Made available in DSpace on 2014-12-17T14:03:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JulianaMCS.pdf: 573830 bytes, checksum: 9b4db031d8ca76bd1eed966ee42dfb5b (MD5) Previous issue date: 2008-11-25 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / Sulfated polysaccharides (PS) are biomolecules with a great biotechnological potential. There are few data about PS from high plants. In addition, pharmacological activities of PS from plants have not been carrying out. The aim of this work was extract PS from the angiosperm Halodule wrightii and study their anticoagulant and antioxidant activities. Histological analysis showed the presence of the PS manly in the roots. A polysaccharide-rich extract was obtained from H. wrightii by proteolysis followed by methanol and TCA precipitation. Chemical, infra-red analysis and agarose gel electrophoresis in 1.3 diaminopropane acetate buffer confirmed the presence of sulfated polysaccharides made by glucose, galactose, xylose and sulfate residues in the proportion 1: 0,9: 1: 1. In addition polyacrilamide electrophoresis have shown that extract is mainly compose by 11kDa sulfated polysaccharides. Pharmacological analysis have shown total antioxidant capacity (CAT) that resulted in 15,21 μg for equivalent of ascorbic acid, scavenging activity of the DPPH radical with 41,36 % of scavenging, activity of reducing power with the maximum of 0,290 nm (50 % of vitamin C activity) and scavenging activity superoxide radical (O2-) with a maximum of 32,23 %. Chelating activity of metal less than 4% and scavenging activity of the radical hydroxyl (OH-) less than 2%. Time of activated partial tromboplastin (aPTT) doubling the time of coagulation from 20μg of and protrombin time (PT) was not present. The data indicate that PS from Halodule wrightii could be considered for future applications in medicine, food production or cosmetic industry / Os polissacar?deos sulfatados (PS) s?o biomol?culas com um grande potencial biotecnol?gico por apresentarem uma diversidade estrutural e farmacol?gica muito grande. Poucos s?o os relatos da exist?ncia destes pol?meros em vegetais superiores, al?m disso, ainda n?o se tem relatos da identifica??o de atividades antioxidantes e anticoagulantes com PS extra?dos destes vegetais. Com o intuito de verificar a presen?a destes polissacar?deos em angiospermas marinhas conhecidas popularmente como capim do mar, foi coletada a esp?cie marinha Halodule wrightii. As por??es vegetativas (folha, caule e raiz) n?o foram separadas sendo preparado inicialmente um extrato denominado de extrato bruto (EB). Ap?s descontamina??o prot?ica o material obtido foi chamado de extrato de polissacar?deos totais (EPT). A presen?a destes polissacar?deos foi investigada e confirmada por an?lises qu?micas, espectroscopia de infravermelho e eletroforese em gel de agarose sendo denominados de extrato rico em polissacar?deos sulfatados (EPS). A an?lise histol?gica da localiza??o dos PS resultou na presen?a destes polissacar?deos principalmente na epiderme da por??o vegetativa raiz. As an?lises qu?micas mostraram que os polissacar?deos contem glicose, galactose, xilose e sulfato na propor??o de 1: 0,9: 1: 1 e massa molecular de aproximadamente 11 kDa. Os grupos sulfatos est?o provavelmente ligados principalmente em C2 de um monossacar?deo. Testes de atividade antioxidante demonstraram que os PS de H. wrightii n?o apresentaram resultado para o teste de capacidade antioxidante total pelo m?todo CAT. Desta forma foi utilizada a atividade de seq?estro do radical DPPH indicado na literatura por dosar a capacidade antioxidante total que resultou em 41,36%. O seq?estro do ?on super?xido tamb?m foi realizado e resultou em 32,23% assim como o poder redutor que equivaleu a 50% da atividade da Vit. C. N?o houve atividade de seq?estro do radical hidroxila assim como atividade quelante de metal. O teste de atividade anticoagulante (aPTT) mostrou que EPS dobra o tempo de coagula??o com 20 g, que ? apenas 2,5 vezes a quantidade da Clexane? (heparina de baixo peso molecular). Para o tempo de protrombina (PT) H.wrightii n?o apresentou atividade. Os dados indicam que EPS possuem um potencial biotecnol?gico anticoagulante e antioxidante e que futuras an?lises se fazem necess?rias para confirmarem esse potencial

