Diss. (sammanfattning) Uppsala : Uppsala universitet, 2006. / Härtill 5 uppsatser.

Thesis(M.S.)--Auburn University, 2006. / Abstract. Includes bibliographic references (p.69-73).

Thesis (doctoral)--University of Helsinki, 2004. / Includes bibliographical references. Also available on the World Wide Web.

Diss. (sammanfattning) Umeå : Sveriges lantbruksuniv., 2008. / Härtill 4 uppsatser.

Thesis (MSc)--University of Stellenbosch, 2008. / Bibliography. Also available via the Internet.

Thesis (doctoral)--University of Helsinki, 2004. / Includes bibliographical references. Also available on the World Wide Web.

O Penicillium echinulatwn linhagem 9A02Sl é um fungo filamentoso que apresenta um sistema celulolítico com potencial para aplicaqão em processos de degradação de materiais lignocelulósicos para produção de etanol. O crescente interesse nesse combustível e a abundância de materiais lignocelulósicos que podem ser usados como matéria-prima fez aumentar o interesse no estudo de celulases. Neste estudo, a linhagem 9A02Sl de Penicillium echinulatum foi cultivada em cultivos submersos em frascos mantidos sob agitação recíproca, com variações quanto às fontes de carbono. Além de crescimento, foram avaliadas as produções de celulases, ~-glicosidases e xilanases e a expressão das enzimas através ale zimogramas em géis de poliacrilamida para detemlinação da massa molecular. Observou-se que o crescimento micelial provocou a redução do pH do meio de cultivo, e que não está relacionado a produção de enzimas. A celulose apresentou-se como indutora para todas as enzimas analisadas. A carboximetilcelulose mostrou-se uma eficiente fonte de carbono para a produção de atividade sobre papel filtro, endoglicanases e xilanases, apesar do baixo crescimento micelial. Celobiose, glicerol e glicose estimularam a produção de ~glicosidases. Uma banda de atividade endoglicanêlsica de 74 kDa foi detectada nos zimogramas de todos os caldos enzimáticas obtidos na presença d1e diferentes fontes de carbono, sugerindo esta seja uma enzima constitutiva. A expressão da ~-glicosidase oconeu ao fmal do cultivo (5° e 6° dias), sendo que em todos os cultivos avaliados houve a expressão de uma banda de 220 kDa, indicando tratar-se de uma enzima constitutiva. A expressão de outras bandas com diferentes massas moleculares sugerem que diferentes genes, fotmats multiméricas ou modificações pós-traducionais estão envolvidos no perfil destas enzimas em Peni'cillium echinulatum. / Submitted by Ana Guimarães Pereira (agpereir@ucs.br) on 2015-09-22T17:54:12Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao Denise Zampieri.pdf: 18671785 bytes, checksum: 0c85c4e913bd6377f21bfe2a1fe9e8ff (MD5) / Made available in DSpace on 2015-09-22T17:54:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Denise Zampieri.pdf: 18671785 bytes, checksum: 0c85c4e913bd6377f21bfe2a1fe9e8ff (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico, CNPq / The st:rain of Penicillium echinulatum 9A02Sl is a filamentous fungus that presents a cellulolytic system with potential application in processes of degradation of lignocellulosic materiais for ethanol production. The growing interest in fhel and the abundance of lignocellulosic materiais that can be used as raw material has inc:reased the interest in cellulases. In this study, the strain P echinulatum 9A02Sl was grown in submerged cultivation in agitated flasks in presence of different carbon sources. In addition to growth, it was evaluated the production of cellula.ses, Pglucosidases and xylanases, and enzyme expres:sion in activity polyacrylamide gels in order to detemlinate the molecular ma.ss. The mycelial growth decreased pH o f the medium and this fact was not related to enzyme production. The cellulose was an inducer for all the enzymes ana.lyzed. The carboximetilcellulose was found to be an effi[cient carbon source for production o f filter paper a.ctivity, endogluca.nases and xylanases, despite the low mycelial growth. Cellobiose, glycerol and glucose stimulated the production of P-glucosidases. An endoglucanase band of 74 kDa was detected in zymograms o f all enzyme broths obtained in the presence o f different carbon sources, suggesting it is a constitutive enzyme. The expression of P-glucosidase occuned at the end of cultivation (5 and 6 days), and in all medium that was evaluated was observed a 250 kDa band, indica.ting that this is a. constitutive enzyme. The expression of other bands with different molecular mass suggest that different genes, multimeric fonns or post-translational modifications are involved in the expression ofthese enzymes in P echinulatum.

