas à ovario-histerectomia, sendo 30 animais de conveniência e 21 com diagnóstico de piometra. Os níveis de progesterona para os 51 animais variaram entre 0,11 e 38,00 ng/ml, com média e erro padrão de 7,46+-1,52 ng/ml, respectivamente. Foi observado que os animais do grupo controle apresentaram concentrações séricas de progesterona significativamente superiores (P<0,01) em relação aos animais do grupo experimental, particularmente na fase de diestro. Não foram detectadas diferenças significativas (P>0,05) entre as freqüências de ocorrências nas classificações citológicas e com base nos níveis de progesterona, para animais normais e com piometra. Nos animais clinicamente saudáveis, foram observados em 6,6% com Hiperplasia Endometrial Cística (HEC) e 93,4% sem HEC. Para os animais com piometra, 100% exibiram HEC. Não foram verificadas diferenças significativas (P>0,05) nas expressões gênicas de receptores ER-alfa PR entre os grupos avaliados nas diferentes fases do ciclo estral. Entretanto, as expressões gênicas de receptor ER-beta apresentaram diferenças significativas (P<0,01), com os animais do grupo controle exibindo maiores taxas de transcrição quando comparados aos animais do grupo experimental, na fase de diestro. As porcentagens de células imunopositivas para o receptor de estrógeno, obtidos pela técnica de imunoistoquímica...
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Avaliação clínica e imunoistoquímica do útero e cérvix de cadelas com o diagnóstico de piometra

Volpato, Rodrigo [UNESP] 30 June 2011 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-06-30Bitstream added on 2014-06-13T18:39:03Z : No. of bitstreams: 1 volpato_r_me_botfmvz.pdf: 642492 bytes, checksum: 0343fee1df67369c16b788d4073dbf54 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação para o Desenvolvimento da UNESP (FUNDUNESP) / O objetivo do presente estudo foi analisar de forma comparativa piometra de cérvix aberta e fechada a fim de compreender o mecanismo de abertura e fechamento cervical. Para tanto, foram utilizadas 31 cadelas, de raças e idades variadas, sendo 25 cadelas com piometra de cérvix aberta e 6 de cérvix fechada. Durante a ovariosalpingohisterectomia (OSH), utilizada como tratamento, foi coletado sangue por venopunção da jugular e conteúdo vesical. Após o procedimento, foram coletados fragmentos da cérvix e do útero para a avaliação imunoistoquímica, além do conteúdo uterino. Para a avaliação imunoistoquímica foram analisados os receptores de estrógeno α e β, progesterona e colágeno I e III. Foram realizadas imunomarcações em diferentes regiões da cérvix como o epitélio glandular, epitélio luminal e estroma, assim como em diferentes regiões do útero como epitélio glandular e estroma. As imunomarcações de colágeno I e III foram realizadas nas regiões glandular e muscular da cérvix e útero. Foram realizadas análises bacterianas do conteúdo uterino e vesical e o perfil de sensibilidade das bactérias através de antibiogramas, testando os antibióticos mais comumente descritos na literatura. Foram realizados os testes estatísticos Mann-Whitnney, quiquadrado e correlação Spearman do teste de Fisher e concordância Kappa, dependendo da variável trabalhada. Os receptores de estrógeno α e β, colágenos I e III comportaram-se da mesma maneira na piometra aberta e fechada. As concentrações de receptores de progesterona foram superiores nas piometras fechadas. As concentrações de progesterona plasmática foram semelhantes nas piometras abertas e fechadas. O hemograma das cadelas com piometra aberta e fechada foram semelhantes e característicos de um processo inflamatório crônico. A função renal dos animais comprometidos estão dentro dos limites... / The aim of this study was to analyze comparatively open and closed cervix pyometra in oder to undertand the mechanism of cervical opening and closing. To this end, we used 31 bitches of different breeds and ages, 25 with pyometra cervix open and 6 closed cervix. During ovariohysterectomy (OSH), used as treatment, blood by venipuncture from the jugular and vesical content were collected. After the procedure, samples were collected from the cervix and uterus to evaluate immunohistochemistry, and the uterine contents. For immunohistochemical evaluation were analyzed estrogen receptors α and β, progesterone and collagen I and III. Immunostainings were performed in different regions of the cervix such as glandular epithelium, luminal epithelium and glandular stroma, as well as in different regions of the uterus as glandular epithelium and glandular stroma. The immunostainings for collagen I and III were performed in muscular and glandular regions of the cervix and uterus. We analyzed the bacterial content of the uterus and bladder and the susceptibility profile of bacteria through