Com a finalidade de se analisar a dinâmica da evolução dos anticorpos na fase aguda da infecção, através das reações de soroaglutinação microscópica e de fixação do complemento, trinta animais foram inoculados experimentalmente com leptospiras patogênicas, sendo quinze com o sorotipo icterohaemorrhagiae e quinze com o sorotipo canicola. Procurou-se também avaliar a potencialidade do emprego dos antígenos preparados com amostras de leptospiras aquícolas estirpes Patoc I, Rufino e Buenos Aires, em ambas as reações. Os anticorpos fixadores do complemento foram observados na circulação sanguínea a partir do 49 dia após a inoculação em ambos os grupos de animais, enquanto as aglutininas foram detectadas a partir do 7º dia. Estas persistem durante um período maior de tempo, pois 50% dos animais inoculados com o sorotipo icterohaemorrhagiae apresentaram anticorpos circulantes no 56º dia após a inoculação e 80% dos cães inoculados com o sorotipo canicola, no 63º dia pós-infecção. Nessa oportunidade, os anticorpos fixadores do complemento não foram observados nos soros dos animais de ambos os grupos. As estirpes Patoc I e Rufino não foram-eficientes em revelar anticorpos circulantes em ambos os grupos experimentais tanto pela reação de soroaglutinação microscópica como pela reação de fixação do complemento, em proporções que justifiquem seu emprego como antígeno único. Entretanto, 87% dos cães inoculados com o sorotipo icterohaemorrhagiae e 80% dos cães inoculados com o sorotipo canicola foram reagentes quando se empregou a estirpe Buenos Aires nas reações de soroaglutinação microscópica e de fixação do complemento. / In order to evaluate the antibody response to pathogenic leptospira from both serotypes icterohaemorrhagiae and canicola, dogs were experimentally inoculated with these two serotypes. Bach of the serotypes were inoculated in 15 dogs and the antibody response in the acute phase of infection was followed using agglutination, and complement fixation tests. These tests were also performed using non pathogenic leptospira such as Patoc l, Rufino and Buenos Aires. Complement fixing antibodies were detected in both groups, at the 4th day post-infection and agglutinins only appeared in circulation at the 7th day post-infection when homologous antigens were used. On the 63rd day post-infection with canicola serotype and on the 56th day post-infection with the serotype icterohaemorrhagiae complement fixing antibody could no longer be detected but, in both experimental groups, specific agglutinins were present in significant tittles. The antigens Patoc I and Rufino were inefficient to detect circulating antibodies in experimentally infected animals. However, when the Buenos Aires antigen was used 87 percent of the animals infected with the serotype icterohaemorrhagiae and 80 per cent of the animals infected with the serotype canicola showed significant tittles of antibody.

Com a finalidade de se analisar a dinâmica da evolução dos anticorpos na fase aguda da infecção, através das reações de soroaglutinação microscópica e de fixação do complemento, trinta animais foram inoculados experimentalmente com leptospiras patogênicas, sendo quinze com o sorotipo icterohaemorrhagiae e quinze com o sorotipo canicola. Procurou-se também avaliar a potencialidade do emprego dos antígenos preparados com amostras de leptospiras aquícolas estirpes Patoc I, Rufino e Buenos Aires, em ambas as reações. Os anticorpos fixadores do complemento foram observados na circulação sanguínea a partir do 49 dia após a inoculação em ambos os grupos de animais, enquanto as aglutininas foram detectadas a partir do 7º dia. Estas persistem durante um período maior de tempo, pois 50% dos animais inoculados com o sorotipo icterohaemorrhagiae apresentaram anticorpos circulantes no 56º dia após a inoculação e 80% dos cães inoculados com o sorotipo canicola, no 63º dia pós-infecção. Nessa oportunidade, os anticorpos fixadores do complemento não foram observados nos soros dos animais de ambos os grupos. As estirpes Patoc I e Rufino não foram-eficientes em revelar anticorpos circulantes em ambos os grupos experimentais tanto pela reação de soroaglutinação microscópica como pela reação de fixação do complemento, em proporções que justifiquem seu emprego como antígeno único. Entretanto, 87% dos cães inoculados com o sorotipo icterohaemorrhagiae e 80% dos cães inoculados com o sorotipo canicola foram reagentes quando se empregou a estirpe Buenos Aires nas reações de soroaglutinação microscópica e de fixação do complemento. / In order to evaluate the antibody response to pathogenic leptospira from both serotypes icterohaemorrhagiae and canicola, dogs were experimentally inoculated with these two serotypes. Bach of the serotypes were inoculated in 15 dogs and the antibody response in the acute phase of infection was followed using agglutination, and complement fixation tests. These tests were also performed using non pathogenic leptospira such as Patoc l, Rufino and Buenos Aires. Complement fixing antibodies were detected in both groups, at the 4th day post-infection and agglutinins only appeared in circulation at the 7th day post-infection when homologous antigens were used. On the 63rd day post-infection with canicola serotype and on the 56th day post-infection with the serotype icterohaemorrhagiae complement fixing antibody could no longer be detected but, in both experimental groups, specific agglutinins were present in significant tittles. The antigens Patoc I and Rufino were inefficient to detect circulating antibodies in experimentally infected animals. However, when the Buenos Aires antigen was used 87 percent of the animals infected with the serotype icterohaemorrhagiae and 80 per cent of the animals infected with the serotype canicola showed significant tittles of antibody.

