Mesmo sendo uma das zoonoses mais antigas descritas pelo homem, a raiva ainda é um grande desafio em todo o mundo. O ciclo da enfermidade em espécies silvestres apresenta importância emergente no Brasil e a região Nordeste apresenta uma epidemiologia única em comparação ao restante do país, por ser endêmica para o vírus da raiva em silvestres terrestres. Nesta região, foram identificadas as duas variantes do vírus da raiva responsáveis pelo acometimento da doença em seres humanos, que são mantidas e transmitidas por animais silvestres terrestres. Registros de casos nas espécies descritas como reservatórios, em outras espécies silvestres, domésticas e em humanos ocorrem anualmente. Estas variantes virais foram identificadas primeiramente no Estado do Ceará, uma em saguis do tufo branco (Callithrix jacchus) e a outra em canídeos silvestres, estando restritas à região Nordeste do Brasil até o momento. O objetivo do presente estudo foi identificar geneticamente, utilizando DNA mitocondrial, as espécies de canídeos silvestres de ocorrência no Estado do Ceará, que atuam como reservatório e fonte de infecção do vírus da raiva, e a correlação entre esses reservatórios e o vírus. Para que fosse possível, utilizamos as técnicas de amplificação do gene Citocromo C Oxidase I (COI), bem como a amplificação da nucleoproteína do vírus da raiva pela Transcriptase Reversa e a Reação em Cadeia da Polimerase (RT - PCR). Todas as amostras que apresentaram banda representativa em gel de agarose, para ambos os casos, foram submetidas ao sequenciamento genético das regiões amplificadas. De um total de 101 amostras recebidas, 89 obtiveram sequências satisfatórias para a identificação da espécie de canídeo silvestre, sugerindo que a principal espécie de canídeo silvestre presente no Estado do Ceará é o Cerdocyon thous e, 50 amostras obtiveram banda representativa para o vírus da raiva. Dessas, 48 apresentaram sequência satisfatória para a caracterização do vírus. Os resultados obtidos indicam alta positividade para o vírus da raiva em canídeos silvestres nessa região do Brasil, e sugerem que C. thous é a principal espécie de canídeo silvestre atuando como reservatório e transmissor do vírus da raiva no Estado do Ceará. Esses dados fornecem informações valiosas sobre as espécies de canídeos envolvidas nos casos de raiva ocorridos no Estado do Ceará, possibilitando a adoção de estratégias efetivas de prevenção e controle da raiva, além de resultados inéditos em relação às espécies de canídeos silvestres de ocorrência no Estado e sua importância na epidemiologia da enfermidade. / Although it is one of the most ancient diseases related in human history, rabies still presents a great challenge throughout the world. Wild animals have emergent importance in Brazil and the Northeast region, an endemic region, presents a unique epidemiology compared to the rest of the country. In this region, two variants of the rabies virus responsible for the disease in humans, were identified which are maintained and transmitted by terrestrial wild animals. These variants were initially identified in the State of Ceara, one maintained by populations of marmosets (Callithrix jacchus) and other by wild canids, both being restricted to time to the Northeast. The aim of this study was to identify genetically, using the mitochondrial DNA, the species of wild canids in Ceara that act as reservoir and transmitters of the rabies virus. We used the Polymerase Chain Reaction by Reverse Transcriptase (RT - PCR) tecnique for amplification of Citocrhome C Oxidase I (COI) gene to species characterization and the viral nucleoprotein to detect the rabies virus. All the samples that presented representative band on agarose gel, in both cases, were submitted to the genetic sequencing. Of a total of 101 samples received, 89 obtained satisfactory sequences to identify the wild canid species, suggesting that the main wild canid species occurring in Ceara state is Cerdocyon thous. Out of 50 samples with representative band to rabies virus, 48 presented satisfactory sequences to the viral characterization. The results indicate high positivity for rabies virus in wild canids in this region of Brazil, and suggest that C. thous is the main terrestrial wild reservoir e transmitter of rabies virus in Ceara State. These data provide valuable information about canids species involved in rabies cases in Ceara state, implying in the adoption of effective strategies for prevention and control of rabies, and also unpublished results regarding the occurrence of species of wild canids in the State and its importance in the disease epidemiology.

