Submitted by Fernanda Rodrigues de Lima (fernanda.rlima@ufpe.br) on 2018-10-05T20:39:23Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Leydianne Leite de Siqueira Patriota Queiroz.pdf: 1890707 bytes, checksum: 03464b332cc53d519ebcbeca1662febe (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-11-14T20:11:16Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Leydianne Leite de Siqueira Patriota Queiroz.pdf: 1890707 bytes, checksum: 03464b332cc53d519ebcbeca1662febe (MD5) / Made available in DSpace on 2018-11-14T20:11:17Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Leydianne Leite de Siqueira Patriota Queiroz.pdf: 1890707 bytes, checksum: 03464b332cc53d519ebcbeca1662febe (MD5) Previous issue date: 2017-02-20 / CNPq / Microgramma vacciniifolia (Polypodiaceae, Pteridophyta) é uma planta epífita que possui propriedades medicinais, por exemplo, no tratamento de infecções respiratórias. Lectinas de origem vegetal são capazes de exercer ação imunomoduladora sobre células do sistema imune de mamíferos, através da interação com receptores de superfície celular. Esta dissertação descreve a purificação e caracterização de uma lectina a partir das frondes de M. vacciniifolia (MvFL), assim como a avaliação da sua toxicidade e efeito imunomodulador sobre células mononucleares de sangue periférico (PBMCs) humano. Extrato proteico foi obtido por homogeneização do pó das frondes secas em NaCl 0,15 M (10%, p/v) por 16 h a 25ºC. MvFL foi isolada a partir do extrato através de cromatografia de gel filtração em coluna de Sephadex G-75 seguida de cromatografia de troca iônica utilizando a matriz DEAE-Sephadex A25. A homogeneidade de MvFL foi avaliada por eletroforese em gel de poliacrilamida (PAGE) em condições nativas para proteínas básicas ou ácidas. MvFL foi caracterizada quanto a especificidade de ligação a carboidratos, massa molecular nativa, ponto isoelétrico (pI), composição em subunidades, presença de glicosilação e similaridades na sua estrutura primária com outras proteínas vegetais. A estabilidade da lectina em diferentes valores de pH (3,0–9,0) e após aquecimento a diferentes temperaturas (30–100°C) foi avaliada por ensaio de hemaglutinação e espectrometria de fluorescência. Adicionalmente, MvFL foi avaliada quanto à atividade inibitória de tripsina. Citotoxicidade foi investigada através da avaliação da indução de apoptose/necrose em PBMCs tratados com MvFL (6,25–50μg/mL). A atividade imunomoduladora de MvFL (12,5 μg/mL) sobre PBMCs foi avaliada através da determinação dos níveis de citocinas, quimiocinas e óxido nítrico (NO). Diferenciação e ativação de células T também foram investigadas. MvFL foi isolada com elevada atividade hemaglutinante específica (10.240) e elevado fator de purificação (3.413). Ela foi revelada como uma glicoproteína de pI 4,51 e massa molecular nativa de 54 kDa, sendo composta por 3 subunidades distintas. Espectrometria de massas de peptídeos derivados da hidrólise de MvFL por tripsina revelou similaridades (cobertura de sequência de 32%) com a estrutura primária de uma proteína vegetal ligadora de RNA de Theobroma cacao. A atividade hemaglutinante da lectina foi inibida apenas por glicoproteínas (fetuína e ovoalbumina). O aquecimento de MvFL não afetou a atividade hemaglutinante nem promoveu desenovelamento da lectina. Tanto a atividade hemaglutinante quanto a conformação da lectina variaram dependendo do pH do meio, sendo MvFL menos ativa em pH alcalino. A lectina apresentou atividade inibidora de tripsina (3360,1 U/mg) e não apresentou toxicidade para PBMCs nas concentrações de 6,25 a 25 μg/mL. A lectina promoveu um aumento na produção de TNF-α, IFN-γ, IL-6, IL-10 e NO, bem como estimulou a diferenciação e ativação de linfócitos T CD8+. MvFL não alterou a produção das quimiocinas testadas. Em conclusão, as frondes de M. vacciniifolia contêm uma proteína termoestável e multifuncional, com atividades lectínicas e inibidora de tripsina, baixa toxicidade para linfócitos, ação imunomoduladora sobre PBMCs, induzindo predominantemente uma resposta Th1, e capaz de promover ativação e diferenciação de linfócitos humanos. / Microgramma vacciniifolia (Polypodiaceae, Pteridophyta) is an epiphytic plant that has medicinal properties, for example, in the treatment of respiratory infections. Lectins of plant origin are able to exert immunomodulatory action on cells from mammalian immune system by interacting with cell surface receptors. This work describes the purification and characterization of a lectin from the M. vacciniifolia fronds (MvFL), as well as the evaluation of its toxicity and immunomodulatory effect on human peripheral blood mononuclear cells (PBMCs). Protein extract was obtained by homogenizing the powder of dried fronds in 0.15 M NaCl (10%, w/v) for 16 h at 25°C. MvFL was isolated from the extract by gel filtration chromatography on Sephadex G-75 column followed by ion exchange chromatography using the DEAE-Sephadex A25 matrix. The homogeneity of MvFL was evaluated by polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) under native conditions for basic or acidic proteins. MvFL was characterized in terms of carbohydrate specificity, native molecular mass, isoelectric point (pI), subunit composition, presence of glycosylation and similarities in its primary structure with plant proteins. The stability of the lectin at different pH values (3.0-9.0) and after heating at different temperatures (30-100°C) was evaluated by hemagglutination assay and fluorescence spectrometry. Additionally, MvFL was evaluated for trypsin inhibitory activity. Cytotoxicity was investigated by evaluating the induction of apoptosis/necrosis in PBMCs treated with MvFL (6.25–50 μg/mL). Immunomodulatory activity of MvFL (12.5 μg/mL) on PBMCs was assessed by determining the levels of cytokines, chemokines and nitric oxide (NO). Differentiation and activation of T cells were also investigated. MvFL was isolated with high specific hemagglutinating activity (10,240) and purification factor (3,413). It was revealed as a glycoprotein with pI 4.51 and native molecular weight of 54 kDa, being composed of three distinct subunits. Mass spectrometry of peptides derived from the hydrolysis of MvFL by trypsin revealed similarities (32% sequence coverage) with the primary structure of a RNA-binding protein from Theobroma cacao. The hemagglutinating activity of MvFL was inhibited only by glycoproteins (fetuin and ovalbumin). Heating of MvFL did not affect hemagglutinating activity or promote lectin unfolding. Both the hemagglutinating activity and the conformation of the lectin varied depending on the pH of the medium, with MvFL being less active at alkaline pH. The lectin showed trypsin inhibitory activity (3,360.1 U/mg) and no toxicity to PBMCs at concentrations of 6.25 to 25 μg/mL. The lectin promoted an increase in the production of TNF-α, IFN-γ, IL-6, IL-10 and NO, as well as stimulated the differentiation and activation of T CD8+ lymphocytes. MvFL did not alter the production of the chemokines tested. In conclusion, the fronds of M. vacciniifolia contain a thermostable and multifunctional protein with lectin and trypsin inhibitor activities, low toxicity to lymphocytes, immunomodulatory action on PBMCs, inducing predominantly a Th1 response, as well as able to promote differentiation and activation of human lymphocytes.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:50:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Inibidores de protease são moléculas que têm a capacidade de controlar proteases por bloqueio da atividade catalítica. As proteases participam de importantes eventos fisiológicos tais como a digestão dos alimentos, coagulação sangüínea, e apoptose. A ação dos inibidores é essencial para garantir a homeostase. Artrópodes como insetos e aracnídeos são ricas fontes desses inibidores. O objetivo desse trabalho foi isolar inibidores de proteases presentes na hemolinfa da aranha Lasiodora sp. Hemolinfa foi coletada através de punção cardíaca na presença de anticoagulante. Após centrifugação (800g) o plasma foi separado e utilizado para a detecção de inibidor de tripsina, trombina, fator Xa e XIIa. Cromatografia de afinidade em tripsina-Sepharose resultou no inibidor purificado, porém sem atividade inibitória. Isolamento do inibidor de tripsina foi realizado por cromatografia em coluna de Sephadex G-100 e a preparação contendo atividade inibitória de tripsina foi denominada: inibidor de tripsina bruto. Cromatografia em Mono Q isolou a partir do inibidor de tripsina bruto, o inibidor de tripsina LPTI (do inglês Lasiodora plasma trypsin inhibitor) e uma proteína anticoagulante LPA (do inglês Lasiodora plasma anti-coagulant). Eletroforese em gel de poliacrilamida em presença de sulfato sódico de dodecila revelou massa molecular de 72 kDa para LPTI e LPA. Avaliação de atividade inibitória sobre proteases e do efeito na coagulação através de determinação do tempo de recalcificação, tempo de protrombina (TP) e tempo de tromboplastina parcial ativada (TTPA) revelou que LPTI não interfere na coagulação e LPA, sem atividade inibitória de tripsina, interfere no TTPA. De acordo com nosso conhecimento LPTI e LPA correspondem ao primeiro inibidor de tripsina e a primeira proteína anticoagulante isolados da hemolinfa de aranha. LPTI e LPA podem participar no mecanismo de coagulação da hemolinfa através do controle da produção da protease fenoloxidase, que dispara a cascata, e do controle da atividade de proteases da cascata de coagulação

OLIVEIRA, A. S de. Purificação e caracterização de inibidores de tripsina de sementes de Pithecellobium dumosun e seus efeitos. 222 f. 2007. Tese (Doutorado em Bioquímica)- Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2007. / Submitted by Aline Nascimento (vieiraaline@yahoo.com.br) on 2013-05-20T17:10:50Z No. of bitstreams: 1 2007_tes_asdeoliveira.pdf: 3337963 bytes, checksum: d6b49c9e4081b7dc7967d8be3fb8d65b (MD5) / Rejected by Aline Nascimento(vieiraaline@yahoo.com.br), reason: descrição on 2013-05-20T19:18:25Z (GMT) / Submitted by Aline Nascimento (vieiraaline@yahoo.com.br) on 2013-05-20T19:18:50Z No. of bitstreams: 1 2007_tes_asdeoliveira.pdf: 3337963 bytes, checksum: d6b49c9e4081b7dc7967d8be3fb8d65b (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Nascimento(vieiraaline@yahoo.com.br) on 2013-05-20T19:19:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007_tes_asdeoliveira.pdf: 3337963 bytes, checksum: d6b49c9e4081b7dc7967d8be3fb8d65b (MD5) / Made available in DSpace on 2013-05-20T19:19:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007_tes_asdeoliveira.pdf: 3337963 bytes, checksum: d6b49c9e4081b7dc7967d8be3fb8d65b (MD5) Previous issue date: 2007 / Five Kunitz-type trypsin inhibitors (JB1, JB2, JB3-1, JB3-2 and JB4) were purified from Pithecellobium dumosum seeds, a tree of the sub-family Mimosoideae, by TCA precipitation, affinity chromatography on immobilized trypsin-Sepharose and reverse phase HPLC using Vydac C-18 column. The five inhibitors had Mr between 18 and 20 kDa with a single polypeptide chain as determined by SDS-PAGE with and without reduction. JB1, JB3-1 and JB3-2 had Mr of 19.70, 19.69 and 19.69 kDa, respectively, by MALDI-TOF. JB2 and JB4 had Mr of 18.08 and 20.85, respectively, by SDS-PAGE. The N-terminal sequences of JB1, JB3-1 and JB3-2 showed identity with others Kunitz-type