Made available in DSpace on 2018-08-01T21:35:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_12099_Dissertação_Isabella Bittencourt da Valle.pdf: 8090609 bytes, checksum: 6e09574c3fb07de58cf9e66e8e26d822 (MD5) Previous issue date: 2018-04-23 / O prognóstico de pacientes com Carcinoma Epidermóide Oral (CEO) é majoritariamente desfavorável, principalmente devido à elevada taxa de recidiva e mortalidade. Até o momento, não existem marcadores biológicos clinicamente disponíveis que indiquem eventos de transformação tumoral ou prognóstico em CEO. Portanto, grande interesse tem sido direcionado aos genes reguladores do ciclo celular, como a participação da expressão gênica de P63 na oncogênese através da sua atividade na regulação da proliferação e diferenciação celular em CEO. Este trabalho teve como objetivo analisar a aplicabilidade de p63 como biomarcador de prognóstico e progressão tumoral. Realizou-se estudo multicêntrico internacional, no qual foram obtidas amostras biológicas, dados clínicos e seguimento clínico de 109 indivíduos com CEO provenientes do Brasil e Reino Unido. As lâminas histológicas obtidas foram avaliadas quanto à gradação tumoral, infiltrado linfocitário tumoral (TIL), padrão de invasão tumoral e invasão perineural, vascular e linfática. Tissue Microarray (TMA) foi construído considerando 3 áreas: epitélio adjacente ao tumor, displasia e tumor. Os TMAs foram submedidos à imunohistoquímica para análise de expressão de p63 e p40 (&#916;Np63) e hibridização in situ de RNA para investigar p63 mRNA. Para avaliar a expressão de p63 e p40 foi considerada a marcação nuclear em queratinócitos através de H-Score. A avaliação de p63 mRNA se deu por um guia de pontuação (score 0-4) conforme a quantidade de pontos em cada célula. O nível de significância considerado para todos os testes estatísticos foi de 95%. Teste Qui-Quadrado foi empregado para instituir associações entre as variáveis clinico-patológicas estudadas. A comparação entre a expressão da proteína p63, p40 e de p63 mRNA nas diferentes regiões foi realizada através do teste de Wilcoxon. Curvas de sobrevida global e sobrevida livre de doença foram obtidas pelo modelo de Kaplan-Meier e regressão de Cox. Nossos resultados mostraram associação entre a elevada presença de TIL no tumor com estadiamentos iniciais (p=0,001) enquanto tabagismo mostrou relação com menor TIL (p=0,044) e padrões de invasão tumoral dos tipos III e IV (p=0,032). Indivíduos etilistas/ex-etilistas apresentaram mais invasão vascular que os não etilistas (p=0,015). A expressão de p63 nos tumores foi maior que nas displasias (p=0,001) e foi associada a tumores maiores (T3 e T4) (p=0,001). Foi observada diferença quanto à expressão de p40 entre displasia e tumor (p<0,001) e displasias de alto risco apresentaram alta expressão de p40 (p=0,022). A elevada expressão de p40 tumoral mostrou associação com tumores pouco diferenciados (p=0,010) e com invasão de vasos linfáticos (p=0,022). Não foi observada diferença de expressão de p63 mRNA entre as regiões estudadas. Indivíduos com estadios iniciais (p=0,001) e não tabagistas (p=0,035) tiveram maior sobrevida global. Mostraram pior sobrevida livre de doença indivíduos cujos padrões de invasão tumoral eram III e IV (p=0,014) e que apresentavam tumores maiores (p=0,004). Concluímos com este estudo que a expressão de p63, de p40, são úteis como marcadores de progressão tumoral, mas não comportam-se como bons marcadores de prognóstico uma vez que não mostraram influenciar os índices de sobrevida global e sobrevida livre de doença.

