Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Tecnologia, Departamento de Engenharia Florestal, Programa de Pós-Graduação em Ciências Florestais, 2012. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2013-03-28T11:15:24Z No. of bitstreams: 1 2012_SuelemMunizLeao.pdf: 12919484 bytes, checksum: 6ee9b89f98d0aa3a578d0056664c3365 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-03-28T12:05:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_SuelemMunizLeao.pdf: 12919484 bytes, checksum: 6ee9b89f98d0aa3a578d0056664c3365 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-03-28T12:05:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_SuelemMunizLeao.pdf: 12919484 bytes, checksum: 6ee9b89f98d0aa3a578d0056664c3365 (MD5) / CAPÍTULO I Apresentamos informações sobre a atividade, dimorfismo sexual, reprodução e dieta de Bothrops itapetiningae. Todos os espécimes analisados foram provenientes de coleções científicas. A espécie foi registrada em todos os meses do ano, sendo mais frequente entre o meio da estação chuvosa e início da seca. Somente os jovens foram significativamente mais registrados na estação chuvosa, provavelmente por ser o período em que ocorrem os nascimentos e eles ainda estão mais vulneráveis. Machos apresentam caudas relativamente mais longas, mas fêmeas são maiores e possuem cabeça mais longa. Das 99 fêmeas analisadas, o número de embriões variou entre 3 e 11 (média: 5,8 e desvio-padrão: 2,9) e a fecundidade das fêmeas está relacionada à circunferência do corpo. O ciclo reprodutivo é sazonal e bienal, com nascimentos na estação chuvosa. A dieta é generalista e os itens consumidos são mamíferos, lagartos, anfíbios, aves e quilópodes, sem diferenças relacionadas à estação, sexo ou ontogenia. No entanto, o pequeno tamanho corporal de Bothrops itapetiningae pode ter evitado uma completa especialização em mamíferos e limitado a fecundidade, a qual é menor que a de todas as espécies estudadas do gênero. Dados como reprodução e atividade sazonal, dieta generalista e dimorfismo sexual com fêmeas maiores, com cabeças maiores e machos com caudas maiores refletem condições plesiomórficas, amplamente distribuídas no gênero Bothrops. Entretanto, a menor fecundidade do gênero torna a espécie mais sensível e vulnerável, principalmente somando-se ao fato da espécie ser especialista em habitats de áreas abertas, que são as mais desmatadas atualmente e por ser sensível à alterações antrópicas. Assim, utilizar o conhecimento aqui apresentado é essencial para o manejo e conservação de B. itapetiningae. _____________________________________________________________________________ CAPÍTULO II / As atuais taxas de desmatamento do Cerrado estão reduzindo rapidamente as opções de conservação na região. Em tal cenário, a modelagem de distribuição geográfica pode ser uma ferramenta útil no planejamento conservacionista e manejo da fauna silvestre. O objetivo geral deste trabalho foi propor estratégias de conservação para Bothrops itapetiningae a partir da modelagem potencial de sua distribuição geográfica. A frequência dos resultados em todos os estados diminuíram quase completamente nos últimos 10 anos. O último registro da espécie em coleções científicas foi em 2004. As variáveis mais importantes para modelagem de B. itapetiningae mostram que a espécie tem preferencia por localidades típicas dos planaltos e chapadas da parte sul do Cerrado, onde a topografia favorece maior umidade e temperaturas mais amenas. As distribuições dos cenários permissivo e restritivo modelados para B. itapetiningae abrangeu uma área aparentemente grande. No entanto, esta área inclui zonas muito afetadas pela urbanização, desmatamentos e fronteiras agrícolas. O cenário permissivo e o restritivo do futuro (2050) mostraram que as áreas sobrepostas com as fitofisionomias abertas do Cerrado poderiam colocar B. itapetiningae com status de ameaça vulnerável (VU) à extinção. De acordo com o cenário restritivo do presente com a sobreposição do mapa de remanescentes de áreas abertas e utilizando a ferramenta do GeoCAT com as localidades recentes, sugere-se que B. itapetiningae deixe de ter o status de menos preocupante (LC) de acordo com a IUCN e seja considerada espécie em perigo de extinção (EN) (Critério: A2a; B2bii,iii).

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Thesis--Ph. D., University of Hong Kong. / Typewritten.

