Thesis (Ph.D.)--University of Nebraska-Lincoln, 2007. / Title from title screen (site viewed July 9, 2007). PDF text: 87 p. : ill. UMI publication number: AAT 3252833. Includes bibliographical references. Also available in microfilm and microfiche formats.

Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Autor no autoriza el acceso a texto completo de su documento / Existe controversia en los resultados obtenidos por investigaciones que valoran la diversidad genética de levaduras de sitios subgingivales sanos y enfermos. Recientemente, un estudio concluyó que las levaduras orales aisladas de sujetos enfermos son genéticamente más diversas que las de grupos con salud oral. El propósito de este trabajo fue medir la variabilidad genética de 103 aislados de levaduras de sujetos periodontalmente sanos. Para ello, se les extrajo ADN genómico, el cual fue analizado por la técnica de amplificación al azar de ADN polimórfico, mediante reacción en cadena de la polimerasa (RAPD-PCR). Se determinó que los aislados de levaduras de mucosa y subgingiva sanas son genéticamente homogéneos dentro de los individuos, con mantención de cepas y microevolución. Sin embargo, entre grupos de aislados de sujetos diferentes existe heterogeneidad genética. El S AB promedio calculado para mucosa y subgingiva de todos los aislados fue de 0,49. El análisis de todos los aislados permitió determinar 55 genotipos diferentes. Los genotipos más frecuentes fueron el genotipo 6, que lo presentaron 9 de 11 aislados del sujeto C6 y el genotipo 19, que estaba presente en 3 de 4 aislados del sujeto CD. La mayor diversidad genotípica (G) la presentó el sujeto C23 (G=15,2). De esta forma, se ha caracterizado genéticamente un grupo de aislados control, que proviene de mucosa y sitios subgingivales sanos, que en el futuro permitirá realizar el mismo tipo de análisis en levaduras de pacientes con enfermedad periodontal, ya sea gingivitis, periodontitis agresiva o periodontitis crónica.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:46:52Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Introdução: A heterogeneidade genética de Candida parapsilosis tem sido reportada com emprego de distintos métodos moleculares, identificando claramente três grupos (grupos I, II e III). Recentemente, a análise filogenética baseada no polimorfismo de alguns genes propôs uma reclassificação de C. parapsilosis grupo II e III em espécies distintas: Candida orthopsilosis e Candida metapsilosis, respectivamente. Ainda há poucos estudos epidemiológicos avaliando a prevalência e relevância clínica dessas espécies. Métodos moleculares têm sido empregados para discriminar esses três grupos e também para tipagem intra-específica dessas novas espécies. Entretanto, isolados de C. parapsilosis não têm demonstrado grande diversidade genotípica por estes métodos. É necessário o desenvolvimento de técnicas moleculares de baixo custo para viabilizar a identificação dessas espécies em laboratório de rotina. Objetivos: 1) selecionar oligonucleotídeos para utilização em RAPD que apresentem poder discriminatório para identificação de C. parapsilosis, C. orthopsilosis e C. metapsilosis. 2) avaliar a prevalência dessas três espécies em amostras de hemoculturas coletadas em hospitais da América Latina. 3) analisar a diversidade genotípica entre isolados de C. parapsilosis oriundos de diferentes áreas geográficas. Material e métodos: Para este estudo, foram selecionadas todas as amostras de hemoculturas identificadas fenotipicamente como C. parapsilosis, catalogadas no Banco de Microrganismos do Laboratório Especial de Micologia da UNIFESP, que foram coletadas durante o período de 2003 a 2005, incluindo as cepas de referência destas três espécies. Após identificação fenotípica, através do sistema de ID32C e microcultivo, as colônias sugestivas de C. parapsilosis foram submetidas ao método RAPD para identificação de espécie. Para interpretação dos resultados, os perfis genotípicos gerados pelo RAPD foram submetidos à análise por dendrograma utilizando o programa GEL COMPAR II versão 4.5. Todas as amostras identificadas como C. orthopsilosis e C. metapsilosis neste estudo foram submetidas ao seqüenciamento da região ITS para confirmação da identificação de espécie. Resultados: Inicialmente, foram estudados 7 oligonucleotídeos para serem utilizados em RAPD que tivessem reprodutibilidade e poder discriminatório em amostras de origem epidemiologicamente conhecida. Desses, o iniciador 1281 apresentou melhor performance, portanto foi o escolhido