inhibitors. The five inhibitors were stable over a wide range of temperature and pH. The inhibition of trypsin by JB1, JB2 and JB4 was competitive. JB1, JB2, JB3-1 and JB3-2 showed Ki values of 3.56 x 10-8 M, 1.65 x 10-8 M, 4.20 x 10-8 M, 2.88 x 10-8 M, respectively, against bovine trypsin. In comparison with others inhibitors JB4, with Ki of 5.70 x 10-10 M, showed a high affinity toward trypsin. Among the inhibitors purified only JB4 inhibited chymotrypsin activity. The activities of elastase and bromelain were not inhibited for these inhibitors. The inhibition of JB1, JB2, JB3-1 and JB3-2 on papain varied between 32.93 to 48.82% of inhibition and was indicative of its bifunctionality with exception of JB4 that inhibited this activity in 9.9%. The papain inhibition by JB1 and JB2 were noncompetitive type and the Kivalues were 7.6 x 10-7 and 5.1 x 10-7 M, respectively. In vitro assays against digestive proteinases from Lepidoptera, Diptera and Coleoptera pests were carried out. These inhibitors were effective towards trypsin-like digestive enzymes of the insect in different degrees. The digestive enzymes from Zabrotes subfasciatus and Ceratitis capitata were inhibited by JB1 in 68.87 and 65.53% respectively, and Callosobruchus maculatus, Alabama argillaceae and Plodia intepunctella enzymes were inhibited in the range of 29.18 to 44.35%. Digestive enzymes from Z. subfasciatus, C. maculatus and C. capitata were inhibited by JB2 in the range of 70.04 to 74.54%, and the enzymes of A. argillaceae and P. intepunctella were suppressed in 13.58 and 48.67%, respectively. Trypsin-like activities of larval from Z. subfasciatus were suppressed in 67.33 and 56.93% by JB3-1 and JB3-2, respectively, and the activities of C. maculatus, A. argillaceae, P. intepunctella and C. capitata were inhibited by these inhibitors in the range of 5.17-49.00%. JB4 inhibited around 54.53 to 66.15% the digestive enzymes of C. maculatus, Z. subfasciatus and A. argillaceae and the digestive enzymes from P. intepunctella and C. capitata larvae in 8.97% and 37.47%, respectively. The inhibition of trypsin-like and papain-like proteinases of several insects suggested that these inhibitors may affect the growth and survival of these insect pests when incorporated into artificial diet and their bifunctionality are indicative that these inhibitors could be strong candidates to plant management programs cross transgenia. / Cinco inibidores de tripsina da família Kunitz (JB1, JB2, JB3-1, JB3-2 e JB4) foram purificados de sementes de Pithecellobium dumosum, uma árvore da subfamília Mimosoideae, por precipitação com ácido tricloroácetico (TCA), cromatografia de afinidade sobre tripsina imobilizada em Sepharose e coluna de fase reversa em sistema de CLAE. Os cinco inibidores possuem massa molecular entre 18 e 20 kDa formados por uma cadeia polipeptídica como determinado por SDS-PAGE na presença ou ausência de -mercaptoetanol. JB1, JB3-1 e JB3-2 têm massas moleculares de 19,70, 19,69 e 19,69 kDa, respectivamente, por MALDI-TOF. JB2 e JB4 têm massa molecular de 18,08 e 20,85 kDa, respectivamente. A seqüência N-terminal de JB1, JB3-1 e JB3-2 mostrou identidade com outros inibidores da família Kunitz. Os cinco inibidores foram estáveis às variações de temperatura e pH. A inibição da tripsina por JB1, JB2 e JB4 foi do tipo competitivo. JB1, JB2, JB3-1 e JB3-2 tiveram Kis de 3,56 x 10-8 M, 1,65 x 10-8 M, 4,20 x10-8 M, 2,88 x 10-8 M, respectivamente para a tripsina bovina. Em comparação com os outros inibidores JB4, com Ki de 5,70 x 10-10 M, apresentou maior afinidade para tripsina. Entre os inibidores purificados apenas JB4 inibiu moderadamente a atividade da quimotripsina. A atividade da elastase e bromelaína não foi inibida efetivamente por esses inibidores. A inibição de JB1, JB2, JB3-1 e JB3-2 sobre a papaína variaram entre 32,93 a 48,82% e foi indicativo de sua bifuncionalidade, com exceção de JB4 que inibiu fracamente essa atividade (9,93% de inibição). A inibição da papaína por JB1 e JB2 foi do tipo não competitiva e os valores de Ki foram de 7,6 x 10-7 e 5,1 x 10-7 M, respectivamente. Ensaios in vitro sobre as proteinases digestórias de Lepidoptera, Diptera e Coleoptera foram feitos. Esses inibidores foram efetivos para enzimas digestórias semelhantes à tripsina desses insetos em diferentes graus. As enzimas digestivas de Zabrotes subfasciatus e Ceratitis capitata foram inibidas por JB1 em 68,87 e 65,53%, respectivamente, e as enzimas de Callosobruchus maculatus, Alabama argillaceae e Plodia interpunctella foram inibidas entre 29,18 e 44,35%. Enzimas digestórias de Z. subfasciatus, C. maculatus e C. capitata foram inibidas por JB2 entre 70,04 e 74,54% e as enzimas de larvas de A argillaceae e P. interpunctella foram suprimidas em 13,58 e 48,67%, respectivamente. A atividade semelhante à tripsina de larvas de Z. subfasciatus foi suprimida em 67,33 e 56,93% por JB3-1 e JB3-2, respectivamente, e a atividade de C. maculatus, A argillaceae, P. interpunctella e C. capitata foram suprimidas por esses inibidores entre 5,17 e 49,00%. JB4 inibiu entre 54,53 a 66,15 % as enzimas digestivas de C. maculatus, Z. subfasciatus e A argillaceae e inibiu as enzimas digestivas de larvas de P. intepunctella e C. capitata em 8,97 e 37,47%, respectivamente. A inibição de proteinases semelhantes à tripsina e à papaína presentes no intestino de vários insetos sugere que esses inibidores possam afetar o crescimento e sobrevivência desses insetos pragas quando incorporados em sementes artificiais e esta bifuncionalidade é indicativo de que estes inibidores possam ser fortes candidatos para os programas de melhoramento de plantas via transgenia.

