Orientador: Adriana Polachini Valle / Resumo: Introdução: O câncer de próstata (CP) é o mais incidente entre os homens em todas as regiões do Brasil. A detecção e caracterização de células tumorais circulantes (CTCs) tem sido apontada como uma alternativa para melhor compreensão da biologia dos tumores, incluindo câncer de próstata. Objetivo: Este estudo tem como objetivo avaliar a detecção de CTCs em pacientes com tumor de próstata localizado e metastático por teste rápido de filtração celular. Metodologia: Foram incluídos pacientes com diagnóstico anatomopatológico de câncer de próstata ou neoplasia intraepitelial prostática. Os dados demográficos, laudos anatomopatológicos e de Cintilografia Óssea e valores do antígeno prostático especifico ( PSA) foram obtidos pelo estudo dos prontuários médicos dos pacientes. Os pacientes foram classificados como portadores de tumor metastático quando apresentavam evidência de imagem metastática pela Cintilografia Óssea. As CTS foram isoladas por teste rápido de filtração celular com posterior imunocitoquímica utilizando-se anticorpos monoclonais anti-PSA para caracterização câncer de próstata específica das células. Resultados: As CTCs foram detectadas em 9 dos 21 pacientes (43%) com positividade de 60% no grupo metastático e 36% no grupo de tumor localizado. Não foram observadas associações entre os valores de PSA e tratamento instituído com a detecção de CTCS. Discussão: A positividade das CTCs no presente estudo mostrou-se semelhante aos dados da literatura, embora possam ser ci... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Introduction: Prostate cancer (PC) is the most frequent among men in all regions of Brazil. The detection and characterization of circulating tumor cells (CTCs) has been pointed out as an alternative for a better understanding of the biology of tumors, including prostate cancer. Objective: This study aims to evaluate the detection of CTCs in patients with localized and metastatic prostate tumor by rapid cell filtration test. Methodology: Patients with anatomopathological diagnosis of prostate cancer or prostatic intraepithelial neoplasia were included. Demographic data, anatomopathological and bone scintigraphy reports and prostate specific antigen (PSA) values were obtained by the study of patients' medical records. Patients were classified as having metastatic tumor when they presented evidence of metastatic image by Bone Scintigraphy. The CTS were isolated by rapid cell filtration test with subsequent immunocytochemistry using anti-PSA monoclonal antibodies for cell-specific prostate cancer characterization. Results: CTCs were detected in 9 of the 21 patients (43%) with 60% positivity in the metastatic group and 36% in the localized tumor group. No associations were observed between PSA values and treatment established with CTCS detection. Discussion: The positivity of the CTCs in the present study was similar to the data in the literature, although some limitations of the study may be cited, such as a small number of patients included, difficulties encountered by research... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Introdução: O diagnóstico precoce de câncer de próstata (CaP) é essencial para aumentar a sobrevida dos pacientes, mas os marcadores e métodos atuais não possuem sensibilidade e especificidade suficientes, tornando o diagnóstico ainda muito impreciso. Recentemente, as células tumorais circulantes (CTCs) têm surgido não como método de rastreio do CaP, mas sim como marcadores de prognóstico utilizando um arsenal de diversos alvos para a captura dessas células. Contudo, a busca por um método ou marcadores comuns para o rastreio, diagnóstico, prognóstico e monitoramento da doença ainda se apresenta com um dos principais objetivos técnico-científicos a ser alcançado. Objetivo: apresentar um novo marcador, o aptâmero A4 selecionado previamente por 3DCell SELEX na linhagem PC3, e avaliar sua capacidade de detectar CTCs por citometria de fluxo no sangue de pacientes com CaP virgens de tratamento e sob diferentes regimes terapêuticos. Material e métodos: o estudo avaliou 34 homens com CaP e 16 homens sem alterações prostáticas. Foi coletado o sangue em tubo com EDTA, e após proceder a lise de hemácias, as células nucleadas de cada paciente foram incubadas com o aptâmero A4 conjugado à biotina, e em seguida lavadas e incubadas com estreptoavidina-FITC para posterior análise em citometria de fluxo. Os percentuais de CTCs foram comparados entre os dois grupos de pacientes e correlacionados com idade, níveis de PSA, estadiamento e procedimentos terapêuticos adotados (bloqueio hormonal, radioterapia e cirurgia). O limite de detecção acima de 1% de CTCs foi considerado positivo, utilizando como base o percentual observado em todos os 16 controles negativos. Resultados: todos os pacientes foram diagnosticados como positivos independentemente do tempo de terapia ou do estadiamento, exceto um paciente sob bloqueio hormonal que não apresentou CTCs. O percentual de CTCs apresentou alta correlação com idade (R=0,75) e com os níveis de PSA (R=0,80) de forma exponencial, embora seis pacientes com altos índices de células circulantes apresentaram PSA<0,02ng/mL, considerados como falha bioquímica. Conclusão: nossos resultados preliminares indicam uma acurácia elevada de 98% e demonstra um grande potencial de aplicação dessa nova tecnologia diagnóstica tanto no rastreamento, quanto no monitoramento do tratamento do CaP, o qual deverá ser melhor investigado em população de risco. / Introduction: prostate cancer (PCa) early diagnosis is essential to boost patients’ life expectance. Although, current biomarkers and diagnosis methods do not present reliable sensibility and specificity, making the diagnosis rather imprecise. Recent methodologies have been using circulating tumor cells (CTCs), not for screening of PCa, but as prognosis indicators, employing a vast array of techniques to capture those cells. However, the search for a new biomarkers or diagnosis methods able to screen, diagnosis, assist in prognosis and in the disease monitoring still one of the major technical and scientific objectives to be achieved. Objective: To present a new biomarker for PCa, the aptamer A4, previous screened in the prostate cancer cell line PC3, using 3DCell SELEX. And to able to detect, by flow cytometry, CTCs in blood samples of PCa patients undergoing various treatment regimen. Material and methods: the study evaluated 34 PCa patients and 16 health controls. Blood samples were collected in EDTA tubes, and after erythrocytes lysis, nucleated cells were incubated with A4 aptamer conjugated with biotin, them the cells were washed and incubated with streptavidin-FITC for later flow cytometer analysis. Percentage of CTCs were compared between patient’s groups and correlated against age, PSA levels, staging and treatment regimen (hormonal blockade, radiotherapy and surgery). Detection limit above 1% of CTCs was considered positive, based on the percentage observed on all of the 16 negative controls. Results: all patients were positively diagnosed independently of therapy time or staging, except for one patient undergoing hormonal blockade therapy, which does not present detectable CTCs. CTCs percentage presented high correlation against age (R=0.75) and with PSA levels (R=0.80) with exponential behavior, although, six patients with high CTCs count presented PSA levels <0.02 ng/mL, and were considered was biochemical errors. Conclusion: Our preliminary results indicated high accuracy (98%) and demonstrate a potential application of this technology for diagnosis and screening, as well as in the monitoring of PCa evolution, which should be better investigated in the risk population. / Dissertação (Mestrado)