para realização neste estudo. Do total das 166 amostras estudadas, 148 (89%) eram C. parapsilosis, 13 (8%) C. orthopsilosis e 5 (3%) foram identificadas como C. metapsilosis. A análise por dendrograma revelou que as cepas de C. orthopsilosis apresentaram maior heterogeneidade genotípica entre si. Cepas de C. parapsilosis foram geneticamente mais semelhantes entre si (Sab 80%) e formaram 6 subgrupos com uma similaridade superior a 90%. Estes subgrupos eram constituídos, em sua maioria, por cepas de mesma localidade geográfica demonstrando serem mais relacionadas entre si. As análises dos isolados oriundos do estado e da cidade de São Paulo demonstraram uma maior consistência do método, mostrando maior similaridade genética entre cepas de cidades vizinhas e de mesmo centro médico, revelando disseminação de cepas de mesma origem clonal que sofreram microevoluções nestes centros médicos. Conclusões: O RAPD, com o emprego do iniciador 1281 demonstrou ser uma ferramenta de grande utilidade na identificação das espécies do complexo C. parapsilosis. C. parapsilosis foi a espécie de maior prevalência entre as amostras de hemocultura estudadas, seguida de C. orthopsilosis e C. metapsilosis. Quanto à análise genotípica intra-específica, C. orthopsilosis foi a espécie mais heterogênea do grupo. C. parapsilosis foi a espécie mais homogênea geneticamente, provavelmente devido à sua maior adaptação ao homem. Cepas dessa espécie podem tornar-se persistentes em cada cidade ou por centros médicos. / Introduction: The genetic heterogeneity of Candida parapsilosis clearly divided into three different groups (I, II and III) has been reported. Recently, phylogenetic analysis based on coding genes polymorphisms suggested the replacement of the old nomenclature C. parapsilosis groups II and III into two new species: Candida orthopsilosis and Candida metapsilosis, respectively. Only few epidemiological studies evaluate the prevalence and clinical relevance of these species. Molecular methods have been used to identify these three groups, as well as, for intra-specific typing of these new species. Nevertheless, C. parapsilosis isolates show low genetic diversity when these methods are used. Therefore, it is necessary to develop cheap molecular methods to make species identification in routine laboratories viable. Objectives: 1) To select primers to be used in RAPD that have discriminatory power to identify C. parapsilosis, C. orthopsilosis and C. metapsilosis. 2) To evaluate the prevalence of these tree species in blood culture samples from Latin America hospitals. 3) To analyze the genotypic diversity among C. parapsilosis isolates from different geographic areas. Materials and Methods: For this study, we selected the blood stream isolates phenotypically identified as C. parapsilosis collected between 2003 and 2005, and maintained at the yeast stock collection of the Special Mycology Laboratory, Universidade Federal de São Paulo, including the reference strains. After the phenotypic identification by the ID 32C system and micromorphology analysis, the colonies identified as C. parapsilosis were submitted to RAPD test. The RAPD genotypic profiles were analyzed by Gel Compar II program to generate dendrogram. All the strains identified as C. orthopsilosis and C. metapsilosis were submitted to ITS region sequencing to confirm species identification. Results: Seven different primers were tested on RAPD and we selected primer 1281 that showed high reproducibility and discriminatory power with strains from known geographical origin, to be used in this study. From the total of 166 strains tested, 148 (89%) were identified as C. parapsilosis, 13 (8%) as C. orthopsilosis and 5 (3%) as C. metapsilosis. The dendrogram analysis reveled that C. orthopsilosis strains had high genotypic heterogeneity among them. C. parapsilosis strains had the lowest genetic divergences between them (Sab 80%) and clustered in 6 subgroups with similarity higher than 90%. These subgroups clustered most strains from the same geographical locale showing to be highly related. The analysis, including isolates from São Paulo city and state, reveled greater genetic similarity among strains from the same medical center or cities geographically close. These data proved higher consistence of RAPD to analyze strains from close geographical locales and, also, showed the dissemination of strains with the same clonal origin that are undergoing microevolution in the sites studied. Conclusions: RAPD method using primer 1281, have been shown a useful tool for species identification of strains belonging to the C. parapsilosis complex. C. parapsilosis had the highest prevalence among all the blood stream samples studied, followed by C. orthopsilosis and C. metapsilosis. Concerning to intra-specific genotypic analysis, C. orthopsilosis was the most heterogeneous species, in contrast to C. parapsilosis that was the most homogeneous, probably due to its adaptation to the human host. Strains belonging to this species can become endemic in some cities or hospitals. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

