OLIVEIRA, Henrique Pinho. Proteínas antifúngicas do látex de Marsdenia megalantha [GOYDER & MORILLO, 1994] – Caracterização Bioquímica e mecanismos de ação. XIV, 114 f. : Dissertação (Mestrado) - Universidade Federal do Ceará, Centro de Ciências, Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica. Fortaleza-CE, 2009. / Submitted by Eric Santiago (erichhcl@gmail.com) on 2016-05-23T12:17:56Z No. of bitstreams: 1 2009_dis_hpoliveira.pdf: 2711992 bytes, checksum: 0a015faa7a4251855704e8290f0a8b0a (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-07-05T19:04:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_dis_hpoliveira.pdf: 2711992 bytes, checksum: 0a015faa7a4251855704e8290f0a8b0a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-05T19:04:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_dis_hpoliveira.pdf: 2711992 bytes, checksum: 0a015faa7a4251855704e8290f0a8b0a (MD5) Previous issue date: 2009 / Masdenia megalantha (Apocynaceae ) is a species which grows on the hinterland in Northeast, Brazil. Upon injuries, each organ of the plant exudates a latex which quickly coagulates on exposure to air, preventing losses of water and the penetrat ion of plant pathogens. This present work had the aim to describe the antifungal properties of M. megalantha latex and to identify the related proteins in plant defense against phytopathogenous. So, latex was harvested from trees in Quix adá, Ceará, Brazil, and diluted with 0.05 M Tris - HCl, pH 8.0, containing 0.15 M NaCl (10:1, v/v) , to prevent its coagulation. The diluted latex was centrifuged (10,000 g , 10 min, 25 ºC), dialyzed extensively against water, and further centrifuged under the same above conditi ons. The supernatant, denominated Latex Proteins (LP), after exhaustive dialysis against 0.05 M sodium acetate, pH 5.2, was applied to a Resource - Q column equilibrated with this same buffer. Two different fractionswas obtained, one the non - retained protein s (FnRq), eluted with the equilibrating buffer, and the other, the retained proteins (FRq), eluted with 0.2 M NaCl in the above buffer. The FnRq (22 μfP/mL) was the only fraction able to inhibited the spore germination of the phytophatogenic fungi Fusarium solani . In addition, the evaluation of some enzymatic activities involved in plant defense mechanisms against phytopathogenous fungi such as chitinases, peroxidases and proteases were observed in both fractions from Resource - Q. FnRq, after performed in a Superose - 12 HR 10/30 column chromatography, originated another two different protein peaks (S1 and S2), showing different enzymatic activities, but both capable to inhibit the spore germination of the phytopathogenic fungi F. solani . S1 concentrated all th e peroxidase activity, whereas S2, which concentrate the chitinolityc activity. Under SDS - PAGE, S1 was presented as a purified protein band, instead of S2. Indeed, the NH2 - Terminal sequence under Edman degradation showed that S1 protein was blocked. The an tifungal action mechanisms evaluated in this work has showed that these protein presents in M. megalantha latex were able to interfere with the proton pump present in plasmatic membrane, and also to induce the ROS production, and promote alteration in the membrane permeability within the F. solani spores. These results show the latex from M. megalantha as a rich source of antifungal proteins, with potential to been used in the defense against the phytopathogenous F. solani. / Marsdenia megalantha (Apocynaceae) é uma espécie encontrada sobre rochas graníticas no interior do Nordeste brasileiro. Ao sofrer injúrias, diferentes partes da planta exudam látex que, rapidamente, coagula, prevenindo perda de água e penetração de patógenos. O presente trabalho teve como objetivo avaliar as propriedades antifúngicas do látex M. megalantha e identificar proteínas relacionadas com o mecanismo de defesa das plantas contra fitopatógenos. Para isso, indivíduos dessa espécie foram coletados no município de Quixadá-CE e o látex coletado em alíquotas de tampão Tris-HCl 0,05 M, pH 8,0, contendo NaCl 0,15 M (10:1, v/v), a fim de evitar sua coagulação. Esse material foi centrifugado a 10.000 x g, 10 min, 25 ºC, dialisado exaustivamente contra água destilada e, novamente, centrifugado sob as mesmas condições. O sobrenadante, denominado de proteínas totais do látex, após diálise contra tampão acetato de sódio 0,05 M, pH 5,2, foi submetido à cromatografia em coluna de Resource-Q, equilibrada com esse mesmo tampão. Duas frações protéicas foram obtidas, uma não retida (FnRq), obtida com o tampão de equilíbrio, e uma retida (FRq), resultante do acréscimo de