Orientador: Christiane Pienna Soares / Resumo: O câncer é considerado um grave problema de saúde publica. A Organização Mundial da Saúde estimou que no ano de 2030 podem-se esperar 27 milhões de casos incidentes de câncer, 17 milhões de mortes e 75 milhões de pessoas vivas, anualmente com esse tipo de doença. Diante disso, buscam-se, incessantemente, novos fármacos na tentativa de melhorar a sobrevida desses pacientes. Aproximadamente 70% das drogas disponíveis na quimioterapia atualmente são de origem natural, contribuindo intensamente para o desenvolvimento da terapia moderna. O alcalóide guanidínico, (nitensidina A) isolado de Pterogyne nitens, planta típica do cerrado brasileiro demonstrou citotoxicidade contra células de carcinoma epidermóide cervical (SiHa). Sendo assim, o objetivo desse estudo foi verificar a atividade antitumoral, genotóxica e mutagênica da nitensidina A, por meio de experimentos in vitro (linhagem de CEC oral – HSC-3) e in vivo, empregando o modelo de indução por 4NQO – 4-nitroquinolona-1-óxido em ratos. O composto nitensidina A para as linhagens HSC-3 e HaCat, demonstrou atividade citotóxica, morte celular por apoptose e necrose, porém não houve indução na ativação da caspase-3, enzima que participa do processo da via intrínseca de apoptose, ainda demonstrou potencial mutagênico e diminuição no estresse oxidativo. Para a linhagem HSC-3 não houve expressão dos níveis de AKT fosforilada em ser-473. Os experimentos in vivo demonstraram que o modelo de indução por 4NQO foi efetivo, porém o tratament... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Cancer is considered a serious public health problem. The World Health Organization estimated by the year 2030 27 million new cases, 17 million deaths, 75 million people diagnosed with cancer. In this scenario, efforts have been made to improve patient survival. Approximately 70% of the chemotherapeutic agents are derived from natural sources, contributing greatly to the development of modern therapeutic drugs. Guanidine alkaloid (nitensidine A) isolated from Pterogyne nitens, a typical Brazilian cerrado plant, showed cytotoxicity against cervical epidermoid carcinoma cells. Taking this into consideration, the aim of this study was to evaluate nitensidine An antitumor, genotoxic and mutagenic activity in vitro (HSC-3 cell line) and in vivo (mice) induced by 4-nitroquinoline (4-NQO). The guanidine alkaloid demonstrated cytotoxicity activity, cell death induction by apoptosis and necrosis in HSC-3 and HaCat cell lines. However, there was no caspase3 activation. Besides that, it demonstrated mutagenic potential and decreased oxidative stress. HSC-3 cell line did not show any phosphorylated AKT levels at ser-473. In vivo experiments indicated that 4NQO induction model was effective, although the treatment did evidence reduction in the carcinogenic process only at the lowest dose tested (2mg / kg b.c.). Animals exposed to 4NQO presented tumor invasion, but there was no mitotic index decreased and no necrosis areas. Biochemical parameters (glycemia, urea, creatinine, hepatic toxici... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

A expressão das proteínas morfogenéticas ósseas (BMPs) está alterada em vários cânceres humanos. A BMP-2/4 e o BMPR-IA foram recentemente encontrados superexpressos em lesões malignas e pré-malignas de alto risco em epitélio oral. Este estudo analisou a expressão da BMP-2/4 e seu receptor BMPR-IA em 23 espécimes de Carcinoma Epidermóide Oral (CEO), utilizando a imuno-histoquímica. O grupo controle constou de 10 casos de Hiperplasia Fibro-epitelial da mucosa oral. O grupo experimental foi constituído por 16 casos de CEO não metastático e 7 casos de CEO metastático. Utilizou-se o parâmetro presença ou ausência de metástase nodal para avaliar o prognóstico da doença. Os resultados demonstraram imunorreatividade fraca para a BMP-2/4 e o BMPR-IA em todos os espécimes do grupo controle. No grupo experimental com metástase, a BMP-2/4 exibiu forte expressividade (71,4%), enquanto que o BMPR-IA mostrou fraca expressão (85,7%). No grupo experimental sem metástase, evidenciou-se forte expressão para a BMP-2/4 (62,5%) e para o BMPR-IA (100%). Encontrou-se