Avaliou-se presença de espaços vazios, presença de fendas na interface cimento/dentina, o perímetro de penetração do cimento obturador nos canais e nos istmos.e a ação antimicrobiana intra-dentinária do cimento endodôntico (AH Plus) quando submetido ou não a agitação ultrassônica no momento da obturação. Para a avaliação do preenchimento de istmos foram utilizadas 30 raízes mesiais de primeiros molares inferiores, as quais foram divididas em 2 grupos (n=15). A instrumentação foi realizada com o sistema reciprocante Reciproc (R25) e finalizado com instrumento rotatório Mtwo (35.04). Em seguida, o cimento AH Plus foi espatulado com Rodamina B e foi inserido nos canais com espiral de Lentulo no35; o cimento do grupo 1 foi submetido a agitação ultrassônica enquanto o do grupo 2 não foi agitado, sendo que todos os canais foram obturados por meio da técnica do cone único e armazenados em estufa a 37oC durante 7 dias. As raízes foram seccionadas transversalmente a 2, 4 e 6 mm do ápice radicular para análise em esteromicroscópio e microscopia confocal a laser. Para a avaliação da ação antimicrobiana foram utilizados 30 incisivos de bovinos, os quais foram seccionados em cilindros de 6 mm de espessura. Os canais tiveram seu diâmetro padronizado com uma lima tipo K no 80 e então contaminados com Enterococcus faecalis (ATCC 29212) por 4 dias. Após esse período os espécimes foram divididas em 3 grupos (n=30). No grupo 1 o cimento foi agitado com o ultrassom e obturados com a técnica de cone único; no grupo 2 o cimento não foi agitado e o grupo 3 foi o grupo controle. As raízes foram seccionadas longitudinalmente no sentido vestíbulopalatino e coradas com corante LIVE/DEAD para avaliar a viabilidade bacteriana em microscopia confocal a laser. Para análise da agitação ultrassônica do cimento obturador no preenchimento de canais e istmos, foi utilizado o teste não paramétrico de Mann-Whitney (p <0.05) e para a análise da ação antimicrobiana intradentinária, foi utilizado o teste não paramétrico Kruskal-Waliis e o Teste Dunn (p <0.05). Os resultados indicaram que a agitação ultrassônica do cimento AH Plus favoreceu o preenchimento de istmos e a penetração intratubular. A agitação ultrassônica do cimento AH Plus reduziu significantemente a viabilidade bacteriana. Conclui-se que a agitação ultrassônica do cimento AH Plus favoreceu maior penetração intratubular, menor presença de fendas, menos espaços vazios e maior ação antimicrobiana. / In this study it was assessed the presence voids, gaps in the sealer/dentin interface, the intratubular sealer penetration in canals and isthmuses and intratubular antimicrobial effect of the AH Plus sealer when ultrasonic activation was performed during obturation. 30 mesial roots of mandibular first molars were selected and divided into 2 groups (n=15). Root canal instrumentation was performed with the reciprocating system Reciproc (R25) and finished with the Mtwo (35.04) rotary instrument. Then the AH Plus sealer was mixed with Rhodamine B and was inserted into the root canals with a Lentulo spiral #35. In group 1 the ultrasonic activation of the sealer was performed while in group 2 was not activated. Then, the root canal filling was performed using the single cone technique. After 7 days of storage the roots were sectioned at 2, 4 and 6 mm from the apex and analyzed in the stereomicroscope and by confocal laser scanner microscopy. To the antimicrobial test 30 bovine incisors cut into cylinders with 6 mm in thickness were used. The root canals diameter was standardized with a K file # 80 and then contaminated with Enterococcus faecalis (ATCC 29212) for 4 days. After this period the samples were divided into 3 groups (n = 30). In group 1 the ultrasonic activation of the sealer was perfomed and filled with single cone technique; in group 2 the sealer was not ultrasonic activated and in group 3 the canals were not obturated (control group). The roots were sectioned in the buccal-palatal direction and stained with LIVE / DEAD stain to assess the bacterial viability by confocal laser microscopy. For analysis of ultrasonic activation of the sealer on the filling quality of the canals and isthmuses, a non-parametric Mann-Whitney test (p <0.05) was used. For the analysis of the intradentin antimicrobial action, a Kruskal-Waliis nonparametric and Dunn\'s test was used (p <0.05). The results showed that the ultrasonic agitation of the AH Plus sealer favored the isthmus filling and the intratubular penetration. Also, the ultrasonic activation of AH Plus sealer reduced bacterial viability. It was concluded that the ultrasonic agitation of the sealer favored higher intratubular penetration, lower presence of gaps and voids and higher antimicrobial activity.