NaCl 0,2 M ao tampão. Na avaliação do potencial antifúngico, FnRq (22 μgP/mL) se mostrou capaz de inibir a germinação dos esporos de Fusarium solani. Quando avaliadas atividades enzimáticas relacionadas ao mecanismo de defesa das plantas, quitinases, peroxidases e proteases foram detectadas em ambas as frações oriundas da Resource Q. FnRq, após cromatografia em coluna de Superose 12 HR 10/30, resultou em dois picos (S1 e S2), com atividades enzimáticas distintas, porém ambas com potencial para inibir a germinação dos esporos de F. solani. Em S1 ficou concentrada toda atividade peroxidásica, diferentemente de S2 que reteve a atividade quitinásica. Por PADE-SDS, S1 se mostrou puro, como uma única banda de Mr de 67 kDa, diferindo de S2, cujo perfil apresentou várias bandas protéicas. Sequenciamento por degradação de Edman revelou que a extremidade NH2-terminal de S1 estava bloqueada. Avaliação dos mecanismos de ação antifúngica usando esporos de F. solani mostrou que proteínas presentes no látex de M. megalantha são capazes de interferir com o funcionamento de bombas de prótons, de induzir a produção de espécies reativas de oxigênio e de causar alterações na permeabilidade de membranas. Esses resultados apresentam o látex de M. megalantha como uma rica fonte de proteínas antifúngicas, com potencial para serem usadas na defesa contra o fitopatógeno F. solani.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:05:44Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4600_1.pdf: 1342100 bytes, checksum: d7618cd80a12e082157ab2e864f2c701 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2006 / Fundação de Amparo à Ciência e Tecnologia do Estado de Pernambuco / Objetivando o diagnóstico das doenças foliares da bananeira (Musa spp.) ocorrentes no município de Belo Jardim, Estado de Pernambuco, Brasil, foi realizada a presente pesquisa, envolvendo o isolamento e a identificação de fungos fitopatógenos de três cultivares de banana: Prata, Pacovan e Nanicão. Folhas novas, intermediárias e velhas, apresentando sintomas de manchas e lesões, foram coletadas, sendo utilizados dois métodos para isolamento dos fungos: direto e câmara úmida. O método direto foi o mais eficiente para o isolamento de todos os fungos fitopatógenos. Os fungos identificados e as respectivas doenças produzidas foram: sigatoka-amarela (Pseudocercospora musae), mal-do-Panamá (Fusarium oxysporum), antracnose (Glomerella musarum; Colletotrichum musae), mancha de Deightoniella (Deightoniella torulosa) e mancha de Cladosporium (Cladosporium musae). O isolamento de P. musae ocorreu pelo método direto e em meio de cultura com extrato de folha de bananeira. Os demais isolados foram obtidos pelos dois métodos e em batata-dextrose-ágar. Maiores índices de fungos fitopatógenos foram registrados nas folhas intermediárias e na cultivar Prata. Para determinação da patogenicidade, os isolados foram inoculados em folhas de bananeira micropropagadas, pelo método de discos de micélio (5mm de diâmetro) com escarificação. A reprodução dos sintomas foi observada em todas as cultivares inoculadas, sendo todos, fungos patogênicos. As características macroscópicas e microscópicas e aspecto das doenças após inoculação artificial dos fitopatógenos foram descritas e fotografadas

ARRUDA, F. V. S. Atividade de lectinas de leguminosas sobre a germinação de esporos de fungos fitopatogênicos. 2009. 69 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2009. / Submitted by Francisco Lacerda (lacerda@ufc.br) on 2015-01-23T21:08:38Z No. of bitstreams: 1 2009_dis_fvsarruda.pdf: 4076915 bytes, checksum: f6c6665743e913178363f22bd996eb14 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2015-02-25T20:45:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_dis_fvsarruda.pdf: 4076915 bytes, checksum: f6c6665743e913178363f22bd996eb14 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-02-25T20:45:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_dis_fvsarruda.pdf: 4076915 bytes, checksum: f6c6665743e913178363f22bd996eb14 (MD5) Previous issue date: 2009 / Lectins represent a diversified group of proteins, both in terms of size and structure, as well as in relation to biological activities that they play on different organisms. Most of lectins have been isolated from plants and some of them can exert remarkable antifungal activities. This work shows the effect of five structurally related lectins, which were purified from the seeds of Canavalia ensiformis (ConA), C. boliviana (Cbol), C. maritima (ConM), C. brasiliensis (ConBr) and C. gladiata (ConG), respectively, on the in vitro growth of phytopathogenic fungi Mucor sp., Rhizoctonia