significância estatística para a associação entre o prognóstico do CEO e a intensidade de marcação da BMP-2/4 (p=0,002). Para o BMPR-IA não houve significância estatística à sua associação com o prognóstico da doença (p>0,001), em função do tamanho da amostra. Portanto, os resultados sugerem que a fraca expressividade do BMPR-IA associada à forte expressão da BMP-2/4, no grupo experimental com metástase, tem relevância prognóstica, já que a perda de sensibilidade às BMPs, através da perda de expressão de seus receptores pode ser indicativo de desenvolvimento de metástase em CEO. _________________________________________________________________________________________ ABSTRACT: The expression of bone morphogenetic proteins (BMPs) is altered in a variety of human canceres. The BMP-2/4 and BMPR-IA were recently shown to be overexpressed in high-risk premalignant and malignant lesions of oral epithelium. The present study analysed the expression of BMP-2/4 and BMPR-IA in Oral Squamous Cell Carcinoma (OSCC) such as their implications in disease prognostic using munohistochemistry. Ten cases of Oral Fibroepithelial Hiperplasia were selected as a control group. The experimental group included 16 cases of OSCC without metastases and 7 cases of OSCC metastatic. The presence or absence of nodal metastases was used as parameter to evaluated the disease prognostic. The results demonstrated weak immunoreactivity for BMP-2/4 and BMPR-IA in every case of the control group. In the cases of OSCC with metastases an overexpression of BMP-2/4 (71,4%) was observed while the BMPR-IA showed weak expression (85,7%). In the cases of OSCC without metastases BMP-2/4 (62,5%) and BMPR-IA showed strong immunostaining standing out an overexpression of the receptor in all the specimens. Observed statistical significance for correlation between the oral cancer prognostic and the staining intensity of the BMP-2/4 (p=0,002). There wasn t statistical significance for association between the staining intensity of the BMPR-IA and the disease prognostic (p>0,001). In conclusion, this findings suggest that the overexpression of BMP-2/4 associated with the loss of expression of the BMPR-IA in OSCC metastatic has prognostic relevance, as the loss of sensitivity to BMPs can be an indicative of metastases development in OSCC.

O Brasil está entre os países com os maiores índices de carcinoma epidermóide oral (CEO). O gene p63 é um análogo do supressor tumoral p53 e a influência da expressão de ambos no prognóstico do CEO ainda necessita ser melhor investigada. O envolvimento do papilomavírus humano (HPV) no CEO é outro fator ainda não elucidado. Nosso estudo objetivou avaliar os pacientes com CEO no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto da Universidade de São Paulo, assim como também investigar a relação entre a presença do HPV e a imunoexpressão das proteínas p53 e p63 com alguns parâmetros relevantes ao prognóstico deste tumor. Os seguintes dados foram obtidos dos prontuários médicos de 424 pacientes: idade, gênero, localização e tamanho da lesão primária, história pregressa, consumo de tabaco e álcool, exposição actínica, traumatismo por prótese, recidivas, metástases, diferenciação tumoral, tratamento, sobrevida e óbitos. Cento e vinte e seis pacientes foram selecionados para o estudo da sobrevida, 106 para o estudo imunohistoquímico, 45 para a investigação IHQ com amostras pareadas (AP) e 87 para a reação em cadeia da polimerase para detecção do HPV e análise multivariada. Os tumores tiveram predominância em pacientes masculinos na 6ª década de vida, havendo após esta faixa etária um aumento dos casos no gênero feminino e menor sobrevida. A língua foi a região mais acometida, e as lesões em lábio inferior demonstraram maior atraso na procura pelo tratamento e relatos de exposição actínica desprotegida. As recidivas ocorreram em 30% dos pacientes, 28,8% tiveram metástases e 13,2% foram a óbito. Os tumores bem diferenciados foram predominantes (47,7%), e a sobrevida livre da doença (SLD) e a sobrevida global (SG) em cinco anos foram 19% e 24,3%, respectivamente. A imunoexpressão de p63 (87,8%) nos tumores foi maior que a de p53 (52,8%), mas os tumores p53 positivos estiveram