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Purificação e caracterização de lectinas e inibidor de tripsina presentes em tecidos de Myracrodruon urundeuva e Schinus terebinthifolius: ação antimicrobiana de preparaçõesGomes, Francis Soares 26 August 2013 (has links)
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Previous issue date: 2013-08-26 / CAPES / Schinus terebinthifolius (aroeira-da-praia) e Myracrodruon urundeuva (aroeira-dosertão)
são plantas utilizadas na medicina popular para tratamento de doenças humanas
causadas por microorganismos. Este trabalho relata 1) o isolamento e caracterização
estrutural das lectinas isoladas de folha (SteLL) e entrecasca (SteBL) de S.
terebinthifolius e do inibidor de tripsina isolado de entrecasca de S. terebinthifolius
(SteBI) e 2) a investigação da atividade antimicrobiana de infusão e extrato metanólico
de entrecasca de S. terebinthifolius, de SteLL, SteBL, SteBI e de lectinas de entrecasca
(MuBL), folha (MuLL) e cerne (MuHL) de M. urundeuva isoladas de acordo com
procedimentos previamente estabelecidos. Bactérias e fungo que causam doenças em
humanos e em peixes foram utilizados nos ensaios e os valores de concentrações
mínima inibitória (CMI), bactericida (CMB) e fungicida (CMF) foram determinados.
Adicionalmente foi avaliado o efeito das lectinas de M. urundeuva na aderência e
capacidade invasiva de bactérias em células de peixe (SAF-1) e humanas (HeLa) bem
como na produção de produtos extracelulares por bactérias. SteLL, isolada após eluição
da coluna de quitina com ácido acético 1 M, é um glicopeptídeo de 14 kDa com
atividade hemaglutinante (AH) inibida por N-acetilglicosamina, não afetada por Ca2+ e
Mg2+, estável entre 30 e 100 °C e pH 5,0-8,0. SteBL, isolada após eluição da coluna de
quitina com ácido acético 1 M, é um peptídeo não-glicosilado de 20 kDa, com maior
AH em pH 7,5 e inibida por N-acetilglicosamina e fetuína. SteBI, isolado durante o
mesmo procedimento cromatográfico que isolou SteBL, representando a fração protéica
ao suporte cromatográfico, é um peptídeo de 16 kDa que inibiu em 89,5% a atividade de
tripsina bovina. SteLL apresentou atividade antibacteriana contra Escherichia coli,
Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella
enteritidis e Staphylococcus aureus. Maiores efeitos bacteriostáticos e bactericidas
foram detectadas para S. enteritidis (CMI: 0,45 μg/ml) e S. aureus (CMB: 7,18 μg/ml),
respectivamente. SteLL inibiu o crescimento (CMI: 6,5 μg/ml) e matou (CMF: 26
μg/ml) Candida albicans. SteBL mostrou atividade bacteriostática contra E. coli, S.
aureus, Enterococcus faecalis (CMI: 200 μg/ml), atividade bactericida contra S. aureus
(CMB: 400 μg/ml) e não apresentou atividade antifúngica contra C. albicans. SteBI não
apresentou atividade antibacteriana e foi fungicida (CMF: 7,5 μg/ml) contra C.
albicans. MuBL, MuHL e MuLL apresentaram atividade bacteriostática e bactericida
contra S. aureus, E. coli e Photobacterium damselae subsp. piscicida (CMI e CMB de 1
a 122 e 2 a 225 μg/ml, respectivamente) e bacteriostática contra linhagens de Yersinia
ruckeri (CMI entre 34 a 489,8 μg/ml). A infusão da entrecasca de S. terebinthifolius foi
bactericida contra S. aureus, E. faecalis e E. coli (CMB de 14,85 a 29,7 mg/mL de
proteínas e 0,026 a 0,052 mg/mL de fenóis) e fungicida contra C. albicans (CMF de
3,71 mg/mL de proteínas e 0,007 mg/mL de fenóis). Extrato metanólico mostrou
atividade bactericida contra S. aureus e E. faecalis, com CMB de 13,19 e 3,29 mg/mL
de proteínas e 4,1 e 1,02 mg/mL de fenóis, respectivamente e não contem atividade
antifúngica. As lectinas de M. urundeuva promoveram redução na adesão e capacidade
invasiva de S. aureus, E. coli, Y. ruckeri e P. damselae subsp. piscicida em SAF-1 e
HeLa e alteração no padrão de produtos extracelulares liberados por S. aureus, E. coli,
Y. ruckeri e P. damselae subsp. piscicida. O estudo demonstrou a purificação,
caracterização e propriedades biológicas de lectinas ligadoras de quitina e inibidor de
tripsina presentes em tecidos de S. terebinthifolius e M. urundeuva. Adicionalmente o
estudo confirmou a ação antimicrobiana da infusão da entrecasca de S. terebinthifolius
usada pela população para tratar infecções.
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