solani, Colletotrichum musae and C. lindemuthianum. In order to determine the effect of lectins, fungal spores were properly isolated, treated with each lectin in a concentration of 500 μg/ml for 24 hours and then inoculated to growth at 27°C in 96-well polystyrene plates containing potato dextrose broth. The fungal growth was assessed at different times by measuring the optical density at 620 nanometers. The negative control was performed with 0.15 M NaCl. In order to verify if the effect on fungal growth occurred merely by the presence of protein, the fungi were grown in the presence of bovine serum albumin (BSA). The results showed that the growth of Mucor sp. is decreased when spores were treated with ConA. On the other hand, all the other lectins enhanced its growth. With respect to other species, it was observed that fungal growth is increased when the spores were treated with lectins. / Lectinas representam um grupo diversificado de proteínas, tanto em termos de tamanho e estrutura, quanto com relação às atividades biológicas que desempenham sobre diferentes organismos. A maioria das lectinas tem sido isolada de plantas e algumas podem exercer atividades antifúngicas marcantes. Este trabalho apresenta o efeito de cinco lectinas estruturalmente relacionadas, as quais foram purificadas, respectivamente, das sementes de Canavalia ensiformis (ConA), C. boliviana (Cbol), C. maritima (ConM), C. brasiliensis (ConBr) e C. gladiata (ConG), sobre o crescimento in vitro dos fungos fitopatogênicos Mucor sp., Rhizoctonia solani, Colletotrichum musae e C. lindemuthianum. No sentido de determinar o efeito das lectinas, os esporos fúngicos foram devidamente isolados, tratados com cada uma das lectinas na concentração de 500 μg/mL durante 24 horas e então inoculados para crescimento a 27ºC em placas de poliestireno de 96 poços contendo caldo batata dextrose. O crescimento dos fungos foi avaliado em diferentes tempos através da determinação da densidade óptica a 620 nanômetros. O controle negativo foi feito com NaCl 0,15 M. No sentido de verificar se o efeito das lectinas sobre o crescimento fúngico era meramente proteico, os fungos foram crescidos na presença de albumina sérica bovina (BSA). Os resultados mostraram que o crescimento de Mucor sp. foi diminuído quando seus esporos foram tratados com ConA. Por outro lado, todas as outras lectinas promoveram o aumento de seu crescimento. Com relação às outras espécies, observou-se que o crescimento fúngico é aumentado quando os esporos são tratados com as lectinas.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2018-04-19T13:52:32Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1721815 bytes, checksum: 43f6125a682c349b31f8f0fb972ad1c3 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-19T13:52:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1721815 bytes, checksum: 43f6125a682c349b31f8f0fb972ad1c3 (MD5) Previous issue date: 2018-02-20 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Em resposta a infecções por patógenos, as plantas modulam vias de sinalização mediada por hormônios, tais como SA, MeJA e auxina. Essas vias podem resultar em alteração da expressão gênica, processo importante para a mitigação dos efeitos da infecção. Essa reprogramação transcricional é regulada através de fatores de transcrição. Os fatores de transcrição da família gênica bZIPs são reguladores importantes em plantas e alguns de seus membros estão envolvidos em respostas de defesa contra patógenos. Neste estudo, descreveu-se a caracterização funcional do fator de transcrição GmbZIP105 e da proteína GmARP15g em resposta a infecção pelo fungo causador da ferrugem asiática da soja. Além disso, potencias grupos da família DRM1/ARP foram identificados por meio de metodologias de agrupamento in silico de sequências. Os perfis de expressão de genes presente nestes grupos foram avaliados em resposta ao tratamento com os hormônios auxina e MeJA e à infecção por patógenos em plantas de soja. As proteínas GmbZIP105 e GmARP15g interagem em ensaios de duplo híbrido de leveduras. Além disso, apresentam o mesmo perfil transcricional em resposta ao tratamento com os hormônios MeJA e auxina. GmbZIP105 induz a expressão de genes relacionados a fotossíntese, enquanto GmARP15g interage com PSBS, uma proteína que compõe o PSII. Esses resultados sugerem uma relação funcional entre estas proteínas e que, provavelmente, GmARP15g modula a localização ou a atividade do fator de transcrição GmbZIP105. / In response to pathogen infections, plants modulate a series of signaling pathways that are mediated by hormones, such as SA, MeJA and auxin. These