Foram coletados cinqüenta e oito (58) amostras de cachorro-do-mato (Cerdocyon thous) de vida livre, provenientes do Estado do Espírito Santo, Brasil. Os animais eram mortos por atropelamento ao longo da rodovia estadual ES-060 que liga os municípios de Vila Velha à Guarapari, passando por duas reservas florestais de Mata Atlântica. Todos os animais eram encaminhados para a Universidade de Vila Velha UVV pela concessionária RodoSol, onde passavam por detalhado exame necroscópico com coleta de tecidos e ectoparasitas para pesquisa de patógenos pela técnica de Reação em Cadeia de Polimerase (PCR). Todas as amostras obtidas foram testadas quanto à presença de agentes pertencentes à família Anaplasmataceae e membros dos gêneros Rickettsia, Borrelia, Babesia, Coxiella, Leishmania, Hepatozoon e Ehrlichia. No total foram colhidos 25 espécimes de carrapatos, todos em estágio ninfal e pertencentes à espécie Amblyomma cajennense. Na pesquisa de patógenos pela PCR, não foi encontrada nenhuma amostra de animal ou carrapato positiva para Leishmania spp, Rickettsia spp, Borrelia spp, Babesia spp e Coxiella spp. Das 58 amostras de tecidos, 29 (50%) foram positivas para Hepatozoon spp no gene 18S rRNA, tendo sido identificado dois genótipos, um denominado Hepatozoon sp. ex Cerdocyon thous, presente em 96,55% dos animais testados, com máxima similaridade de 98,67% com a espécie Hepatozoon sp. curupira 2 (AY461377). O outro genótipo foi encontrado em somente um animal (3,44%), denominado Hepatozoon sp. P20 Cerdocyon thous, que apresentou máxima similaridade de 97,5% com Hepatozoon sp. 744C (EU430234). Na pesquisa para Ehrlichia spp, seis amostras foram positivas (10,34%). As seis amostras foram caracterizadas como uma possível nova espécie de Ehrlichia, denominada Ehrlichia sp. ex Cerdocyon thous, com máxima similaridade de 97,57% com a espécie Ehrlichia ruminantium (DQ482915) para o gene 16S e 82,51% similar com E. ruminantium str. Gardel (CR925677) para o gene dsb. Todas as espécies de carrapatos foram negativas. Hepatozoon spp e Ehrlichia spp são agentes infecciosos transmitidos por carrapatos, com potencial zoonótico, de potencial impacto para saúde animal e humana. / We collected samples from fifty-eight (58) free-living crab-eating fox (Cerdocyon thous) from the State of Espírito Santo, Brazil. All animals were hit by vehicles passing through the highway ES-060, which crosses an Atlantic rainforest reserve, located between the cities of Guarapari and Vila Velha. The animals were collected by the Rodosol Company, and taken to the University of Vila Velha - UVV, where they underwent post-mortem examination, and collection of tissue samples and ectoparasites for research through the polymerase chain reaction (PCR) technique. All samples were tested for the presence of agents belonging to the family Anaplasmataceae and members of the genera Rickettsia, Borrelia, Babesia, Coxiella, Leishmania, Hepatozoon, and Ehrlichia. We collected 25 specimens of nymphal ticks, which were all identified as Amblyomma cajennense. Search of pathogens by PCR did not find any positive animal or tick sample for Leishmania spp, Rickettsia spp, Borrelia spp, Babesia spp and Coxiella spp. From the 58 tissue samples, 29 (50%) were positive for Hepatozoon sp by the PCR targeting the 18S rRNA gene. Amplicons generated two different genotypes, one named Hepatozoon sp. ex Cerdocyon thous, present in 96.55% of the animals, with a maximum of 98.67% similarity with the sequence of Hepatozoon sp. curupira 2 (AY461377); the second genotype was found in only one animal (3.44%), named Hepatozoon sp. P20 Cerdocyon thous, which showed maximum similarity (97.5%) with Hepatozoon sp. 744C (EU430234). The survey for Ehrlichia spp resulted in six positive samples (10.34%). The six samples were characterized as a possible new species of Ehrlichia, named Ehrlichia sp. ex Cerdocyon thous, with maximum similarity (97.57%) with the species Ehrlichia ruminantium (DQ482915) for the 16S and 82.51% similar to E. ruminantium str. Gardel (CR925677) for the dsb gene. All species of ticks were negative for all pathogens searched. Hepatozoon spp and Ehrlichia spp are tick-borne infectious agents with zoonotic potential; the present findings are of potential impact for both animal and human health.