significativamente associados aos casos de metástases. Os tumores p53 negativos e com forte intensidade de imunoexpressão de p63 demonstraram melhor SG. No estudo com AP, os tumores com elevada imunoexpressão de p63 demonstraram melhor sobrevida e as neoplasias p53 negativas tiveram melhor SLD. A maioria dos casos demonstrou um padrão concordante de imunoexpressão nas AP (73,3% para p53 e 53,3% para p63, respectivamente). O HPV foi encontrado em 18 (10,4%) amostras de CEO, correspondendo a 17 (19,5%) pacientes. Foram encontradas amostras positivas em 10 (11,5%) tumores primários e em 8 (9,2%) AP. Foram identificados os subtipos de HPV 16 e 18 em 4 (22,2%) e 3 (16,7%) das amostras positivas, respectivamente. Em 6 (33,3%) amostras foi encontrada a presença de ambos os subtipos e em 5 (27,8%) amostras não foi identificado. As amostras HPV positivas foram significativamente associadas aos pacientes não fumantes. Diferenças significativas relacionadas ao prognóstico do CEO na análise multivariada foram encontradas para idade, localização tumoral e p53. A imunoexpressão de p53 e a baixa intensidade da imunoexpressão de p63 demonstraram relação com pior prognóstico. Uma associação do HPV à carcinogênese oral foi observada nos pacientes não fumantes. / Brazil is among the countries with the largest indexes of oral squamous cell carcinoma (OSCC). The role of p53 and p63 in the OSCC prognosis is still debatable. The involvement of the human papilomavirus (HPV) in CEO is still another factor no elucidated. Our study aimed to evaluate the patients with OSCC diagnosed in the Teaching Hospital of the Ribeirao Preto Medical School of the Sao Paulo University, as well as to investigate the relationship between the p53 and p63 proteins immunoexpression and the HPV presence with some relevant clinicopathological parameters to the tumor prognostic. The data obtained from the medical files of 424 patients were: age, gender, primary tumor (PT) site and size, evolution time, tobacco and alcohol consumption, actinic radiation exposition, prosthesis trauma reports, recurrences, metastases, tumoral differentiation, treatment, survival and deaths. One hundred twenty-six patients were selected for the survival study, 106 for the immunohistochemical investigation, 45 for the IHQ analysis with matched samples (MS), and 87 for the polymerase chain reaction test of HPV and multivariate analysis. Tumors were prevalent in masculine patients around the 6th decade of life, with an increase in feminine gender and a smaller survival after this age. Tongue was the prevalent site, and the lower lip lesions had the larger delay to look for treatment and high reports of unprotected actinic exposition. There were recurrences in 30% of the patients, 28.8% had metastases and 13.2% died. Well differentiated tumors were more prevalent in this study (47.7%), and the five years disease free survival (DFS) and overall survival (OS) were 19% and 24.3%, respectively. The p63 immunoexpression (87.8%) in tumors was higher than p53 (52.8%), and the p53 positive tumors were significantly associated with metastases. The p53 negative tumors and those with strong p63 immunoexpression intensity demonstrated better OS. In the MS study, tumors with high p63 immunoexpression demonstrated better survival and those p53 negative had better DFS. Most of cases demonstrated a concordant immunoexpression pattern in MS (73.3% for p53 and 53.3% for p63, respectively). HPV was found in 18 (10.4%) OSCC samples, corresponding to 17 (19.5%) patients. There were positive samples in 10 (11.5%) PT and 8 (9.2%) MS. The subtypes HPV 16 and 18 were identified in 4 (22.2%) and 3 (16.7%) of the positive samples, respectively. Presence of both subtypes was found in 6 (33.3%) samples and in 5 (27.8%) samples they were not identified. The HPV positive samples were significantly associated with non-smoker patients. Significant differences related to the OSCC prognostic were found in multivariate analysis for age, tumoral site and p53. The p53 immunoexpression and low intensity of p63 immunoexpression demonstrated relation with worse prognostic, and a HPV association to oral carcinogenesis was verified in the non-smoker patients.