Doctor of Philosophy / Department of Diagnostic Medicine/Pathobiology / K.R. Harkin / T.G. Nagaraja / Associations of land cover/land use, socio-economic and housing, and hydrological and soil-hydrological variables were evaluated retrospectively as potential risk factors for canine leptospirosis in Kansas and Nebraska using Geographic Information Systems (GIS). The sample included 94 dogs positive for leptospirosis based on a positive polymerase chain reaction test for leptospires in urine, isolation of leptospires on urine culture, a single reciprocal serum titer of 12,800 or greater, or a four-fold rise in reciprocal serum titers over a 2 to 4 week period; and 185 dogs negative for leptospirosis based on a negative polymerase chain reaction test and reciprocal serum titers less than 400. Publicly available geographic datasets representing land cover/land use, socio-economic and housing characteristics, and hydrologic and soil hydrologic themes were analyzed along with geocoded addresses of case/control locations in GIS. Among different land cover/land use variables evaluated, urban areas (high and medium intensity urban areas and urban areas in general) and evergreen forests and forest/woodlands in general were significant risk factors. Among socio-economic and demographic determinants evaluated, houses lacking complete plumbing facilities, poverty status by age (18-64), and living within 2500 meters of a university/college or parks/forests were significant risk factors. Proximity to water features, hydrologic density and frequently flooded areas were identified as significant risk factors for canine leptospirosis among hydrologic and soil-hydrologic variables. Pet owners whose dogs live in such areas or under these circumstances should consider vaccination to prevent canine leptospirosis.

Realizou-se a pesquisa de anticorpos aglutinantes (AcA) anti-leptospira, através da técnica de soroaglutinação microscópica (SAM) e tentativas de isolamento do agente etiológico em 29 cães com suspeita clínica de leptospirose. Foi também realizada a pesquisa de material genético de Leptospira spp., utilizando-se a técnica de reação em cadeia de polimerase (PCR) em 24 amostras de urina dos mesmos cães. Com o objetivo de determinar a proteção cruzada entre os sorovares icterohaemorrhagiae e copenhageni, 24 cães adultos foram avaliados antes e após a vacinação com uma dose de vacina contendo os antígenos icterohaemorrhagiae, canicola, grippotyphosa e pomona, utilizando-se o teste de inibição de crescimento in vitro (TIC) dos sorovares canicola, copenhageni e icterohaemorrhagiae. Os títulos de AcA anti-copenhageni foram os mais freqüentemente observados nos cães com suspeita clínica de leptospirose, havendo entretanto, reação cruzada entre diferentes sorovares. Foram isoladas quatro amostras de leptospira, das quais três foram caracterizadas por anticorpos policlonais e por Variable Number Tandem Repeat (VNTR) como sorovar canicola. A quarta amostra isolada reagiu em alto título com o anti-soro policlonal anti-sorovar copenhageni (51.200), não tendo sido testado com o anti-soro anti-icterohaemorrhagiae. Pela técnica de VNTR, essa amostra foi classificada como pertencente ao sorogrupo icterohaemorrhagiae e, finalmente, pelo uso dos anticorpos monoclonais F70 C24, F70 C14-10, F12 C3-11 e F89 C12, para a diferenciação dos representantes do sorogrupo icterohaemorrhagiae, essa amostra isolada apresentou o comportamento imunológico do sorovar copenhageni (cepa padrão L1 130, FIOCRUZ - Bahia). Considerando-se como critério sorológico de confirmação do diagnóstico clínico de leptospirose, títulos maiores ou iguais a 800 em amostra única de soro, ou o aumento ou declínio de quatro vezes os títulos de AcA (duas diluições) em duas amostras pareadas de soro, houve a confirmação do diagnóstico etiológico em 9 de 24 cães (37,5%) pela SAM. Por outro lado, 11 das 