Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-12-04T10:24:50Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Paulo Roberto da Mota - 2015.pdf: 1806908 bytes, checksum: d6798b75ceeef2f456ddde6fbf387e77 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-12-04T10:27:57Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Paulo Roberto da Mota - 2015.pdf: 1806908 bytes, checksum: d6798b75ceeef2f456ddde6fbf387e77 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-04T10:27:57Z (GMT). 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Alpha-mannosidase has an essential role in the recycling of glycoproteins in filamentous fungi, but little is known about the role of these enzymes in mycoparasitism. This study aims to characterize the expression of T. alphamannosidase gene harzianum after growth in cell wall of Sclerotinia sclerotiorum (SS), Fusarium solani (FS) and Fusarium oxysporum (FO) as well as during the interaction in vivo . It was used as a control cell wall T. harzianum (TH). Also, jobs obtaining mutants of this gene in T. harzianum were performed. Our data show that alpha-mannosidase gene was highly expressed as T. harzianum grown in the presence of cell wall SS (4.5X), FS (18X) and FO (75X) compared to the control TH (1X). In comparison situation it was noticed a 75X greater expression in TH x FO state during contact as compared with the control (TH x TH). In other situations of confrontation did not observe a significant increase in expression. The promoter region, the selection mark and the terminator region of the alpha-mannosidase of T. harzianum gene was cloned into the pRS426 vector, and the deletion cassette was assembled by the recombination technique in Saccharomyces cerevisiae. Then, these vectors were used for transformation of T. harzianum and transformants were obtained by selection on plates containing hygromycin b. Approximately 50 transformants were obtained, but none of the alpha-mannosidase gene was successfully deleted. Obtaining more transformants is necessary for us to have a mutant alpha-mannosidase gene deleted. / Fungos do gênero Trichoderma têm se destacado como agentes de controle biológico, principalmente aqueles pertencentes à espécie Trichoderma harzianumcom vários mecanismos envolvidos incluem produção de antibióticos, micoparasitismo, competição por nutrientes e indução de resistência da planta hospedeira. Micoparasitismo é um processo sequencial que envolve reconhecimento do hospedeiro, contato, adesão, expressão de genes específicos e secreção de metabólitos secundários. Várias enzimas hidrolíticas estão envolvidas neste processo dentre elas quitinases, beta-glucanases e proteases. Estudos recentes de interação de T. harzianum com alguns fitopatógenos tem demonstrado que outras enzimas podem também estar envolvidas neste mecanismo, dentre elas as alfamanosidases. As alfa-manosidases tem um papel fundamental na reciclagem de glicoproteínas em fungos filamentosos, mas pouco se sabe sobre o papel destas enzimas no micoparasitismo. Este trabalho tem como objetivo a caracterização da expressão do gene de alfa-manosidase de T. harzianumapós crescimento em parede celular de Sclerotinia sclerotiorum (SS), Fusarium solani (FS) e Fusarium oxysporum (FO), bem como durante a interação in vivo. Como controle foi utilizado parede celular de T. harzianum (TH). Além disto, trabalhos de obtenção de mutantes deste gene em T. harzianum foram realizados. Nossos dados mostraram que o gene de alfa-manosidase foi altamente expresso quando T. harzianum cresceu na presença de parede celular de SS (4.5X), FS (18X) e FO (75X) quando comparado com o controle TH (1X). Em situação de confronto foi observado uma expressão de 75X maior na situação TH x FO durante o contato, quando comparado com o controle (TH x TH). Na outras situações de confronto não observamos um aumento significativo de expressão. A região promotora, a marca de seleção e a região terminadora do gene da alfa-manosidase de T. harzianumfoi clonado no vetor pRS426 e o cassete de deleção foi montado através da técnica de recombinação em Saccharomyces cerevisiae . Em seguida, estes vetores foram utilizados para a transformação de T. harzianume os transformantes foram obtidos por seleção em placas contendo higromicina b. Aproximadamente 50 transformantes foram obtidos, mas em nenhum deles o gene da alfa-manosidase foi deletado com sucesso. A obtenção de mais transformantes se faz necessário para que possamos ter um mutante com o gene da alfa-manosidase deletado.