O carcinoma epidermóide da cavidade oral (CEO) é o tumor maligno mais frequente da região da cabeça e pescoço. O Chk2 (Checkpoint kinase 2) é considerado um supressor tumoral que atua na resposta celular ao dano do DNA. Entretanto, a relação do Chk2 entre CEO ainda não está compreendida. O objetivo deste estudo foi avaliar a imunoexpressão do Chk2 nos CEOs e associar sua expressão com parâmetros clínico-patológicos de importância prognóstica, incluindo a sobrevida global, sobrevida livre de doença e livre de metástase. A expressão de Chk2 foi analisada em 104 amostras de pacientes com CEO por meio da técnica de imunoistoquímica e foi positiva em 97,11% dos nossos casos com CEO, com isso, estratificamos apenas os casos de marcação positiva, e dividimo-los em alta expressão (> 66%) e baixa expressão (<66%), e excluímos os casos negativos de nossa análise, pois o número de casos com expressão negativa para Chk2 seria inclusivo para realizarmos as análises estatísticas. A positividade de Chk2 na maioria dos nossos casos sugere que o Chk2 possa estar envolvido na patogênese desses tumores, porém em nosso trabalho, a expressão de Chk2 não se associou com os parâmetros prognósticos. Não houve diferença entre a sobrevida global, sobrevivência livre de metástases e sobrevida livre de doença de acordo com a marcação de Chk2. Em conclusão, em nossos achados, o Chk2 não pode ser considerado como um biomarcador prognóstico do carcinoma de células epidermóides da cavidade oral. / Squamous cell carcinoma of the oral cavity (CEO) is the most frequent malignant tumor of the head and neck region. Chk2 (Checkpoint kinase 2) is considered a tumor suppressor that acts on the cellular response to DNA damage. However, the Chk2 relationship between CEO is not yet understood. The objective of this study was to evaluate the Chk2 immunoexpression in the CEOs and to associate their expression with clinical-pathological parameters of prognostic importance, including global survival, disease-free survival, and metastasis-free. The expression of Chk2 was analyzed in 104 samples of patients with CEO using the immunohistochemistry technique and was positive in 97.11% of our cases with CEO, with that, we stratified only the cases of positive marking, and we divided them into high expression (> 66%) and low expression (<66%), and we excluded the negative cases from our analysis, since the number of cases with negative expression for Chk2 would be inclusive for the statistical analysis. The positivity of Chk2 in most of our cases suggests that Chk2 may be involved in the pathogenesis of these tumors, but in our study, the expression of Chk2 was not associated with the prognostic parameters. There was no difference between overall survival, metastasis-free survival, and disease-free survival according to the Chk2 labeling. In conclusion, in our findings, Chk2 cannot be considered as a prognostic biomarker of oral squamous cell carcinoma.

O carcinoma epidermóide da cavidade oral (CEO) é o tumor maligno mais frequente da região da cabeça e pescoço. O Chk2 (Checkpoint kinase 2) é considerado um supressor tumoral que atua na resposta celular ao dano do DNA. Entretanto, a relação do Chk2 entre CEO ainda não está compreendida. O objetivo deste estudo foi avaliar a imunoexpressão do Chk2 nos CEOs e associar sua expressão com parâmetros clínico-patológicos de importância prognóstica, incluindo a sobrevida global, sobrevida livre de doença e livre de metástase. A expressão de Chk2 foi analisada em 104 amostras de pacientes com CEO por meio da técnica de imunoistoquímica e foi positiva em 97,11% dos nossos casos com CEO, com isso, estratificamos apenas os casos de marcação positiva, e dividimo-los em alta expressão (> 66%) e baixa expressão (<66%), e excluímos os casos negativos de nossa análise, pois o número de casos com expressão negativa para Chk2 seria inclusivo para realizarmos as análises estatísticas. A positividade de Chk2 na maioria dos nossos casos sugere que o Chk2 possa estar envolvido na patogênese desses tumores, porém em nosso trabalho, a expressão de Chk2 não se associou com os parâmetros prognósticos. Não houve diferença entre a sobrevida global, sobrevivência livre de metástases e sobrevida livre de doença de acordo com a marcação de Chk2. Em conclusão, em nossos achados, o Chk2 não pode ser considerado como um biomarcador prognóstico do carcinoma de células epidermóides da cavidade oral. / Squamous cell carcinoma of the oral cavity (CEO) is the most frequent malignant tumor of the head and neck region. Chk2 (Checkpoint kinase 2) is considered a tumor suppressor that acts on the cellular response to DNA damage. However, the Chk2 relationship between CEO is not yet understood. The objective of this study was to evaluate the Chk2 immunoexpression in the CEOs and to associate their expression with clinical-pathological parameters of prognostic importance, including global survival, disease-free survival, and metastasis-free. The expression of Chk2 was analyzed in 104 samples of patients with CEO using the immunohistochemistry technique and was positive in 97.11% of our cases with CEO, with that, we stratified only the cases of positive marking, and we divided them into high expression (> 66%) and low expression (<66%), and we excluded the negative cases from our analysis, since the number of cases with negative expression for Chk2 would be inclusive for the statistical analysis. The positivity of Chk2 in most of our cases suggests that Chk2 may be involved in the pathogenesis of these tumors, but in our study, the expression of Chk2 was not associated with the prognostic parameters. There was no difference between overall survival, metastasis-free survival, and disease-free survival according to the Chk2 labeling. In conclusion, in our findings, Chk2 cannot be considered as a prognostic biomarker of oral squamous cell carcinoma.