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:03:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JulianaMCS.pdf: 573830 bytes, checksum: 9b4db031d8ca76bd1eed966ee42dfb5b (MD5) Previous issue date: 2008-11-25 / Sulfated polysaccharides (PS) are biomolecules with a great biotechnological potential. There are few data about PS from high plants. In addition, pharmacological activities of PS from plants have not been carrying out. The aim of this work was extract PS from the angiosperm Halodule wrightii and study their anticoagulant and antioxidant activities. Histological analysis showed the presence of the PS manly in the roots. A polysaccharide-rich extract was obtained from H. wrightii by proteolysis followed by methanol and TCA precipitation. Chemical, infra-red analysis and agarose gel electrophoresis in 1.3 diaminopropane acetate buffer confirmed the presence of sulfated polysaccharides made by glucose, galactose, xylose and sulfate residues in the proportion 1: 0,9: 1: 1. In addition polyacrilamide electrophoresis have shown that extract is mainly compose by 11kDa sulfated polysaccharides. Pharmacological analysis have shown total antioxidant capacity (CAT) that resulted in 15,21 μg for equivalent of ascorbic acid, scavenging activity of the DPPH radical with 41,36 % of scavenging, activity of reducing power with the maximum of 0,290 nm (50 % of vitamin C activity) and scavenging activity superoxide radical (O2-) with a maximum of 32,23 %. Chelating activity of metal less than 4% and scavenging activity of the radical hydroxyl (OH-) less than 2%. Time of activated partial tromboplastin (aPTT) doubling the time of coagulation from 20μg of and protrombin time (PT) was not present. The data indicate that PS from Halodule wrightii could be considered for future applications in medicine, food production or cosmetic industry / Os polissacar?deos sulfatados (PS) s?o biomol?culas com um grande potencial biotecnol?gico por apresentarem uma diversidade estrutural e farmacol?gica muito grande. Poucos s?o os relatos da exist?ncia destes pol?meros em vegetais superiores, al?m disso, ainda n?o se tem relatos da identifica??o de atividades antioxidantes e anticoagulantes com PS extra?dos destes vegetais. Com o intuito de verificar a presen?a destes polissacar?deos em angiospermas marinhas conhecidas popularmente como capim do mar, foi coletada a esp?cie marinha Halodule wrightii. As por??es vegetativas (folha, caule e raiz) n?o foram separadas sendo preparado inicialmente um extrato denominado de extrato bruto (EB). Ap?s descontamina??o prot?ica o material obtido foi chamado de extrato de polissacar?deos totais (EPT). A presen?a destes polissacar?deos foi investigada e confirmada por an?lises qu?micas, espectroscopia de infravermelho e eletroforese em gel de agarose sendo denominados de extrato rico em polissacar?deos sulfatados (EPS). A an?lise histol?gica da localiza??o dos PS resultou na presen?a destes polissacar?deos principalmente na epiderme da por??o vegetativa raiz. As an?lises qu?micas mostraram que os polissacar?deos contem glicose, galactose, xilose e sulfato na propor??o de 1: 0,9: 1: 1 e massa molecular de aproximadamente 11 kDa. Os grupos sulfatos est?o provavelmente ligados principalmente em C2 de um monossacar?deo. Testes de atividade antioxidante demonstraram que os PS de H. wrightii n?o apresentaram resultado para o teste de capacidade antioxidante total pelo m?todo CAT. Desta forma foi utilizada a atividade de seq?estro do radical DPPH indicado na literatura por dosar a capacidade antioxidante total que resultou em 41,36%. O seq?estro do ?on super?xido tamb?m foi realizado e resultou em 32,23% assim como o poder redutor que equivaleu a 50% da atividade da Vit. C. N?o houve atividade de seq?estro do radical hidroxila assim como atividade quelante de metal. O teste de atividade anticoagulante (aPTT) mostrou que EPS dobra o tempo de coagula??o com 20 ug, que ? apenas 2,5 vezes a quantidade da Clexane? (heparina de baixo peso molecular). Para o tempo de protrombina (PT) H.wrightii n?o apresentou atividade. Os dados indicam que EPS possuem um potencial biotecnol?gico anticoagulante e antioxidante e que futuras an?lises se fazem necess?rias para confirmarem esse potencial

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:13:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 NednaldoDS_TESE.pdf: 2321205 bytes, checksum: c08caa8155a3fd7b840048363939c371 (MD5) Previous issue date: 2012-03-19 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / Sulfated polysaccharides (SP) are widely distributed in animals and seaweeds tissues. These polymers have been studied in light of their important pharmacological activities, such as anticoagulant, antioxidant, antitumoral, anti-inflammatory, and antiviral properties. On other hand, SP potential to synthesize biomaterials like as nanoparticules has not yet been explored. In addition, to date, SP have only been found in six plants and all inhabit saline environments. However, the SP pharmacological plant activities have not been carrying out. Furthermore, there are no reports of SP in freshwater plants. Thus, do SP from marine plants show pharmacological activity? Do freshwater plants actually synthesize SP? Is it possible to