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Análise proteômica de células a-549 infectadas por adenovírus espécie f sorotipo 40 (HAdV-40) / Proteomic analysis of a-549 cells infected by adenovirus species f sorotypes 40 (HAdV-40)

Guissoni, Ana Carla Peixoto 06 August 2015 (has links)
Submitted by Cássia Santos (cassia.bcufg@gmail.com) on 2017-07-03T12:16:28Z No. of bitstreams: 2 Tese - Ana Carla Peixoto Guissoni - 2015.pdf: 3062686 bytes, checksum: d470d2e61cd6d74d52b862bd1e76f0c9 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-07-10T11:37:21Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Ana Carla Peixoto Guissoni - 2015.pdf: 3062686 bytes, checksum: d470d2e61cd6d74d52b862bd1e76f0c9 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-10T11:37:21Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Ana Carla Peixoto Guissoni - 2015.pdf: 3062686 bytes, checksum: d470d2e61cd6d74d52b862bd1e76f0c9 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2015-08-06 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Human adenovirus (HAdVs) are causative agents of different clinical syndromes such as gastroenteritis, respiratory diseases, eye diseases and cystitis. Adenovirus infection can modify the cellular homeostasis through the interaction with the host cell by inducing proteins of several metabolic pathways. The resulting knowledge of this virus-cell interaction may aid the elucidation of the pathogenic mechanisms caused by adenovirus and the host response against viral infection. To study this interaction, a methodology that has been widely used is proteomics, a tool used in this study, which aimed to identify induced proteins due to viral infection. In this context, we used cells A-549 infected with human adenovirus of type F, serotype 40 (HAdV-40). Infected cells and non-infected cells were used for the osmotic lysis, which were quantified by the Bradford method and then digested with trypsin. Peptides were separated on the LC system in two dimensions. The ionization of the peptides was performed by nano-eletronspray source and through analysis of ToF-MSE system aiming the protein identification. A sum of 336 proteins were identified, 206 of them induced and 130 suppressed by the infection with HAdV-40. The main pathways affected by viral infection were: energy, cellular organization, stress response and apoptosis. It was observed alteration of cell metabolism with increase of the glycolytic pathway, β-oxidation and respiratory chain. Also, the results suggest cytoskeleton reorganization and apoptosis induction. The data can to contribute knowledge about adenovirus pathogenesis considering the proteins related to distinct metabolic pathways induced by viral infection. / Adenovírus humano (HAdVs) são agentes causadores de diversas síndromes clínicas como gastroenterite, doenças respiratórias, oculares e cistite. A infecção por adenovírus pode levar a alterações na homeostase celular a partir da interação com a célula hospedeira pela indução de proteínas de diversas vias metabólicas. O conhecimento resultante desta interação vírus-célula pode auxiliar na elucidação da patogenia destes vírus e na resposta do hospedeiro contra a infecção viral. Para o estudo desta interação, uma metodologia que tem sido bastante utilizada é a proteômica, ferramenta esta usada no presente estudo, que tem como finalidade a identificação de proteínas induzidas a partir da infecção viral. Foram utilizadas células A-549 infectadas por adenovírus humano da espécie F, sorotipo 40 (HAdV-40). Para o procedimento, a partir de células infectadas e controles, procedeu-se à extração de proteínas por lise osmótica, as quais foram quantificadas pelo método de Bradford e a seguir digeridas com tripsina. Os peptídeos foram separados em sistema de cromatografia líquida em duas dimensões. A ionização dos peptídeos foi realizada em fonte nano-eletronspray e a análise destes através do sistema ToF-MSE, possibilitanto a identificação das proteínas. Foram identificadas 336 proteínas, sendo 206 induzidas pela infecção por HAdV-40 e 130 reprimidas. As principais vias afetadas pela infecção viral foram: energia, organização celular, resposta ao estresse e apoptose. Observou-se alteração do metabolismo da célula com o aumento da via glicolítica, β-oxidação e da cadeia respiratória. Além disso, os resultados sugerem reorganização do citoesqueleto e indução de apoptose. Esses dados podem contribuir para o conhecimento da patogenia dos adenovírus considerando as proteínas relacionadas com vias metabólicas distintas induzidas pela infecção viral.

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