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El síndrome metabólico, la hiperlipemia familiar combinada (HLFC), la diabetes mellitus tipo 2 y la dislipemia secundaria al tratamiento del VIH son síndromes que conllevan un elevado riesgo cardiovascular. Comparten alteraciones en el metabolismo de las lipoproteínas y de los hidratos de carbono y en la función endotelial. Los genes implicados en estos procesos están regulados a nivel transcripcional por la vía de señalización de la vitamina A. Asimismo, diferentes estudios de ligamiento para estas patologías identificaron un locus común en la región cromosómica 1q21-23. Estas evidencias nos llevaron a plantear la siguiente hipótesis: alteraciones de la regulación génica modulada por la vitamina A, ya sea de origen genético o inducidas por determinados fármacos, como son el ácido retinoico y sus derivados, causan tanto la hiperlipemia como la disfunción endotelial y por lo tanto, un aumento del riesgo cardiovascular.En la región 1q21-23 se localiza el gen CRABP2 (transportador intracelular del ácido retinoico). En pacientes con HLFC identificamos dos nuevos polimorfismos: rs2236795 y rs74118740, y realizamos un estudio de asociación en tres poblaciones independientes. El gen CRABP2 está asociado con niveles más altos de colesterol LDL. Por otro lado, estudiamos el efecto del ácido retinoico 13-cis sobre la expresión génica en células vasculares endoteliales humanas (HUVEC). A concentraciones farmacológicas se identificaron cambios en los niveles de expresión que pueden suponer un aumento de la adhesión celular y de la eliminación de los remanentes de las lipoproteínas y una modificación del metabolismo de la HDL. Finalmente, en el estudio más detallado de uno de los genes, la prostaciclina sintasa (PGIS), se observó un aumento en la liberación de la prostaglandina I2 (inhibidor de la agregación plaquetar y vasodilatador) debido a la inducción de PGIS. Los resultados obtenidos en esta tesis aportan evidencias de que los procesos regulados por el ácido retinoico participan en estas patologías. / Metabolic syndrome, familial combined hyperlipidemia (FCHL), type 2 diabetes mellitus and dyslipidemia secondary to HIV treatment are syndromes linked to high cardiovascular risk, and alterations in lipoprotein and carbohydrate metabolism, as well as with endothelial function. The genes involved in these processes are regulated at the transcriptional level through the vitamin A signaling pathway. Also, several linkage studies have identified a common locus in 1q21-23. This evidence led us to the following hypothesis: vitamin A modulates gene regulation involved in these alterations either genetic or drug induced (such as retinoic acid and its derivatives); these alterations cause hyperlipidemia and endothelial dysfunction and therefore increase cardiovascular risk. Cellular retinoic acid binding protein II gene (CRABP2) is located in 1q21-23. We identified in FCHL patients two new polymorphisms (rs2236795 and rs74118740), and studied its association with dyslipidemia in three independent populations. CRABP2 gene is associated with higher levels of LDL cholesterol. Furthermore, we studied the effect of 13-cis retinoic acid on gene expression in human vascular endothelial cells (HUVEC). We identified changes in expression levels at pharmacological concentrations that caused an increase in either cell adhesion and lipoprotein remnants removal, and a modification of HDL metabolism. Finally, studying prostacyclin synthase gene in detail (PGIS), we observed an increase in the release of prostaglandin I2 (platelet aggregation inhibitor and vasodilator) due to the induction of PGIS. The results in this thesis provide evidence that the processes regulated by retinoic acid are involved in these pathologies.

Abstract Chronic, non-healing wounds constitute a massive financial burden on health care system. The healing processes of these wounds and their underlying pathology are only partly understood. In this study, important biological functions performed by Retinoic acid with its regulatory protein cellular retinoic acid binding protein 2 (CRABP2) were discussed. Possibly, these biological func-tions might be linked with chronic wound therapeutic by inducing antiproliferative activity of cells which leads to reduction in migration and growth rate of fibroblast during skin regeneration pro-cess in chronic wound healing. The aim of this study was to comparatively analyze the expression pattern of CRABP2 and P16 cyclic dependent kinase inhibitor in dermal fibroblasts at mRNA levels along with their morphological pattern, migration and growth rate. Fibroblasts were cultured and their morphology were observed by phase-contrast imaging. Difference in viability, migratory capacity was examined by Cell titer blue and scratch assay respectively and expression were meas-ured by polymerase chain reaction. Interestingly, the date revealed that morphology was altered and growth rate and migration velocity was significantly lower in chronic wound fibroblasts and senescent fibroblasts when compared with their control. Expression pattern revealed that CRABP2 was highly up-regulated only by senescent cells but not in chronic wound fibroblasts which point novel function for this protein in term of replicative senescence. However, P16 was not signifi-cantly altered among all fibroblasts which demands supplementary studies to conform the role of CRABP2 in fibroblast dysfunction and cellular senescence in chronic wounds.