antibiograms, testing the antibiotics most commonly reported. Through appropriate statistical. The estrogen receptors α and β, collagen I and III behaved the same way in both open and closed pyometra. Concentrations of progesterone receptors were higher in closed pyometra.The plasma progesterone concentrations were similar in both open and closed pyometra. Hemogram bitches with pyometra opened and closed were similar and characteristic of a chronic inflammatory process. The renal function of animals affected are within the range considered normal for dogs. There was a positive correlation between bacteria isolated from urinary bladder and uterine contents. The most frequently isolated bacteria was E. coli and the antibiotic doxycycline was more sensitive. Further studies are needed to understand... (Complete abstract click electronic access below)
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Maturação nuclear de ovócitos de cadelas em estro e anestro submetidos à maturação in vitro

Martins, Lilian Rigatto [UNESP] January 2005 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005Bitstream added on 2014-06-13T20:59:34Z : No. of bitstreams: 1 martins_lr_me_botfmvz.pdf: 205027 bytes, checksum: c3564239794a755089ca1f0ea2f577ca (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O presente estudo objetivou avaliar a taxa de maturidade nuclear dos ovócitos provenientes de cadelas em estro e em anestro submetidos à maturação em dois meios de cultivo, TCM 199 (Tissue Culture Medium) e SOF (Synthetic Oviduct Fluid) durante 24 horas. A parte experimental foi dividida em dois grupos; grupo 1, cadelas em anestro e grupo 2, constituído de cadelas em estro. Em cada grupo, os ovócitos foram removidos dos ovários e metade deles foi imediatamente corada com Hoescht 33342 e classificados como VG (vesícula germinativa), QVG (quebra da vesícula germinativa), MI (metáfase I) e D/NI (degenerados/não passíveis de identificação) e a outra parte foi maturada em SOF e em TCM 199 por 24 horas, corados e avaliados conforme descrição anterior. Foram recuperados 511 e 373 ovócitos grau I nos grupos 1 e 2 respectivamente. O número médio de ovócitos grau I obtidos por cadela no anestro foi de 46,45 ± 25,23. Para as fêmeas do grupo 2, este valor foi de 62,16 ± 8,18 ovócitos/cadela. O protocolo que utilizou ovócitos provenientes de doadoras em estro e maturação in vitro no SOF foi superior aos demais protocolos testados, demonstrando que a maturação ovocitária é beneficiada pela associação entre a fase do ciclo estral e o meio de maturação in vitro (58% MI). Quando submetidos à maturação in vitro os ovócitos provenientes de fêmeas em estro e em anestro apresentam taxas de QVG semelhantes (21,68% TCM 199 e 23,61% SOF – anestro; 20% TCM199 e 23% SOF - estro), porém a taxa de MI foi superior no grupo de ovócitos provenientes de fêmeas em estro (9,79% TCM 199 e 9,72% SOF – anestro; 25% TCM 199 e 58% SOF – estro). Pôde-se ainda evidenciar que em todos os protocolos testados, o tempo de maturação in vitro de 24 horas foi insuficiente para a obtenção da configuração nuclear de metáfase II. / The present study aimed to evaluate the nuclear maturation of in vitro matured oocytes originating from estrus and anoestrus bitches. Two different culture media were used, TCM 199 (Tissue Culture Medium) and SOF (Synthetic Oviduct Fluid). The experimental part was divided into two groups: group 1, consisting of anoestrus bitches, and group 2, consisting of estrus bitches. In each group, oocytes were harvested from ovaries and half of them were immediately stained with Hoechst 33342 and classified as in GV (germinal vesicle), GVBD (germinal vesicle breakdown), MI (metaphase I) and D/NI (degenerated/non identifiable). The other part was matured in SOF or TCM media for 24 hours, stained and evaluated as described previously. There were 511 and 373 grade I oocytes recovered in groups 1 and 2, respectively. The mean number of oocytes obtained per anoestrus bitch was 46.45 ± 25.23. For females in group 2, this value was 62.16 ± 8.18 oocytes / bitch. The protocol that utilized estrus donor’s oocytes and in vitro maturation in SOF was superior to the other protocol tested, demonstrating that the association between phase of the estrus cycle and maturation medium is beneficial for oocyte in vitro maturation (58% MI). Oocytes from estrus and anoestrus bitches submitted to in vitro maturation presented similar rates of GVBD (21.68% TCM 199 and 23.61% SOF – anoestrus; 20% TCM199 and 23% SOF - estrus). However the MI rate was higher in the estrus group (9.79% TCM 199 and 9.72% SOF – anoestrus; 25% TCM 199 and 58% SOF – estrus). It was demonstrated, in all the protocols tested, that 24 hours in vitro maturation was insufficient for obtaining nuclear configuration of metaphase II.
