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Suscetibilidade de microorganismos relacionados com a contaminação de alimentos em biofilme artificial e em suspensão frente a desinfetantesCabeça, Tatiane Karen [UNESP] 10 August 2006 (has links) (PDF)
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cabeca_tk_me_arafcf.pdf: 1210665 bytes, checksum: 4362d616ef5872f20b6711858bce8e88 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Avaliou-se o perfil de suscetibilidade de Staphylococcus aureus ATCC 6538, Escherichia coli ATCC 25922 e Listeria monocytogenes ATCC 7644, em suspensão e em biofilme formado in vitro, frente à ação dos desinfetantes: ácido iodado, à base de biguanida, à base de quaternário de amônio, à base de ácido peracético e clorado, empregados comumente em indústrias alimentícias brasileiras. As técnicas de microscopia eletrônica de varredura e microbiológica de viabilidade celular foram utilizadas para esta pesquisa. Os resultados demonstraram que as células microbianas em suspensão foram suscetíveis a ação de todos os desinfetantes estudados, não apresentando células viáveis após 10 minutos de tratamento com os desinfetantes. O desinfetante clorado foi o mais eficaz na eliminação das células microbianas em biofilme, proporcionando baixos valores numéricos na contagem das células viáveis e poucas células aderidas à superfície do aço inoxidável após submetido ao tratamento de 10 minutos, enquanto o desinfetante à base de biguanida mostrou ser o menos eficaz na eliminação das células microbianas em biofilme após um tratamento de 10 minutos. A idade do biofilme em horas (24, 75, 120) não mostrou ser um fator influente na resistência das células microbianas aos desinfetantes testados. Comparando-se os resultados da suscetibilidade das células microbianas em suspensão e em biofilme, foi verificado que as células em biofilme são mais resistentes à ação dos desinfetantes. O conjunto dos resultados sugerem uma deficiência de todos os desinfetantes estudados na eliminação de S. aureus, E. coli e L. monocytogenes quando em biofilme. / The susceptibility of Staphylococcus aureus ATCC 6538, Escherichia coli ATCC 25922 and Listeria monocytogenes ATCC 7644, in suspension and in biofilm formed in vitro, was studied against the action of disinfectants: iodine, biguanide, quaternary ammonium, peracetic acid and chlorine, commonly used in Brazilian food industries. The scanning electron microscopy and cellular viability techniques were used in this research. The results showed that the microbiological suspension cells were susceptible after 10 minutes of treatment with the disinfectants. The chlorine disinfectant was the most effective against microbiological cells in biofilm, showed low numbers of viable cells and few adhered cells on stainless steel surface after 10 minutes of treatment, while the biguanide disinfectant showed to be the least effective against microbiological cells in biofilm after 10 minutes of treatment. The biofilm age in hours (24, 72 and 120) didn't show to be an influential factor on resistance of microbiological cells to studied disinfectant. The comparison between the results of susceptibility of microbiological suspension cells and microbiological biofilm cells showed that the biofilm cells are more resistant to disinfectants action. The results suggest that the studied disinfectants could not eliminate S. aureus, E. coli and L. monocytogenes biofilms.