A expansão desordenada do processo de urbanização e da malha rodoviária sem a construção de corredores ecológicos que permitam a transposição segura de várias espécies de animais silvestres contribui para os elevados índices de mortalidade observados na atualidade e constitui uma ameaça para o declínio populacional de espécies, como o cachorro-do-mato (Cerdocyon thous). Estima-se que o número de animais vitimados por atropelamentos chegue a aproximadamente 450 milhões de animais/ano nas diversas espécies, sendo: 400 milhões de pequenos vertebrados, 3 milhões de grandes vertebrados e aproximadamente 47 milhões de vertebrados de médio porte, a partir do estabelecimento de uma taxa média de 1,7 milhões de quilômetros à malha rodoviária do território brasileiro, levando-se em consideração a ampla diferença entre rodovias e estradas de asfalto e terra, pertencentes às esferas federal, estadual, e municipal. Uma estratégia para a conservação ex situ é o estudo da biologia da reprodução da espécie Cerdocyon thous é a criopreservação de seu patrimônio genético através da formação de um Banco de Germoplasma Animal, onde se contemplou o estudo do sistema reprodutor feminino de cinco espécimes por descrição morfológica e ultraestrutural, cultivo e criopreservação celular (fibroblastos). Foram utilizadas 7 (sete) fêmeas de Cerdocyon thous, (n=7), das quais 2 (duas) eram vítimas de atropelamento (Km 215 da Rodovia Anhanguera, Pirassununga - SP), tendo seus sistemas reprodutores dissecados e analisados macroscopicamente. Os respectivos animais foram encontrados em datas distintas em período que compreende os meses de janeiro a julho do ano de 2015 com sinais de evisceração e um destes apresentava avançado estágio de decomposição. Foi realizado o estudo biométrico dos animais, onde se constatou que as fêmeas encontradas eram adultas. Os achados foram compilados por meio de técnicas histológicas (Hematoxilina-Eosina, Tricrômico de Massom, Reativo de Schiff ou \"PAS\" e Alcian Blue) e microscopia eletrônica de varredura. A partir da observação macroscópica do sistema reprodutor feminino da espécie em questão, constatou-se que o formato dos ovários apresenta forma similar a um grão de feijão e tubas uterinas com comprimentos variáveis entre 5 a 8 cm para os espécimes analisados. Constatou-se também, a presença de um útero bicornuado com aproximadamente 3 cm de comprimento e cornos uterinos compridos e estreitos (9 a 11 cm de comprimento); Como já observado em estudos realizados em outras espécies (domésticas e silvestres), a cérvix dos espécimes de Cerdocyon thous analisados faz comunicação entre o útero e a vagina. A vagina apresenta musculatura alongada e circular e a vulva uma conformação anatômica densa com clitóris bastante pronunciado. Microscopicamente, foram observados que os ovários apresentavam folículos primordiais formados por um ovócito e por células foliculares achatadas, bem como a presença de folículos primários unilaminares, este último constituído por um ovócito envolvido por uma camada de células da granulosa. A análise por microscopia eletrônica de varredura evidenciou a superfície ovariana, com característica irregular. As tubas uterinas apresentaram-se com epitélio de revestimento constituído de células ciliadas e células secretoras não ciliadas. Através de análise por microscopia eletrônica de varredura, foi possível verificar que parte da parede da tuba uterina apresentou uma mucosa intensamente \"pregueada\". Microscopicamente, o útero apresentou uma parede relativamente espessa e, externamente uma camada serosa, constituída de mesotélio e tecido conjuntivo e, dependendo da porção do órgão (adventícia), constituída de tecido conjuntivo sem revestimento de mesotélio e microscopia eletrônica de varredura que evidenciou a superfície luminal, ilustrando a disposição dobrada do endométrio e a presença de fibras de músculo liso. A cérvix se apresentou com epitélio colunar simples, secretor de muco e por análise de microscopia eletrônica de varredura, foram observadas poucas fibras de músculo liso. Quanto à vagina, foi observado epitélio pavimentoso estratificado sobre um tecido conjuntivo denso, onde se constatou por microscopia eletrônica de varredura, a região de transição entre a cérvix e a vagina, onde se evidenciou a lâmina própria da mucosa vaginal, constituída por um tecido conjuntivo frouxo e, mais externamente, uma parede densa, constituída por uma camada muscular composta de fibras musculares lisas. A vulva e o clitóris foram observados recobertos por um epitélio pavimentoso estratificado com uma delgada camada de células queratinizadas na superfície. No que diz respeito à criação de uma linhagem celular (fibroblastos) para o enriquecimento de banco de germoplasma, os resultados demonstraram que as células de Cerdocyon thous apresentaram uma baixa capacidade clonogênica, especialmente quando comparadas ao cão doméstico. Por serem espécimes silvestres de histórico desconhecido (idade, hábitos alimentares), tais fatores poderiam implicar no tamanho dos telômeros das células (fibroblastos) e, consequentemente, ser um impedimento para uma satisfatória proliferação celular. Assim, o presente estudo