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Estudo da população e criopreservação de folículos ovarianos pré-antrais de cadelas

Rôlo, José Luiz Jivago de Paula 15 February 2012 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2012. / Submitted by Elna Araújo (elna@bce.unb.br) on 2012-07-13T00:25:54Z No. of bitstreams: 1 2012_JoseLuizJivagodePaulaRolo.pdf: 3609925 bytes, checksum: 551d692980de399bc948d25b7d70b901 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2012-07-13T12:58:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_JoseLuizJivagodePaulaRolo.pdf: 3609925 bytes, checksum: 551d692980de399bc948d25b7d70b901 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-07-13T12:58:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_JoseLuizJivagodePaulaRolo.pdf: 3609925 bytes, checksum: 551d692980de399bc948d25b7d70b901 (MD5) / O objetivo desse trabalho foi definir as características populacionais, morfológicas e ultraestruturais de folículos ovarianos pré-antrais (FOPA) e comparar o efeito das técnicas de criopreservação de congelamento lento (CL) e vitrificação (V) de tecido ovariano de cadela sobre a morfologia dos FOPA. A média da estimativa da população de FOPA de cadelas foi de 48541±18366, onde 94,25% eram primordiais (45145±16076), 4,92% primários (2358±1253) e 0,83% secundários (397±351). A média de diâmetro do folículo, ovócito e núcleo do ovócito e número de células da granulosa de folículos primordiais foram 27,5±4,2μm, 21,7±2,7μm e 11,3±1,6μm e 6,0±1,8 respectivamente. Para folículos primários foram, respectivamente, 42,6±12,5μm, 27,8±7,5μm, 13,7±2,6μm e 15,0±7,0. Para folículos secundários, foi 101,6±62,9μm para diâmetro do folículo, 48,0±12,6μm para diâmetro do ovócito, 18,7±4,2μm para diâmetro do núcleo do ovócito e 61,5±63,5 células da granulosa. A porcentagem total de FOPA morfologicamente normais foi de 93,66±6,81% para o grupo controle, 86,16±11,05% para o CL e 68,14±12,75% para a V. Para folículos primordiais a porcentagem de FOPA normais foi 96,69±4,72% no controle, 89,51±10,39% no CL e 75,32±9,23% na V. Para folículos primários e secundários os valores foram, respectivamente, 94,80±6,91% e 87,62±17,12% para o controle, 86,8±12,15% e 76,35±26,34% para CL e 61,53±14,78 e 52,25±22,13% para a V. Não houve diferença significativa na porcentagem de FOPA morfologicamente normais entre o CL e o grupo controle. Já na V essa porcentagem foi significativamente inferior aos outros 2 grupos (P<0,05). A ultraestrutura de folículos pré-antrais de cadela mostrou ser semelhante à descrita para outras espécies. Após criopreservação por CL os folículos apresentaram danos ultraestruturais, enquanto após vitrificação os folículos primordiais e primários estavam bem preservados. No entanto, os folículos secundários foram muito danificados em ambos os tratamentos. Em conclusão, este trabalho descreveu as características morfométricas, ultraestruturais e populacionais dos FOPA de cadela. A vitrificação foi mais eficiente em preservar a ultraestrutura dos folículos primordiais e primários que o congelamento lento. Os dois métodos de criopreservação testados apresentam resultados promissores, mas ainda precisam de aperfeiçoamento, especialmente em relação à preservação de folículos secundários. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The aim of this study was to define the population, morphological and ultrastructural characteristics of bitch preantral follicles (PAF) and to compare the effects of two cryopreservation techniques - slow freezing (SF) and vitrification (V) - of bitches ovarian tissue on the morphology of PAF. The average population of PAF was 48,541 ± 18,366, where 94.25% were primordial (45145 ± 16076), 4.92% primary (2358 ± 1253) and 0.83% secondary (397 ± 351). The average diameter of the follicle, oocyte and the oocyte nucleus and the number of granulosa cells for primordial follicles were 27.5 ± 4.2μm, 21.7 ± 2.7μm, 11.3 ± 1.6μm and 6.0 ± 1.8, respectively. For primary follicles the values were, respectively, 42.6 ± 12.5μm, 27.8 ± 7.5μm, 13.7 ± 2.6μm and 15.0 ± 7.0. For secondary follicles follicle diameter was 101.6 ± 62.9μm, oocyte diameter was 48.0 ± 12.6μm, nucleus diameter was 18.7 ± 4.2μm, and the number of granulosa cells was 61.5 ± 63.5. The overall percentage of morphologically normal PAF was 93.66 ± 6.81% for the control group, 86.16 ± 11.05% for SF and 68.14 ± 12.75% for V. The percentage