synthesize nanoparticles using SP from seaweed? In order to understand this question, this Thesis was divided into tree chapters. In the first chapter a sulfated polysaccharide (SPSG) was successfully isolated from marine plant Halodule wrightii. The data presented here showed that the SPSG is a 11 kDa sulfated heterogalactan contains glucose and xylose. Several assays suggested that the SPSG possessed remarkable antioxidant properties in different in vitro assays and an outstanding anticoagulant activity 2.5-fold higher than that of heparin Clexane? in the aPTT test; in the next chapter using different tools such as chemical and histological analyses, energy-dispersive X-ray analysis (EDXA), gel electrophoresis and infra-red spectroscopy we confirm the presence of sulfated polysaccharides in freshwater plants for the first time. Moreover, we also demonstrate that SP extracted from E. crassipes root has potential as an anticoagulant compound; and in last chapter a fucan, a sulfated polysaccharide, extracted from the brown seaweed was chemically modified by grafting hexadecylamine to the polymer hydrophilic backbone. The resulting modified material (SNFuc) formed nanosized particles. The degree of substitution for hydrophobic chains of 1H NMR was approximately 93%. SNFfuc-TBa125 in aqueous media had a mean diameter of 123 nm and zeta potential of -38.3 ? 0.74 mV, measured bydynamic light scattering. Tumor-cell (HepG2, 786, H-S5) proliferation was inhibited by 2.0 43.7% at SNFuc concentrations of 0.05 0.5 mg/ mL and RAEC non-tumor cell line proliferation displayed inhibition of 8.0 22.0%. On the other hand, nanogel improved CHO and RAW non-tumor cell line proliferation in the same concentration range. Flow cytometric analysis revealed that this fucan nanogel inhibited 786 cell proliferation through caspase and caspaseindependent mechanisms. In addition, SNFuc blocks 786 cell passages in the S and G2-M phases of the cell cycle / Os polissacar?deos sulfatados (PS) s?o amplamente distribu?dos em animais e tecidos de algas. Estes pol?meros t?m sido estudados em fun??o da import?ncia de suas atividades farmacol?gicas, tais como: anticoagulante, antioxidante, antitumoral, anti-inflamat?ria e as propriedades antivirais. Contudo, o potencial dos PS para sintetizar biomateriais, tais como nanopart?culas, ainda ? pouco explorado. At? ent?o, os PS s? foram encontrados em seis plantas e todas habitam ambientes salino. N?o havendo relatos de PS em plantas de ?gua doce. O que nos levou aos seguintes questionamentos: Os PS extraidos de vegetais marinhos n?o apresentam atividades farmacol?gicas? Os vegetais de ?gua doce realmente sintetizam PS? ? poss?vel sintetizar nanopart?culas utilizando PS a partir de algas marinhas? Para melhor entender as quest?es, esta tese foi dividida em tr?s cap?tulos. No primeiro cap?tulo, um polissacar?deo sulfatado (SPSG) foi isolado a partir de um vegetal marinho Halodule wrightii. Os dados aqui apresentados mostram que o SPSG ? uma heterogalactana sulfatada de 11 kDa constituida de glucose e xilose. Os ensaios realizados sugerem que o SPSG possue propriedades antioxidantes not?veis em diferentes ensaios in vitro e uma excelente actividade anticoagulante de 2,5 vezes mais elevadas do que a de heparina Clexane ? no teste APTT. No cap?tulo seguinte, utilizando ferramentas diferentes, tais como an?lises qu?micas e histol?gicas, an?lise de dispers?o de raios-X (EDXA), eletroforese em gel e espectroscopia de infra-vermelho,confirmamos, em primeira m?o, a presen?a de polissacar?deos sulfatados em vegetais de ?gua doce. Al?m de demonstrarmos que o PS extra?do a partir da raiz de E. crassipes tem potencial como um composto anticoagulante.No ?ltimo cap?tulo uma fucana, um polissac?rido sulfatado, extra?do a partir de uma alga marrom, foi quimicamente modificada por adi??o de hexadecilamina ? cadeia principal do pol?mero hidrof?lico. O material resultante (SNFuc) forneceu part?culas nanom?tricas. O grau de substitui??o para as cadeias hidrof?bicas de 1H RMN foi de aproximadamente 93%. SNFuc em meios aquosos tinha um di?metro m?dio de 123 nm e potencial zeta de -38,3 ? 0,74 mV. Os ensaios com c?lulas tumorais (HepG2, 786, H-S5) demonstrou a ocorr?ncia de uma inibi??o que variou de 2,0-43,7% em concentra??es diferentes de SNFuc (0,05-0,5 mg / mL) resultado semelhante foi obtido com a RAEC monstrando uma inibi??o entre 8,0-22,0%. Por outro lado, o nanogel estimulou a prolifera??o de linhagens celulares n?o tumorais como CHO e RAW nas mesmas concentra??es. An?lise por citometria de fluxo revelou que este nanogel de fucana inibiu a prolifera??o celular de 786 por mecanismos dependentes e independentes de caspases. Al?m disso, bloqueou a passagens da c?lula 786 na fase S e G2-M do ciclo celular / 2020-01-01