ALMEIDA FILHO, L. C. P. Efeito de inibidores de tripsina obtidos de sementes de Leucaena leucocephala (Lam) R. de Witt sobre o desenvolvimento de Aedes aegypti. 2013. 93 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2013. / Submitted by Daniel Eduardo Alencar da Silva (dealencar.silva@gmail.com) on 2015-01-07T19:53:22Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_lcpafilho.pdf: 1557437 bytes, checksum: 52850a797f2df3dd2adc5ccac27318ca (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2016-01-29T20:17:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_lcpafilho.pdf: 1557437 bytes, checksum: 52850a797f2df3dd2adc5ccac27318ca (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-29T20:17:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_lcpafilho.pdf: 1557437 bytes, checksum: 52850a797f2df3dd2adc5ccac27318ca (MD5) Previous issue date: 2013 / Dengue fever is currently the most important arboviral disease in the world, being widely distributed among the continents and having increased incidence areas due to climate change. One of the reasons that makes it so important is the absence of an effective vaccine against the four virus serotypes. So, to control this disease is necessary to fight the disease vector, the mosquito Aedes aegypti. Nowadays, health programs use synthetic insecticides to control the mosquito populations. However, the emergence of resistant populations to these insecticides is an obstacle to combating this mosquito. Thus, it is necessary to search for new insecticides or molecules capable of enhancing the toxic effect of current insecticides. The present study aimed to obtain trypsin inhibitors from Leucaena leucocephala seeds and evaluate the insecticidal potential of these molecules against Ae. aegypti larvae survival and development. For this, the proteins of L. leucocephala seeds were extracted, fractionated and subjected to anhydrotrypsin affinity chromatography to obtain a trypsin-enriched fraction (called sLlTi), which was biochemically characterized and used at a concentration of 0.3 mg/mL in assays of larvae development. Biochemical characterization of sLlTi concluded that the inhibitors are heat resistant (the activity was retained after heating for 30 min at 100 ° C), showed considerable resistance to the reducing agent DTT and reduction of their inhibitory activity against trypsin was demonstrated only when incubated with 100 mM DTT for 120 min. The inhibitor is also resistant to pH changes in a range from 2 to 10. The reverse zymograms revealed the presence of protein bands with apparent mass near 20 kDa. Biological testing in vitro showed that the sLlTi showed trypsin inhibitory activity greater than 90% and that sLlTi is also capable to inhibit Ae. aegypti digestive enzymes by 70%. After two-dimensional electrophoresis isoforms with pI ranging from 4 to 7, approximately, were observed. These inhibitors were able to inhibit proteases of Ae. aegypti in vivo by 56%, and was capable to delay the larval development after incubation for 10 days. Thus, sLlTi contains proteins with promising insecticidal action against dengue vector. / A dengue é considerada, hoje, a arbovirose mais importante do mundo, tendo distribuição e ressurgência em todos os continentes e aumento das áreas de incidência devido às mudanças climáticas. Um dos motivos que a torna tão importante é ausência de uma vacina eficaz para os quatro sorotipos do vírus. Assim, para o controle dessa doença é necessário que haja o combate ao vetor, o mosquito Aedes aegypti. Os atuais programas de combate ao mosquito dispõem de inseticidas sintéticos, contudo o surgimento de populações resistentes a esses inseticidas representa um entrave ao combate deste mosquito. Desta forma, torna-se necessária a busca por novas moléculas inseticidas ou capazes de potencializar o efeito tóxico dos inseticidas atuais. Assim, o presente trabalho teve por objetivo a obtenção de inibidores de tripsina de sementes de Leucaena leucocephala e avaliação do potencial inseticida dessas moléculas sobre as larvas do mosquito Ae. aegypti. Para isso, as proteínas presentes nas sementes de L. leucocephala foram extraídas, fracionadas e submetidas à cromatografia de afinidade a anidrotripsina acoplada a sepharose 4B, para a obtenção de uma fração rica em inibidores de tripsina denominada sLlTi, a qual foi caracterizada bioquimicamente e utilizada em concentração de 0,3 mg/mL nos ensaios de desenvolvimento das larvas do mosquito. A caracterização bioquímica do sLlTi permitiu concluir que os inibidores são termorresistentes (a atividade foi mantida após aquecimento por 30 min. a 100 °C), apresentam considerável resistência ao agente redutor (DTT), tendo decaimento da sua atividade inibitória frente a tripsina apenas quando incubado com 100 mM de DTT por 120 min, o mesmo, também, é resistente às variações de pH na faixa de 2 a 10. Os zimogramas reversos revelaram a presença de bandas proteicas com massa molecular aparente de 20 kDa. Testes biológicos in vitro mostraram que o sLlTi apresenta atividade inibitória superior a 90% frente a tripsina e 70% frente ao homogenato intestinal de larvas de Ae. aegypti. Após a realização de eletroforese bidimensional, foi possível a visualização de isoformas com pI entre 4 e 7, aproximadamente. Esses inibidores são capazes de inibir as proteases de larvas de Ae. aegypti in vivo em 56%, causando retardo no desenvolvimento e cerca de 70% de mortalidade. Assim, o sLlTi possui potencial ação inseticida contra o mosquito vetor da dengue.

Submitted by Jean Medeiros (jeanletras@uepb.edu.br) on 2016-03-09T13:28:58Z No. of bitstreams: 1 PDF - Géssica Laize Berto Gomes.pdf: 960450 bytes, checksum: 01f35541007decb425986338cf77d27a (MD5) / Approved for entry into archive by Secta BC (secta.csu.bc@uepb.edu.br) on 2016-07-21T21:00:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 PDF - Géssica Laize Berto Gomes.pdf: 960450 bytes, checksum: 01f35541007decb425986338cf77d27a (MD5) / Approved for entry into archive by Secta BC (secta.csu.bc@uepb.edu.br) on 2016-07-21T21:01:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 PDF - Géssica Laize Berto Gomes.pdf: 960450 bytes, checksum: 01f35541007decb425986338cf77d27a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-21T21:01:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PDF - Géssica Laize Berto Gomes.pdf: 960450 bytes, checksum: 01f35541007decb425986338cf77d27a (MD5) Previous issue date: 2014-02-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The Brazilian production of grains has grown every