of normal primordial follicles was 96.69 ± 4.72% in control, 89.51 ± 10.39% in SF and 75.32 ± 9.23% in V. For primary and secondary follicles values were respectively 94.80 ± 6.91% and 87.62 ± 17.12% for control, 86.8 ± 12.15% and 76.35 ± 26.34% for SF and 61.53 ± 14.78 and 52.25 ± 22.13% for V. There was no significant difference on the percentage of normal PAF among SF and the control. However, V presented a significantly lower percentage of normal PAF than the other two groups (P<0.05). The ultrastructure of bitch PAF was similar to that described for other species. After, SF follicles presented ultrastructural damage, while after V, primordial and primary follicles were well preserved. Secondary follicles, however, suffered many damages in both cryopreservation techniques. In conclusion, this work described the morphometric and ultrastructural characteristics and the population of bitch PAF. Vitrification was more effective in preserving the ultrastructure of primordial and primary follicles than slow freezing. Both methods are promising, but need improvement, especially concerning secondary follicles preservation.
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Inseminação artificial com sêmen congelado em cães

Chirinéa, Viviane Helena [UNESP] 06 June 2008 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-06-06Bitstream added on 2014-06-13T20:46:14Z : No. of bitstreams: 1 chirinea_vh_dr_botfmvz.pdf: 377109 bytes, checksum: 14a2afeb1c35186ec50ee38a1a81ba09 (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A inseminação artificial (IA) utilizando sêmen congelado é uma ferramenta importante na reprodução de cães, visa o melhoramento genético e melhor aproveitamento do reprodutor. Além disso, a melhor metodologia para avaliar o potencial fecundante de uma amostra de sêmen é o teste in vivo. Por isso, os objetivos deste trabalho foram determinar a taxa de gestação de cadelas, utilizando sêmen congelado em meio diluente TRIS/OEP/Frutose/8%Glicerol, e comparar duas técnicas de IA: intra-uterina, por laparotomia e intravaginal. O sêmen foi colhido de um único macho, por manipulação digital do pênis e analisado, imediatamente, após a colheita e após a descongelação a 70°C, por 8 segundos. A cinética do movimento foi verificada pelo CASA (Computer Assisted Semen Analyzer), e a integridade das membranas por: sondas fluorescentes (iodeto de propídio e carboxifluoresceína), pelo teste supra vital com a coloração de eosina, e pela associação de sondas (iodeto de propídio, JC-1 e FITC-PSA). A morfologia espermática foi avaliada por meio de esfregaços corados com Karras. A congelação do sêmen foi realizada pelo método descrito por Chirinéa et al. (2006). As fêmeas foram monitoradas desde o início da fase do proestro utilizando a citologia vaginal seriada e a dosagem de progesterona sérica, a cada 48 horas. Para as inseminações, as cadelas foram divididas em dois grupos: Grupo 1 (n=6) inseminadas uma única vez, via intra-uterina, por laparotomia, com uma dose inseminante de 160 x 106 espermatozóides/2mL; e Grupo 2 (n=6) inseminadas duas vezes, via intravaginal com uma dose inseminante de 160 x 106 espermatozóides/2 mL por inseminação. Os resultados das análises do sêmen pré e pós-descongelação não apresentaram diferenças significativas, com exceção da morfologia espermática e da associação de sondas fluorescentes... / Artificial insemination (AI) using frozen semen is an important tool on dog’s reproduction, aiming to genetic improvement and better use of a stud. Besides, the better way to evaluate the fecundate potential of a semen sample is an in vivo test. That way, the aim of this work was to determine the pregnancy rate in bitches, using TRIS/OEP/Fructose/8%Glycerol as the diluent medium, and to compare two AI techniques: intrauterine and intravaginal. Semen was collected from one male only, by digital manipulation. Semen was analyzed immediately after collection and after thawed at 70°C for 8 seconds. Movement kinetics were analyzed by CASA (Computer Assisted Semen Analyzer), membrane integrity using fluorescents probes (propidium iodide and carboxyfluorescein), supravital test, eosin staining, integrity of plasmatic, nuclear and mitochondrial membranes using the association of fluorescent probes (FITC-PSA, propidium iodide and JC-1) and sperm morphology. Semen was frozen using the method described by Chirinéa, 2006. Females were monitored