24 amostras de urina (45,8%) foram positivas à PCR. A associação das duas técnicas permitiu a confirmação diagnóstica em 15 cães (62,5%). Os títulos de anticorpos neutralizantes (AcN) (TL50) pré-vacinais contra os sorovares icterohaemorrhagiae, canicola e copenhageni foram respectivamente de 1,444±0,278, 0,725±0,317 e 0,583±0,322, e os títulos pós-vacinais foram respectivamente de 1,455±0,287, 1,475±0,270 e 0,510±0,304. Considerando-se o título de AcN maior ou igual a 1 como título protetor contra a infecção leptospírica, no momento pré-vacinal, os cães ainda apresentavam AcN contra o sorovar icterohaemorrhagiae capazes de protegê-los contra a infecção natural, não tendo havido também uma resposta adicional ao estímulo vacinal. Com relação ao sorovar canicola, houve aumento significativo dos títulos de AcN após a imunização (p=0,001) quando comparado ao momento pré-vacinal, tendo sido desenvolvida uma resposta protetora. Embora os animais não tenham sido vacinados contra o sorovar copenhageni, a presença de AcN pré-vacinal e pós-vacinal pode ser justificada pela reatividade cruzada entre ambos, copenhageni e icterohaemorrhagiae, pertencentes ao mesmo sorogrupo; entretanto os títulos pré- e pós-vacinais não foram da mesma magnitude dos produzidos contra o sorovar icterohaemorrhagiae. Portanto, a vacina contendo bacterina do sorovar icterohaemorrhagiae não é capaz de eliciar resposta protetora contra o sorovar heterólogo copenhageni. / A research on agglutinating antibodies (AAc) anti-leptospira has been performed, through microscopic agglutination test (MAT) and attempts of isolation of the etiologic agent in 29 dogs with clinical suspicious of leptospirosis. There was also made a research of Leptospira spp.´s genetic material, using polimerase chain reaction (PCR) in 24 urine samples of the same dogs. With the aim to determine the cross protection between serovars icterohaemorrhagiae and copenhageni, 24 adult dogs were evaluated before and after vaccination with one dose of a vaccine containing icterohaemorrhagiae, canicola, grippotyphosa and pomona antigens, by the in vitro inhibition growth test (GIT) of serovars canicola, icterohaemorrhagiae and copenhageni. The AAc anti-copenhageni titers were the most frequently obseeved in the dogs with clinical suspicious of leptospirosis, existing however, cross reaction among different serovars. There were isolated four samplas of leptospira, of witch three were all characterizated by polyclonal antibodies and Variable Nunber Tandem Repeat (VNTR) as serovar canicola. The fourth isolated sample reacted in high titers to polyclonal antisera anti-copenhageno (51.200), but is was not tested with antisera anti-icterohaemorrhagiae. By VNTR technique, this sample was classified as belonging to the serogroup icterohaemorrhagiae, and finally by the use of monoclonal antibodies F70 C24, F70 C14-10, F12 C3-11 and F89 C12, for differentiation of the representatives of serogroup icterohaemorrhagiae. This isolated sample presented the immunological behavior of serovar copenhageni (standard strain LI 130, FIOCRUZ - Bahia). Considering the sorologic criteria confirmation of clinical diagnosis of leptospirosis, titers higher or equal than 800 in a unique serum sample, or the increase or decrease of four times of AAc titers (two dilutions) in two paired serum samples, there was the conformation of etiologic diagnosis in 9 of the 24 dogs (37,5%) by MAT. However, 11 out of 24 urine samples (45,8%) were positive at PCR. The association of both techniques allowed the diagnostic conformation in 15 dogs (62,5%). The prevaccinal neutralizing antibodies (NAc) titers (TL50) were respectively 1,444±0,278, 0,725±0,317 and 0,583±0,322. And the postvaccinal titers were respectively 1,455±0,287, 1,475±0,270 and 0,510±0,304. Considering the NAc titer higher than 1 as a protective titer against leptospiral infection, at