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Produção de carotenoides em culturas in vitro de Cleome rosea Vahl ex DC (Capparaceae) e avaliação de sua toxicidade e potencial antioxidante / Carotenoid production in vitro cultures of Cleome rosea Vahl ex DC (Capparaceae) and evaluation of toxicity and antioxidant potential.Adriana Silva da Rocha 29 February 2012 (has links)
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A produção e a otimização de substâncias de valor medicinal têm sido alcançadas pelo
uso das técnicas de cultura de tecidos vegetais, que têm apresentado grande relevância quando
se considera o status de conservação de uma espécie ou sua ocorrência em ambientes
ameaçados. No presente trabalho foi avaliada a produção de carotenoides em culturas de calos
e células em suspensão de Cleome rosea Vahl ex DC, espécie nativa encontrada em áreas de
restinga nos estados do Rio de Janeiro e de São Paulo. Plantas micropropagadas obtidas a
partir de raízes produzidas in vitro foram usadas como fonte de explantes para o início das
culturas de calos. A produção de massa calogênica foi avaliada em meio MS suplementado
com diferentes concentrações das auxinas ácido 2,4-diclorofenoxiacético e ácido 4-amino-
3,5,6-tricloropicolínico, na presença de luz ou no escuro. O uso de diferentes meios básicos de
cultura (B5, Nitsch, White) também foi avaliado. A calogênese foi induzida em todos os
tratamentos, entretanto a maior produção de biomassa foi alcançada pelas culturas mantidas
na presença de luz. A maior produção de massa calogênica foi obtida em culturas iniciadas no
meio MS suplementado com 0,2 mg.L-1 de 2,4-D. A exposição das culturas à luz foi um fator
essencial para a produção de carotenoides, que só ocorreu nas culturas mantidas nessa
condição. Culturas de calos foram submetidas a tratamentos com substâncias elicitoras
(extrato de levedura, metil jasmonato, quitosana) em diferentes concentrações e por um
período de exposição de sete ou 14 dias visando otimizar a produção do pigmento. A maior
produção de carotenoides nas culturas elicitadas foi alcançada com o tratamento com metil
jasmonato (MJ) na concentração de 300 μM, independentemente do tempo de exposição ao
elicitor. Análises cromatográficas mostraram que o processo de elicitação com MJ induziu ao
aumento na produção de β-caroteno. Calos elicitados nessa condição foram usados para
iniciar culturas de células em suspensão (CCS). Estas culturas foram acompanhadas por três
subculturas realizadas a cada 20 dias, durante a fase exponencial de crescimento. Embora as
CCS tenham mantido uma produção de biomassa constante ao longo das subculturas, os
valores de produção de carotenoides foram inferiores àqueles alcançados pelas culturas de
calos e não houve diferenças estatísticas significativas quando comparadas às CCS iniciadas a
partir de calos não elicitados. Extratos de calos produzidos em meio MS suplementado com
0,2 mg.L-1 de 2,4-D foram avaliados quanto à sua capacidade antioxidante por meio da
incubação dos extratos com DNA plasmidial em presença de cloreto estanoso (SnCl2), um
potente agente redutor capaz de produzir quebras na molécula de DNA. Os extratos foram
avaliados em concentrações crescentes (25 - 500 μg.mL-1) e apresentaram uma proteção dose
dependente à ação do SnCl2. Estudos de toxicidade com o modelo de Artemia salina
demonstraram que os extratos não apresentaram toxicidade nas concentrações avaliadas. Os
resultados alcançados mostram que a elicitação foi eficiente para a otimização da produção de
β-caroteno nas culturas in vitro e que os extratos obtidos a partir desses materiais
apresentaram atividade antioxidante, indicando o êxito das técnicas de cultura de tecidos para
a produção deste metabólito sob condição in vitro. / The production and optimization of plants secondary metabolites with medicinal value
have been achieved by using plant tissue culture techniques, which have showed great
relevance when considering the conservation status of a species or their occurrence in
degraded environments. The present study assessed the production of carotenoids in callus
and cell suspension cultures of Cleome rosea Vahl ex DC (Capparaceae), a Brazilian native
herbaceous species that occurs mainly in coastal sandy plains (restingas) in the states of Rio
de Janeiro and São Paulo. Micropropagated plants obtained from in vitro roots were used as
source of explants for callus cultures. Callus biomass accumulation was evaluated on MS
medium supplemented with different concentrations of the auxins 2,4-Dichlorophenoxyacetic
acid (2,4-D) and 4-Amino-3,5,6-trichloropicolinic acid (PIC), in the presence of light and in
the dark. The use of different culture basal media (B5, Nitsch, and White) was also evaluated.