teve caráter preservacionista, visando à conservação em longo prazo dos recursos genéticos desta espécie pertencente aos biomas brasileiros, sendo de grande relevância e os achados aqui contidos, um ponto de partida para a realização e continuidade de novas pesquisas com abordagem sobre a espécie em questão. / The disorderly expansion of the urbanization process and the road network without building ecological corridors that allow for the safe implementation of various species of wild animals contributes to the high mortality rates observed today and is a threat to the population decline of species such as the Creb-eating fox (Cerdocyon thous). It is estimated that the number of animals victims of road kill reach approximately 450 million animals / year in different species, of which: 400 million small vertebrates, 3 million of large vertebrates and approximately 47 million medium-sized vertebrates, from establishment of an average rate of 1.7 million kilometers of road network of Brazil, taking into account the wide difference between highways and asphalt roads and land belonging to the federal, state, and municipal. A strategy for ex situ conservation is the study of Cerdocyon thous species reproductive biology is cryopreservation of their genetic heritage through the formation of an Animal Germplasm Bank, where he contemplated the study of the female reproductive system of five specimens for morphological description and ultrastructural, cell culture and cryopreservation (fibroblasts). They used seven (7) female Cerdocyon thous (n = 7), of which two (2) were victims of running over (Km 215 of Anhanguera Highway, Pirassununga - SP) and their reproductive systems dissected and analyzed macroscopically. Their animals were found on different dates in a period comprising the months of January to July 2015 with evisceration signals and one of these had advanced stage of decomposition. biometric study of animals, which demonstrated that adult females were found, was performed. The findings were compiled by histological techniques (hematoxylin-eosin, Masson\'s Trichrome, Schiff Reactive or \"PAS\" and Alcian Blue) and scanning electron microscopy. From macroscopic observation of the female reproductive system of the species concerned, it was found that the shape of the ovaries features similar to a grain of beans and uterine tubes with lengths ranging from 5-8 cm for the analyzed specimens. It was also found the presence of a bicorn uterus approximately 3 cm and narrow uterine horns (9-11 cm); as noted in studies in other species (domestic and wild), the cervix of Cerdocyon thous specimens analyzed is communication between the uterus and vagina. The vagina has lengthened and circular muscle and the vulva a dense anatomical conformation quite pronounced clitoris. Microscopically, it was observed that the ovaries had primordial follicles formed by a flattened oocyte and follicular cells, as well as the presence of unilaminares primary follicles, the latter consisting of an oocyte surrounded by a layer of granulosa cells. Analysis by scanning electron microscopy revealed the ovarian surface with irregular feature. The oviducts presented with epithelium composed of ciliated and non-ciliated secretory cells. Through analysis by scanning electron microscopy, we found that part of the oviduct wall showed a mucosa intensely \"pleated\". Microscopically, the uterus showed a relatively thick wall and externally a serous layer consisting of mesothelium and connective tissue and, depending on the body portion (adventitious), composed of connective tissue without mesothelium coating and scanning electron microscopy which showed the surface luminal illustrating the folded disposition of the endometrium and the presence of smooth muscle fibers. The cervix is presented with simple columnar epithelium, mucus secreting and analytical scanning electron microscopy; a few smooth muscle fibers were observed. As the vagina was observed stratified squamous epithelium on a dense connective tissue, where it was found by scanning electron microscopy, the transition region between the cervix and the vagina, where it showed the lamina propria of the vaginal mucosa, consisting of a connective tissue loose and more externally a thick wall consisting of a muscular layer composed of smooth muscle fibers. The vulva and clitoris were observed covered by a stratified epithelium with a thin layer of keratinized cells on the surface. As regards the establishment of a cell line (fibroblasts) to the genebank enrichment, the results showed that cells had a lower Cerdocyon thous clonogenic capacity, especially when compared to the domestic dog. Being wild specimens of unknown history (age, diet), such factors could lead to the size of the telomeres of cells (fibroblasts) and thus be a hindrance to a satisfactory cell proliferation. Thus, the present study was preservationist character, aiming at long-term conservation of genetic resources of the species belonging to the Brazilian biomes, being of great importance and the findings contained herein, the starting point for the implementation and continuity of new research approach the species in question.