pathways may result in gene expression alteration that is important for mitigating the effects of infection. This transcriptional reprogramming is regulated by transcription factors. bZIP’s transcriptional factors are important regulators in plants. Some of their members are involved in defense responses against pathogens. This study describes the functional characterization for GMbZIP105 transcriptional factor and GmARP15g protein during response against fungal infection. For that, it was used the fungus that causes ASR – Asian soybean rust. In addition, in silico analysis using clustering methodologies were applied to identify potential DRM1 / ARP family groups. The expression profiles of these groups were evaluated in response to treatment with hormones auxin and MeJA and during pathogen infection in soybean. The proteins GmbZIP105 and GmARP15g interact in two-hybrid yeast assays; in addition, they present the same transcriptional profile in response to treatment with hormones MeJA and auxin and are responsive to pathogen. GmbZIP105 induces the expression of genes related to photosynthesis, while GmARP15g interacts with one of the PSII proteins. These results suggest a functional relationship between both proteins in which GmARP15g probably modulates the localization or activity of the transcription factor GmbZIP105.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Programa de Pós-Graduação em Agronomia, 2018. / Submitted by Robson Amaral (robsonamaral@bce.unb.br) on 2018-05-11T13:53:19Z No. of bitstreams: 1 2018_AlysonSilvadeAraujo.pdf: 3066304 bytes, checksum: cf95de43c6b402d277baf1937a0b984f (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-06-07T12:18:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2018_AlysonSilvadeAraujo.pdf: 3066304 bytes, checksum: cf95de43c6b402d277baf1937a0b984f (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-07T12:18:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2018_AlysonSilvadeAraujo.pdf: 3066304 bytes, checksum: cf95de43c6b402d277baf1937a0b984f (MD5) Previous issue date: 2018-06-07 / Macrophomina phaseolina é um importante patógeno habitante do solo, associado ao “damping- off” e podridões de raízes e caules em mais de 700 espécies de plantas. O uso de biochar (BCH) de lodo de esgoto, aplicado ao solo, tem despertado interesse em diferentes estudos para o controle de doenças em plantas, proporcionando uma inibição ou mesmo suprimindo fitopatógenos. O controle biológico é evidenciado por ser uma alternativa eficaz para o manejo de diferentes fitopatógenos. Trichoderma é um dos mais estudados e utilizados agentes de biocontrole de doenças vegetais em todo o mundo. O objetivo desse trabalho foi avaliar os efeitos da aplicação ao solo de BCH, Trichoderma harzianum e da associação BCH + T. harzianum sobre M. phaseolina em aspectos agronômicos das culturas de soja, milho, feijão e algodão inoculadas ou não com o fitopatógeno. Foi avaliado o efeito direto de concentrações (0,0; 0,5; 1,0; 2,0; 5,0 e 10,0%) de BCH sobre o crescimento micelial de isolados de M. phaseolina. Foi observado ainda a capacidade de biocontrole por meio do uso do pareamento de cultura (T. harzianum x M. phaseolina) com ou sem biochar. Além disso, foi avaliado o uso de BCH, do T. harzianum, e da associação BCH + T. harzianum em plantas de feijão e soja para controle de M. phaseolina em experimento conduzido em casa de vegetação. Biochar de lodo de esgoto, pirolisado a 500 oC e utilizado em baixa concentração (0,5%), possui efeito direto no controle in vitro de diferentes isolados de M. phaseolina. No entanto, concentrações mais elevadas do BCH estimulou o crescimento do fungo. Trichoderma harzianum (linhagem 1306) inibiu o crescimento micelial de M. phaseolina, em meio de cultura com ou sem biochar. Macrophomina phaseolina afeta negativamente: (a) a germinação e sobrevivência de plantas de soja e; (b) a germinação, sobrevivência e número de vagens de plantas de feijão comum. O isolado 428 de M. phaseolina reduziu todos os índices agronômicos (germinação, sobrevivência, número de vagens, massa fresca e seca) de plantas de feijão. O uso de BCH aumentou o número de vagens em plantas de soja, inoculadas ou não com M. phaseolina. A associação T. harzianum + BCH de lodo de esgoto aumentou o número de vagens, massa fresca e seca de plantas de feijão, inoculadas ou não com M. phaseolina. / Macrophomina phaseolina is an important soil pathogen, associated with “damping-off” and root and stem rot in more than 700 plant species. The use of biochar (BCH) of sewage sludge applied to the soil, has aroused interest in studies for the control of