prevaccinal moment the dogs still presented NAc against serovar icterohaemorrhagiae capable to protect them against natural infection, an adictional response to the vaccinal stimulus had not occurred. Concerning serovar canicola, there was a significant increase of NAc titers after immunization (p=0,001) when compared to prevaccinal moment, and a protective response was developed. Although the animals were not vacinated against serovar copenhageni, the presence of prevaccinal and postvaccinal NAc can be explained by cross reactivity between both, copenhageni and icterohaemorrhagiae, belonging to same serogroup; however, the pre- and postvaccinal titers were not of the same magnitude of those produced against serovar icterohaemorrhagiae. Therefore, the vaccine containing bacterins of serovar icterohaemorrhagiae is not capable of eliciting protective response against the heterologous serovar copenhageni.

Realizou-se a pesquisa de anticorpos aglutinantes (AcA) anti-leptospira, através da técnica de soroaglutinação microscópica (SAM) e tentativas de isolamento do agente etiológico em 29 cães com suspeita clínica de leptospirose. Foi também realizada a pesquisa de material genético de Leptospira spp., utilizando-se a técnica de reação em cadeia de polimerase (PCR) em 24 amostras de urina dos mesmos cães. Com o objetivo de determinar a proteção cruzada entre os sorovares icterohaemorrhagiae e copenhageni, 24 cães adultos foram avaliados antes e após a vacinação com uma dose de vacina contendo os antígenos icterohaemorrhagiae, canicola, grippotyphosa e pomona, utilizando-se o teste de inibição de crescimento in vitro (TIC) dos sorovares canicola, copenhageni e icterohaemorrhagiae. Os títulos de AcA anti-copenhageni foram os mais freqüentemente observados nos cães com suspeita clínica de leptospirose, havendo entretanto, reação cruzada entre diferentes sorovares. Foram isoladas quatro amostras de leptospira, das quais três foram caracterizadas por anticorpos policlonais e por Variable Number Tandem Repeat (VNTR) como sorovar canicola. A quarta amostra isolada reagiu em alto título com o anti-soro policlonal anti-sorovar copenhageni (51.200), não tendo sido testado com o anti-soro anti-icterohaemorrhagiae. Pela técnica de VNTR, essa amostra foi classificada como pertencente ao sorogrupo icterohaemorrhagiae e, finalmente, pelo uso dos anticorpos monoclonais F70 C24, F70 C14-10, F12 C3-11 e F89 C12, para a diferenciação dos representantes do sorogrupo icterohaemorrhagiae, essa amostra isolada apresentou o comportamento imunológico do sorovar copenhageni (cepa padrão L1 130, FIOCRUZ - Bahia). Considerando-se como critério sorológico de confirmação do diagnóstico clínico de leptospirose, títulos maiores ou iguais a 800 em amostra única de soro, ou o aumento ou declínio de quatro vezes os títulos de AcA (duas diluições) em duas amostras pareadas de soro, houve a confirmação do diagnóstico etiológico em 9 de 24 cães (37,5%) pela SAM. Por outro lado, 11 das 24 amostras de urina (45,8%) foram positivas à PCR. A associação das duas técnicas permitiu a confirmação diagnóstica em 15 cães (62,5%). Os títulos de anticorpos neutralizantes (AcN) (TL50) pré-vacinais contra os sorovares icterohaemorrhagiae, canicola e copenhageni foram respectivamente de 1,444±0,278, 0,725±0,317 e 0,583±0,322, e os títulos pós-vacinais foram respectivamente de 1,455±0,287, 1,475±0,270 e 0,510±0,304. Considerando-se o título de AcN maior ou igual a 1 como título protetor contra a infecção leptospírica, no momento pré-vacinal, os cães ainda apresentavam AcN contra o sorovar icterohaemorrhagiae capazes de protegê-los contra a infecção natural, não tendo havido também uma resposta adicional ao estímulo vacinal. Com relação ao sorovar canicola, houve aumento significativo dos títulos de AcN após a imunização (p=0,001) quando comparado ao momento pré-vacinal, tendo sido desenvolvida