O objetivo deste estudo foi avaliar, in vitro, o efeito das soluções irrigadoras quitosana a 0,2%; hipoclorito de sódio a 1% e EDTA a 17% na superfície dentinária e na interface de união da dentina/material obturador resinoso. Sessenta fragmentos de dentina, obtidos de 10 caninos superiores humanos, com 4 mm2 de área foram distribuídos em quatro grupos (n=15) de acordo com o tratamento: G1 NaOCl + EDTA + NaOCl, G2 NaOCl + Quitosana + NaOCl, G3 Quitosana + Quitosana + Quitosana, G4 Quitosana + EDTA + Quitosana. As amostras foram imersas por 6 minutos na primeira solução irrigadora (Tempo 1), 3 minutos na segunda (Tempo 2) e 1 minuto na terceira (Tempo 3), simulando o tratamento endodôntico. Foi analisada a composição orgânica e inorgânica das amostras por meio da Espectroscopia Infravermelha por Transformada de Fourier (FTIR) após cada etapa de irrigação. Para segunda fase, 24 caninos superiores humanos, divididos em 4 grupos (n=6), tiveram suas coroas cortadas e as raízes instrumentadas mecanicamente com instrumentos K3 até o instrumento 60.04, irrigadaos com NaOCl a 1% e Quitosana a 0,2% durante o preparo e EDTA a 17% e Quitosana a 0,2% como irrigação final. As amostras foram cortados longitudinalmente para análise do número e do perímetro dos túbulos expostos nos diferentes tempos e a rugosidade da superfície antes (baseline) e após cada fase do tratamento, além da penetração do cimento endodôntico, e avaliação da interface material obturador/dentina, após a obturação (Tempo 3), por meio de microscopia confocal a laser. Os dados foram analisados pela ANOVA e pós-teste de Tukey (p<0,05). Por meio do FTIR, constatou-se que o G4 apresentou maiores valores de matéria orgânica quando comparado aos outros grupos (p<0,05), e foram observados maiores valores para o T3 quando comparado ao T0. Quanto aos valores de matéria inorgânica, o G1 apresentou valores superiores (p<0,05) aos G2 e G3. Não houve diferença quando comparado os tempos para o conteúdo inorgânico (p>0,05). O terço apical apresentou maior valores de conteúdo inorgânico quando comparado aos demais (p<0,05). Por meio do confocal, observou-se que apenas o G3 apresentou maiores valores de perímetro dos túbulos com diferença em relação ao G1,(p<0,05), que o T2 apresentou valores semelhantes ao T1 (p>0,05), e não houve diferença entre os terços radiculares. Na análise da contagem dos túbulos dentinários, observa-se que o G4 apresentou maiores valores, semelhantes ao G3 (p>0,05). O T2 apresentou os maiores valores e o T0 os menores (p<0,05), e o terço cervical apresentou maiores valores em relação aos demais (p<0,05). Na análise da rugosidade, não houve diferença entre os grupos, e nem entre os terços radiculares (p>0,05), sendo que o T0 apresentou maiores valores, com diferença em relação ao T1 e T2 (p<0,05). Na análise da interface material obturador/dentina, não houve diferença entre os grupos, e o terço apical apresentou menor extensão de tags formados (p<0,05). A Quitosana como solução irrigadora produziu efeitos favoráveis na dentina radicular sem afetar a interação do substrato com o cimento endodôntico. / The aim of this study was to evaluate, in vitro, the influence of irrigation solutions, used during instrumentation of root canals - chitosan at 0.2%; 1% sodium hypochlorite and 17% EDTA - on dentin, by means of Fourier Transform Infrared Spectroscopy (FTIR) and laser confocal microscopy. Sixty dentin fragments, obtained from 10 human canines, with 4 mm2 area were distributed in four groups (n = 15) according to the treatment: G1 NaOCl + EDTA + NaOCl, G2 NaOCl + Chitosan + NaOCl, G3 Chitosan + Chitosan + Chitosan, G4 Chitosan + EDTA + Chitosan. The samples were immersed for 6 minutes in the first irrigation solution (Time 1), 3 minutes in the second (Time 2) and 1 minute in the third (Time 3), simulating the endodontic treatment. The organic and inorganic composition of the samples were analyzed by Fourier Transform Infrared Spectroscopy (FTIR) after each irrigation step. In a second phase, 24 teeth were divided into 4 groups (n = 6), cut longitudinally to analyze the number and perimeter of the exposed tubules at different times, the surface roughness before and after each treatment phase. The penetration of the endodontic sealer, and evaluation of the dentin interface, after the obturation (Time 3), by laser confocal microscopy. Data were analyzed by ANOVA and Tukey post hoc test (p<0.05). Using FTIR, G4 presented higher values of organic content when compared to the others groups (p <0.05), and higher values were observed for T3 when compared to T0. There was no difference when comparing the times for the inorganic content (p> 0.05). The apical third had higher values of inorganic content when compared to the others (p <0.05). With the aid of the confocal analysis, it was observed that only G3 presented higher values of tubule perimeter with difference in relation to the G1, (p <0.05), that T2 presented values similar to T1 (p> 0.05), And there was no difference between the root thirds. In the analysis of the dentinal tubule count, it was observed that G4 presented higher values, similar to G3 (p> 0.05). The T2 presented the highest values and T0 the lowest (p <0.05), and the cervical third had higher values compared with the others (p <0.05). Regarding the analysis of roughness, there was no difference between the groups, nor between the root thirds (p> 0.05), and the T0 presenting higher values compared with T1 and T2 (p <0.05). In the analysis of the dentin interface, there was no difference between the groups, and the apical third had a smaller extension of the formed tags (p <0.05). Chitosan produced less chemical changes in root dentin when compared to the other solutions.