Submitted by Emanoel Martins Filho (emanoelfilho@ufba.br) on 2016-07-11T10:46:54Z No. of bitstreams: 1 Dissert Paulo Bahiano.pdf: 1519247 bytes, checksum: 513f19cb7ab4130f97005a3280f2ff7b (MD5) / Approved for entry into archive by Patricia Barroso (pbarroso@ufba.br) on 2016-07-13T01:17:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissert Paulo Bahiano.pdf: 1519247 bytes, checksum: 513f19cb7ab4130f97005a3280f2ff7b (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-13T01:17:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissert Paulo Bahiano.pdf: 1519247 bytes, checksum: 513f19cb7ab4130f97005a3280f2ff7b (MD5) / Programa de Demanda Social (CAPES) / No presente estudo, é descrita a padronização da técnica de imunoensaio enzimático (ELISA) para o sorodiagnóstico da infecção causada por Leishmania em canídeos silvestres brasileiros. Na América do Sul, a leishmaniose visceral (LV) é causada pela L. chagasi, sendo alguns canídeos considerados reservatórios naturais do parasito. A resposta imunológica à Leishmania é pouco estudada nos canídeos silvestres, que parecem apresentar resistência natural ao parasito. Foram estudadas amostras de soro/plasma obtidas de 12 canídeos cativos: sete lobos-guará (Chrysocyon brachyurus), três raposinhas (Lycalopex vetulus) e dois cachorros-do-mato (Cerdocyon thous). Dentre os canídeos estudados, um C. brachyurus e uma L. vetulus cativos em área endêmica para a LV, apresentavam em seu histórico clínico positividade na IFI e na técnica de PCR em aspirados de medula óssea para Leishmania sp. Foram então realizados diferentes ensaios imunoenzimáticos com o conjugado anti-IgG de cão e proteína A, que detectaram quatro (04/12) e três (03/12) C. brachyurus soropositivos para Leishmania sp. no ELISA com os respectivos conjugados. Os testes foram capazes de distinguir claramente as amostras positivas das negativas, uma vez que a média das densidades ópticas (DOs) das amostras negativas foram 4,8 vezes mais baixa do que a média das DOs dos positivos no ensaio com o conjugado anti-IgG de cão e 15,5 vezes nos testes com a proteína A. No Western Blot foi detectado um total de 22 bandas, com destaque para as de peso molecular 19, 22, 24, 45 e 66 kDa, presentes nas amostras de três C. brachyurus com soropositividade no ELISA indireto. Entretanto, as bandas 212, 32 e 23 kDa foram constatadas somente nos dois C. brachyurus com maiores valores de DOs. Os testes ELISA com a proteína A e o conjugado anti-IgG de cão apresentaram uma concordância excelente (Kappa = 1 p. 0,001) e moderada com o Western Blot respectivamente. O ensaio com a proteína A mostrou ser adequado a testes sorológicos de triagem, mas o ideal ainda seria o desenvolvimento de conjugados com anticorpos espécie-específico para padronização de ELISA indireto para as diferentes espécies silvestres. / In the present study, the standardization of an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the serodiagnosis of infection by Leishmania in brazillian species of wild canids is described. In South America, visceral leishmaniosis (VL) is caused by L. chagasi, being some wild canids considered natural reservoirs of the parasite. The immunological response to Leishmania is not studied enough in the wild canids, which seem to show natural resistance to the parasite. Samples of serum/plasma from 12 captive wild canids were studied: seven maned wolves (Chrysocyon brachyurus), three hoary foxes (Lycalopex vetulus) and two crabeating foxes (Cerdocyon thous). Among the canines studied, a C. brachyurus and L. vetulus captives in an area endemic for VL, presented in their clinical history a positivity in Indirect Immunofluorescence Reaction, RIFI, and Polymerase Chain Reaction, PCR, in bone marrow aspirates for Leishmania sp. Were then performed with different immunoassays conjugated anti-dog IgG and protein A, which detected four (04/12) and three (03/12) C. brachyurus seropositive for Leishmania sp. by ELISA with their conjugates respectively. The tests were able to clearly distinguish the negative and positive samples, as the mean optical density (OD) of the negative samples was 4.8 times lower than those of the average of the positive in test with anti-IgG conjugate dogs and 15.5 times in the tests with protein A. Western blot was detected in a total of 22 bands, especially those of molecular weight 19, 22, 24, 45 and 66 kDa present in the samples of three C. brachyurus with seropositivity in ELISA. However, bands 212, 32 and 23 kDa were observed in only two C. brachyurus with higher values of OD.. The ELISA with protein A and conjugated anti-dog IgG showed excellent agreement (Kappa = 1 p. 0.001) and moderate (Kappa = 0,8 p. 0,0015) with the Western Blot respectively.. Even though the test with protein A has shown adequate to screening tests, the ideal would be the development of conjugates with species-specific antibodies for the standardization of indirect ELISA for different wild species.