since the beginning of proestrus, using vaginal smear and progesterone measurement, each 48hours. To inseminations, bitches were divided into two groups: Group 1, composed by 6 females, which were inseminated just once via intrauterine, with an insemination dose of 160 x 106 spermatozoids/2mL and Group 2 constituted by 6 females, which were inseminated twice, via intravaginal, using an insemination dose of 160 x 106 spermatozoids/2 mL/insemination. Results from semen analyses made before and after freezing did not show any difference, except for sperm morphology and association of fluorescents probes. Pregnancy rate was 66,6% (4/6) on Group 1 and 16,6% (1/6) on Group 2. In conclusion, the success of artificial insemination depends not only on semen quality after thawed, but also on the AI technique used. In our work, intrauterine technique by laparotomy was better than intravaginal.
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Indução do estro em cadelas (canis familiaris): aspectos clínico, comportamental e hormonal

Paula, Moisés Calvo de [UNESP] 23 July 2009 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-07-23Bitstream added on 2014-06-13T20:59:32Z : No. of bitstreams: 1 paula_mc_me_botfmvz.pdf: 465421 bytes, checksum: d4f7523bab03de870773e810dfc43208 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A cadela apresenta particularidades no ciclo estral e, o conhecimento de tais características é fundamental para a implantação de técnicas de reprodução assistida. A indução do estro é uma importante ferramenta tanto em pesquisas quanto no manejo reprodutivo de canis. Portanto, o presente trabalho utilizou um agonista da dopamina – cabergolina – 105 -120 dias após o final do estro na dose de 5μg/Kg por no máximo 15 dias ou até a fêmea apresentar sinais de estro, a fim de induzir e acompanhar os estros, espontâneo e induzido em cadelas, desde o início do proestro até o final do estro. As fêmeas foram divididas em 2 grupos: controle (espontâneo) e experimental (induzido). Amostras de sangue para a dosagem de progesterona e esfregaço vaginal foram coletadas a cada 2 dias, além de, observação dos sinais clínicos e comportamentais. Todas as 5 fêmeas do grupo experimental responderam ao tratamento com cabergolina em média após 42,6 dias, sendo que em 2 fêmeas essa resposta foi mais rápida e ambas apresentaram sinais de estro antes do final do tratamento. Ademais, o Intervalo Interestral (IIE) foi menor nas fêmeas do grupo experimental, 159 ± 15.01, em relação às do grupo controle, 169 ± 13.43 dias. O perfil da progesterona e o padrão citológico não apresentaram diferenças entre os grupos estudados bem como os sinais clínicos e comportamentais. Em suma, a cabergolina pode ser empregada como agente indutor do estro na cadela, a fim de diminuir o IIE e facilitar o manejo reprodutivo. / The bitch presents certain peculiarities in her estrus cycle that makes the knowing of such differences a sine qua non condition to the ones that want to implement assisted reproduction techniques. The estrus induction is an important tool not only for researches but also for kennels’ reproductive managements. Hence this present study has used the cabergoline, which is a dopamine agonist, from 105 to 120 days after the end of the estrus at 5μg/Kg until the bitch presented estrus signs (maximum of 15 days of injection). Both spontaneous and induced estruses were observed from the beginning of proestrus until the end of estrus. Bitches were divided into 2 groups: control (spontaneous) and experimental (induced). Blood samples to check progesterone levels and vaginal smears were taken every 2 days, and clinical signs and behavioral changes were also observed and taken into consideration. All 5 females from the experimental group responded to the cabergoline treatment (42,6 days), but 2 bitches responded earlier than that and both presented estrus signs before the end of the treatment. Not only that but also the interestral interval (IEI) was shorter for the bitches in the experimental group, 159 ± 15,01, if compared to the control group, 169 ± 13,43 days. The progesterone profile and the cytological standard did not present any difference among the studied groups, and so happened to the clinical and behavioral signs. To sum up, cabergoline can be used as a tool to induce estrus in bitches in order to reduce the IEI and facilitate the reproductive management.