A rodamina B e outros marcadores fluorescentes vêm sendo empregados na avaliação morfológica da interface de adesão com o auxílio de microscopia confocal de varredura a laser. Acrescentando-se rodamina B a sistemas adesivos, é possível observar as características de espessura da camada de adesivo, micromorfologia da camada híbrida, extensão e quantidade de tags, bem como diagnosticar defeitos ou alterações na interface de adesão. A literatura revela, entretanto, uma falta de precedentes sobre as quantidades de marcadores nos componentes resinosos. Além disso, ainda não se avaliou o efeito da concentração de rodamina B sobre a qualidade da análise da interface de adesão, bem como sobre o comportamento fotofísico dos marcadores nos sistemas adesivos. Este estudo foi realizado com o propósito de sistematizar um método de adição de rodamina B a sistemas adesivos, incluindo-se estratégias para a determinação de concentrações mínimas de rodamina nos componentes resinosos, porém, ainda viáveis para a realização da análise morfológica da interface de adesão através de microscopia confocal de varredura a laser. Para tal, os sistemas adesivos não simplificados e considerados padrão-ouro em suas categorias Adper&#x2122; Scotchbond&#x2122; Multi-Purpose (convencional de três passos) e Clearfil&#x2122; SE Bond (auto-condicionante de dois passos) foram modificados com rodamina B em cinco diferentes concentrações: C1 (0,5 mg/mL), C2 (0,10 mg/mL), C3 (0,02 mg/mL), C4 (0,004 mg/mL) e C5 (0,0008mg/mL) e o comportamento fluorescente da rodamina nos adesivos foi avaliado tanto no âmbito espectroscópico (espectroscopia de fotoluminescência), como no âmbito microscópico (microscopia confocal de varredura a laser). Para a modificação dos adesivos, utilizou-se uma técnica precisa de proporcionamento na qual o marcador fluorescente foi incorporado às resinas fluidas a partir de soluções de rodamina B em etanol. Os espectros de fluorescência mostraram diferenças nos máximos das bandas de emissão e de excitação, de acordo com as concentrações de rodamina B em cada material dispersante. A análise microscópica dos espécimes em dentina confirmou que é possível utilizar sistemas adesivos contendo rodamina B em concentrações muitas vezes menores do que as mencionadas na literatura. Ambos os sistemas avaliados puderam ser visualizados, microscopicamente, quando marcados com rodamina B nas três concentrações pré-selecionadas para a avaliação da interface de adesão: C2 (0,10 mg/mL), C3 (0,02 mg/mL) e C4 (0,004 mg/mL), sendo que C3 forneceu os melhores resultados em relação ao contraste e à saturação nas fotomicrografias. Concluiu-se que o comportamento fotofísico da rodamina B é influenciado tanto pela concentração, como pelo sistema adesivo no qual o marcador está dissolvido. A concentração de rodamina B também interfere na qualidade da análise morfológica da interface de adesão, sendo que o excesso do marcador pode dificultar a distinção de detalhes micromorfológicos. / Rhodamine B and other fluorescent markers have been used for the assessment of the bonding interface via confocal laser scanning microscopy. By adding rhodamine into adhesive systems, it is possible to study morphological characteristics of the hybrid layer, the extent and amount of resin tags and the adhesive layer thickness, as well as detecting potential defects or alterations at bonding interface. Meantime the literature reveals lack of standards among the quantities of fluorescent markers in resin-based polymers. The effects of rhodamine B concentration on the quality of the microscopic analysis, as well as on the photophysics of labeled adhesive systems were not assessed up to now. This study aimed to systematize methodologies for adding rhodamine B into adhesive systems, including suitable strategies for determining the