O Brasil está entre os países com os maiores índices de carcinoma epidermóide oral (CEO). O gene p63 é um análogo do supressor tumoral p53 e a influência da expressão de ambos no prognóstico do CEO ainda necessita ser melhor investigada. O envolvimento do papilomavírus humano (HPV) no CEO é outro fator ainda não elucidado. Nosso estudo objetivou avaliar os pacientes com CEO no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto da Universidade de São Paulo, assim como também investigar a relação entre a presença do HPV e a imunoexpressão das proteínas p53 e p63 com alguns parâmetros relevantes ao prognóstico deste tumor. Os seguintes dados foram obtidos dos prontuários médicos de 424 pacientes: idade, gênero, localização e tamanho da lesão primária, história pregressa, consumo de tabaco e álcool, exposição actínica, traumatismo por prótese, recidivas, metástases, diferenciação tumoral, tratamento, sobrevida e óbitos. Cento e vinte e seis pacientes foram selecionados para o estudo da sobrevida, 106 para o estudo imunohistoquímico, 45 para a investigação IHQ com amostras pareadas (AP) e 87 para a reação em cadeia da polimerase para detecção do HPV e análise multivariada. Os tumores tiveram predominância em pacientes masculinos na 6ª década de vida, havendo após esta faixa etária um aumento dos casos no gênero feminino e menor sobrevida. A língua foi a região mais acometida, e as lesões em lábio inferior demonstraram maior atraso na procura pelo tratamento e relatos de exposição actínica desprotegida. As recidivas ocorreram em 30% dos pacientes, 28,8% tiveram metástases e 13,2% foram a óbito. Os tumores bem diferenciados foram predominantes (47,7%), e a sobrevida livre da doença (SLD) e a sobrevida global (SG) em cinco anos foram 19% e 24,3%, respectivamente. A imunoexpressão de p63 (87,8%) nos tumores foi maior que a de p53 (52,8%), mas os tumores p53 positivos estiveram significativamente associados aos casos de metástases. Os tumores p53 negativos e com forte intensidade de imunoexpressão de p63 demonstraram melhor SG. No estudo com AP, os tumores com elevada imunoexpressão de p63 demonstraram melhor sobrevida e as neoplasias p53 negativas tiveram melhor SLD. A maioria dos casos demonstrou um padrão concordante de imunoexpressão nas AP (73,3% para p53 e 53,3% para p63, respectivamente). O HPV foi encontrado em 18 (10,4%) amostras de CEO, correspondendo a 17 (19,5%) pacientes. Foram encontradas amostras positivas em 10 (11,5%) tumores primários e em 8 (9,2%) AP. Foram identificados os subtipos de HPV 16 e 18 em 4 (22,2%) e 3 (16,7%) das amostras positivas, respectivamente. Em 6 (33,3%) amostras foi encontrada a presença de ambos os subtipos e em 5 (27,8%) amostras não foi identificado. As amostras HPV positivas foram significativamente associadas aos pacientes não fumantes. Diferenças significativas relacionadas ao prognóstico do CEO na análise multivariada foram encontradas para idade, localização tumoral e p53. A imunoexpressão de p53 e a baixa intensidade da imunoexpressão de p63 demonstraram relação