diseases in plants, providing an inhibition of plant pathogens. Biological control is evidenced as an effective alternative for the management of different phytopathogens. Trichoderma is one of the most studied and used biocontrol agents of plant diseases worldwide. The objective of this work was to evaluate the effects of BCH, Trichoderma harzianum and BCH + T. harzianum on M. phaseolina and on agronomic aspects of soybeans, maize, beans and cotton inoculated or not with M. phaseolina. The direct effect of concentrations (0.0, 0.5, 1.0, 2.0, 5.0 and 10.0%) of BCH on the mycelial growth of M. phaseolina isolates was evaluated. It was also observed the biocontrol capacity using culture pairing (T. harzianum x M. phaseolina) with or without biochar. In addition, the use of BCH, T. harzianum, and the association BCH + T. harzianum in bean and soybean plants were evaluated for M. phaseolina control in a greenhouse experiment. Biochar of sewage sludge, pyrolyzed at 500 oC and used in low concentration (0.5%), has direct effect on the in vitro control of isolates of M. phaseolina. However, higher concentrations of BCH stimulated fungal growth. Trichoderma harzianum (strain 1306) inhibited the mycelial growth of M. phaseolina, in culture medium with or without biochar. Macrophomina phaseolina negatively affects: (a) the germination and survival of soybean plants, and; (b) the germination, survival and number of pods of common bean plants. Isolate 428 from M. phaseolina reduced all agronomic characteristics (germination, survival, number of pods, fresh and dry mass) of bean plants. The use of BCH increased the number of pods in soybean plants, inoculated or not with M. phaseolina. The association of T. harzianum + BCH of sewage sludge increased the number of pods, fresh and dry mass of bean plants, whether or not inoculated with M. phaseolina.

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2017-08-22T13:09:41Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Dissertacao_DiogoCavalcanti_BC.pdf: 3366342 bytes, checksum: 1cb002141032824ff8d879898ca1256e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-22T13:09:41Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Dissertacao_DiogoCavalcanti_BC.pdf: 3366342 bytes, checksum: 1cb002141032824ff8d879898ca1256e (MD5) Previous issue date: 2016-02-25 / FACEPE / O aumento da produtividade agrícola é impactado negativamente por estresses bióticos e abióticos, que são os principais responsáveis pela drástica redução da produção do feijão-caupi (Vigna unguiculata). Para se defender dos estresses bióticos, os vegetais desenvolveram sofisticados mecanismos, incluindo o sistema de defesa pré-invasivo, localizado nas partes externas dos vegetais e impedindo a entrada do patógeno, e a imunidade inata, que reconhece estruturas fundamentais dos microorganismos e induz a produção de proteínas de combate aos patógenos. Dentre elas as defensinas, que inviabilizam o estabelecimento de agentes invasores. Por sua vez, o melão-de-são-caetano (Momordica charantia) dispõe de transcriptoma sequenciado e destaca-se pelo seu potencial antimicrobiano. A partir de análises in silico no transcriptoma dessa espécie foram selecionados cinco genes-candidatos da classe das defensinas. Destes, o gene McDef1 apresentou domínio conservado completo com predição de atividade antifúngica. A defensina McDef1 exibe regiões conservadas na maioria das defensinas de plantas incluindo oito cisteínas, uma serina na posição 8, um aminoácido aromático na posição 11 e resíduos de glicina nas posições 13 e 34. Após análise fenéticas a McDef1 foi agrupada com outras defensinas já descritas com atividades antifúngicas in vitro e/ou in vivo, o que reforça a predição revelada pelas análises in silico. Um vetor pAHASMCDEF1, portando o gene McDef1 e Atahas, que confere resistência ao herbicida Imazapyr, foi construído e utilizado para bombardear 880 embriões de feijão-caupi através da técnica de biobalística. Destes, sete plantas transformadas foram geradas, com eficiência de transformação semelhante àquela de trabalhos anteriores com feijão-caupi. As próximas etapas compreendem a multiplicação das plantas transformadas até a geração T3, após o que as mesmas serão inoculadas com fungos fitopatogênicos, os quais podem causar perdas de até 50% na produção em feijão-caupi. / Increased agricultural productivity is negatively impacted by biotic and abiotic stresses, that are responsibles for the drastic reduction in cowpea (Vigna unguiculata) production. To defend against biotic stresses, plants have developed sophisticated mechanisms including a pre-invasive defense system, located