minimum serviceable rhodamine concentrations to perform the morphological analysis of the bonding interface. Two non-simplified adhesive system considered gold standard categories Adper&#x2122; Scotchbond&#x2122; Multi-Purpose (3 steps conventional) and Clearfil&#x2122; SE Bond (2 steps self-etching) were modified with rhodamine B at five concentrations: C1 (0.5 mg/ml), C2 (0.10 mg/ml), C3 (0.02 mg/ml), C4 (0.004 mg/ml) and C5 (0.0008 mg/ml ) and the fluorescent behavior of the labeled resins was assessed both by photoluminescence spectroscopy and by confocal laser microscopy The preparation of the labeled resins was proceed by means of a precise proportioning technique in which the fluorescent marker was incorporated into the bonding agents from solutions of rhodamine B in ethanol. The fluorescence spectra showed differences in the intensity and wavelength fluorescence according to the rhodamine B concentration. Microscopic analysis of the dentin specimens confirmed adhesive systems can be modified with rhodamine B at far lower concentrations than those mentioned in the literature. Both evaluated systems were microscopically visualized while labeled with Rhodamine B at three pre-selected concentrations: C2 (0.10 mg/mL), C3 (0.02 mg/ml) and C4 (0.004 mg/ml), and C3 offered the best outcome with respect to contrast and saturation in photomicrographs. It was concluded that the photophysical behavior of rhodamine B depends on both the concentration and labeled adhesive system. The rhodamine B concentration also interferes with the quality of morphological analysis of the bonding interface, and the excess of the fluorescent marker may jeopardize the discrimination of morphological details.

Neste estudo avaliou-se o efeito in vitro de 4 compostos isolados de espécies vegetais, as amidas piplartina e piperina, a lignana grandisina e o alcaloide epiisopiloturina; 1 composto isolado da pele de anfíbio, o peptídeo antimicrobiano dermaseptina 01; e de 6 extratos etanólicos obtidos de vegetais, Piper tuberculatum, P. crassinervium, P. diospyrifolium, P. fuligineum, P. gaudichaudianum e Pothomorphe umbellata em adultos (machos e fêmeas com 49 dias) e esquistossômulos (recém-transformados, 1, 3, 5 e 7 dias) de Schistosoma mansoni linhagem BH. O estudo avaliou: 1) a viabilidade de vermes adultos; 2) a capacidade reprodutiva, avaliada pelo acasalamento e oviposição; 3) o efeito no tegumento em parasitas adultos; 4) a viabilidade e o efeito no tegumento em esquistossômulos; 5) a citotoxicidade de compostos e extratos em células de mamífero (célula Vero). Além disso, com microscopia confocal, neste estudo é proposto um novo modelo experimental que avalia, quantitativamente, o efeito de esquistossomicidas no tegumento dos esquistossomos. / In this study, the in vitro effect of 4 compounds isolated from plant species, amides piplartine and piperine, the lignin grandisin and alkaloid epiisopiloturine; 1 compound isolated from amphibian skin, the antimicrobial peptide dermaseptin 01; and 6 ethanolic extracts of plants, Piper tuberculatum, P. crassinervium, P. diospyrifolium, P. fuligineum, P. gaudichaudianum and Pothomorphe umbellata was evaluated in adults worm pairs (49-day-old) and schistosomula (newly-transformed, 1-, 3-, 5-, and 7-day-old) of Schistosoma mansoni BH strain. The effect of compounds and extracts against schistosomes was examined regarding: 1) adult worms survival, 2) the reproductive fitness as assessed by mating and oviposition; 3) alterations on adult worms tegumental surface; 4) viability and morphological alterations on schistosomula; 5) the cytotoxicity of compounds and extracts in mammalian cells (Vero cells) In addition, this study shows a new experimental model to evaluate quantitatively the effect of schistosomicidal drugs on the tegument of the schistosomes.