uma resposta protetora. Embora os animais não tenham sido vacinados contra o sorovar copenhageni, a presença de AcN pré-vacinal e pós-vacinal pode ser justificada pela reatividade cruzada entre ambos, copenhageni e icterohaemorrhagiae, pertencentes ao mesmo sorogrupo; entretanto os títulos pré- e pós-vacinais não foram da mesma magnitude dos produzidos contra o sorovar icterohaemorrhagiae. Portanto, a vacina contendo bacterina do sorovar icterohaemorrhagiae não é capaz de eliciar resposta protetora contra o sorovar heterólogo copenhageni. / A research on agglutinating antibodies (AAc) anti-leptospira has been performed, through microscopic agglutination test (MAT) and attempts of isolation of the etiologic agent in 29 dogs with clinical suspicious of leptospirosis. There was also made a research of Leptospira spp.´s genetic material, using polimerase chain reaction (PCR) in 24 urine samples of the same dogs. With the aim to determine the cross protection between serovars icterohaemorrhagiae and copenhageni, 24 adult dogs were evaluated before and after vaccination with one dose of a vaccine containing icterohaemorrhagiae, canicola, grippotyphosa and pomona antigens, by the in vitro inhibition growth test (GIT) of serovars canicola, icterohaemorrhagiae and copenhageni. The AAc anti-copenhageni titers were the most frequently obseeved in the dogs with clinical suspicious of leptospirosis, existing however, cross reaction among different serovars. There were isolated four samplas of leptospira, of witch three were all characterizated by polyclonal antibodies and Variable Nunber Tandem Repeat (VNTR) as serovar canicola. The fourth isolated sample reacted in high titers to polyclonal antisera anti-copenhageno (51.200), but is was not tested with antisera anti-icterohaemorrhagiae. By VNTR technique, this sample was classified as belonging to the serogroup icterohaemorrhagiae, and finally by the use of monoclonal antibodies F70 C24, F70 C14-10, F12 C3-11 and F89 C12, for differentiation of the representatives of serogroup icterohaemorrhagiae. This isolated sample presented the immunological behavior of serovar copenhageni (standard strain LI 130, FIOCRUZ - Bahia). Considering the sorologic criteria confirmation of clinical diagnosis of leptospirosis, titers higher or equal than 800 in a unique serum sample, or the increase or decrease of four times of AAc titers (two dilutions) in two paired serum samples, there was the conformation of etiologic diagnosis in 9 of the 24 dogs (37,5%) by MAT. However, 11 out of 24 urine samples (45,8%) were positive at PCR. The association of both techniques allowed the diagnostic conformation in 15 dogs (62,5%). The prevaccinal neutralizing antibodies (NAc) titers (TL50) were respectively 1,444±0,278, 0,725±0,317 and 0,583±0,322. And the postvaccinal titers were respectively 1,455±0,287, 1,475±0,270 and 0,510±0,304. Considering the NAc titer higher than 1 as a protective titer against leptospiral infection, at prevaccinal moment the dogs still presented NAc against serovar icterohaemorrhagiae capable to protect them against natural infection, an adictional response to the vaccinal stimulus had not occurred. Concerning serovar canicola, there was a significant increase of NAc titers after immunization (p=0,001) when compared to prevaccinal moment, and a protective response was developed. Although the animals were not vacinated against serovar copenhageni, the presence of prevaccinal and postvaccinal NAc can be explained by cross reactivity between both, copenhageni and icterohaemorrhagiae, belonging to same serogroup; however, the pre- and postvaccinal titers were not of the same magnitude of those produced against serovar icterohaemorrhagiae. Therefore, the vaccine containing bacterins of serovar icterohaemorrhagiae is not capable of eliciting protective response against the heterologous serovar copenhageni.