SOUZA, Elizabeth Ribeiro Yokobatake. Atividade antifúngica in vitro de estatinas sobre espécies de candida e cryptococcus. 2011. 96 f. Dissertação (Mestrado em Microbiologia Médica) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2011. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-06-26T12:14:28Z No. of bitstreams: 1 2011_dis_erysouza.pdf: 1529070 bytes, checksum: bec5e50bfee0b3880c94980ee63697d6 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes(erikaleitefernandes@gmail.com) on 2013-07-04T11:48:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_dis_erysouza.pdf: 1529070 bytes, checksum: bec5e50bfee0b3880c94980ee63697d6 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-07-04T11:48:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_dis_erysouza.pdf: 1529070 bytes, checksum: bec5e50bfee0b3880c94980ee63697d6 (MD5) Previous issue date: 2011 / Nos últimos anos, as infecções oportunistas fúngicas, especialmente, candidíase, criptococose e se tornaram mais frequentes, devido ao aumento no número de indivíduos imunocomprometidos, tais como a SIDA, o transplante e pacientes de cancro e os que estão em terapia imunossupressora. Apesar de ser eficaz, por vezes é necessário utilizar novas drogas como alternativa ou como adjuvantes de modo a potenciar o efeito da terapia antifúngica clássica. As estatinas são os medicamentos hipolipemiantes mais prescritos em todo o mundo para a prevenção de doenças cardiovasculares. No entanto, outros efeitos benéficos para estas drogas foram descritas, tais como o controlo de infecções. Este trabalho teve como objetivo determinar a atividade antifúngica das estatinas contra Candida spp. e Cryptococcus spp. As concentrações inibitórias mínimas (MICs) para três diferentes estatinas (pravastatina, sinvastatina e atorvastatina) foram determinadas contra 51 cepas de Candida spp. (16 de C. albicans, 11 C. Krusei, C. tropicalis, 12 C. parapsilosis e 12) e 25 estirpes de Cryptococcus spp. (12 e 13 C. gattii C. neoformans), através do ensaio de microdiluição em meio líquido, de acordo com o Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI - Documento M27-A3). A concentração de ensaio para a pravastatina variou de 50-0,0977 mg / mL, no caso da simvastatina, variou 1-0,0020 mg / ml e, para a atorvastatina, que variou de 10-0,0200 mg / ml. A pravastatina inibe 37 estirpes de Candida, com MICs variando 1,56-6,25 mg / mL e as amostras restantes não foram inibidas, mesmo na maior concentração testada (50 mg / mL). Simvastatina e atorvastatina, por outro lado, todas as estirpes inibiram 51 Candida avaliada, apresentando MICs, variando de 0,02 a 1 mg / ml e 0,04-5 mg / mL, respectivamente. Relativamente Cryptococcus spp., Apenas quatro estirpes foram inibidas por pravastatina (CIM = 25 mg / mL), enquanto todas as 25 estirpes foram inibidas por sinvastatina (0,06 ≤ CIM ≤ 1 mg / mL) e oito foram inibidos por atorvastatina (0,62 ≤ CIM ≤ 2,5 mg / mL) e os restantes 17 não eram sensíveis à concentração máxima testada atorvastatina (10 mg / mL). As concentrações fungicidas mínimas (CFM) para as estatinas testadas também foram determinadas. O MFC para a pravastatina contra Candida spp. foi determinada contra 15 cepas (3,12 ≤ MIC ≤ 25 mg / mL). Os valores de MFC para sinvastatina foram determinados para 34 cepas de Candida spp. (0,03 ≤ MFC ≤ 1 mg / mL), enquanto que aqueles para a atorvastatina foram determinados contra 16 estirpes (0,04 ≤ MFC ≤ 0,31 mg / mL). Quanto Cryptococcus spp., As 25 cepas testadas, os valores de MFC para pravastatina foram encontrados contra três cepas (MFC = 50 mg / mL), enquanto os de sinvastatina foram determinadas contra 21 cepas (0,12 ≤ MFC ≤ 1 mg / mL) e aqueles para atorvastatina foram determinados contra uma única estirpe (MFC = 1 mg / mL). Esta actividade inibidora in vitro de estatinas contra Cândida spp. e Cryptococcus spp. cria uma perspectiva importante para a utilização destes fármacos in vivo, a fim de controlar as