A espectroscopia de correlação de fluorescência (FCS) é uma das diferentes técnicas de análise por imagens de alta resolução espacial e temporal de biomoléculas em concentrações extremamente baixas. Ela se tornou uma técnica extremamente poderosa e sensível em áreas como bioquímica e biofísica. Como uma técnica bem estabelecida, ela é utilizada para medir concentrações locais de biomoléculas, através da marcação com moléculas fluorescentes. Coeficientes de difusão e constantes cinéticas também podem ser medidos através de FCS assim como detecção de molécula única. Ela também pode dar informação precisa sobre interações de antígeno-anticorpo, ácidos nucleicos e proteínas. Através de uma combinação de marcadores de alto rendimento quântico, fontes de luz estável (lasers), detecção ultrassensível e microscopia confocal, é possível realizar medidas de FCS em volumes de fentolitros (fL) e em concentrações de nanomolar (nM) em soluções aquosas ou em células vivas. Em contraste com outras técnicas de fluorescência, a sensibilidade da FCS aumenta com a diminuição da concentração do fluoróforo marcador, porque o parâmetro de interesse não é a intensidade de emissão de fluorescência, mas sim as flutuações espontâneas da fluorescência. Durante o tempo em que a partícula ou molécula atravessa o volume de medida pode ocorrer mudanças conformacionais e reações químicas e fotofísicas que alteram as características de emissão do fluoróforo e causam flutuações no sinal detectado. Estas flutuações são então monitoradas e transformadas em uma curva de autocorrelação, por intermédio de um software comercial que emprega um modelo físico apropriado para FCS. Em nosso estudo, utilizamos um marcador comercial (ALEXA 488&reg;) para marcar proteínas. Primeiramente utilizamos a técnica de FCS para medir concentrações extremamente baixas de marcadores fluorescentes. Também realizamos um experimento testando a influência da viscosidade do meio na difusão livre do fluoróforo, assim como as melhores condições em que temos um melhor sinal de FCS. Por fim, estudamos a difusão de proteínas marcadas (PUC II e IV) em meio aquoso (PBS) e no interior de células. / Fluorescence correlation spectroscopy (FCS) is one of the many different modes of high-resolution spatial and temporal analysis of extremely low concentrated biomolecules. It has become a powerful and sensitive tool in fields like biochemistry and biophysics. As a well established technique, it is used to measure local concentrations of fluorescently labeled biomolecules, diffusion coefficients, kinetic constants and single molecule studies. Through a combination of high quantum yield fluorescent dyes, stable light sources (lasers), ultrasensitive detection and confocal microscopy is possible to perform FCS measurements in femtoliters volumes and nanomolar concentrations in aquous solution or in live cells. Unlike with other fluorescence technics, its sensibility increases with the decrease of dye concentrarion, because the main factor is not the emission intensity itself. Instead this, spontaneous statistical fluctuation of fluorescence becomes the main factor in FCS analisys. During the time that the conjugated-dye cross the volume detection can occur conformational changes, chemical reaction and photophysical processes that can change the emission properties of the dye and, then, change the detected sinal. This fluctuations are tracked and changed into a autocorrelation curve, by a specific software, appropriate to perform FCS analisys. In our study, we use comercial dye (Alexa 488) to label proteins. Firstly, we applied FCS to measure extremally diluted concentrations of dyes (~1 nM). We have performed experiments testing the influence of the viscosity medium in the free difusion of the dyes and the optical apparatus and conditions that result in the best FCS signal. We also have studied protein diffusion (PUC II e IV) in aquous medium (PBS) and toward the inner of the cells.

Avaliou-se a adaptação da obturação às paredes do canal, a penetrabilidade dos cimentos nos túbulos dentinários, a qualidade da obturação e a capacidade seladora utilizando-se quatro cimentos obturadores a base de resina epóxi (AH Plus, AcroSeal, AdSeal e Sealer 26), quando submetidos a agitação ultrassônica no momento da inserção do cimento. Foram utilizados 84 caninos humanos recém extraídos, unirradiculados e que foram divididos em dois grupos A e B (n=40), sendo que cada grupo foi dividido em quatro subgrupos de 10 dentes cada, conforme o cimento empregado: A1 e B1 - AH Plus, A2 e B2 Acroseal, A3 e B3 Adseal e A4 e B4 Sealer 26. O preparo biomecânico foi efetuado utilizando-se de instrumentação rotatória com sistema ProTaper, determinando um batente apical com o instrumento F5 (50.05) no comprimento real de trabalho. Foi realizada, em todos os dentes, a padronização do forame até o instrumento Protaper F3. Em seguida, os cimentos foram corados com a Rodamina B. Os canais foram então obturados por meio da técnica da condensação lateral, sendo os canais do grupo A previamente preenchidos pelos cimentos obturadores e submetidos à agitação ultrassônica enquanto que os do grupo B foram considerados como controle e não foram submetidos a agitação. Os dentes então foram submetidos ao teste de infiltração de fluídos após 7 e 30 dias de realizada a obturação. Após esse período, foram realizadas três secções transversais a 2, 4 e 6 mm do ápice e as imagens das secções foram obtidas em estereomicroscópio e microscopia a laser confocal. Para análise entre grupos, no período de 7 e 30 dias em relação ao teste de infiltração apical, foi selecionado o teste não-paramétrico de Kruskall-Wallis e Dunn (p<0.05). Para as demais análises, foi utilizado o teste não-paramétrico Mann Whitney e Wilcoxon. Os resultados indicaram que a agitação ultrassônica aumentou a infiltração apical de forma significante para o cimento AH Plus no período de 7 dias. No que diz respeito à penetração de cimento na dentina, houve um aumento significante para os cimentos AHPus, Acrosela e Sealer 26 no terço médio, e para o AH Plus e Sealer no terço cervical. Com relação às fendas, a agitação ultrassônica favoreceu menor presença desta para o AH Plus na porção