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Th. Ph.D.--Sambalpur university. / Notes bibliogr. Bibliogr. p. 122-134. Index.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2013. / Submitted by Elna Araújo (elna@bce.unb.br) on 2013-07-30T00:36:52Z No. of bitstreams: 1 2013_LeonardoGoncalvesTedeschi.pdf: 6646655 bytes, checksum: 2b27d54032da35b51493f69bd3c4a3c3 (MD5) / Approved for entry into archive by Luanna Maia(luanna@bce.unb.br) on 2013-07-30T12:18:27Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_LeonardoGoncalvesTedeschi.pdf: 6646655 bytes, checksum: 2b27d54032da35b51493f69bd3c4a3c3 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-07-30T12:18:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_LeonardoGoncalvesTedeschi.pdf: 6646655 bytes, checksum: 2b27d54032da35b51493f69bd3c4a3c3 (MD5) / A diagonal de áreas abertas separa os dois grandes blocos de formações florestais da América do Sul, Floresta Amazônica e Mata Atlântica, e é formada pela união de três conjuntos de formações vegetacionais no centro do continente: Caatinga, Cerrado e Chaco. Estas regiões possuem uma herpetofauna diversa e com muitas espécies endêmicas. O gênero de serpentes Psomophis é composto por três espécies (P. joberti, P. genimaculatus e P. obtusus) e está amplamente distribuído nesta região. Entretanto, dados precisos de ocorrência dos organismos são escassos, e o processo de diversificação das biotas nestas regiões ainda é pouco compreendido. O presente trabalho objetiva estudar as relações de parentesco e a biogeografia de Psomophis, contribuindo para compreender a biogeografia da diagonal de áreas abertas neotropicais. As relações intra e interespecíficas do grupo foram inferidas a partir das sequências dos genes 12S, 16S, C-mos e NGFB. As análises filogenéticas foram realizadas pelos métodos de máxima verossimilhança e inferência bayesiana. Utilizamos os pontos de coordenadas geográficas das três espécies, obtidos de literatura taxonômica e de exemplares depositados em museus para elaboração de mapas e análises biogeográficas. Modelos de distribuição potencial foram realizados para cada espécie, utilizando as variáveis bioclimáticas recentes da região neotropical. A partir destes dados, foram confeccionados mapas de distribuições realizadas e potenciais das espécies e linhagens. Finalmente, analisamos as identidades de nicho para cada clado, assim como a existência de uma barreira biogeográfica atual em suas distribuições. Realizamos ainda uma análise de relógio molecular relaxado para estimar o tempo de divergência de cada espécie. As áreas ancestrais de cada clado foram obtidas com base em inferência bayesiana implementada no programa Rasp. Os principais parâmetros de diversidade genética foram calculados para P. joberti e a relação entre os haplótipos foi obtida por median-joining. As espécies de Psomophis apresentaram baixa diversidade intraespecífica, alta diferenciação interespecífica e monofiletismo recíproco. A divergência do gênero data do Oligoceno Médio (~30 Ma) e as divergências entre as espécies foram datadas entre o meio e final do Mioceno (~13-7 Ma). Psomophis é encontrado em toda a extensão da diagonal de áreas abertas e em áreas adjacentes, como a região dos Pampas. Cada espécie apresenta relação com uma ou duas grandes formações vegetacionais inseridas nesta diagonal. Pela análise de identidade de nicho, obtivemos divergências significativas entre cada espécie e a indicação da existência de barreiras entre a distribuição das espécies de Psomophis. Observamos que a possível área ancestral do grupo esta na região ao sul do Chaco e norte dos Pampas. Ainda, o segundo evento de cladogênese no grupo provavelmente se deu em razão do surgimento da depressão do alto Paraguai, entre o Cerrado e Chaco, onde atualmente se situam as baixadas do Pantanal. O padrão de distribuição e diferenciação do grupo corrobora a hipótese de regionalização que postula a inclusão dos Pampas e Monte como áreas da província Chaquenha, junto com Cerrado, Chaco e Caatinga. O padrão observado, também, indica uma maior relação do Cerrado com Chaco com populações relictuais na região da Caatinga. Finalmente, este trabalho inclui uma compilação completa de dados moleculares e de distribuição e portanto é o mais significativo sobre Psomophis desde a sua descrição. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The South American arid diagonal occurs between two large blocks of forest formations, Amazon and Atlantic Forest, and is formed by three open vegetation regions in the center of the continent: Caatinga, Cerrado and Chaco. These regions have a diverse herpetofauna and many endemic species. The genus of snakes Psomophis comprises three species (P. joberti, P. genimaculatus, and P. obtusus) and is widely distributed in this region. However, their relationships and distribution are still poorly understood. The present work aims to study the evolutionary relationships and biogeography of Psomophis to bring new data about the biogeography the South American open diagonal. For estimating the intra- and interspecific relationship we used molecular data from the genes 12S, 16S, C-mos and NGFB. Phylogenetic analyses were performed by maximum likelihood and Bayesian inference. We used geographic coordinates points of the three species for mapping and performing biogeographic analyses. These point locality records were obtained by checking taxonomic literature and localities of verified specimens deposited in museums. The estimation of potential distributions was performed for each species, using recent bioclimatic variables for the Neotropical region. Based on these models we built observed and potential distribution maps. Finally, we analyzed niche identities for each pair of species, as