in the external parts of plants to prevent pathogenic entry, and the innate immunity, which recognizes fundamental structures of microorganisms and induces proteins production that avoid the pathogen establishment. Among them defensins, that prevent the establishment of invading agents. In turn, the bitter melon (Momordica charantia) disposes a sequenced transcriptome and stands out for its antimicrobial potential. After an in silico analysis of M. charantia transcriptome, five defensin gene candidates were selected. Of these, McDef1 gene exhibited a complete conserved domain with prediction of its antifungal activity. The McDef1 defensin displayed conserved regions similar to most plant defensins including eight cysteines, a serine at position 8, an aromatic amino acid at position 11 and glycine residues at positions 13 and 34. After phenetic analyzes, McDef1 was grouped with other defensins previously described with in vitro and/or in vivo antifungal activity, reinforcing the in silico prediction analysis. A pAHASMCDEF1 vector was constructed, bearing the McDef1 and Atahas gene, which confers resistance to the herbicide Imazapyr, being used for bombardment of 880 cowpea embryos by biolistic technique. Of these, seven transformed plants were generated, with transformation efficiency similar to previous reports for cowpea. The next steps include the multiplication of transformed plants up to the T3 generation, after which they will be inoculated with pathogenic fungi, which can cause losses of up to 50% in cowpea production.

Memoria para optar al Título profesional de Ingeniera Agrónoma Mención Sanidad Vegetal / La pudrición ácida, causada por Geotrichum candidum, afecta a carozos en postcosecha. La fuente de inóculo son los frutos podridos en el huerto, que contaminan los materiales de cosecha, aguas de lavado, líneas de selección y embalaje. Los síntomas de la enfermedad se presentan en los mercados de destino y escasamente en almacenamiento o laboratorio, no existiendo una metodología para reproducirla, siendo difícil conocer su epidemiología o el efecto de las medidas de manejo. Investigaciones previas han mostrado que el congelamiento y posterior incubación a temperatura ambiente permiten la detección de poblaciones epífitas del patógeno sobre la fruta. Para inhibir el desarrollo de hongos saprófitos que impiden el recuento de G. candidum en postcosecha, como Penicillium y Rhizopus, se evaluaron las mezclas de fungicidas dicloran + iprodione, dicloran + imazalil, dicloran + pyrimethanil y dicloran + benomyl, asperjándolas sobre duraznos cv. Zee Lady posteriormente congelados y mantenidos en cámara húmeda durante cinco días, comparando los resultados con un tratamiento testigo (sin fungicida). Se determinó el porcentaje de frutos con poblaciones epífitas de cada hongo, resultando efectivas para el recuento de G. candidum todas las mezclas excepto dicloran + imazalil. Para verificar efectos inhibitorios de los fungicidas sobre Geotrichum candidum, duraznos cv. Ross fueron inoculados con el hongo previo al tratamiento con fungicidas y congelación. Todas las mezclas permitieron el recuento del patógeno. Aunque los fungicidas no eliminaron completamente los saprófitos Rhizopus, Cladosporium, Penicillium y Aspergillus, sí impidieron que éstos colonizaran totalmente los frutos, permitiendo el desarrollo y recuento de G. candidum. También se determinó el efecto de los fungicidas sobre el crecimiento miceliar in vitro de dos cepas de G. candidum, comparadas con un testigo sin fungicidas. Dicloran + pyrimethanil y dicloran + benomyl, a la mitad de la dosis, presentaron la menor inhibición del crecimiento miceliar del hongo. Además, se determinó el porcentaje de frutos con poblaciones epífitas de Geotrichum candidum en duraznos cv. Sweet September provenientes de huertos comerciales con y sin historial de pudrición ácida, en tres etapas del proceso de embalaje (bins llegada a la planta, hidrocooler y caja embalada). Se observó que la fruta de los huertos sin historial alcanzó el mismo nivel de inóculo en caja embalada que la de aquellos con historial. Esto se debería a la redistribución del inóculo de G. candidum durante el proceso de selección y embalaje, después del hidrocooler. En ambos casos se determinó que casi la totalidad de los frutos presentaron poblaciones epífitas del hongo una vez embalados. / Sour rot of stone fruit caused by Geotrichum candidum has become an important disease in exported peaches. The inoculum coming from rotten fruits in the orchard contaminates the fruit and picking materials, as well as water tanks and packing lines at the