apical, e para todos os cimentos na região média e cervical. Concluiu-se que a agitação ultrassônica não proporcionou melhorias no selamento apical e favoreceu maior penetração de cimento na dentina e menor presença de fendas na região média e cervical. / The aim of this study was to evaluate the adaptation of the filling of the canal walls, the penetration of cements in the dentinal tubules, the quality of the filling and sealing capacity utilizing four different epóxic based sealers (AH Plus, Acroseal, AdSeal and Sealer 26), when submitted to ultrasonic agitation at the time of the obturation. Eighty four extracted uniradicular human canines were utilized, and they were divided into two experimental groups A and B (n = 40), and each group was divided into four groups of 10 teeth each, in accordance with the cement used: A1 and B1 - AH Plus, A2 and B2 - Acroseal, A3 and B3-Adseal and A4 and B4 - Sealer 26. The biomechanical preparation was performed utilizing rotary instrumentation with theProTaper system, determining an apical stop with a F5 instrument (50.05) in the real working length. The standardization of the foramen was performed on all teeth until the Protaper F3 instrument. The cements were stained with Rhodamine B. Next the canals were filled by the lateral condensation technique. The canals of group A were previously filled by the sealers and submitted to ultrasonic agitation while those in Group B were considered as the controls and were not subjected to agitation. The teeth were then submitted to testing for leakage of fluids 7 and 30 days after the obturation. After this period, three transverse cross sections were performed at 2, 4 and 6 mm from the apex and the images of the sections were obtained in a stereomicroscope and confocal laser microscopy. For the analysis between the groups, in the period of 7 and 30 days, in relation to the apical leakage test, was selected the nonparametric Kruskal-Wallis and Dunn tests (p <0.05). For the other analyzes, the nonparametric Mann Whitney and Wilcoxon tests was used. The results indicated that the ultrasonic agitation significantly increased apical leakage for the AH Plus in the period of 7 days. With regard to the penetration of the cement into the dentin, there was a significant increase for the AHPus, Acroseal and Sealer 26 cements in the middle third, and the AH Plus and Sealer 26 in the cervical third when the ultrasonic agitation was performed. Regarding the cracks, the ultrasonic agitation favored a smaller presence for the AH Plus in the apical portion, and for all cements in the middle region and cervical. It was concluded that the ultrasonic agitation did not improve the apical seal and favored greater penetration of cement into the dentin and less presence of cracks in the middle and cervical region.

Neste trabalho foi avaliado microscopicamente a interface de adaptação entre diferentes cimentos obturadores resinosos e dentina no interior do canal radicular de pré-molares humanos, identificando microscopicamente o nível de adaptação. Foram selecionadas 60 raízes de dentes uniradiculados, raízes retilíneas, com anatomia circular ou ovalada, ápices completos, obtidos por meio de doação feita por Cirurgião Dentistas e, consentidos seu emprego em pesquisas pelo paciente. Posteriormente as raízes foram divididas randomicamente em três grupos de acordo com o sistema de obturação empregado: Grupo 1 Guta-percha + cimento AHPlus; Grupo 2 Real Seal; Grupo 3 Sistema obturador smart-seal. Em seguida cada espécime recebeu cortes transversais em diferentes níveis, com 2mm de espessura, com disco diamantado, em máquina de corte de tecido duro (Isomet®) sob abundante irrigação. Após a realização dos cortes, as fatias a 2mm, 4mm, 6mm e 8mm foram analisadas em esteriomicroscópio, observando-se a área de adaptação cimento-dentina e em microscópio confocal para analisar a penetração do cimento em túbulos dentinários e a presença de fendas. As imagens obtidas foram analisadas pelo software de medida de área Image J®, em que as imagens foram devidamente calibradas. Os resultados apontaram uma superioridade do sistema Smart-seal na área de cimento no corte de 6mm (p<0,05), contudo uma inferioridade no que se tratou da penetração do cimento em túbulos dentinários nos cortes de 2mm, 6mm e 8mm (p<0,05). Em relação as fendas o smart-seal apresentou uma menor quantidade de fendas (p<0,05) apenas na medida de 8mm. Concluiu-se que apesar de sofrer expansão na tomada de presa, e melhor adaptação nas paredes do canal o sistema Smart Seal não apresentou penetrabilidade tubular satisfatória. / This study evaluated microscopically the interface adaptation between sealer and dentin within the root canal, identifying the level of sealing provided by different resin filling materials. 60 single rooted teeth were selected, roots straight with circular or oval anatomy, complete apexes, obtained through donation made by Surgeon Dentists and consented to its use in research by the patient. Subsequently the roots were randomly divided into three groups according to the system obturation: group 1 - Gutta-percha + cement AHPlus, Group 2 - Epiphany + Resilon, Group 3 - Smart Seal obturation system. Then each specimen received a transverse cut with 2 mm thick, with a diamond disc, cutting machine for hard tissue (Isomet ®) under abundant irrigation. After the cuts, slices to 2mm, 4mm, 6mm and 8mm were analyzed by esteriomicroscopy, observing the adaptation area between dentin and sealer, confocal microscopy was utilized to examine the penetration of cement into the dentinal tubules and the presence of gaps. The images were analyzed by software measurement area Image J ®, where the images have been properly calibrated. The results showed a superiority of Smart-seal in the area of cement in cutting 6mm (p <0.05), however inferiority in the penetration of the sealer into the dentinal tubules in sections of 2mm, 6mm and 8mm (p <0.05). Regarding the cracks Smart Seal had a smaller amount of cracks (p <0.05) only the extent of 8mm. It was concluded that although the Smart Seal system presentes expansion and better fit into the dentin walls of the canal, the system showed no satisfactory tubular penetration.

