Für die Diagnose und das Monitoring des Sézary Syndrome haben sich zwei hauptsächliche Herangehensweisen etabliert: die Immunophänotypisierung und PCR basierte T-Zell-Rezeptor (TCR)-Gen-Rearrangement Analyse. Die verminderte Expression von T-Zell-Antigenen auf im Blut zirkulierenden Lymphozyten ist beim Sézary Syndrom beschrieben, insbesondere der Antigene CD7 und CD26. Jedoch ist die Verteilung des genetisch definierten Tumorzellklons auf die CD7 und CD26 positiven bzw. negativen Subpopulationen bisher nicht untersucht worden. Aus diesem Grund etablierten wir eine qualitative sowie eine quantitative klonspezifische PCR und bestimmten die Verteilung der klonalen Zellen auf diese Subpopulationen. Diese Daten wurden anschließend in Beziehung zur Klinik und zur Prognose der Patienten gesetzt. Für jeden unserer fünf Sézary Syndrom Patienten wurde die Sequenz des klonalen TCR-gamma und TCR-beta Rearrangementes ermittelt. Es erfolgte eine durchflußzytometrische Analyse der PBMC hinsichtlich der CD7 und CD26 Expression. Anschließend wurde für jeden Fall eine klonspezifische qualitative und quantitative (real-time) PCR etabliert. Mit Hilfe dieser PCR untersuchten wir das Vorhandensein und die Frequenz klonaler Zellen in den sortierten Subpopulationen. Die FACS-Analyse ergab bei unseren Patienten im Vergleich zu den Kontrollen eine verminderte CD7 und CD26 Expression der Lymphozyten. In der qualitativen PCR konnten klonale Zellen sowohl in der CD7+ und CD7- Population gezeigt werden, gleiches gilt für die CD26 Populationen. Die quantitative PCR zeigte, dass der dominante T-Zell-Klon sowohl CD7+ als auch CD7- sein kann, wohingegen CD26- Tumorzellen bei weitem überwiegen. Hinsichtlich Klinik und Prognose deutete sich an, das ein CD7+ Tumorzellklon eine bessere Prognose für den Patienten bedeuten kann. Zusammenfassung: Die Tumorzellen des Sézary Syndrom zeigen einen CD3+CD7+CD26- sowie CD3+CD7-CD26- Phänotyp. Aus diesem Grund kann bei dieser Erkrankung die Tumorzelllast im Blut über die Bestimmung der CD3+CD26- Zellen erfolgen. Die Signifikanz eines CD7+ Tumorzellkolons in Bezug zur Prognose muß an einem größeren Patientenkollektiv überprüft werden. / Introduction: For diagnosis and monitoring of the Sézary syndrome (SS) two crucial approaches are applied: immunophenotyping and PCR based T-cell receptor (TCR)-gene rearrangement analysis. The absence of T-cell antigens, in particular CD7 and CD26, on peripheral circulating tumor cells has been described in SS patients. However, the prevalence of the genetically identified malignant T-cell clone in CD7 and CD26 positive and negative subsets in SS has never been investigated so far. Thus we have performed qualitative and quantitative PCR based turmor cell determination in the corresponding FACS-separated T-cell fractions. These data were then correlated to clinical outcome and prognosis. Methods: For each of five SS patients with a total of 15 peripheral blood samples the sequences of clonal TCR-gamma and/or TCR-beta rearrangements were established. Then clone-specific qualitative und quantitative (real-time) PCR have been developed for each case. Using these PCR, we estimated presence and frequency of tumor cells in FACS-sorted CD3+CD7+/- as well as CD3+CD26+/- T-cell subsets. Results: The qualitative PCR showed that the malignant T-cells can be both: CD7 positive or negative, the same is true for CD26. The quantitative PCR demonstrated that CD7+ as well as CD7- tumor cells can occur simultaneously whereas CD26- tumor cells predominate by far. The individual tumor cell phenotypes did not fluctuate substantially in the disesase course, but considerable interindividual variations were seen. Furthermore we found in our patients, that CD7+ tumor cells may be a factor for a more favourable prognosis. Conclusions: The tumor cells in SS have mostly a CD3+CD7+CD26- as well as CD3+CD7- CD26- phenotyp. Thus, the tumor burden in this disease can be assessed by an estimation of the CD26- T-cells. The significance of a CD7+ t-cell clone for a better prognosis has to be re-evaluated in a larger patient-collective.

Activation of the immune system during photodynamic therapy (PDT) and improvement of the effector functions of mAbs - these are the ways to use and enhance the potential of the immune system to fight cancer. Tumor cells lack β-glucan as a surface compo¬nent and can‘t trigger complement receptor 3-dependent cellular cytoto¬xicity and initiate tumor-killing activity during PDT. So, it gave rise to the hypothesis that β-glucan in combination with PDT will produce more effective killing of by iC3b fragment opsonized tumor cells. The human Fc portion is essential for the recruiting of human effector immune cells to produce antitumor effect. Therefore, connection of Fv portion of murine anti-CD7 antibody with Fc portion of human IgG1 can be helpful for such protein to obtain ideal feathers. However, each modification of the monoclonal antibody can cause the lost or decrease in the rate of protein expression and antigen-binding properties. Monoclonal antibody products are unique in their molecules. Because of post-translational modifications that often occur during the fermentation process, the final product is heterogeneous. Therefore, careful characterization of monoclonal antibodies is required in order to assess their identity, purity, potency and safety. Response of Lewis lung carcinoma tumor to PDT modulated by β-glucan was assessed in mice and functional characteristics of novel purified chimeric anti-CD7 antibody was tested in this study. / Imuninės sistemos aktyvinimas taikant fotosensibilizacinę terapiją (FNT) ir monokloninių antikūnų efektorinių funkcijų gerinimas yra vienas iš būdų, kaip naudoti ir sustiprinti organizmo imuninės sistemos veiksnių potencialą kovai su naviku. Navikinės ląstelės membranos paviršiuje nėra β-gliukano, todėl FNT metu negali būti aktyvinamas nuo komplemento receptoriaus 3 priklausomas ląstelės citotoksiškumo mechanizmas bei sukeliama navikinės ląstelės žūtis. Todėl galima tikėtis, kad β-gliukanas ir FNT, taikomi kartu, gali aktyvinti iC3b frag¬mento opsonizuotų navikinių ląstelių žūtį. Norint aktyvinti žmogaus imunines ląsteles priešnavikiniam poveikiui sukelti, pelės monokloniniam antikūnui būtina žmogaus imunoglobulino Fc dalis. Todėl pelės antikūno prieš CD7 vienos grandinės Fv fragmento sujungimas su žmogaus imunoglobulino G1 Fc dalimi baltymui gali suteikti idealias savybes. Tačiau, bet kokia monokloninio antikūno modifikacija gali keisti jo savybes ir, išskiriant baltymą, dėl daugiapakopio proceso ji gali keistis. Todėl, norint įvertinti chimerinio CD7-Fc antikūno identiškumą, grynumą, veiksmingumą bei saugumą, būtina atlikti tyrimus, kuriais būtų galima nustatyti, ar antikūnas išlaiko specifiškumą antigenui, kaip aktyviai jungiasi prie jo, ar aktyvina imuninius mechanizmus. Šio tyrimo metu buvo vertintas pelėms įskiepytos Luiso plaučių karcinomos atsakas į FNT moduliaciją β-gliukanu ir išgrynintas chimerinis antikūnas prieš CD7 bei ištirtos jo funkcinės savybės in vitro.