Calogenesis was induced in all treatments; however greater efficiency was achieved by
cultures maintained in the light. Exposure of cultures to light was also an essential factor to
induce the production of carotenoids. The highest biomass accumulation was achieved by
cultures established on MS medium supplemented with 0.2 mg.L-1 2,4-D. Callus cultures
were subject to treatments with a range of elicitors (chitosan, methyl jasmonate, yeast
extract), at different concentrations and time of exposure (7 or 14 days). The highest
production of carotenoids was achieved by cultures treated with 300 μM methyl jasmonate
(MJ), regardless of time exposure. The chromatographic analysis showed that elicitation with
MJ induced an increase in the production of β-carotene. Elicited calluses were used to
establish cell suspension cultures (CSC). These cultures were evaluated during three
subsequent subcultures performed at 20 days each during the exponential growth phase.
Although the CSC have maintained a steady biomass accumulation along successive
subcultures, carotenoids content were lower than those achieved by callus cultures and did not
present significant differences when compared to CSC established from no elicited callus.
Extracts of callus obtained from MS medium supplemented with 0.2 mg.L-1 2,4-D were
evaluated for their antioxidant potential. These extracts were incubated with plasmid DNA in
the presence of stannous chloride (SnCl2), a potent reduced agent. Extracts were used at
increasing concentrations (25 - 500 μg.mL-1) and showed a dose-dependent protective action,
regardless of their origin. Studies of toxicity using the brine shrimp lethality bioassay revealed
that the extracts were not toxic at tested concentrations. This study showed that the use of
elicitation was a powerful tool in the optimization of β-carotene production in in vitro cultures
of C. rosea and that extracts obtained from these cultures have antioxidant activity, indicating
the success of plant tissue culture techniques for production of this metabolite under in vitro
condition.
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Produção de carotenoides em culturas in vitro de Cleome rosea Vahl ex DC (Capparaceae) e avaliação de sua toxicidade e potencial antioxidante / Carotenoid production in vitro cultures of Cleome rosea Vahl ex DC (Capparaceae) and evaluation of toxicity and antioxidant potential.Adriana Silva da Rocha 29 February 2012 (has links)
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A produção e a otimização de substâncias de valor medicinal têm sido alcançadas pelo
uso das técnicas de cultura de tecidos vegetais, que têm apresentado grande relevância quando
se considera o status de conservação de uma espécie ou sua ocorrência em ambientes
ameaçados. No presente trabalho foi avaliada a produção de carotenoides em culturas de calos
e células em suspensão de Cleome rosea Vahl ex DC, espécie nativa encontrada em áreas de
restinga nos estados do Rio de Janeiro e de São Paulo. Plantas micropropagadas obtidas a
partir de raízes produzidas in vitro foram usadas como fonte de explantes para o início das
culturas de calos. A produção de massa calogênica foi avaliada em meio MS suplementado
com diferentes concentrações das auxinas ácido 2,4-diclorofenoxiacético e ácido 4-amino-
3,5,6-tricloropicolínico, na presença de luz ou no escuro. O uso de diferentes meios básicos de
cultura (B5, Nitsch, White) também foi avaliado. A calogênese foi induzida em todos os
tratamentos, entretanto a maior produção de biomassa foi alcançada pelas culturas mantidas
na presença de luz. A maior produção de massa calogênica foi obtida em culturas iniciadas no
meio MS suplementado com 0,2 mg.L-1 de 2,4-D. A exposição das culturas à luz foi um fator
essencial para a produção de carotenoides, que só ocorreu nas culturas mantidas nessa
condição. Culturas de calos foram submetidas a tratamentos com substâncias elicitoras
(extrato de levedura, metil jasmonato, quitosana) em diferentes concentrações e por um
período de exposição de sete ou 14 dias visando otimizar a produção do pigmento. A maior
produção de carotenoides nas culturas elicitadas foi alcançada com o tratamento com metil
jasmonato (MJ) na concentração de 300 μM, independentemente do tempo de exposição ao
elicitor. Análises cromatográficas mostraram que o processo de elicitação com MJ induziu ao
aumento na produção de β-caroteno. Calos elicitados nessa condição foram usados para
