Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico, Programa de Pós-Graduação em Engenharia Química, Florianópolis, 2014. / Made available in DSpace on 2015-02-05T20:37:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 328355.pdf: 2113827 bytes, checksum: 1b1f5a0a553224afa5273b3b5476470f (MD5) Previous issue date: 2014 / Dotadas de um sistema complexo de comunicação, as células nervosas representam o modo com o qual o cérebro pode se comunicar com as mais diversas partes do corpo. O córtex cerebral apresenta sua citoarquitetura composta por neurônio, células gliais (incluindo os astrócitos) e fibras. O modo tradicional de comunicação nervosa é a sinapse, e, assim como os neurônios, a partir destas, as células gliais também podem se comunicar entre si. Tendo nos íons cálcio seu modo de transmitir a informação, o astrócito, ao término da cadeia de eventos bioquímicos, reage liberando gliotransmissores. Partindo-se destes conhecimentos, este trabalho desenvolveu um estudo experimental para melhor elucidar o processo de captação de íons cálcio por astrogliomas após o emprego de um estímulo glutamatérgico. O experimento foi realizado utilizando-se cultura de células de glioma C6; solução contendo cálcio; glutamato monossódico e o indicador de cálcio fluorescente FURA-2/AM. A aquisição dos dados foi realizada em equipamento de misturador de fluxo interrompido, stopped flow mixer, capaz de produzir dados de concentração de cálcio no interior das células, utilizando para tal fluorescência. O tratamento estatístico dos dados foi realizado através das ferramentas média e desvio padrão. Para a interpretação global dos mesmos, utilizou-se autores que pudessem estabelecer relações pertinentes sobre a temática, de modo a comprovar a influencia do neurotransmissor glutamato no processo de captação de íons cálcio por astrogliomas, além da análise da viabilidade da metodologia proposta para tal.<br> / Abstract : Nerve cells are endowed with a complex communication system. They represent the main way of communication between the brain and others parts of the body. The cerebral cytoarchitecture is composed by neuron, glial cells (including astrocytes) and fibers. The traditional mode of nervous communication is the synapse. Like neurons, glial cells also employ the synapse to communicate ones with each others. Using calcium ions like way of transmitting information, the astrocyte, in the end of the biochemical events chain, reacts by releasing gliotransmitters. Knowing that, this research developed an experimental study to elucidate the process of calcium uptake by astrogliomas after a glutamatergic stimulation. The experiment was executed by using a culture of C6 glioma cells; calcium solution; monosodium glutamate and fluorescent calcium indicator Fura-2/AM. Data acquisition was performed in a "stopped-flow mixer", a device able to obtain data from concentration of calcium inside cells by fluorescence measurement. The data statistical treatment was done by employing mean and standard deviation. The overall interpretation of the results made use of authors able to establish relevant links about the subject, in order to prove the influence of the neurotransmitter glutamate in the uptake of calcium ions by astrogliomas, besides assessing the feasibility of the proposed study methodology.