Foram coletados cinqüenta e oito (58) amostras de cachorro-do-mato (Cerdocyon thous) de vida livre, provenientes do Estado do Espírito Santo, Brasil. Os animais eram mortos por atropelamento ao longo da rodovia estadual ES-060 que liga os municípios de Vila Velha à Guarapari, passando por duas reservas florestais de Mata Atlântica. Todos os animais eram encaminhados para a Universidade de Vila Velha UVV pela concessionária RodoSol, onde passavam por detalhado exame necroscópico com coleta de tecidos e ectoparasitas para pesquisa de patógenos pela técnica de Reação em Cadeia de Polimerase (PCR). Todas as amostras obtidas foram testadas quanto à presença de agentes pertencentes à família Anaplasmataceae e membros dos gêneros Rickettsia, Borrelia, Babesia, Coxiella, Leishmania, Hepatozoon e Ehrlichia. No total foram colhidos 25 espécimes de carrapatos, todos em estágio ninfal e pertencentes à espécie Amblyomma cajennense. Na pesquisa de patógenos pela PCR, não foi encontrada nenhuma amostra de animal ou carrapato positiva para Leishmania spp, Rickettsia spp, Borrelia spp, Babesia spp e Coxiella spp. Das 58 amostras de tecidos, 29 (50%) foram positivas para Hepatozoon spp no gene 18S rRNA, tendo sido identificado dois genótipos, um denominado Hepatozoon sp. ex Cerdocyon thous, presente em 96,55% dos animais testados, com máxima similaridade de 98,67% com a espécie Hepatozoon sp. curupira 2 (AY461377). O outro genótipo foi encontrado em somente um animal (3,44%), denominado Hepatozoon sp. P20 Cerdocyon thous, que apresentou máxima similaridade de 97,5% com Hepatozoon sp. 744C (EU430234). Na pesquisa para Ehrlichia spp, seis amostras foram positivas (10,34%). As seis amostras foram caracterizadas como uma possível nova espécie de Ehrlichia, denominada Ehrlichia sp. ex Cerdocyon thous, com máxima similaridade de 97,57% com a espécie Ehrlichia ruminantium (DQ482915) para o gene 16S e 82,51% similar com E. ruminantium str. Gardel (CR925677) para o gene dsb. Todas as espécies de carrapatos foram negativas. Hepatozoon spp e Ehrlichia spp são agentes infecciosos transmitidos por carrapatos, com potencial zoonótico, de potencial impacto para saúde animal e humana. / We collected samples from fifty-eight (58) free-living crab-eating fox (Cerdocyon thous) from the State of Espírito Santo, Brazil. All animals were hit by vehicles passing through the highway ES-060, which crosses an Atlantic rainforest reserve, located between the cities of Guarapari and Vila Velha. The animals were collected by the Rodosol Company, and taken to the University of Vila Velha - UVV, where they underwent post-mortem examination, and collection of tissue samples and ectoparasites for research through the polymerase chain reaction (PCR) technique. All samples were tested for the presence of agents belonging to the family Anaplasmataceae and members of the genera Rickettsia, Borrelia, Babesia, Coxiella, Leishmania, Hepatozoon, and Ehrlichia. We collected 25 specimens of nymphal ticks, which were all identified as Amblyomma cajennense. Search of pathogens by PCR did not find any positive animal or tick sample for Leishmania spp, Rickettsia spp, Borrelia spp, Babesia spp and Coxiella spp. From the 58 tissue samples, 29 (50%) were positive for Hepatozoon sp by the PCR targeting the 18S rRNA gene. Amplicons generated two different genotypes, one named Hepatozoon sp. ex Cerdocyon thous, present in 96.55% of the animals, with a maximum of 98.67% similarity with the sequence of Hepatozoon sp. curupira 2 (AY461377); the second genotype was found in only one animal (3.44%), named Hepatozoon sp. P20 Cerdocyon thous, which showed maximum similarity (97.5%) with Hepatozoon sp. 744C (EU430234). The survey for Ehrlichia spp resulted in six positive samples (10.34%). The six samples were characterized as a possible new species of Ehrlichia, named Ehrlichia sp. ex Cerdocyon thous, with maximum similarity (97.57%) with the species Ehrlichia ruminantium (DQ482915) for the 16S and 82.51% similar to E. ruminantium str. Gardel (CR925677) for the dsb gene. All species of ticks were negative for all pathogens searched. Hepatozoon spp and Ehrlichia spp are tick-borne infectious agents with zoonotic potential; the present findings are of potential impact for both animal and human health.