com pior prognóstico. Uma associação do HPV à carcinogênese oral foi observada nos pacientes não fumantes. / Brazil is among the countries with the largest indexes of oral squamous cell carcinoma (OSCC). The role of p53 and p63 in the OSCC prognosis is still debatable. The involvement of the human papilomavirus (HPV) in CEO is still another factor no elucidated. Our study aimed to evaluate the patients with OSCC diagnosed in the Teaching Hospital of the Ribeirao Preto Medical School of the Sao Paulo University, as well as to investigate the relationship between the p53 and p63 proteins immunoexpression and the HPV presence with some relevant clinicopathological parameters to the tumor prognostic. The data obtained from the medical files of 424 patients were: age, gender, primary tumor (PT) site and size, evolution time, tobacco and alcohol consumption, actinic radiation exposition, prosthesis trauma reports, recurrences, metastases, tumoral differentiation, treatment, survival and deaths. One hundred twenty-six patients were selected for the survival study, 106 for the immunohistochemical investigation, 45 for the IHQ analysis with matched samples (MS), and 87 for the polymerase chain reaction test of HPV and multivariate analysis. Tumors were prevalent in masculine patients around the 6th decade of life, with an increase in feminine gender and a smaller survival after this age. Tongue was the prevalent site, and the lower lip lesions had the larger delay to look for treatment and high reports of unprotected actinic exposition. There were recurrences in 30% of the patients, 28.8% had metastases and 13.2% died. Well differentiated tumors were more prevalent in this study (47.7%), and the five years disease free survival (DFS) and overall survival (OS) were 19% and 24.3%, respectively. The p63 immunoexpression (87.8%) in tumors was higher than p53 (52.8%), and the p53 positive tumors were significantly associated with metastases. The p53 negative tumors and those with strong p63 immunoexpression intensity demonstrated better OS. In the MS study, tumors with high p63 immunoexpression demonstrated better survival and those p53 negative had better DFS. Most of cases demonstrated a concordant immunoexpression pattern in MS (73.3% for p53 and 53.3% for p63, respectively). HPV was found in 18 (10.4%) OSCC samples, corresponding to 17 (19.5%) patients. There were positive samples in 10 (11.5%) PT and 8 (9.2%) MS. The subtypes HPV 16 and 18 were identified in 4 (22.2%) and 3 (16.7%) of the positive samples, respectively. Presence of both subtypes was found in 6 (33.3%) samples and in 5 (27.8%) samples they were not identified. The HPV positive samples were significantly associated with non-smoker patients. Significant differences related to the OSCC prognostic were found in multivariate analysis for age, tumoral site and p53. The p53 immunoexpression and low intensity of p63 immunoexpression demonstrated relation with worse prognostic, and a HPV association to oral carcinogenesis was verified in the non-smoker patients.