Cette thèse porte sur l'interaction lumière-matière au sein de nanostructures placées dans des cavités optiques à base de semi-conducteurs nitrures. A l'aide d'expériences de micro-photoluminescence dans l'ultra-violet, nous étudions les propriétés optiques de boîtes quantiques GaN/AlN dans des microcavités planaires et celles de puits quantiques GaN/AlN insérés dans des microdisques AlN.Afin d'améliorer la collection du faible signal de photoluminescence de boîtes quantiques uniques, nous utilisons des microcavités planaires pour modifier le diagramme d'émission d'une boîte quantique. Le dessin des microcavités est optimisé grâce à des simulations numériques basées sur la méthode des matrices de transfert en présence d'un émetteur. Nous montrons que, pour une microcavité nitrure à base de miroirs de Bragg AlN/AlGaN, la collection des photons émis par une boîte quantique peut être théoriquement améliorée d'un ordre de grandeur, ce qui est confirmé par nos mesures sur boîtes quantiques uniques, ouvrant ainsi la voie à des études avancées de corrélations de photons dans l'UV.La seconde partie des travaux est dédiée à la réalisation d'un micro-laser opérant dans l'UV profond et à température ambiante. En utilisant des puits quantiques GaN/AlN de 2,8 mono-couches, crûs sur substrat silicium et insérés dans des microdisques AlN, nous observons une émission laser à 275 nm sous pompage optique impulsionnel. Cette démonstration montre le fort potentiel des semi-conducteurs nitrures pour la nano-photonique UV sur silicium. / This thesis addresses the light-matter interaction in nitride nanostructures embedded in optical microcavities. By using micro-photoluminescence experiments, we study the optical properties of GaN/AlN quantum dots embedded in planar microcavities and those of GaN/AlN quantum wells in AlN microdisks.By placing quantum dots in planar microcavities, we are able to modify the emission diagram and increase the collection efficiency. The design of the microcavities is optimized by using numerical simulations based on transfer matrix method with an internal emitter. For an AlN microcavity with AlN/AlGaN Bragg mirrors, we show that the collection efficiency could be theoretical increase by one order of magnitude, which is confirmed by our micro-photoluminescence experiments on single quantum dots. This observation opens the way for advanced studies such as photon correlations experiments in the UV range.The second part of our work is devoted to the realization of a micro-laser operating in the deep-UV range at room-temperature. By using thin GaN/AlN quantum wells (2.8 monolayers), grown on silicon substrate and embedded in AlN microdisks, we observe a laser emission at 275 nm under pulsed optical pumping. This demonstration shows the strong potentiality for future developments of nitride-on-silicon nano-photonics.