Introduction : La Vitamine A (rétinol, ROL) et son métabolite l’acide rétinoïque (AR) sont essentielles pour l’embryogénèse. L’excès comme l’insuffisance d’AR sont nocives. L’AR est régularisé dans l’embryon par des gènes spécifiques (ALDH, CRABP, CYP). Hypothèse : Les grandes variations d’AR dans le plasma des adultes normaux, nous ont orienté à mesurer les rétinoïdes (ROL et RA) dans le sang de cordon ombilical, pour évaluer des corrélations avec des polymorphismes des gènes impliquées dans le métabolisme de l’AR et le développement rénal-(RALDH2, CRABP2, CYP26A1; B1). Vérifier pour des corrélations entre ces rétinoïdes et/ou avec la taille de reins à la naissance. Méthodes : Extraction du ROL et RA du sang de cordon ombilical de 145 enfants et analyse par HPLC. Le volume des reins a été mesuré par ultrasonographie et l’ADN génomique leucocytaire extrait (FlexiGene DNA-Kit). 10 échantillons d’ADN ont été exclus (qualité). Les htSNP : ALDH1A2, CRABP2, CYP26A1;B1 du génome humain (HapMap) ont été séquencés et génotypés (Sequenom iPlex PCR).Des testes bio-statistiques des fréquences génotypiques et alléliques ont été effectués (Single-Locus, χ2, Kruskal-Wallis, Allelic-Exact).Des corrélations (ROL, RA, SNPs, V-reins) ont été analysés (Kendall-tau /Oakes). Résultats : La Δ RA (0.07-550.27 nmol/l) non corrélé avec la Δ ROL (51.39-3892.70 nmol/l). Il n’y a pas d’association ROL ou RA avec les volumes des reins ou avec les SNPs/ CYP21A1;B1. Corrélations trouvées : 1. (p=0.035), polymorphisme génétique ALDH1A2-SNP (rs12591551:A/C) hétérozygote/CA, (25enfants, 19%) avec moyennes d’AR (62.21nmol/l). 2. (p=0.013), polymorphisme CRABP2-SNP (rs12724719:A/G) homozygote/AA (4 enfants, 3%) avec hautes valeurs moyennes d’AR (141,3 nmol/l). Discussion-Conclusion : Les grandes ΔRA suggèrent une variabilité génique individuelle du métabolisme de ROL. Les génotypes (CA)-ALDH1A2/ SNP (rs12591551:A/C) et (AA) -CRABP2/SNP (rs12724719:A/G) sont associés à des valeurs moyennes hautes d’AR, pouvant protéger l’embryogénèse lors d’une hypovitaminose A maternelle. / Introduction: Vitamin A (retinol, ROL) modulate the embryogenesis thorough RA, its metabolite. Excess or deficiency being pathologic, the RA is tight regulated in the embryo thorough specific genes (ALDH, CRABP, CYP, etc.) important for Vitamin A metabolism. Hypothesis: High RA variations in healthy adults plasma, oriented to ROL, RA evaluation in human cord blood, in regard of possible correlations with polymorphisms of genes involved in RA metabolism and kidney development (RALDH2, CRABP2, CYP26A1,B1). Correlations between ROL and RA and/or with birth kidney size might also occur. Methods: Cord blood ROL and RA were extracted and HPLC analysed, from 145 Montreal healthy newborns. Kidney volumes already measured by ultrasonography. Genomic leucocytary DNA extraction was performed with FlexiGene DNA-Kit. 10 samples excluded (DNA quality). htSNP choices: ALDH1A2, CRABP2, CYP26A1;B1 were made on HapMap human genome. Sequencing, genotyping (Sequenom iPlex PCR) was made for these genes eventual SNPs. Biostatistics tests for genotype and allelic frequencies (Single-Locus, χ2, Kruskal-Wallis, Allelic-Exact) and Kendall-tau /Oakes analysis for eventual ROL, RA, SNPs, V-reins correlations, were performed. Results: No correlation found between Δ RA (0.07-550.27 nmol/L) and Δ ROL (51.39-3892.70 nmol/L). No association ROL or RA with kidney volumes nor with SNPs/ CYP21A1;B1. Found correlations: 1. (p=0.035), polymorphism ALDH1A2-SNP (rs12591551:A/C) heterozygous/CA, (25babies, 19%) with RA (mean ~62.21nmol/L). 2. (p=0.013), polymorphism CRABP2-SNP (rs12724719: A/G) homozygous/AA (4babies, 3%) with RA (mean~141, 3 nmol/L). Discussion/Conclusion: Big Δ RA not correlated with Δ ROL suggests individual genetic variance on RA metabolism. Genotypes (CA)-ALDH1A2/SNP (rs12591551:A/C) and (AA)-CRABP2/SNP (rs12724719: A/G) are associated with high cord blood RA mean and may be embryogenesis protective in a maternal hypovitaminosis-A, environment.