infecções fúngicas. / O aumento nn ultimos Anos de indivíduos imunocomprometidos, Como Portadores da Síndrome da Imunodeficiência Adquirida, de Doenças malignas, transplantados e To Us Link Usuarios de terapias imunossupressoras, favorece o surgimento de Infecções oportunistas, principalmente como de Teor fúngico, Como a candidíase ea criptocócica. Apesar de a terapia antifúngica Atual Ser Eficiente na maioria dos Casos, algumas Vezes fazem necessárias SE-Novas Drogas Que atuem COMO ALTERNATIVA UO Como coadjuvantes sem Tratamento parágrafos potencializar Ø EFEITO DOS Antifúngicos utilizados. Como estatinas São fármacos hipolipemiantes Mais prescritos mundialmente parágrafo Doenças cardiovasculares. EntreTanto, recentemente, Tem Sido descritos To Us Link efeitos benéficos destas Drogas, Como, Por Exemplo, o Controle de Infecções. Este Trabalho Teve Como Objetivo determinar um ATIVIDADE antifúngica in vitro das estatinas ante 51 cepas de Candida, Sendo 16 de C. albicans, 11 de C. krusei, 12 de C. tropicalis e 12 de C. parapsilosis, e 25 cepas de Cryptococcus, Sendo 12 de C. gattii e 13 de C. neoformans, Por Meio de testes de microdiluição los caldo, Segundo Documento M27-A3 padronizado Pelo CLSI. O Intervalo de Concentração Testado parágrafo pravastatina was de 50 a 0,0977 mg / mL, parágrafo sinvastatina, 1 a 0,0020 mg / mL e parágrafo atorvastatina, 10 a 0,0200 mg / mL. Pravastatina inibiu 37 Leveduras fazer Gênero Candida apresentando Concentração inibitória minima (CIM) na Faixa de 1,56 a 6,25 mg / mL e como cepas restantes Localidade: Não FORAM MESMO inibidas na Maior Concentração testada (50 mg / mL), enquanto Opaco sinvastatina e atorvastatina apresentaram ATIVIDADE antifúngica sobre TODAS como 51 cepas avaliadas, apresentando CIM de 0,02 a 1 mg / ml e 0,04 de mg / ml, 5,00 respectively. Pará o Gênero Cryptococcus, apenas quatro cepas FORAM inibidas ante a pravastatina (CIM = 25 mg / mL), Por Outro Lado, sinvastatina inibiu TODAS as 25 cepas (CIM = 0,06 a 1 mg / mL), e atorvastatina apenas oito cepas (CIM = 0,62 a 2,5 mg / mL), Sendo Que como 17 restantes Localidade: Não FORAM MESMO inibidas na Maior Concentração testada (≥ 10 mg / mL). FOI determinada Concentração fungicida minima (CFM) de pravastatina sobre 15 cepas fazer Gênero Candida (CFM = 3,12 a 25 mg / mL), de sinvastatina sobre 34 cepas (CFM = 0,03 a 1 mg / mL), e de atorvastatina sobre 16 cepas (CFM = 0,04 a 0,31 mg / mL). Pará o Gênero Cryptococcus, das 25 cepas testadas, pravastatina exibiu apenas sobre CFM três cepas (CFM = 50 mg / mL), sinvastatina sobre 21 cepas (CFM = 0,12 a 1 mg / mL), e atorvastatina sobre uma cepa (CFM = 1 mg / mL). ESTA ATIVIDADE inibitória in vitro de estatinas sobre Espécies de Candida e Cryptococcus, abre UMA Perspectiva de suma importância par a Investigação fazer Possível USO destas Drogas com Finalidade antifúngica in vivo.

RODRIGUES, Terezinha de Jesus Santos. Cepas do complexo Candida parapsilosis de origem animal : classificação taxonômica, sensibilidade antifúngica e atributos de virulência in vitro. 2013 .41 f. Dissertação (Mestrado em Microbiliologia Médica) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2013. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-03-07T15:19:20Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_tjsrodrigues.pdf: 627956 bytes, checksum: 19ceecd82882c4a35b1f917867db26b3 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-03-07T15:27:27Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_tjsrodrigues.pdf: 627956 bytes, checksum: 19ceecd82882c4a35b1f917867db26b3 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-03-07T15:27:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_tjsrodrigues.pdf: 627956 bytes, checksum: 19ceecd82882c4a35b1f917867db26b3 (MD5) Previous issue date: 2013 / In the past decades, important changes in the epidemiology of fungal infections have resulted in the frequent isolation of yeasts of the genus Candida. Yeasts of the Candida parapsilosis species complex, for example, have been pointed out as infectious agents and components of the microbiota of animals. Thus, the work aimed at identifying molecularly the strains of the C. parapsilosis species complex recovered from veterinary sources and maintained at the Specialized Medical Mycology Center, as well as evaluating their in vitro antifungal susceptibility profile and attributes of virulence. For such, 28 strains of the C. parapsilosis species complex, recovered from dogs, psittacines, raptors and prawn were assessed. Initially, the strains were