Todos os seres vivos compartilham uma característica comum na sua composição estrutural, a célula. No corpo humano, as células vasculares de músculo liso são fundamentais para o bom funcionamento dos vasos arteriais. A principal função dessas células é contrair e regular o calibre desses vasos, a pressão sanguínea e a distribuição do fluxo de sangue. Devido a isto, alterações mecânicas sofridas por estas células acarretam modificações estruturais nos vasos, podendo levar à hipertensão, vasoespasmo e arteriosclerose. O principal objetivo do nosso trabalho foi o de desenvolver uma nova plataforma de análise de imagens de células vasculares para caracterizar suas propriedades estruturais. Em nossa plataforma, analisamos parâmetros estruturais de células vasculares de músculo liso de diferentes leitos arteriais, com as fibras de actina evidenciadas com marcadores fluorescentes, obtidas por microscopia confocal. Estes parâmetros são: o Índice de Alinhamento das fibras de actina da imagem, a distribuição de comprimento dessas fibras e sua dimensão fractal. Mostramos que com esses parâmetros somos capazes de comparar células de leitos arteriais diferentes de forma quantitativa, assim como, correlacionar esses parâmetros com suas propriedades mecânicas. / All living organisms share a unique characteristic in their structural composition, the cell. In the human body, vascular smooth muscle cells are fundamental for the ideal functioning of the arterial vessels. The main function of these cells is to contract and regulate these vessels caliber, as well as the blood pressure and flow distribution of blood. Due to the exposed above, mechanical alterations suffered by these cells cause structural modifications in vessels, which may lead to hypertension, vasospasm and atherosclerosis. The main objective of our research was to develop a new framework of image analysis for vessel cells in order to characterize their structural properties. In our framework we analyzed structural parameters of vascular smooth muscle cells from different arterial sites, with actin fibers labeled with fluorescent markers, obtained by confocal microscopy. These parameters are: the actin fibers alignment index of the image, the length distribution of these fibers and their fractal dimension. We presented that with these parameters we are able to quantitatively compare cells in different arterial sites as well as correlate these parameters with their mechanical properties.

Background Chemotherapy-induced peripheral neuropathy (CIPN) is a common dose-limiting toxicity with significant sequelae impacting prognosis and quality of life. The natural history and pathophysiological mechanisms of CIPN are unclear. Equally, the lack of systematic approach to diagnosis and assessments contribute to difficulty identifying at risk patients with implications on symptom burden. Effective management of CIPN is also difficult due to limited treatment options. To try and address this challenging clinical problem, this thesis aimed to adopt a translational approach to: 1) characterisation and early identification of the development of CIPN in cancer patients receiving neurotoxic chemotherapy and 2) explore topical treatment options in patients with chronic peripheral neuropathic pain. Methodology In the CIPN study, a mixed cohort of colorectal, gynaecological and lung cancer patients receiving neurotoxic chemotherapy (platinum agents and taxanes) were assessed prospectively, at baseline (prior to initiating chemotherapy), during cycles (every 3 weeks) and post-treatment (every 3 months) for up to 12 months (cumulative 261 assessments). Comprehensive longitudinal clinical characterisation consisted of the integration of quantitative sensory testing (QST), objective measure of function (grooved pegboard test), patient-reported outcomes and in vivo confocal microscopy to provide insight into the clinical course and potential psychophysical biomarkers of CIPN during and after chemotherapy. In the pilot intervention study, patients with chronic, complex cancer treatment related peripheral neuropathic pain received a single application of high concentration 8% capsaicin patch. Assessments conducted at baseline, 4 weeks and 12 weeks included patient-reported outcomes and QST with an exploratory application of in vivo confocal microscopy in a case. Results In the CIPN study, 33 patients when compared to 33 age and gender matched healthy controls displayed thermal hyperalgesia, sensorimotor impairment and increased resting heart rate prior to initiating neurotoxic chemotherapy. Characterisation of somato-sensory profile demonstrated dysfunction of the various types of primary afferent nerves (Aβ, Aδ and C). Assessing the change over time from baseline to during cycles and post-treatment follow up, revealed signs and symptoms as early as cycle 2 with an increase in the later cycles and 3 months post-treatment follow up. A greater burden was observed at 12 months in comparison to baseline. Significant changes were observed in QST parameters indicating both small and large fibre deficits. Interesting associations were observed for example with tactile deficits in the upper and lower limb and patient-reported outcomes. The repeated measures model provided an opportunity to distil the relationship between subjective and objective measures of CIPN. The subclinical findings at baseline however did not translate to obvious predictors of CIPN development. The exploratory use of in vivo confocal microscopy (45 healthy controls, 9 patients) demonstrated correlation with current assessment tools (QST). Analysis from the pilot intervention study of 20 patients revealed clinically significant improvement in pain in a subset at 4 and 12 weeks post-treatment. Conclusion Overall the combination of subjective and objective measures utilised in the prospective characterisation of this mixed cohort of cancer patients provided a useful paradigm for qualifying and quantifying the trajectory of CIPN related peripheral nerve damage and symptom burden with additional contribution from the novel in vivo confocal microscopy work. In capturing the varied spectrum of phenotypes, this approach may provide insight into the complexities of the underlying neurobiological mechanisms. The baseline subclinical sensory, motor and autonomic nerve dysfunction implicate a cancer-mediated process possibly contributing to CIPN. Although the preliminary investigation of baseline predictors of CIPN was inconclusive, thermal pain threshold warrant further investigation. These findings highlight the need to further address prediction and risk stratification in larger studies. The exploratory intervention study suggests that patients with chronic neuropathic pain may receive some benefit in pain severity, function and mood with effect continuing at 12 weeks post-treatment. This research warrants further investigation in larger cohorts.