year, transforming Brazil in one of the main cereals and oilseeds producers. However, the post-harvest losses are huge, causing production loss by the inadequacy of storage, especially in order of pest occurrence. In the case of sesame, there has been a marked occurrence of P. interpuctella, which attack stored grains accompanied by other pests causing economic damage to the crop. With this, the Breeding Program Sesame Embrapa Cotton seeks alternatives to control these pests by genotypes that express high levels of protein inhibitors (PIs) with ability to inhibit proteolytic digestive enzymes of insects. The objective of this study was to detect trypsin inhibitors in genotypes of sesame (S. indicum L.) with potential use in biotechnological applications and programs to improve the species, aiming selection of genotypes resistant to stored grain pests, so we proceeded to study PIs in 10 sesame genotypes belonging to the Active Germplasm Bank at Embrapa Cotton. The total protein extracts of accessions were extracted and tested in vitro with bovine pancreatic trypsin (BPT) and intestinal homogenate of larvae of P. interpuctella. After selection of the most promising genotypes, we proceeded to a protein fractionation with ammonium sulfate. The protein fractions obtained were analyzed for inhibitory activity with BPT and intestinal homogenate of larvae of P. interpuctella, and yet, as the thermal stability and hydrogen ion and bioassays with P. interpuctella. Data were analyzed by Tukey test at 5% of probability. The results showed the presence of trypsin inhibitors in the total protein extracts of 10 sesame genotypes, ranging from 51% to 90% inhibition, among which, the BRS-SEDA, CNPA G3 and CNPA G4 stood out with 87%, 88% and 90% inhibition, respectively. These genotypes inhibitory activity have been demonstrated for the intestinal homogenate of larvae of P. interpuctella, with inhibition between 60% and 76%. The fractions F2 of the three genotypes were relatively stable to changes in temperature and pH. In the bioassay, the larvae of P. interpuctella. were susceptible to protein extracts of the three genotypes of sesame, with a maximum of 83% mortality of larvae in different strengths with total protein extracts and 58% in fractions F2, however, did not observe statistically a significant difference between genotypes. In this regard, BRS-SEDA, CNPA G3 and CNPA G4 have protein inhibitors that can prevent the development of P. interpuctella, suggesting candidates with potent insecticidal properties to control stored grain pests. / A produção brasileira de grãos tem crescido a cada ano levando o Brasil a um dos principais produtores de cereais e oleaginosas. No entanto, as perdas na pós-colheita são enormes provocando uma redução da produção em função do controle inadequado no armazenamento, especialmente em função da ocorrência de pragas. No caso do gergelim, tem havido uma ocorrência acentuada de P. interpuctella, que ataca os grãos armazenados acompanhado de outras pragas, causando danos econômicos à cultura. Com isto, o Programa de Melhoramento Genético de Gergelim da Embrapa Algodão busca alternativas para controlar essas pragas, por meio de genótipos que expressem altos níveis de inibidores proteicos (IPs) com capacidade de inibir enzimas proteolíticas digestivas de insetos. Objetivou-se com este trabalho detectar inibidores de tripsina em genótipos de gergelim (Sesamum indicum L.) com potencial uso na aplicação biotecnológica e no programa de melhoramento da espécie, visando seleção de genótipos resistentes a pragas de grãos armazenados. Assim, procedeu-se o estudo de IPs em 10 genótipos de gergelim, pertencentes ao Banco Ativo de Germoplasma da Embrapa Algodão. Os extratos proteicos totais dos acessos foram extraídos de sementes de gergelim e testados in vitro com tripsina pancreática bovina (TPB) e homogenato intestinal de larvas de P. interpuctella. Após seleção dos genótipos mais promissores, procedeu-se um fracionamento proteico com sulfato de amônia. As frações proteicas obtidas foram analisadas quanto a atividade inibitória com TPB e homogenato intestinal de larvas de P. interpuctella, e ainda, quanto a estabilidade térmica e hidrogeniônica e em bioensaios com P. interpuctella. Os dados foram analisados pelo teste de Tukey a 5% de probalibilidade. Os resultados obtidos mostraram a presença de inibidores de tripsina nos extratos proteicos totais dos 10 genótipos de gergelim, com variação de 51% a 90% de inibição, dentre os quais, o BRS-SEDA, CNPA G3 e CNPA G4 se destacaram com 87%, 88% e 90% de inibição, respectivamente. Nesses genótipos foram evidenciadas atividade inibitória para o homogenato intestinal de larvas de P. interpuctella, com inibição entre 60% e 76%. As frações F2 dos três genótipos foram relativamente estáveis às variações de temperatura e pH. No ensaio biológico, as larvas de P interpuctella mostraram-se suscetíveis aos extratos proteicos dos três genótipos de gergelim, com mortalidade máxima de 83% das larvas em diferentes dosagens com extratos proteicos totais e 58% nas frações F2, contudo, estatisticamente não observou-se diferença significativa entre os genótipos. Neste aspecto, os genótipos BRS-SEDA, CNPA G3 e CNPA G4 possuem inibidores proteicos capazes de impedir o desenvolvimento P. interpuctella, o que sugere potentes candidatos com propriedades inseticidas no controle de pragas de grãos armazenados.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:51:46Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo3107_1.pdf: 1671474 bytes, checksum: 24bd8cb473e30b625f220e29f8df13a5 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Dengue é uma arbovirose transmitida pelo Aedes aegypti e o controle do mosquito é fundamental para reduzir a propagação da doença. As larvas de A. aegypti têm desenvolvido resistência a inseticidas organofosforados. O uso de compostos naturais que promovam mortalidade pode evitar a emergência de larvas resistentes, devido à rotatividade dos inseticidas. Este trabalho relata a atividade larvicida (CL50 de 0.925%, p/v) do extrato de flores de Moringa oleifera sobre o quarto instar larval (L4) de A. aegypti. Inibidor de tripsina de natureza protéica (MoFTI, 169,9 kDa, Ki: 0,38 nM), triterpeno (β-amirina), esteróide (β- sitosterol) e flavonóides (kaempferol e quercetina) foram detectados no extrato; lectina não foi detectada. Tripsina do extrato do intestino de L4 foi inibida por MoFTI (Ki: 0,6 nM); entretanto, a atividade de acetilcolinesterase (AChE) do extrato de L4 inteiras não foi alterada. Ensaio em condições in vivo mostrou que a atividade de tripsina do intestino de L4 tratadas com o extrato de flores de M. oleifera diminuiu ao longo do tempo (0 a 1440 min) e foi fortemente inibida (98,6 %) após 310 min de incubação; a atividade de AChE do extrato de L4 inteiras não foi afetada neste período. O estudo aponta o extrato de flores de M. oleifera como uma ferramenta biodegradável para o controle de larvas de A. aegypti e sugere que o mecanismo larvicida envolve a inibição da tripsina do intestino das L4 por MoFTI