A expansão desordenada do processo de urbanização e da malha rodoviária sem a construção de corredores ecológicos que permitam a transposição segura de várias espécies de animais silvestres contribui para os elevados índices de mortalidade observados na atualidade e constitui uma ameaça para o declínio populacional de espécies, como o cachorro-do-mato (Cerdocyon thous). Estima-se que o número de animais vitimados por atropelamentos chegue a aproximadamente 450 milhões de animais/ano nas diversas espécies, sendo: 400 milhões de pequenos vertebrados, 3 milhões de grandes vertebrados e aproximadamente 47 milhões de vertebrados de médio porte, a partir do estabelecimento de uma taxa média de 1,7 milhões de quilômetros à malha rodoviária do território brasileiro, levando-se em consideração a ampla diferença entre rodovias e estradas de asfalto e terra, pertencentes às esferas federal, estadual, e municipal. Uma estratégia para a conservação ex situ é o estudo da biologia da reprodução da espécie Cerdocyon thous é a criopreservação de seu patrimônio genético através da formação de um Banco de Germoplasma Animal, onde se contemplou o estudo do sistema reprodutor feminino de cinco espécimes por descrição morfológica e ultraestrutural, cultivo e criopreservação celular (fibroblastos). Foram utilizadas 7 (sete) fêmeas de Cerdocyon thous, (n=7), das quais 2 (duas) eram vítimas de atropelamento (Km 215 da Rodovia Anhanguera, Pirassununga - SP), tendo seus sistemas reprodutores dissecados e analisados macroscopicamente. Os respectivos animais foram encontrados em datas distintas em período que compreende os meses de janeiro a julho do ano de 2015 com sinais de evisceração e um destes apresentava avançado estágio de decomposição. Foi realizado o estudo biométrico dos animais, onde se constatou que as fêmeas encontradas eram adultas. Os achados foram compilados por meio de técnicas histológicas (Hematoxilina-Eosina, Tricrômico de Massom, Reativo de Schiff ou \"PAS\" e Alcian Blue) e microscopia eletrônica de varredura. A partir da observação macroscópica do sistema reprodutor feminino da espécie em questão, constatou-se que o formato dos ovários apresenta forma similar a um grão de feijão e tubas uterinas com comprimentos variáveis entre 5 a 8 cm para os espécimes analisados. Constatou-se também, a presença de um útero bicornuado com aproximadamente 3 cm de comprimento e cornos uterinos compridos e estreitos (9 a 11 cm de comprimento); Como já observado em estudos realizados em outras espécies (domésticas e silvestres), a cérvix dos espécimes de Cerdocyon thous analisados faz comunicação entre o útero e a vagina. A vagina apresenta musculatura alongada e circular e a vulva uma conformação anatômica densa com clitóris bastante pronunciado. Microscopicamente, foram observados que os ovários apresentavam folículos primordiais formados por um ovócito e por células foliculares achatadas, bem como a presença de folículos primários unilaminares, este último constituído por um ovócito envolvido por uma camada de células da granulosa. A análise por microscopia eletrônica de varredura evidenciou a superfície ovariana, com característica irregular. As tubas uterinas apresentaram-se com epitélio de revestimento constituído de células ciliadas e células secretoras não ciliadas. Através de análise por microscopia eletrônica de varredura, foi possível verificar que parte da parede da tuba uterina apresentou uma mucosa intensamente \"pregueada\". Microscopicamente, o útero apresentou uma parede relativamente espessa e, externamente uma camada serosa, constituída de mesotélio e tecido conjuntivo e, dependendo da porção do órgão (adventícia), constituída de tecido conjuntivo sem revestimento de mesotélio e microscopia eletrônica de varredura que evidenciou a superfície luminal, ilustrando a disposição dobrada do endométrio e a presença de fibras de músculo liso. A cérvix se apresentou com epitélio colunar simples, secretor de muco e por análise de microscopia eletrônica de varredura, foram observadas poucas fibras de músculo liso. Quanto à vagina, foi observado epitélio pavimentoso estratificado sobre um tecido conjuntivo denso, onde se constatou por microscopia eletrônica de varredura, a região de transição entre a cérvix e a vagina, onde se evidenciou a lâmina própria da mucosa vaginal, constituída por um tecido conjuntivo frouxo e, mais externamente, uma parede densa, constituída por uma camada muscular composta de fibras musculares lisas. A vulva e o clitóris foram observados recobertos por um epitélio pavimentoso estratificado com uma delgada camada de células queratinizadas na superfície. No que diz respeito à criação de uma linhagem celular (fibroblastos) para o enriquecimento de banco de germoplasma, os resultados demonstraram que as células de Cerdocyon thous apresentaram uma baixa capacidade clonogênica, especialmente quando comparadas ao cão doméstico. Por serem espécimes silvestres de histórico desconhecido (idade, hábitos alimentares), tais fatores poderiam implicar no tamanho dos telômeros das células (fibroblastos) e, consequentemente, ser um impedimento para uma satisfatória proliferação celular. Assim, o presente estudo