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Efeitos da aplicação do benzoato de estadiol na prevvenção de gestação em cadelas

Derussi, Ana Augusta Pagnano [UNESP] 23 January 2009 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-01-23Bitstream added on 2014-06-13T19:38:32Z : No. of bitstreams: 1 derussi_aap_me_botfmvz.pdf: 919371 bytes, checksum: 2a418e27dc57dd6def1de0d243e28651 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos do benzoato de estradiol na prevenção de gestação em cadelas recém-acasaladas. Utilizou-se 24 fêmeas: GRUPO I (Experimental) – 12 cadelas que receberam uma única aplicação de benzoato de estradiol, dose de 0,2 mg/Kg, via intramuscular, entre o 2º e 7º dia da data da última cobertura. GRUPO II (Controle)- 12 cadelas que receberam solução oleosa diluente, dose de 0,2 ml/Kg, via intramuscular, entre os dias 2 e 7 da última data de cobertura. A ovariohisterectomia (OSH) foi realizada entre os dias 6 a 16 após a última cobertura e foram avaliadas: taxa de recuperação e degeneração ovocitária/ embrionária; viabilidade embrionária e a influência do fármaco sobre à migração, clivagem e implantação embrionária. Foi examinado, também, os efeitos do benzoato de estradiol no sistema hematológico após a utilização da droga. Para avaliação dos hemogramas foi realizado análise de variância –ANOVA (p< 0,05) para medidas repetidas e o teste de Tukey para os parâmetros hematológicos. Para as variáveis recuperação ovocitária e embrionária foi utilizado o coeficiente de correlação de Pearson; para migração embrionária e clivagem embrionária foi realizado o teste de qui-quadrado, na análise de viabilidade embrionária foi utilizado teste exato de Fisher e na análise da implantação foi utilizada análise descritiva dos dados. Todos os testes foram realizados a 5% de nível de significância. Obteve-se 03 embriões no grupo experimental e 52 no grupo controle; o benzoato de estradiol exerceu influencia sobre o número de estruturas recuperadas, porém não influenciou a migração, clivagem e a viabilidade embrionária quando utilizado até o 7°dia após a cobertura. Não foi detectada a presença de vesículas embrionárias implantadas em ambos os grupos, porém... / The purpose of this experiment was to evaluate the effects of the estradiol benzoate on the prevention of pregnancy in mismantig dogs. For that, 24 bitches were divided, in: Experimental Group - 12 bitches that has received a single application of the estradiol benzoate (dose of 0,2 mg/Kg, intramuscular application), in a 2 to 7º days after the last mating. Control Group - 12 bitches received an oily solution (dose of 0,2 mL/Kg, intramuscular application) on the same period (between 2 to 7 days after the last mating). Ovariohysterectomy (OSH) has performed, between days 6 and 16 after the last mating and the parameters evaluated were the recovery rate and the embryonic/ oocytary degeneration rate and the influence of the drug on the migration, the viability, clivage and embryonic implantation. The effect of the estradiol benzoate on the hematologic system after the use of the drug was also investigate. For the oocytary and embryonic recovery variables the coefficient of Pearson correlation was used, in the analysis of the embryonic migration and embryonic clivage a qui-square test was carried qui-square test, in the analysis of embryonic viability were used the Fisher’s exact test were used and in the analysis of the implantation descriptive analysis o was used. All the tests used 5% of significance level.Three embryos in the experimental group and 52 embryos in the control group were acquired; estradiol benzoate did practise influences on the number of structures recouvered, but, nor on the migration, clivage and embryonic viability, when used until the 7° day after the mating. There was no detection the presence of embryonic vesicles in both the groups, Apparently, OSHs were performed to soon for the detection of embryonic vesicle... (Complete abstract click electronic access below)
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Efeitos da congelação lenta e da vitrificação na viabilidade, ultraestrutura e expressão gênica de embriões caninos produzidos in vivo