iniciar culturas de células em suspensão (CCS). Estas culturas foram acompanhadas por três
subculturas realizadas a cada 20 dias, durante a fase exponencial de crescimento. Embora as
CCS tenham mantido uma produção de biomassa constante ao longo das subculturas, os
valores de produção de carotenoides foram inferiores àqueles alcançados pelas culturas de
calos e não houve diferenças estatísticas significativas quando comparadas às CCS iniciadas a
partir de calos não elicitados. Extratos de calos produzidos em meio MS suplementado com
0,2 mg.L-1 de 2,4-D foram avaliados quanto à sua capacidade antioxidante por meio da
incubação dos extratos com DNA plasmidial em presença de cloreto estanoso (SnCl2), um
potente agente redutor capaz de produzir quebras na molécula de DNA. Os extratos foram
avaliados em concentrações crescentes (25 - 500 μg.mL-1) e apresentaram uma proteção dose
dependente à ação do SnCl2. Estudos de toxicidade com o modelo de Artemia salina
demonstraram que os extratos não apresentaram toxicidade nas concentrações avaliadas. Os
resultados alcançados mostram que a elicitação foi eficiente para a otimização da produção de
β-caroteno nas culturas in vitro e que os extratos obtidos a partir desses materiais
apresentaram atividade antioxidante, indicando o êxito das técnicas de cultura de tecidos para
a produção deste metabólito sob condição in vitro. / The production and optimization of plants secondary metabolites with medicinal value
have been achieved by using plant tissue culture techniques, which have showed great
relevance when considering the conservation status of a species or their occurrence in
degraded environments. The present study assessed the production of carotenoids in callus
and cell suspension cultures of Cleome rosea Vahl ex DC (Capparaceae), a Brazilian native
herbaceous species that occurs mainly in coastal sandy plains (restingas) in the states of Rio
de Janeiro and São Paulo. Micropropagated plants obtained from in vitro roots were used as
source of explants for callus cultures. Callus biomass accumulation was evaluated on MS
medium supplemented with different concentrations of the auxins 2,4-Dichlorophenoxyacetic
acid (2,4-D) and 4-Amino-3,5,6-trichloropicolinic acid (PIC), in the presence of light and in
the dark. The use of different culture basal media (B5, Nitsch, and White) was also evaluated.
Calogenesis was induced in all treatments; however greater efficiency was achieved by
cultures maintained in the light. Exposure of cultures to light was also an essential factor to
induce the production of carotenoids. The highest biomass accumulation was achieved by
cultures established on MS medium supplemented with 0.2 mg.L-1 2,4-D. Callus cultures
were subject to treatments with a range of elicitors (chitosan, methyl jasmonate, yeast
extract), at different concentrations and time of exposure (7 or 14 days). The highest
production of carotenoids was achieved by cultures treated with 300 μM methyl jasmonate
(MJ), regardless of time exposure. The chromatographic analysis showed that elicitation with
MJ induced an increase in the production of β-carotene. Elicited calluses were used to
establish cell suspension cultures (CSC). These cultures were evaluated during three
subsequent subcultures performed at 20 days each during the exponential growth phase.
Although the CSC have maintained a steady biomass accumulation along successive
subcultures, carotenoids content were lower than those achieved by callus cultures and did not
present significant differences when compared to CSC established from no elicited callus.
Extracts of callus obtained from MS medium supplemented with 0.2 mg.L-1 2,4-D were
evaluated for their antioxidant potential. These extracts were incubated with plasmid DNA in
the presence of stannous chloride (SnCl2), a potent reduced agent. Extracts were used at
increasing concentrations (25 - 500 μg.mL-1) and showed a dose-dependent protective action,
regardless of their origin. Studies of toxicity using the brine shrimp lethality bioassay revealed
that the extracts were not toxic at tested concentrations. This study showed that the use of
elicitation was a powerful tool in the optimization of β-carotene production in in vitro cultures
of C. rosea and that extracts obtained from these cultures have antioxidant activity, indicating
the success of plant tissue culture techniques for production of this metabolite under in vitro
condition.
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