well as the presence of biogeographical barriers between current distributions. We also performed a relaxed molecular clock dating to estimate the divergence time of each species. The ancestral area of each clade was inferred based on Bayesian analyses implemented in the software Rasp. Measures of genetic diversity were estimated for P. joberti and the relationship between haplotypes was obtained by median-joining. The species of Psomophis showed low intraspecific diversity and high interspecific differences with high supported reciprocal monophyly. The divergence date of the genus was estimated in the Oligocene (~ 30 Ma) and the differences between species were dated from the middle to late Miocene (~ 13 - 7 Ma). Psomophis is found throughout the South American arid diagonal and in adjacent areas, such as the Pampas region. Each species is associated to one or two major vegetation formations included in this diagonal. We obtained significant niche identity differences between each species and indications that there are barriers between species distributions. The probable ancestral area of this group is between southern portions of the Chacos and northern part of the Pampas. The second divergence event in the group probably occurred between Cerrado and Chaco, after the subsidence of the Upper Paraguay depression, in the Pantanal lowlands. The distribution pattern and differentiation of the group supports the hypothesis that Pampas and Monte regions should be included as a biogeographical unit along with Cerrado, Chaco and Caatinga (the Chacoan region of Morrone). The observed pattern also indicates a close relationship between Cerrado and Chaco with only relictual, isolated populations in the Caatinga. Finally, we presented here a comprehensive compilation of molecular and distribution data, and therefore this is the most significant study about Psomophis since its description.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2012. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2012-10-24T13:59:03Z No. of bitstreams: 1 2012_TayanaKariyadosSantos.pdf: 1916483 bytes, checksum: 1da6d0a3a422596840dde29ca4f8afbd (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2012-10-29T11:50:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_TayanaKariyadosSantos.pdf: 1916483 bytes, checksum: 1da6d0a3a422596840dde29ca4f8afbd (MD5) / Made available in DSpace on 2012-10-29T11:50:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_TayanaKariyadosSantos.pdf: 1916483 bytes, checksum: 1da6d0a3a422596840dde29ca4f8afbd (MD5) / Os acidentes ofídicos, causados principalmente por serpentes do gênero Bothrops, são uma importante questão de saúde pública no Brasil. O tratamento de suas vítimas é baseado na administração do soro antiofídico produzido a partir do plasma de cavalos imunizados com peçonha. Por ser composto por anticorpos e outras moléculas, todas de origem equina, a utilização do soro pode gerar diversas respostas imunes adversas contra seus componentes, já que são heterólogos ao paciente. Com o objetivo de desenvolver novos anticorpos humanos para uso clínico, foram isolados Fabs específicos para peçonha de Bothrops atrox a partir de uma biblioteca combinatorial de Fabs humanos apresentada na superfície de fagos. Um deles, Fab D12, foi selecionado para expressão. Como sistema de expressão heteróloga do Fab em questão foi utilizada a levedura metilotrófica Pichia pastoris e o gene heterólogo foi posto sob controle do promotor AOX1, que é fortemente ativado na presença de metanol como única fonte de carbono. O melhor nível de produção em frasco, aproximadamente 30 mg/L, foi alcançado fazendo-se o acúmulo de biomassa durante 24 horas a 30 °C em meio contendo glicerol como fonte de carbono e a etapa de indução da síntese do Fab a 20 °C durante 48 horas, com alimentação de metanol a cada 12 horas. A purificação da proteína de interesse foi realizada por cromatografia de afinidade com íons Ni2+ já que ela carrega em sua porção carboxi-terminal uma cauda de histidina que tem afinidade por esses íons. Por meio de teste de ligação direta à peçonha verificou-se que o Fab D12 puro é capaz de reconhecer o extrato bruto da peçonha. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Snake bites, mainly caused by Bothrops snakes, are an important public health issue in Brazil. The treatment of victims is based on the administration of antiophidic serum which is produced from plasma of horses immunized with venom. As it is composed of antibodies and other molecules, all of equine origin, the serum can cause adverse immune responses against various components as they are heterologous to the patient. Aiming the development of new human antibodies for clinical use, it was isolated Fabs specific for the venom of Bothrops atrox from a combinatorial library of human Fabs displayed on the surface of phage. One of them, Fab D12, was chosen for expression. As system for heterologous expression of the Fab in question was used the methylotrophic yeast Pichia pastoris and the heterologous gene was put under the control of AOX1 promoter, which is strongly activated in the presence of methanol as sole carbon source. The higher level of production in flask, approximately 30 mg/L, was achieved by performing the growth of biomass for 24 hours at 30 ° C in media containing glycerol as sole carbon source and induction of the synthesis of Fab at 20 ° C for 48 hours, with methanol feed at each 12 hours. The purification of the protein of interest was performed by affinity chromatography with Ni2+ ions as it carries on its carboxy-terminus a histidine tail which has affinity for these ions. Through direct binding assay was confirmed that pure Fab D12 is capable of recognizing the crude extract of B. atrox venom.