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:52:03Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo3131_1.pdf: 596856 bytes, checksum: 6ecd36106eae78833584c1e83095f1fe (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação de Amparo à Ciência e Tecnologia do Estado de Pernambuco / Tilápia do Nilo (Oreochromis niloticus) é um dos peixes mais populares de criação no mundo, tem excelente adaptação e reprodução em ambientes lênticos e possui filé de alta qualidade. Além das peças limpas e comestíveis do pescado, há uma quantidade substancial de resíduos de peixe. Muitas vezes, esse remanescente de resíduos é despejado em rios, causando um desequilíbrio ambiental. Carcaças e vísceras de tilápia têm um alto valor protéico a ser usado na produção de alimentos para organismos aquáticos. A utilização de resíduos de pescado diminui o risco de poluição ambiental e gera receitas econômicas. Estudos mostraram que os resíduos podem ser usados na recuperação de compostos úteis, incluindo proteínas que têm atividade antimicrobiana. O presente trabalho relata a presença de inibidor de tripsina de tilápia no fígado, estômago e intestino, bem como a purificação do inibidor de tripsina O. niloticus (OnTI) e atividade antibacteriana do fígado, víscera de maior atividade inibidora de tripsina específica. As vísceras foram separadas e homogeneizadas com 0,15 M NaCl e os homogeneizados foram tratados com sulfato de amônio. Concentrações de proteínas das frações dos precipitados e sobrenadantes foram dosadas, aquecida a 80 ° C por 1 h, e avaliadas quanto à atividade do inibidor de tripsina. O precipitado da fração 20-40% de fígado (LF20-40) de alta atividade inibidora de tripsina específica foi utilizado para purificação do inibidor e em testes de atividade antibacteriana; sendo determinadas as concentrações inibitórias mínima (CIM) e bactericidas (CBM). Frações de sulfato de amônio de fígado e estômago apresentaram atividade do inibidor de tripsina superior às frações de intestino. O. niloticus inibidor de tripsina (OnTI) ligado à coluna Tripsina-Agarose foi eluído com 0,5 M KCl-HCl pH 2,0. OnTI apresentou atividade específica de 950 U / mg e duas bandas de proteínas em SDS-PAGE. A atividade antibacteriana sobre S. aureus foi detectada pela LF20-40 (MIC: 0,09 mg / mL; MBC: 0,76 mg / mL), a fração também foi capaz de inibir o crescimento de K. pneumoniae (MIC: 1,53 mg / mL), mas não apresentou atividade antibacteriana contra E. coli. Os resultados revelaram que o fígado e estômago de tilápia contem inibidor de tripsina. O efeito da preparação do fígado de tilápia sobre S. aureus e K. pneumoniae, indica que esta víscera, normalmente descartada como resíduo, é uma fonte potencial de agentes antibacterianos

Made available in DSpace on 2015-09-25T12:21:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PDF - Patricia de Lima Martins.pdf: 1012001 bytes, checksum: ab70117935599ee610a03aabf8bc94dd (MD5) Previous issue date: 2013-03-19 / Peanut (Arachis hypogaea L.) is an oilseed very expressive worldwide, due to commercial value of its oil. In Brazil, crop is grown in all regions, in order to attend in natura and food markets. The post-harvest is serious problem that affect the final output of the crop, which in inappropriate conditions, lead to occurrence of pests in stored grains. Some legumes contain protease inhibitors (PI) in their seeds that act directly in defense against grain pests, causing damage in nutrient absorption and further death. The objective of this study was to detect the presence of trypsin inhibitors in peanut genotypes and to study the potential inhibition against digestive enzymes in Alphitobius diaperinus and other agricultural pests. PI detection was carried out in 10 peanut genotypes belonging to Improvement Program at Embrapa Algodão (Campina Grande, PB, Brazil). Total proteins from seeds were extracted in each accession, quantified, fractionated with ammonium sulfate, and submitted thermal stability and pH tests, for further assays. All peanut genotypes showed PI in seed-protein extracts, however the highest inhibition rate for digestive enzymes of A. diaperinus was found in L7 BRS 151, which also reduced the number of larvae, in bioassay. The CNPA AM 280 showed the highest inhibition rate in both assays, bovine trypsin and intestinal homogenate of A. diaperinus. This genotype was also highly stable in different pH and temperature assays and inhibited the intestinal serine proteases from Spodoptera frugiperda, Tenebrio molitor and Tribolium castaneum, in 16%, 42% and 82% respectively. The results obtained in this study are quite relevant due to contribute with the reduction of grain losses in post-harvest, considering that genotypes investigated here have interesting traits for further use as genetic resources with resistance to pests. / O amendoim (Arachis hypogaea L.) é uma oleaginosa expressiva no cenário mundial, devido ao valor comercial de seu óleo. No Brasil, é cultivado em todas as regiões, para atender aos mercados in natura e de alimentos. Um dos problemas detectado na lavoura é na fase de pós-colheita, que, em condições inapropriadas levam a ocorrência de pragas nos grãos armazenados. Sabe-se, contudo, que algumas leguminosas detêm em suas sementes os inibidores de proteases (IP) que atuam na defesa direta contra pragas de grãos, provocando prejuízos na absorção de nutrientes e até mesmo a sua morte. Objetivou-se com este trabalho detectar a presença de inibidores de tripsina em genótipos de amendoim e estudar o potencial de inibição contra as enzimas digestivas de Alphitobius diaperinus e outros insetos de interesse agronômico. Para tanto, procedeu-se a detecção de IPs em 10 genótipos de amendoim pertencentes ao Programa de Melhoramento da Embrapa Algodão. As proteínas totais de sementes de cada acesso foram extraídas, quantificadas, fracionadas com sulfato de amônio, e submetidas a testes de estabilidade térmica e de pH, para posteriores ensaios in vitro e bioensaios. Os resultados obtidos evidenciaram a presença de inibidores de tripsina nos extratos proteicos das sementes de amendoim dos dez genótipos, contudo o BRS 151 L7 apresentou a maior inibição in vitro para as enzimas do trato digestivo do A. diaperinus e o menor número de larvas no bioensaio. A F3 do genótipo CNPA 280 AM apresentou o maior percentual de inibição tanto nos ensaios com tripsina bovina como no homogenato intestinal de A. diaperinus, e foi altamente estável nos ensaios com diferentes pHs e temperaturas. Destacou-se ainda por inibir em 16%, 42% e 82% as tripsinas intestinais de Spodoptera frugiperda, Tenebrio molitor e Tribolium castaneum, respectivamente. Os resultados obtidos nesta pesquisa são bastante relevantes para contribuir com a redução de perdas de grãos no período de pós-colheita, tendo em vista que os genótipos investigados possuem características interessantes para posterior uso como recurso genético com fonte de resistência a insetos-praga.