RÉSUMÉ: Introduction : La Vitamine A (rétinol, ROL) et son métabolite l’acide rétinoïque (AR) sont essentielles pour l’embryogénèse. L’excès comme l’insuffisance d’AR sont nocives. L’AR est régularisé dans l’embryon par des gènes spécifiques (ALDH, CRABP, CYP). Hypothèse : Les grandes variations d’AR dans le plasma des adultes normaux, nous ont orienté à mesurer les rétinoïdes (ROL et RA) dans le sang de cordon ombilical, pour évaluer des corrélations avec des polymorphismes des gènes impliquées dans le métabolisme de l’AR et le développement rénal-(RALDH2, CRABP2, CYP26A1; B1). Vérifier pour des corrélations entre ces rétinoïdes et/ou avec la taille de reins à la naissance. Méthodes : Extraction du ROL et RA du sang de cordon ombilical de 145 enfants et analyse par HPLC. Le volume des reins a été mesuré par ultrasonographie et l’ADN génomique leucocytaire extrait (FlexiGene DNA-Kit). 10 échantillons d’ADN ont été exclus (qualité). Les htSNP : ALDH1A2, CRABP2, CYP26A1;B1 du génome humain (HapMap) ont été séquencés et génotypés (Sequenom iPlex PCR).Des testes bio-statistiques des fréquences génotypiques et alléliques ont été effectués (Single-Locus, χ2, Kruskal-Wallis, Allelic-Exact).Des corrélations (ROL, RA, SNPs, V-reins) ont été analysés (Kendall-tau /Oakes). Résultats : La Δ RA (0.07-550.27 nmol/l) non corrélé avec la Δ ROL (51.39-3892.70 nmol/l). Il n’y a pas d’association ROL ou RA avec les volumes des reins ou avec les SNPs/ CYP21A1;B1. Corrélations trouvées : 1. (p=0.035), polymorphisme génétique ALDH1A2-SNP (rs12591551:A/C) hétérozygote/CA, (25enfants, 19%) avec moyennes d’AR (62.21nmol/l). 2. (p=0.013), polymorphisme CRABP2-SNP (rs12724719:A/G) homozygote/AA (4 enfants, 3%) avec hautes valeurs moyennes d’AR (141,3 nmol/l). Discussion-Conclusion : Les grandes ΔRA suggèrent une variabilité génique individuelle du métabolisme de ROL. Les génotypes (CA)-ALDH1A2/ SNP (rs12591551:A/C) et (AA) -CRABP2/SNP (rs12724719:A/G) sont associés à des valeurs moyennes hautes d’AR, pouvant protéger l’embryogénèse lors d’une hypovitaminose A maternelle. Mots clé: sang de cordon ombilical, ROL-rétinol, AR-acide rétinoïque, HPLC, SNP- polymorphisme, ALDH1A2, CRABP2, CYP26A1,développement rénal,embryogénèse. / ABSTRACT Introduction: Vitamin A (retinol, ROL) modulate the embryogenesis thorough RA, its metabolite. Excess or deficiency being pathologic, the RA is tight regulated in the embryo thorough specific genes (ALDH, CRABP, CYP, etc.) important for Vitamin A metabolism. Hypothesis: High RA variations in healthy adults plasma, oriented to ROL, RA evaluation in human cord blood, in regard of possible correlations with polymorphisms of genes involved in RA metabolism and kidney development (RALDH2, CRABP2, CYP26A1,B1). Correlations between ROL and RA and/or with birth kidney size might also occur. Methods: Cord blood ROL and RA were extracted and HPLC analysed, from 145 Montreal healthy newborns. Kidney volumes already measured by ultrasonography. Genomic leucocytary DNA extraction was performed with FlexiGene DNA-Kit. 10 samples excluded (DNA quality). htSNP choices: ALDH1A2, CRABP2, CYP26A1;B1 were made on HapMap human genome. Sequencing, genotyping (Sequenom iPlex PCR) was made for these genes eventual SNPs. Biostatistics tests for genotype and allelic frequencies (Single-Locus, χ2, Kruskal-Wallis, Allelic-Exact) and Kendall-tau /Oakes analysis for eventual ROL, RA, SNPs, V-reins correlations, were performed. Results: No correlation found between Δ RA (0.07-550.27 nmol/L) and Δ ROL (51.39-3892.70 nmol/L). No association ROL or RA with kidney volumes nor with SNPs/ CYP21A1;B1. Found correlations: 1. (p=0.035), polymorphism ALDH1A2-SNP (rs12591551:A/C) heterozygous/CA, (25babies, 19%) with RA (mean ~62.21nmol/L). 2. (p=0.013), polymorphism CRABP2-SNP (rs12724719: A/G) homozygous/AA (4babies, 3%) with RA (mean~141, 3 nmol/L). Discussion/Conclusion: Big Δ RA not correlated with Δ ROL suggests individual genetic variance on RA metabolism. Genotypes (CA)-ALDH1A2/SNP (rs12591551:A/C) and (AA)-CRABP2/SNP (rs12724719: A/G) are associated with high cord blood RA mean and may be embryogenesis protective in a maternal hypovitaminosis-A, environment. Key words: umbilical cord blood, ROL-retinol, AR-retinoic acid, HPLC, SNP- polymorphism, ALDH1A2, CRABP2, CYP26A1,kidney development,embryogenesis. / Note d'excellence 10%: « Le Jury, à l'unanimité, juge ce mémoire excellent et le classe parmi les 10% des mémoires de la discipline » - selon le Rapport définitif du jury d'éxamen d'un mémoire de maîtrise.