phenotypically identified, based on their morphological and biochemical characteristics, which confirmed their identification as C. parapsilosis lato sensu. The molecular identification of the strains was then carried out through PCR-REA. In order to analyze the in vitro antifungal susceptibility, the broth microdilution assay was performed, according to the document M27-A3 of the Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI) 2008, using amphotericin B, itraconazole, voriconazole, fluconazole and caspofungin. Concerning the virulence attributes, the ability of producing phospholipase was evaluated on egg yolk agar, while protease production was assessed on bovine serum albumin agar, and biofilm formation was tested in 96-well polystyrene microplates. The genotypical analysis identified 13 C. parapsilosis stricto sensu, ten C. orthopsilosis and five C. metapsilosis. The minimum inhibitory concentrations varied from 0.125 to 1 μg/mL foramphotericin B, from 0.03125 to 0.5 μg/mL, for itraconazole, from 0.03125 to 0,25 μg/mL for voriconazole, from 0.5 to 16 μg/mL for fluconazol and from 0.0625 to 2 μg/mL for caspofungin. Fluconazole resistance was observed in three strains of C. parapsilosis stricto sensu and two of C. metapsilosis, while one strain of C. parapsilosis stricto sensu and five C. orthopsilosis presented high MIC values for caspofungin (2 μg/mL). As for the virulence attributes, none of the tested strains produced phospholipases, while 23/28 presented proteolytic activity, and all of the strains produced biofilm, with one weak producer, 20 moderate producers and seven strong producers. These data show that the in vitro antifungal susceptibility and production of virulence attributes vary among species of the C. parapsilosis species complex, which can lead to differences in pathogenicity and therapeutic response. / Mudanças importantes na epidemiologia das infecções fúngicas nas últimas décadas têm resultado no isolamento frequente de leveduras do gênero Candida. As leveduras do complexo Candida parapsilosis, por exemplo, têm sido apontadas tanto como agentes de infecções como componentes da microbiota de animais. Diante disso, os objetivos deste trabalho foram realizar a identificação molecular de cepas do complexo C. parapsilosis, isoladas de fontes veterinárias e mantidas no Centro Especializado em Micologia Médica; assim como avaliar seus atributos de virulência e perfil de sensibilidade a antifúngicos, in vitro. Para tanto, foram utilizados 28 cepas do complexo C. parapsilosis obtidos de cães, psitacídeos, rapinantes e camarão. Inicialmente foi realizada a fenotipagem das cepas, com base na análise de suas características morfológicas e bioquímicas, que as ratificou como C. parapsilosis (lato sensu). A identificação molecular das espécies foi realizada por PCR-REA. A fim de analisar o perfil de sensibilidade das cepas, empregou-se o teste de microdiluição em caldo com anfotericina B, itraconazol, fluconazol, voriconazol e caspofungina, segundo metodologia padronizada pelo M27-A3. CLSI (2008). No tocante aos atributos de virulência, a capacidade da produção de fosfolipases foi avaliada pelo método de cultivo em ágar gema de ovo, a produção de proteases foi analisada através de cultivo em ágar albumina bovina e a formação de biofilme foi em microplaca de poliestireno com 96 poços. A análise genotípica evidenciou 13 C. parapsilosis (stricto sensu), 10 C. orthopsilosis e 05 C. metapsilosis. As concentrações inibitórias mínimas (MICs) variaram de 0,125 a 1 μg/mL para anfotericina B, de 0,5 a 16 μg/mL para fluconazol, de 0,03125 a 0,5 μg/mL para itraconazol, de 0,03125 a 0,25 μg/mL para voriconazol e de 0,0625 a 2 μg/mL para caspofungina. Foi observada resistência em 03 cepas de C. parapsilosis (stricto sensu) ao fluconazol e 01 cepa apresentou MIC elevado (2 μg/mL) para caspofungina. No que tange aos isolados de C. orthopsilosis, notou-se que 05 isolados apresentaram MICs elevados (2 μg/mL) para a caspofungina. Enquanto que, 02 isolados de C. metapsilosis revelaram-se resistentes ao fluconazol. Quanto à virulência, todas as cepas foram capazes de formar biofilmes, sendo, 20, 7 e 01, classificadas como produtoras moderadas, fortes e fracas respectivamente. Observou-se, ainda que 23/28 isolados apresentaram atividade proteolítica. Por outro lado, nenhuma foi capaz de produzir fosfolipases. Estes dados sinalizam que padrões de virulência, patogenicidade sensibilidade antifúngica, in vitro, podem variar entre as espécies do complexo C. parapsilosis.