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de NÃvel Superior / Cinco inibidores de tripsina da famÃlia Kunitz (JB1, JB2, JB3-1, JB3-2 e JB4) foram purificados de sementes de Pithecellobium dumosum, uma Ãrvore da subfamÃlia Mimosoideae, por precipitaÃÃo com Ãcido tricloroÃcetico (TCA), cromatografia de afinidade sobre tripsina imobilizada em Sepharose e coluna de fase reversa em sistema de CLAE. Os cinco inibidores possuem massa molecular entre 18 e 20 kDa formados por uma cadeia polipeptÃdica como determinado por SDS-PAGE na presenÃa ou ausÃncia de -mercaptoetanol. JB1, JB3-1 e JB3-2 tÃm massas moleculares de 19,70, 19,69 e 19,69 kDa, respectivamente, por MALDI-TOF. JB2 e JB4 tÃm massa molecular de 18,08 e 20,85 kDa, respectivamente. A seqÃÃncia N-terminal de JB1, JB3-1 e JB3-2 mostrou identidade com outros inibidores da famÃlia Kunitz. Os cinco inibidores foram estÃveis Ãs variaÃÃes de temperatura e pH. A inibiÃÃo da tripsina por JB1, JB2 e JB4 foi do tipo competitivo. JB1, JB2, JB3-1 e JB3-2 tiveram Kis de 3,56 x 10-8 M, 1,65 x 10-8 M, 4,20 x10-8 M, 2,88 x 10-8 M, respectivamente para a tripsina bovina. Em comparaÃÃo com os outros inibidores JB4, com Ki de 5,70 x 10-10 M, apresentou maior afinidade para tripsina. Entre os inibidores purificados apenas JB4 inibiu moderadamente a atividade da quimotripsina. A atividade da elastase e bromelaÃna nÃo foi inibida efetivamente por esses inibidores. A inibiÃÃo de JB1, JB2, JB3-1 e JB3-2 sobre a papaÃna variaram entre 32,93 a 48,82% e foi indicativo de sua bifuncionalidade, com exceÃÃo de JB4 que inibiu fracamente essa atividade (9,93% de inibiÃÃo). A inibiÃÃo da papaÃna por JB1 e JB2 foi do tipo nÃo competitiva e os valores de Ki foram de 7,6 x 10-7 e 5,1 x 10-7 M, respectivamente. Ensaios in vitro sobre as proteinases digestÃrias de Lepidoptera, Diptera e Coleoptera foram feitos. Esses inibidores foram efetivos para enzimas digestÃrias semelhantes à tripsina desses insetos em diferentes graus. As enzimas digestivas de Zabrotes subfasciatus e Ceratitis capitata foram inibidas por JB1 em 68,87 e 65,53%, respectivamente, e as enzimas de Callosobruchus maculatus, Alabama argillaceae e Plodia interpunctella foram inibidas entre 29,18 e 44,35%. Enzimas digestÃrias de Z. subfasciatus, C. maculatus e C. capitata foram inibidas por JB2 entre 70,04 e 74,54% e as enzimas de larvas de A argillaceae e P. interpunctella foram suprimidas em 13,58 e 48,67%, respectivamente. A atividade semelhante à tripsina de larvas de Z. subfasciatus foi suprimida em 67,33 e 56,93% por JB3-1 e JB3-2, respectivamente, e a atividade de C. maculatus, A argillaceae, P. interpunctella e C. capitata foram suprimidas por esses inibidores entre 5,17 e 49,00%. JB4 inibiu entre 54,53 a 66,15 % as enzimas digestivas de C. maculatus, Z. subfasciatus e A argillaceae e inibiu as enzimas digestivas de larvas de P. intepunctella e C. capitata em 8,97 e 37,47%, respectivamente. A inibiÃÃo de proteinases semelhantes à tripsina e à papaÃna presentes no intestino de vÃrios insetos sugere que esses inibidores possam afetar o crescimento e sobrevivÃncia desses insetos pragas quando incorporados em sementes artificiais e esta bifuncionalidade à indicativo de que estes inibidores possam ser fortes candidatos para os programas de melhoramento de plantas via transgenia. / Five Kunitz-type trypsin inhibitors (JB1, JB2, JB3-1, JB3-2 and JB4) were purified from Pithecellobium dumosum seeds, a tree of the sub-family Mimosoideae, by TCA precipitation, affinity chromatography on immobilized trypsin-Sepharose and reverse phase HPLC using Vydac C-18 column. The five inhibitors had Mr between 18 and 20 kDa with a single polypeptide chain as determined by SDS-PAGE with and without reduction. JB1, JB3-1 and JB3-2 had Mr of 19.70, 19.69 and 19.69 kDa, respectively, by MALDI-TOF. JB2 and JB4 had Mr of 18.08 and 20.85, respectively, by SDS-PAGE. The N-terminal sequences of JB1, JB3-1 and JB3-2 showed identity with others Kunitz-type inhibitors. The five inhibitors were stable over a wide range of temperature and pH. The inhibition of trypsin by JB1, JB2 and JB4 was competitive. JB1, JB2, JB3-1 and JB3-2 showed Ki values of 3.56 x 10-8 M, 1.65 x 10-8 M, 4.20 x 10-8 M, 2.88 x 10-8 M, respectively, against bovine trypsin. In comparison with others inhibitors JB4, with Ki of 5.70 x 10-10 M, showed a high affinity toward trypsin. Among the inhibitors purified only JB4 inhibited chymotrypsin activity. The activities of elastase and bromelain were not inhibited for these inhibitors. The inhibition of JB1, JB2, JB3-1 and JB3-2 on papain varied between 32.93 to 48.82% of inhibition and was indicative of its bifunctionality with exception of JB4 that inhibited this activity in 9.9%. The papain inhibition by JB1 and JB2 were noncompetitive type and the Kivalues were 7.6 x 10-7 and 5.1 x 10-7 M, respectively. In vitro assays against digestive proteinases from Lepidoptera, Diptera and Coleoptera pests were carried out. These inhibitors were effective towards trypsin-like digestive enzymes of the insect in different degrees. The digestive enzymes from Zabrotes subfasciatus and Ceratitis capitata were inhibited by JB1 in 68.87 and 65.53% respectively, and Callosobruchus maculatus, Alabama argillaceae and Plodia intepunctella enzymes were inhibited in the range of 29.18 to 44.35%. Digestive enzymes from Z. subfasciatus, C. maculatus and C. capitata were inhibited by JB2 in the range of 70.04 to 74.54%, and the enzymes of A. argillaceae and P. intepunctella were suppressed in 13.58 and 48.67%, respectively. Trypsin-like activities of larval from Z. subfasciatus were suppressed in 67.33 and 56.93% by JB3-1 and JB3-2, respectively, and the activities of C. maculatus, A. argillaceae, P. intepunctella and C. capitata were inhibited by these inhibitors in the range of 5.17-49.00%. JB4 inhibited around 54.53 to 66.15% the digestive enzymes of C. maculatus, Z. subfasciatus and A. argillaceae and the digestive enzymes from P. intepunctella and C. capitata larvae in 8.97% and 37.47%, respectively. The inhibition of trypsin-like and papain-like proteinases of several insects suggested that these inhibitors may affect the growth and survival of these insect pests when incorporated into artificial diet and their bifunctionality are indicative that these inhibitors could be strong candidates to plant management programs cross transgenia.