O carcinoma epidermóide oral (CEO) tem alta incidência e mortalidade no mundo, sendo frequentes casos de recidivas em função da resistência aos tratamentos convencionais. Essa resistência tem sido associada à presença de células tronco tumorais (CTT). A terapia fotodinâmica (PDT) tem sido utilizada nos casos de desordens orais potencialmente malignas (DOPM) e CEOs superficiais, com relativo índice de sucesso. Contudo, são relatados casos de recidivas, que sugerem certa resistência à PDT. O objetivo do presente trabalho foi avaliar se células de DOPM desenvolvem resistência à PDT mediada pelo ácido 5-aminolevulínico (5-ALA), tal qual ocorre com células de CEO expostas ao mesmo tratamento, bem como verificar se as células displásicas e neoplásicas orais exibem um fenótipo sugestivo de células tronco tumoral. Foram cultivadas células epiteliais displásicas orais (linhagem DOK) e células de CEO de língua (linhagem SCC9), divididas nos seguintes grupos experimentais: Grupo Controle - células sem tratamento; Grupo ALA - células tratadas com 5-ALA, com concentração e tempo de incubação igual ao do grupo PDT; Grupo LED - células tratadas com LED, com dosimetria igual ao do grupo PDT; Grupo PDT - células tratadas com PDT mediada pelo 5-ALA, subdivididas em duas gerações: geração 1 - células expostas a somente um ciclo de PDT; geração 4 - células expostas a quatro ciclos de PDT e que exibiram resistência (maior viabilidade) à dose inicial aplicada para a geração 1. Para esses grupos, foram realizados ensaios de formação de colônias e de invasão, bem como citometria de fluxo para verificar a expressão de CD44, ESA e p75NTR. Observou-se que todos os grupos expostos à PDT contendo células da linhagem DOK exibiram resistência à dose inicial de PDT, porém em intensidade menor àquela observada para a linhagem SCC9. As células resistentes à PDT de ambas as linhagens exibiram maior potencial de formação de colônias, mas somente a primeira geração de células exibiu maior potencial de invasão. Na análise de citometria de fluxo, observou-se que as células resistentes à PDT de ambas as linhagens exibiram superexpressão de CD44high/ESAhigh. A linhagem SCC9 exibiu ainda maior frequência de células CD44high/ESAlow e CD44high/p75NTR+, sugerindo a presença de uma subpopulação com alto potencial de invasão e resistente aos tratamentos convencionais. Não houve diferenças significativas na frequência de células ESAhigh/p75NTR+ em ambas as linhagens. Concluiu-se que as células displásicas orais desenvolvem resistência à PDT com intensidade menor se comparada às células SCC9. Em ambas as linhagens, as células resistentes exibiram um fenótipo sugestivo de células tronco tumorais. Esse fato deve ser considerado ao se instituir a PDT mediada pelo 5-ALA em lesões displásicas e neoplásicas orais que demandam múltiplos ciclos de tratamento. / Oral squamous cell carcinoma (SCC) has a high incidence and mortality in the world. There are frequent cases of relapses due to its resistance to conventional treatments. This resistance has been associated with the presence of cancer stem cells (CSC). Photodynamic therapy (PDT) has been used in cases of potentially malignant oral lesions (PMOL) and superficial SCC\'s, with a relative success rate. However, relapses are reported, which suggest some resistance to PDT. The aim of the present study was to evaluate whether PMOL cells develop resistance to PDT mediated by the 5- aminolevulinic acid (5-ALA), as occurs with SCC cells exposed to the same treatment, as well as to verify if dysplastic and oral neoplastic cells exhibit a suggestive phenotype of CSC. Oral dysplastic epithelial cells (DOK lineage) and CSC cells of the tongue (SCC9 lineage) were divided into the following experimental groups: Control Group - cells with no treatment; Group ALA - 5-ALA treated cells, with concentration and incubation time equal to that of the PDT group; LED group - LED light treated cells, with dosimetry equal to that of the PDT group; PDT group - cells treated with PDT mediated by the 5-ALA, subdivided into two generations: Generation 1 - cells exposed to only one PDT cycle; Generation 4 - cells exposed to four PDT cycles and exhibiting resistance (greater viability) to the initial dose applied for Generation 1. Colony forming and invasion assays, as well as flow cytometry to verify the expression of CD44, ESA and p75NTR were performed to the experimental groups. It was observed that all groups exposed to PDT containing DOK lineage cells exhibited resistance to the initial dose of PDT, but at a lower intensity than those observed for the SCC9 lineage. PDTresistant cells from both lineages exhibited increased potential for colony formation, but only the first generation of cells exhibited increased invasion potential. In flow cytometric analysis, PDT-resistant cells from both lineages exhibited overexpression of CD44high / ESAhigh. SCC9 lineage also exhibited higher frequency of CD44high / ESAlow and CD44high / p75NTR+ cells, suggesting the presence of a subpopulation with high invasion potential and resistant to conventional treatments. There were no significant differences in the frequency of ESAhigh / p75NTR+ cells in both lineages. It was concluded that the oral dysplastic cells develop resistance to PDT, with lower intensity when compared to SCC9 cells. In both lineages, the resistant cells exhibited a phenotype suggestive of CSC. This fact should be considered when establishing PDT mediated by the 5-ALA in oral dysplastic and neoplastic lesions that require multiple cycles of treatment.