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Orientador: Juliana Campos Junqueira / Banca: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Banca: Luis Vitor Silva do Sacramento / Resumo: O objetivo desse estudo foi avaliar a atividade antimicrobiana in vitro e in vivo dos óleos essenciais de Cymbopogon citratus e Melaleuca alternifolia sobre Candida albicans. No estudo in vitro foi determinada a Concentração Inibitória Mínima (CIM) de M. alternifolia e C. citratus em culturas planctônicas de C. albicans de acordo com as normas da NCCLS. Os efeitos dos óleos essenciais também foram testados sobre biofilmes de C. albicans formados no fundo da placa de 96 poços por 48 horas. Para a realização do estudo in vivo, foram utilizados 42 camundongos imunossuprimidos por injeções de prednisolona. A indução de candidose experimental foi realizada por inoculações de C. albicans (108 células/mL) no dorso da língua dos animais e administração de tetraciclina na água de beber. A seguir, os camundongos foram tratados com 3 aplicações do óleo essencial de C. citratus, M. alternifolia ou solução fisiológica (grupo Controle) no dorso da língua. Foram realizadas coletas de amostras bucais, antes e após o tratamento, para recuperação de leveduras da cavidade bucal dos animais e contagem de UFC/mL. Após 5 dias da indução da candidose experimental, os animais foram submetidos à eutanásia para análise histológica e de microscopia eletrônica do dorso da língua. Os resultados foram analisados estatisticamente pelos testes de Tukey e Kruskal-Wallis (p ≤ 0,05). Os resultados obtidos nos testes realizados in vitro demonstraram que a CIM foi de 0,195% para M. alternifolia e menor que 0,01% para C. citratus. A redução microbiana observada nos biofilmes de C. albicans foi de 6,88 e 5,84 log, respectivamente, para M. alternifolia e C. citratus. Em relação à recuperação de C. albicans da cavidade bucal dos animais... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this study was to evaluate the antimicrobial activity in vitro and in vivo of essential oils of Cymbopogon citratus and Melaleuca alternifolia on Candida albicans. In vitro study was determined the minimum inhibitory concentration (MIC) of M. alternifolia and C. citratus in planktonic cultures of C. albicans according to NCCLS standards. The effects of essential oils were also tested on biofilms of C. albicans formed deep inside the 96-well plate for 48 hours. For the study in vivo, we used 42 mice immunosuppressed by injections of prednisolone. The induction of experimental candidiasis was performed by inoculation of C. albicans (108 cells / mL) on the back of the tongue of animals and administration of tetracycline in drinking water. Next, the mice were treated with three applications of the essential oil of C. citratus, M. alternifolia or saline (control group) on the back of the tongue. Samples were collected with mouth before and after treatment for recovery of yeasts from the oral cavity of animals and number of CFU / mL. 5 days after induction of experimental candidiasis, the animals were euthanized for histological and electron microscopy of the tongue. The results were statistically analyzed by Tukey's test and Kruskal-Wallis test (p ≤ 0.05). The results obtained in in vitro tests showed that the MIC was 0.195% for M. alternifolia and less than 0.01% for C. citratus. The microbial reduction observed in biofilms of C. albicans was 6.88 and 5.84 log, respectively, for M. alternifolia and C. citratus. Regarding the recovery of C. albicans from the oral cavity of animals, there was a reduction of 6.49 log for microbial M. alternifolia and 5.95 for log C. citratus. In the microscopic analysis of the tongue, there was... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Banca: Luana Marotta Reis Vasconcelos / Banca: Thaís Cachulé Paradella / Banca: Célia Regina Gonçalves e Silva / Banca: Graziella Nuemberg Back Brito / Resumo: O objetivo deste trabalho foi avaliar in vitro a atividade antifúngica e a citotoxicidade do ácido peracético e extrato vegetal de Camellia sinensis a (chá verde) e também avaliar o efeito antifúngico da anfotericina B e fluconazol em 22 cepas de Candida spp. isoladas da cavidade bucal de pacientes HIV positivos. Para determinação da concentração fungicida mínima e concentração inibitória mínima (CFM e CIM) em células planctônicas, foram realizadas diluições seriadas do extrato e do ácido peracético em placas de 96 poços em caldo RPMI tamponado, em suspensões padronizadas de cada cepa de Candida (106 células/mL). Após determinação da concentração do extrato e do ácido peracético no CIM e CFM, foi preparado o biofilme de cada cepa em placas de 24 poços utilizando-se corpos-de-prova de resina acrílica (n=10), as quais foi adicionado 0,1 mL da suspensão de Candida e 2mL caldo BHI sacarosado. As placas foram incubadas e mantidas a 37° por 5 dias. Após a incubação, os corpos-de-prova foram lavados em solução fisiológica e colocados em imersão por 5 minutos no ácido peracético ou no extrato vegetal. Os corpos-de-prova foram sonicados e realizadas diluições seriadas, 0,1 ml de cada diluição foi semeada em placas de ágar Sabouraud em duplicata e incubadas em estufa bacteriológica (37ºC/48 h). Posteriormente foi realizada a contagem das unidades formadoras de colônia (UFC/mL). Os dados foram avaliados estatisticamente utilizando-se teste de Mann Whitney (p<0,05) para o biofilme, observação visual para CIM e CFM, Tukey e Anova para citotoxicidade. Foi avaliada a citotoxicidade do ácido peracético e extrato de chá verde em macrófagos de camundongos (RAW 264.7), para verificar a viabilidade celular... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objective of this study was to evaluate the in vitro antifungal activity and cytotoxicity of peracetic acid and plant extract from the Camellia sinensis (green tea) and also to evaluate the antifungal effect of amphotericin B and fluconazole in 22 strains of Candida spp. isolated from the oral cavity of HIV positive patients. To determine the minimum fungicidal concentration and minimum inhibitory concentration (CFM and CIM) in planktonic cells, were performed serial dilutions of the extract and peracetic acid in 96-well plates in RPMI broth buffered in standardized suspensions of each strain of Candida (106 cells / mL). After determining the concentration of the extract and peracetic acid in CIM and CFM, the biofilm was prepared for each strain in 24-well plates using body-of-proof acrylic resin (n = 10), which was added 0, 1 mL of the suspension of Candida sucrose and 2 ml BHI broth. The plates were incubated at 37 ° and maintained for 5 days. After incubation, the bodies of the test piece was washed in saline and placed for 5 minutes immersion in peracetic acid or the plant extract. The bodies of the test piece were sonicated and serial dilutions performed, 0.1 ml of each dilution was seeded on Sabouraud agar plates in duplicate and incubated in a bacteriological incubator (37 º C/48 h). Was subsequently performed the counting of colony forming units (CFU / mL). The data were statistically analyzed using Mann Whitney test (p <0.05) for the biofilm, visual observation for CIM and CFM, ANOVA and Tukey for cytotoxicity. We evaluated the cytotoxicity of peracetic acid and green tea extract in mouse macrophages (RAW 264.7) to verify the cell viability of these substances. The results showed that there was feasibility of peracetic acid and green tea extract in the cells analyzed. The antifungal agents have... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Altair Antoninha Del Bel Cury / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-17T15:28:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gomes_PriscilaNogueira_D.pdf: 18801720 bytes, checksum: 026aef1649b772f202792184935cb7cb (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: O biofilme de Candida spp. formado na superfície de próteses removíveis, é o principal fator etiológico da candidose, sendo a C. albicans e a C. glabrata as espécies mais prevalentes nesta condição. O antifúngico fluconazol (FLZ) é frequentemente utilizado no tratamento da candidose, porém o sucesso tem sido limitado devido a resistência desenvolvida pela Candida a esse medicamento. Considerando a importância da estrutura e morfologia do biofilme de Candida na candidose, o objetivo neste estudo foi avaliar o efeito de FLZ na bioatividade, bioestrutura e morfologia celular de biofilmes de Candida spp. desenvolvidos na presença deste antifúngico. Espécimes (10 mm x 2 mm) foram confeccionados utilizando resina de poli(metilmetacrilato) (PMMA), polimerizada por banho de água quente. Películas de saliva foram formadas na superfície da PMMA, e biofilmes de um isolado referência e dois isolados clínicos de C. albicans (ATCC 90028, P01, P34) e C. glabrata (ATCC 2001, P11, P31) foram desenvolvidos por 48h. Dois grupos foram formados: controle e experimental. FLZ a 2,56 µg/mL, concentração biodisponivel na saliva, foi adicionado ao meio de cultura do grupo experimental. Os meios de cultura do grupo controle e experimental foram trocados a cada 24 h. As bioatividades dos biofilmes foram avaliadas utilizando análise colorimétrica de redução por XTT. A bioestrutura analisada através do Microscópio Confocal à Laser e a morfologia celular avaliada utilizando o Microscópio Eletrônico de Transmissão. Os dados foram analisados pelo Test t de Student com nível de significância de 5%. A presença do FLZ reduziu a bioatividade de todos os biofilmes de C. albicans (p<0.001), porém não alterou a estrutura e morfologia da C. albicans P34. Quanto à bioatividade e bioestrutura dos biofilmes de C. glabrata, não foram encontradas diferenças estatisticamente significantes entre os grupos controle e experimental. Pode-se concluir que as alterações da bioatividade, bioestrutura e morfologia celular, como resposta ao tratamento com FLZ, na concentração biodisponível na saliva, depende da cepa de Candida spp. avaliada. / Abstract: Candida spp. biofilm formed on removable denture surfaces is considered the main etiologic factor of candidosis, being the C. albicans and C.glabrata the species most frequently found in this condition. The antifungic fluconazol (FLZ) is commonly used in the treatment of candidosis, however its success is limited due to the resistance developed by Candida to this medicament. Considering the importance of the structure and morphology of Candida biofilms in the candidosis, the aim of this study was to evaluate the effect of FLZ on the bioactivity, biostructure and morphology of Candida spp. biofilms formed in the presence of this antifungal agent. Specimens (10 mm x 2 mm) were fabricated using water bath poly(methylmethacrylate) resin (PMMA). Salivary pellicles were formed on the PMMA surface, and biofilms of a reference strain and two clinical isolates of C. albicans (ATCC 90028, P01, P34) and C. glabrata (ATCC 2001, P11, P31) were developed for a period of 48h. Two groups were formed: control and experimental. FLZ at 2.56 µg/mL, concentration bioavailable in saliva, was added to the medium of the experimental group. The culture mediums of the control and experimental groups were changed at 24 hours. The bioactivities of the biofilms were evaluated with XTT reduction colorimetric assay. The biostructure was analyzed by the Confocal Scanning Laser Microscopy and the cell morphology analyzed by the Transmission Electron Microscopy. The data were analyzed by Student's t-test, with significance level set at 5%. The presence of FLZ decreased the bioactivity of all C. albicans biofilms (p<0.001), it did not change the structure and morphology of P34. As regards C. glabrata biofilms bioactivity and biostructure, no statistically significant differences were found between control and experimental groups for biofilms of all strains. It could be concluded that the alterations in bioactivity, biostructure and cell morphology in response to the treatment with fluconazole, bioavailable concentration present in saliva, depends on the Candida spp. strain / Doutorado / Protese Dental / Doutor em Clínica Odontológica