Guaitolini, Carlos Renato de Freitas [UNESP] 28 July 2014 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2015-05-14T16:53:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-07-28Bitstream added on 2015-05-14T16:59:08Z : No. of bitstreams: 1 000823842_20160728.pdf: 48543 bytes, checksum: 0a0e4c6e3217335eb5c3eedceb8b2a73 (MD5) Bitstreams deleted on 2016-07-29T12:53:53Z: 000823842_20160728.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-07-29T12:54:47Z : No. of bitstreams: 1 000823842.pdf: 2103625 bytes, checksum: bf645c43dd091bc121630fa032a1e708 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Objetivou-se com este estudo comparar os efeitos da congelação lenta vs vitrificação sobre a viabilidade, ultraestrutura e expressão gênica de blastocistos caninos produzidos in vivo. A coleta dos embriões foi realizada por lavagem uterina 12 dias após a primeira IA. A congelação lenta foi realizada em máquina programável e a vitrificação pela técnica do cryotop. O cultivo in vitro (CIV) foi realizado por 24 horas, em meio SOFaa acrescido de 20% de soro fetal bovino. A reexpansão embrionária foi avaliada 24 horas após a CIV e a viabilidade embrionária avaliada com o uso das sondas Hoscht 33342 e Iodeto de propídeo. A extração e amplificação do RNA foram realizadas segundo recomendações do fabricante. Foram utilizados 70 blastocistos separados nos grupos Co, Co24, Cg, Cg24, Vi e Vi24. No experimento I foram utilizados 34 embriões. Não foi evidenciada reexpansão da blastocele após 24 horas de CIV nos grupos Cg24 e Vi24, já no grupo Co24, 100% dos embriões reexpandiram. Não foi verificada diferença na intensidade da fluorescência do Hoescht entre os grupos Co, Cg e Vi, em ambos os momentos de avaliação, 0 e 24 horas. Quando comparada a intensidade do iodeto de propídeo (IP) foi observada diferença significativa entre o grupo Co em relação aos grupos Cg e Vi, independente da metodologia de criopreservação. Observou-se uma redução na quantidade de gotas lipídicas após 24 horas de CIV comparando-se os grupos Co e Co24. No grupo Vi foram observadas mitocôndrias alongadas, integridade da membrana dos blastômeros e nuclear, reticulo endoplasmático liso, vesículas de digestão, microvilosidades, junções do tipo tight e desmossomas. No Experimento II, foram utilizados 36 embriões para a avaliação da expressão gênica. Todos os genes estudados, com excessão do LIF, foram expressos. Entretanto, não houve diferença na expressão dos genes BAX, Bcl2, AQP3, Na+/K+-ATPases α1, Na+/K+-ATPases β1 e ... / The purpose of this study was to compare the effects of slow freezing versus vitrification in canine embryo produced in vitro: viability, ultra structure and gene expression. Embryos collection was performed using uterus flush technique 12 days after the first AI. For slow freezing protocol we used a programmed machine and vitrification was performed using cryotop. In vitro culture (IVC) was conducted for 24 hours using SOFaa added with 20% of fetal bovine serum. Embryo expansion was evaluated 24 hours after in vitro culture (IVC) and embryo viability was evaluated using Hoscht 33342 and iodine propidium (PI). Extraction and amplification of the RNA was performed according to manufacturer recommendations. We used 70 blastocysts divided in groups: Co, Co24, Cg24, Vi and Vi24. In experiment I 34 embryos were used. No blastocoele expansion was observed after 24 hr of IVC in groups Cg24 and Vi24, however 100% of embryos expanded in Co24. No difference was observed in Hoescht staining intensity between Co, Cg and Vi groups, which were observed at the 0 and 24 hr periods. The iodine propidium (PI) intensity in Co was different when compared to Cg and Vi, independent of the cryopreservation method used. A reduction in the quantity of lipid drops was observed after 24 hr of IVC when comparing groups Co and Co24. In group Vi, elongated mitochondria, membrane and nuclear integrity of blastomere, smooth endoplasmic reticulum, vesicle digestion, microvilli, tight junctions and types of desmosomes were observed. In experiment II, 36 dog embryos were used for gene expression evaluation. All studied genes, except LIF were expressed. However no difference between gene expression of BAX, Bcl2, AQP3, Na+/K+-ATPases α1, Na+/K+-ATPases β1 and LIFr were observed at 0 and 24h in all groups. We concluded that the vitrification technique was the best method to cryopreserve canine embryo when we observe ultrastructure. However, it was not possible ... / FAPESP: 11/08798-6

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