teve caráter preservacionista, visando à conservação em longo prazo dos recursos genéticos desta espécie pertencente aos biomas brasileiros, sendo de grande relevância e os achados aqui contidos, um ponto de partida para a realização e continuidade de novas pesquisas com abordagem sobre a espécie em questão. / The disorderly expansion of the urbanization process and the road network without building ecological corridors that allow for the safe implementation of various species of wild animals contributes to the high mortality rates observed today and is a threat to the population decline of species such as the Creb-eating fox (Cerdocyon thous). It is estimated that the number of animals victims of road kill reach approximately 450 million animals / year in different species, of which: 400 million small vertebrates, 3 million of large vertebrates and approximately 47 million medium-sized vertebrates, from establishment of an average rate of 1.7 million kilometers of road network of Brazil, taking into account the wide difference between highways and asphalt roads and land belonging to the federal, state, and municipal. A strategy for ex situ conservation is the study of Cerdocyon thous species reproductive biology is cryopreservation of their genetic heritage through the formation of an Animal Germplasm Bank, where he contemplated the study of the female reproductive system of five specimens for morphological description and ultrastructural, cell culture and cryopreservation (fibroblasts). They used seven (7) female Cerdocyon thous (n = 7), of which two (2) were victims of running over (Km 215 of Anhanguera Highway, Pirassununga - SP) and their reproductive systems dissected and analyzed macroscopically. Their animals were found on different dates in a period comprising the months of January to July 2015 with evisceration signals and one of these had advanced stage of decomposition. biometric study of animals, which demonstrated that adult females were found, was performed. The findings were compiled by histological techniques (hematoxylin-eosin, Masson\'s Trichrome, Schiff Reactive or \"PAS\" and Alcian Blue) and scanning electron microscopy. From macroscopic observation of the female reproductive system of the species concerned, it was found that the shape of the ovaries features similar to a grain of beans and uterine tubes with lengths ranging from 5-8 cm for the analyzed specimens. It was also found the presence of a bicorn uterus approximately 3 cm and narrow uterine horns (9-11 cm); as noted in studies in other species (domestic and wild), the cervix of Cerdocyon thous specimens analyzed is communication between the uterus and vagina. The vagina has lengthened and circular muscle and the vulva a dense anatomical conformation quite pronounced clitoris. Microscopically, it was observed that the ovaries had primordial follicles formed by a flattened oocyte and follicular cells, as well as the presence of unilaminares primary follicles, the latter consisting of an oocyte surrounded by a layer of granulosa cells. Analysis by scanning electron microscopy revealed the ovarian surface with irregular feature. The oviducts presented with epithelium composed of ciliated and non-ciliated secretory cells. Through analysis by scanning electron microscopy, we found that part of the oviduct wall showed a mucosa intensely \"pleated\". Microscopically, the uterus showed a relatively thick wall and externally a serous layer consisting of mesothelium and connective tissue and, depending on the body portion (adventitious), composed of connective tissue without mesothelium coating and scanning electron microscopy which showed the surface luminal illustrating the folded disposition of the endometrium and the presence of smooth muscle fibers. The cervix is presented with simple columnar epithelium, mucus secreting and analytical scanning electron microscopy; a few smooth muscle fibers were observed. As the vagina was observed stratified squamous epithelium on a dense connective tissue, where it was found by scanning electron microscopy, the transition region between the cervix and the vagina, where it showed the lamina propria of the vaginal mucosa, consisting of a connective tissue loose and more externally a thick wall consisting of a muscular layer composed of smooth muscle fibers. The vulva and clitoris were observed covered by a stratified epithelium with a thin layer of keratinized cells on the surface. As regards the establishment of a cell line (fibroblasts) to the genebank enrichment, the results showed that cells had a lower Cerdocyon thous clonogenic capacity, especially when compared to the domestic dog. Being wild specimens of unknown history (age, diet), such factors could lead to the size of the telomeres of cells (fibroblasts) and thus be a hindrance to a satisfactory cell proliferation. Thus, the present study was preservationist character, aiming at long-term conservation of genetic resources of the species belonging to the Brazilian biomes, being of great importance and the findings contained herein, the starting point for the implementation and continuity of new research approach the species in question.