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2017-11-06T20:54:56Z No. of bitstreams: 1 IzaelDeSousaCosta_DISSERT.pdf: 1172471 bytes, checksum: 10b2fd67da0043eb1fc836fa80793180 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2017-11-20T22:08:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 IzaelDeSousaCosta_DISSERT.pdf: 1172471 bytes, checksum: 10b2fd67da0043eb1fc836fa80793180 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-20T22:08:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 IzaelDeSousaCosta_DISSERT.pdf: 1172471 bytes, checksum: 10b2fd67da0043eb1fc836fa80793180 (MD5) Previous issue date: 2017-08-25 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (CAPES) / A obesidade ? uma epidemia mundial que pode ocorrer por fatores gen?ticos, ambientais e metab?licos / hormonais. Entre os fatores hormonais, sabe-se que, em humanos ou animais, em estado de obesidade, esses apresentam respostas alteradas a determinados horm?nios quando comparados aos eutr?ficos. Por ser uma condi??o de causas multifatoriais, seu tratamento, ocorre por diversas maneiras; entre elas, vem sendo estudada a utiliza??o de inibidores de tripsina. Neste estudo foi avaliado o efeito do ITT como secretagogo de CCK e seu sinergismo sobre leptina em ratos Wistar com obesidade. Inicialmente, ratos Wistar foram classificados quando ao estado nutricional zoom?trico. O estudo foi conduzido com quatro grupos de ratos Wistar, divididos em tr?s grupos de animais com obesidade e um grupo com animais eutr?ficos (n total=20), sendo utilizadas as dietas comercial padr?o (Labina?) e experimental de alto ?ndice glic?mico e alta carga glic?mica (Dieta HGLI), a mesma utilizada para indu??o da obesidade. O ITT (25 mg / Kg de peso) e a Labina? foram utilizadas como tratamentos para dois dos grupos de animais com obesidade, durante dez dias. Aos grupos com obesidade foram administradas: Dieta padr?o mais ?gua (Obeso / Dieta padr?o); Dieta HGLI mais ?gua (Obeso / Dieta HGLI); Dieta HGLI mais ITT (Obeso / Dieta HGLI + ITT); enquanto aos animais eutr?ficos foi oferecida a dieta comercial Labina? (Eutr?fico / Dieta padr?o). Foram verificadas, ao longo desse per?odo, o efeito do ITT sobre o estado nutricional zoom?trico, as concentra??es plasm?ticas de CCK e leptina e a express?o de genes relacionados a CCK em intestino e do gene ob da leptina em gordura subcut?nea. Observou-se que todos os grupos mantiveram seus estados nutricionais de acordo com o ?ndice de Lee por?m os ratos que passaram pelo tratamento com o ITT foram os ?nicos a apresentar uma discreta redu??o desse ?ndice mas, sem signific?ncia estat?stica. O ITT n?o alterou a CCK plasm?tica, n?o tendo sido observadas diferen?as estat?sticas entre os valores de express?o relativa de mRNA para o receptor de CCK-2R e a enzima PCSK1. O tratamento com o ITT aumentou a express?o relativa de mRNA de CCK-1R, assim como ocorreu no grupo sem tratamento que consumia a dieta HGLI, no entanto foi diferente, estatisticamente, dos animais eutr?ficos (p = 0.028). Ademais, foi observado que 60% dos animais, tratados com o ITT, apresentaram concentra??es plasm?ticas de leptina abaixo de 0,1 ng/?L, enquanto aqueles tratados com dieta padr?o, apenas 20% se encontravam nessa condi??o. Tal fato n?o foi observado no grupo eutr?fico e com obesidade. Ainda, relacionado ao efeito do ITT, esse n?o foi capaz de reduzir a express?o relativa de mRNA do gene ob da leptina. O estudo com a express?o relativa de mRNA de genes relacionados ? produ??o de CCK em intestino de ratos com obesidade ? inovador e sugere-se que, ao constatar o efeito do ITT na redu??o das concentra??es plasm?ticas de leptina, neste estudo, o ITT melhore a a??o da CCK em animais com obesidade resultando em discreta melhora do estado de obesidade, independente do aumento plasm?tico da CCK. / Obesity is a worldwide epidemic that can occur due to genetic, environmental and metabolic / hormonal factors. Among the hormonal factors, it is seen that, humans or animals, in state of obesity, present altered responses to certain hormones when compared to eutrophic. Once obesity presents multifactorial causes, its treatment also occurs by several means, among which the use of trypsin inhibitors. This study evaluated the effect of a Tamarindus indica L. seed isolated Trypsin Inhibitor (TTI) as a CCK secretagogue and its synergism with leptin in obese Wistar rats. The study was conducted with obese and lean rats (n = 20). Three groups of obese rats were feed 10 days one of the following diets: Standard diet (Labina?) + water; High Glycemic Index and Load (HGLI) diet + water or HGLI diet + TTI. Lean animals were fed the Labina? for the 10 days. We evaluated nutritional status (zoometric measurements), plasma CCK and leptin, mRNA expression of intestinal CCK-related genes and the ob gene in subcutaneous adipose tissue. TTI treated animals had a slight reduction in the Lee index. TTI did not increase plasma CCK in obese animals and we found no significant effect of TTI in CCK-2R and PCSK1 gene expression. On the other hand, TTI treatment increased CCK-1R gene expression compared with the lean group (p = 0.028). Although TTI did not reduce the ob gene expression. Interestingly 60% of the TTI treated animals presented plasma concentrations below 0.1 ng / ?L, whereas those treated with standard diet, only 20% of the animals were in this condition. This was not observed in the lean and obese groups. Our study with relative mRNA expression of intestinal CCK-related genes in obese rats is a novel study and suggests that TTI by decreasing plasma leptin may improve CCK action in obese rats, since the expression of the CCK-1R gene in this group was higher when compared to lean rats, resulting in improvement of zoometric measurements, independently of plasma CCK increase.