packing facilities. Disease symptoms appear in the export markets, but the incidence is barely observed at the national storage or markets. There is not at the present a methodology to replicate the disease in order to better know the disease and the effectiveness of control practices. Previous work showed that freezing the fruit and incubating at room temperature allowed the detection of the epiphytic populations of the pathogen on the fruit, but the colonies of G. candidum were sometimes overgrowth by other saprophytic fungi, like Penicillium and Rhizopus. To inhibit the saprophytic fungi that prevent G. candidum enumeration, fungicide mixtures of dicloran + iprodione, dicloran + imazalil, dicloran + pyrimethanil and dicloran + benomyl were spray over Zee Lady peaches before freezing for 4 days. To observe the effect of the fungicide combination on G. candidum, inoculated Ross peaches were also treated. The effect of the mixtures of fungicides was also evaluated in vitro for the inhibition of the mycelial growth of the pathogen. Finally, the epiphytic populations of G. candidum on Sweet September peaches, from orchards with or without history of the disease, were determined at the arrival of the fruit at the packing facility, after the hidrocooler and at the end of the packing line. All the fungicide mixtures but dicloran + imazalil effectively reduced the saprophytic growth of Rhizopus, Cladosporium, Penicillium and Aspergillus. All mixtures allowed enumeration of G candidum and although the fungicides did not eliminate saprophytic fungi, they prevented complete fruit colonization, allowing G. candidum growth. Half dose of dicloran + pyrimethanil and dicloran + benomyl had less inhibition of the in vitro miceliar growth of G. candidum. The epiphytic population of G. candidum was lower in fruit coming from the orchards without history of the disease. The population did not increased after the hidrocooler but raised to almost a 100 % at the end of the packing line for both kinds of fruit.

Existe un gran interés por estudiar productos naturales bioactivos que ofrezcan una alternativa sustentable para el control de las enfermedades en cultivos. El propóleos y los aceites esenciales se presentan como candidatos promisorios en tal sentido, ya que poseen compuestos derivados del metabolismo secundario vegetal con actividad biológica. No obstante, las investigaciones al respecto son escasas. En este contexto, el objetivo de esta tesis fue estudiar de forma integral las características de extractos de propóleos y de aceites esenciales de orégano, su actividad antimicrobiana individual y combinada frente a diversos fitopatógenos y su acción fitoinhibitoria sobre propágulos de especies cultivadas. Para esto, el esquema de trabajo comenzó con la bioprospección de distintos extractos de propóleos (EP), así como de aceites esenciales de orégano (AEO). Las muestras presentaron diversas características, destacándose que todas contenían una abundante cantidad de compuestos bioactivos pertenecientes al grupo de los fenoles en los EP, y de los terpenos en los AEO. Luego, se probaron in vitro las propiedades antimicrobianas del EP y del AEO frente a fitopatógenos aislados de propágulos hortícolas y caracterizados morfológica y genotípicamente. Ambos productos mostraron diferencias en su eficacia y forma de actuar frente a Penicillium allii y a Sclerotinia sclerotiorum. El hallazgo más novedoso de estos estudios fue que la combinación de EP con AEO tuvo un efecto antifúngico sinérgico frente a los mencionados patógenos. Por otro lado, también se probó la acción antibacteriana del EP sobre bacterias fitopatógenas. Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis, Xanthomonas gardneri, X. vesicatoria y Pseudomonas corrugata resultaron sensibles a dicho producto. En los estudios referidos a las propiedades fitoinhibitorias del EP y del AEO sobre propágulos de lechuga (Lactuca sativa), ajo (Allium sativum) y poroto pallares (Phaseolous lunatus), se evidenció que existen diferencias en su tolerancia a la aplicación de los productos estudiados. Estos ensayos permitieron seleccionar formulaciones a base de EP y/o de AEO sin efectos adversos para dichos disemínulos, lo que fue fundamental para evitar comprometer su calidad fisiológica. Por último, a través de estudios in vivo, se determinó que la combinación de EP con AEO disminuyó la incidencia y la severidad de la mufa del ajo causada por P. allii en bulbillos, y de moho blanco causado por S. sclerotiorum en semillas de poroto pallares. Estos resultados constituyeron el primer reporte respecto de la actividad antifúngica in vivo del