Orientador: Lilia Freire Rodrigues de Souza Li / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T01:19:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Esteves_TalitaCasagrande_M.pdf: 3933592 bytes, checksum: 7ff95f45970c8b5e8483f59dd89237f8 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: o receptor sensor de cálcio (CASR) é membro da família III dos receptores que acoplam à proteína G e é de fundamental importância no processo da homeostase do cálcio. O domínio extracelular (ECD) do receptor é o principal sítio de ligação do Ca/+ e a maioria das mutações naturais que ocorrem nesse domínio afeta somente a afinidade do receptor pelo Cao2+.~AJgumasmutações no ECD podem causar uma alteração mais grosseira na estrutura do receptor, com conseqüente redução da sua expressão na superficie celular. O objetivo desta tese foi investigar o grau de expressão do CASR com mutações no ECD, incluindo alterações na polaridade ou no caráter ácido/base, em locais onde mutações ativadoras (ADH) ou inativadoras (FHH/NSHPT) já foram descritas. Além disso, também deletamos a região entre os aminoácidos 139 e 167 do ECD por ser uma região altamente hidrofóbica e cuja importância ainda não foi investigada. A técnica de Westem blotting nos permitiu verificar a expressão de todos os receptores mutados transfectados em células HEK-293. Através da densitometria das bandas de 140 e 160 kDa e a análise estatística do valores obtidos de três experimentos separados, verificamos uma expressão similar ao CASR nativo dos receptores mutados nas posições A116T, N118S, E127K, F128Y, T138K e Ll139-167. O receptor com a mutação P55S apresentou uma drástica redução na expressão das formas diméricas e oligoméricas (-220 kDa) em relação ao CASR nativo. Assim, podemos concluir que a expressão do CASR pode ser afetada de acordo com alterações das características dos aminoácidos nativos (polaridade, caráter ácido/base) e a mudança no padrão de expressão é dependente da posição do aminoácido mutado. A posição 55 demonstrou ser crítica para a expressão das formas diméricas do receptor, enquanto que a região hidrofóbica entre os aminoácidos 139 e 167 não é importante para a expressão nem para a formação de dímeros / Abstract: The calcium sensing receptor (CASR) is a member of the family III of G protein coupled receptors and plays an essential role in calcium homeostasis. The extracellular domain (ECD) of the receptor is the most important site for Ca/+-binding and the majority of the naturally occurring mutations in the ECD affects only the affinity of the receptor for Cao2+. Other mutations in the ECD could result in a more gross alteration of the receptor structure, reflected by reducing expression levels of the receptor at the cell surface. The objective of this thesis was to investigate the expression levels of the CASR with mutations in the extracellular domain where activating and inactivating mutations have been described. The mutation resulted in changes in aminoacid polarity or acid/base character. In addition, a deletion of a region between 139 and 167 aminoacids of the extracelullar domain of the CASR, a highly hydrophobic region, was perform to investigate its relevance. The Western blotting technique demonstrated that alI mutant receptors were expressed in HEK-293 cells. Analysis of the intensity of the bands by densitometry in three separate experiments showed no significant differences in expression levels of the mutants Al16T, Nl18S, E127K, F128Y, T138K and ~139-167 compared to the CASR wild type. The mutant receptor P55S showed a drastically decreased expression leveI in the dimeric and oligomeric forms (-220 kDa) when compared to the CASR wild type. In conclusion, the expression of the CASR could be affected by alterations of the amino acids characteristics (polarity, acid/base character) and the changes in the expression levels is dependent on the position of mutated amino acid. The position 55 is critica! for expression of the dimeric forms of the receptor, while the hydrophobic region between 139 and 167 amino acids is not important for the expression nor the dimerization of the CASR / Mestrado / Farmacologia / Mestre em Farmacologia