Orientador: Alicia Juliana Kowaltowski / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-08T16:58:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ruy_Fernando_D.pdf: 990685 bytes, checksum: 783dfc6c0515d5c6cf6b7f57ded8fcd4 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: A levedura Candida albicans é um importante patógeno em humanos. A principal característica deste microorganismo é a sua habilidade de sobreviver em diferentes ambientes do hospedeiro, com diferentes tensões de oxigênio. Acredita-se que esta flexibilidade deve-se à expressão de vias alternativas de redução do oxigênio e ao controle do fluxo de elétrons entre elas e a cadeia respiratória clássica. A presença destas vias pode ainda estar relacionada à alta resistência do fungo a drogas, uma vez que a inibição de uma delas pode ser suprida pela atividade das outras. Neste sentido, um entendimento detalhado do transporte de elétrons destas leveduras torna-se imprescindível. Neste trabalho, após a confirmação da existência de três vias de transporte de elétrons nas mitocôndrias de C. albicans: a cadeia clássica (CRC), uma via paralela (PAR) e a oxidase alternativa (AOX), avaliou-se a importância de cada uma delas para o crescimento celular. Assim, foram feitos tratamentos com compostos que possuem efeito inibitório sobre pontos específicos a cadeia respiratória da levedura, e avaliações de curvas de crescimento dos organismos. A antimicina e o KCN, que inibem os Complexos III e IV da CRC, respectivamente, preveniram totalmente o crescimento quando comparadas à cultura controle. O BHAM, um inibidor da AOX, também promoveu a inibição da proliferação celular. A presença de rotenona, um inibidor do Complexo I da CRC, não inibiu completamente o crescimento da levedura. Estes experimentos foram então correlacionados com medidas de consumo de oxigênio nas suspensões mitocondrial e celular, onde nós observamos que a rotenona e o BHAM foram capazes de promover apenas inibições parciais da respiração. As concentrações de antimicina e KCN que promoveram inibições respiratórias parciais proporcionaram efeitos distintos sobre o crescimento. Enquanto a antimicina preveniu totalmente o crescimento, o KCN não apresentou efeito inibitório. Avaliamos ainda os níveis de espécies reativas de oxigênio (EROs) e glutationa oxidada (GSSG) nas células incubadas na presença dos inibidores respiratórios. Os níveis de EROs nas mitocôndrias tratadas com antimicina foram significativamente aumentados em relação aos outros grupos. Observamos também um aumento de GSSG nas células incubadas com antimicina e BHAM. Nossas descobertas experimentais sugerem que as inibições do Complexo III da CRC e a AOX previnem o crescimento da levedura por promover estresse oxidativo de origem mitocondrial / Abstract: Candida albicans is an important pathogen in humans. A crucial feature of this microorganism is its ability to survive in different environments within the host with distinct oxygen tensions. It is believed that this flexibility is due the expression of alternative oxygen reduction pathways and the control of electron flux between them and the classical respiratory chain. The presence of these pathways may also be related to the high resistance these fungi present to drugs, since the inhibition of one electron transport pathway can be compensated by the activity of the others. In this study we confirm the presence of three electron transport pathways in Candida albicans: the classical respiratory chain (CRC), a parallel chain (PAR) and an alternative oxidase (AOX). We also evaluated the contribution of each pathway toward yeast growth. To do so, we measured cellular proliferation in the absence and presence of electron transport inhibitors. Antimycin A and KCN, which inhibit Complexes III and IV, respectively, totally prevented cellular growth. BHAM, an AOX inhibitor, also promoted inhibition of yeast growth. Surprisingly, the presence of rotenone, an inhibitor of respiratory Complex I, inhibited yeast growth only partially. These results were then correlated with oxygen uptake in mitochondrial and cell suspensions, which revealed that rotenone and BHAM promote only partial respiratory inhibitions. Concentrations of antimycin and KCN which promoted partial respiratory inhibition had distinct effects on growth. While antimycin totally prevented cell proliferation, KCN did not. We also evaluated the levels of reactive species of oxygen (ROS) and oxidized glutathione in the cells incubated in the presence of respiratory inhibitors. The levels of ROS in antimycin-treated cells were significantly higher than in the other groups. Finally, we observed an increase of oxidized glutathione in cells incubated in the presence of antimycin and BHAM. These experimental findings suggest that inhibitions of complex III of the CRC and AOX prevent Candida albicans growth by promoting oxidative stress, indicating the importance of these pathways to ensure yeast viability / Doutorado / Ciencias Biomedicas / Doutor em Ciências Médicas