EP combinado con AEO frente a las mencionadas enfermedades. El trabajo realizado en esta tesis, además de ser de gran interés respecto de las características y propiedades del EP y del AEO, reporta por primera vez la acción antifúngica sinérgica que se logra al combinarlos. Los resultados obtenidos demostraron el gran potencial que poseen ambos productos para el control de enfermedades en las semillas, lo que permitirá avanzar en el desarrollo de alternativas sustentables para el manejo de fitopatógenos en la horticultura. / In recent years, there has been a growing interest in the use of biofungicides as safe and effective alternatives for crop protection. Propolis and essential oils are potential candidates, due to their biological activity related to the secondary metabolites they content. However, research in this area is scarce. The aim of this thesis was to comprehensively study the characteristics of propolis extracts and oregano essential oils, their individual and combined antimicrobial activity against several phytopathogens, and their phytoinhibitory action on plant crop propagules. Accordingly, a work scheme was followed. It began with the bioprospection of different samples of propolis extracts (PE), as well as of different oregano essential oils (OEO). The samples showed different characteristics, all containing a large number of bioactive compounds from the group of phenols in PE and terpenes in OEO. The antimicrobial properties of PE and OEO were then tested in vitro against phytopathogens isolated from horticultural seeds previously characterized morphologically and genotypically. Both products showed differences in their efficacy and mode of action against Penicillium allii and Sclerotinia sclerotiorum. The most significant finding was that the combination of PE with OEO had a synergistic antifungal effect against the fungi mentioned. On the other hand, the antibacterial activity of PE against several phytopathogenic bacteria was also demonstrated. Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis, Xanthomonas gardneri, X. vesicatoria, and Pseudomonas corrugata showed sensitivity to this product. Studies on the phytoinhibitory properties of PE and OEO over lettuce (Lactuca sativa), garlic (Allium sativum), and lima bean (Phaseolous lunatus) propagules showed that there are differences in the tolerance of these structures to the tested products. These assays allowed selecting formulations based on PE and/or OEO without evidencing adverse effects on the seeds, which was crucial to avoid compromising their physiological quality. Finally, through in vivo studies, it was determined that the combination of PE with OEO reduced the incidence and severity of blue mold caused by P. allii in garlic bulbs and of white mold caused by S. sclerotiorum in lima bean seeds. These results led to the first report of in vivo antifungal activity of PE combined with OEO against those diseases. This work provides valuable information on the characteristics and properties of PE and OEO. It also proves the synergistic antifungal action exerted when combining them. The results reported show the significant potential of both products to control seed disease. These findings will allow developing sustainable alternatives for the management of phytopathogens in horticulture.

Xylella fastidiosa (Xf) é o agente etiológico causador de doenças em uma grande variedade de cultivos de grande importância econômica, causando a c1orose variegada dos citros, uma das doenças mais danosas à indústria de citros no Brasil. Os genomas de algumas cepas deste fitopatógeno foram completamente seqüenciados promovendo assim estudos funcionais do genoma em larga escala. Neste trabalho nós nos propusemos a investigar o perfil de transcrição de Xf através da técnica microarranjos (no título da dissertação microarrays, mas a partir de agora usaremos microaarranjos) de DNA usando todo o genoma do fitopatógeno e cultivando-a sob meio definido variando a concentração de glicose. O objetivo inicial deste trabalho era observar se Xf comportava-se da mesma forma que Xac, que tem a expressão de goma aumentada devido ao aumento da concentração de glicose do meio. Nossas análises revelaram que enquanto os transcritos relacionados à goma não se mostraram afetados com a concentração de glicose, genes que codificam para análogos a Colicina-V e precursores de fimbria foram induzidos em alta concentração de glicose. Baseados nestes resultados, nós propusemos um modelo de mecanismo de produção e defesa contra a Colicina em Xf. / Abstract not available.

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