Orientadores: Antonio Carlos Boschero, Maria Alice Rostom de Mello / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-21T05:47:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carneiro_EverardoMagalhaes_D.pdf: 4436080 bytes, checksum: 54c2f9b98b9e2e6c26d899c58986299f (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: O presente trabalho teve como objetivo estudar alguns dos possíveis determinantes da resposta pancreática deficiente à estimulação com diferentes substâncias insulinotrópicas, tendo os ratos submetidos à dieta hipoprotéica como modelo experimental. Os sinais de desnutrição tais como: baixo peso corporal, hipoalbuminemia, teores elevados de glicogênio e de gordura hepática bem como sódio total aumentado estiveram presentes nos animais que receberam dieta hipoprotéica. Esses animais apresentaram ainda menores níveis de insulina plasmática e conteúdo total de insulina diminuído. Através da microscopia eletrônica constatamos nas células dos animais hipoprotéicos desorganização da arquitetura, redução do volume, ausência de nucléolo, perda da polaridade, número reduzido de grânulos, grânulos imaturos, retículo endoplasmático rugoso formando cisternas curtas e ingurgitadas com conteúdo floculento e por último, degeneração e edema mitocondrial. Por outro lado, os estudos In vitro demonstraram maior oxidação da glicose por ilhotas de ratos hipoprotéicos. Os efeitos da glicose, leucina, KIC, tolbutamida e arginina (esta na presença da glicose) sobre efluxo de 86Rb foram semelhantes àqueles observados em ilhotas de ratos normoprotéicos. Contudo, o efeito da arginina (na ausência de glicose) bem como da diazoxida e do TPA sobre o efluxo do referido isótopo foi menor em relação aqueles registrado em ilhotas-controle. A captação e o efluxo do 45Ca, na presença de glicose ou arginina, também foi menor ns ilhotas provenientes de ratos hiprotéicos comparados às ilhotas de ratos normoprotéicos. Consoante com os resultados sobre o efluxo de 86Rb e 45Ca, a secreção de insulina estimulada por glicose, altas concentrações de K+, tolbutamida, OXO-m, TPA e arginina, foi menor nas ilhotas de animais hipoprotéicos quando comparado às ilhotascontrole. Diante disso o desacoplamento entre o A TP, gerado pelos nutrientes ensaiados, e a despolarização da membrana com conseqüentes alterações na permeabilidade aos íons K+ e Ca2+ parece ser uma das causas mais importantes na resposta secretária reduzida por ilhotas de ratos hipoprotéicos. Em paralelo parece haver também desacoplamento entre a via de sinalização, induzida pela interação hormônio-receptor e influxo de Ca2+, reduzindo assim a [Ca2+]i. Concluindo, a secreção reduzida de insulina frente às inúmeras substâncias utilizadas parece ter como causa preponderante a incapacidade das células B de ratos hipoprotéicos em manejar adequadamente os íons Ca2+ que, em última análise é o ativador do mecanismo secretório / Abstract: We have analyzad in this study the possible mechanisms involved in the poor secretory response to different secretagogues in islets derived from rats maintained with low protein diet. After 8 weeks, rats kept on low protein diet showed the following features: low body weight, hypoalbuminemia, high liver fatty acids and glycogen contents and increased total body Na+. In these animals plasma insulin levels and total insulin content were reduced as compared to control rats. Pancreatic B cells from hypoproteic rats showed marked morphological alterations such as: reduced cell volume, loss of cell polarity, altered endoplasmic reticulum, mitochondrial oedema, nucleolus absent and reduced number of insulin-containing granules, which frequently displayed abnormal appearance. Experiments carried out in vitro showed increased glucose oxidation by hypoproteic islets. Nevertheless, there was no significant difference concerning the 86Rb efflux rate induced by glucose, leucine, kic, tolbutamide and arginine (arginine in the presence of glucose) between islets from hypoproteic and control islets. However the effect of arginine (in the absence of glucose), diazoxide and TPA on 86Rb efflux from hypoproteic islets was as reduced compared to control islets. Alterations in 45Ca uptake and efflux, induced by glucose or arginine were reduced when compared to that observed in control islets. Insulin secretion in the presence of glucose, high concentrations of K+, tolbutamide, OXO-m, TPA, leucine and arginine was also reduced in those islets from hypoproteic rats in comparison with the control islets. These data suggest that uncoupling between A TP (produced by nutrient metabolism) and membrane depolarization associated to impairment in K+ and Ca2+ membrane permeabilities could be related to the poor secretory response observed in islets derived from rats kept on low protein diet. In addition, alterations in the hormone receptor second messenger pathway in association with alterations in Ca2+ membrane permeability and internal Ca2+ mobilization could be involved in the phenomenon. In conclusion, the reduced insulin secretion observed in hypoproteic islets in response to different stimuli, seems to be related, mainly, to defects in the ability of B cells in handling adequately the Ca2+ ions / Doutorado / Fisiologia / Doutor em Biologia