O Penicillium echinulatwn linhagem 9A02Sl é um fungo filamentoso que apresenta um sistema celulolítico com potencial para aplicaqão em processos de degradação de materiais lignocelulósicos para produção de etanol. O crescente interesse nesse combustível e a abundância de materiais lignocelulósicos que podem ser usados como matéria-prima fez aumentar o interesse no estudo de celulases. Neste estudo, a linhagem 9A02Sl de Penicillium echinulatum foi cultivada em cultivos submersos em frascos mantidos sob agitação recíproca, com variações quanto às fontes de carbono. Além de crescimento, foram avaliadas as produções de celulases, ~-glicosidases e xilanases e a expressão das enzimas através ale zimogramas em géis de poliacrilamida para detemlinação da massa molecular. Observou-se que o crescimento micelial provocou a redução do pH do meio de cultivo, e que não está relacionado a produção de enzimas. A celulose apresentou-se como indutora para todas as enzimas analisadas. A carboximetilcelulose mostrou-se uma eficiente fonte de carbono para a produção de atividade sobre papel filtro, endoglicanases e xilanases, apesar do baixo crescimento micelial. Celobiose, glicerol e glicose estimularam a produção de ~glicosidases. Uma banda de atividade endoglicanêlsica de 74 kDa foi detectada nos zimogramas de todos os caldos enzimáticas obtidos na presença d1e diferentes fontes de carbono, sugerindo esta seja uma enzima constitutiva. A expressão da ~-glicosidase oconeu ao fmal do cultivo (5° e 6° dias), sendo que em todos os cultivos avaliados houve a expressão de uma banda de 220 kDa, indicando tratar-se de uma enzima constitutiva. A expressão de outras bandas com diferentes massas moleculares sugerem que diferentes genes, fotmats multiméricas ou modificações pós-traducionais estão envolvidos no perfil destas enzimas em Peni'cillium echinulatum. / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico, CNPq / The st:rain of Penicillium echinulatum 9A02Sl is a filamentous fungus that presents a cellulolytic system with potential application in processes of degradation of lignocellulosic materiais for ethanol production. The growing interest in fhel and the abundance of lignocellulosic materiais that can be used as raw material has inc:reased the interest in cellulases. In this study, the strain P echinulatum 9A02Sl was grown in submerged cultivation in agitated flasks in presence of different carbon sources. In addition to growth, it was evaluated the production of cellula.ses, Pglucosidases and xylanases, and enzyme expres:sion in activity polyacrylamide gels in order to detemlinate the molecular ma.ss. The mycelial growth decreased pH o f the medium and this fact was not related to enzyme production. The cellulose was an inducer for all the enzymes ana.lyzed. The carboximetilcellulose was found to be an effi[cient carbon source for production o f filter paper a.ctivity, endogluca.nases and xylanases, despite the low mycelial growth. Cellobiose, glycerol and glucose stimulated the production of P-glucosidases. An endoglucanase band of 74 kDa was detected in zymograms o f all enzyme broths obtained in the presence o f different carbon sources, suggesting it is a constitutive enzyme. The expression of P-glucosidase occuned at the end of cultivation (5 and 6 days), and in all medium that was evaluated was observed a 250 kDa band, indica.ting that this is a. constitutive enzyme. The expression of other bands with different molecular mass suggest that different genes, multimeric fonns or post-translational modifications are involved in the expression ofthese enzymes in P echinulatum.

Orientador : Helia Harumi Sato / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-03T11:29:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fleuri_LucianaFrancisco_M.pdf: 5945832 bytes, checksum: 5ab1eb6f9e401508de39c0e1711f5aba (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: O presente trabalho visou o estudo da produção de b-1,3 glucanases, proteases líticas e quitinases pelas linhagens B1, B22, B26, FXX, Oerskovia sp. n04 e Celulomonas cartae nO191 em meios de cultura contendo diferentes indutores e aplicação na lise de leveduras. Entre as bactérias testadas as linhagens B26 e Cellulomonas cartae nº191 apresentaram maior produção de protease em meio de cultura TI composto de 8% de levedura seca instantânea; as linhagens Bl e C. cartae nº191 apresentaram maior produção de b-1,3 glucanase em meio de cultura m contendo 1% de parede celular de levedura extraída mecanicamente em Dyno- Mill; e a linhagem C. cartae nº191 apresentou maior produção de quitinase em meio de cultivo N contendo 1,5% de quitina neutralizada. Os sobrenadantes dos meios de cultura obtidos da fermentação das linhagens B1 e C. cartae nº191 cultivadas em meio de cultivo m mostraram maior atividade de lise de levedura. No estudo do fracionamento das enzimas líticas, a saturação do sobrenadante do meio de cultura com 60% de sulfato de amônio, foi adequada para a precipitação e obtenção de protease, b-1,3 glucanase e quitinase. As preparações de b-1,3 glucanase das linhagens B1 e C. cartae n °191 obtidas do sobrenadante do meio de cultura através de fracionamento com sulfato de amônio, apresentaram atividade de lise das leveduras Kluyveromyces lodderi, Saccharomyces cerevisiae (levedura de panificação Fleischmann), Saccharomyces cerevisiae (levedura de panificação Itaiquara) e sobre as linhagens "killer" Saccharomyces cerevisiae KL-88, Saccharomyces diastaticus NCYC 713, Saccharomyces cerevisiae NCYC 1001, Candida glabrata NCYC 388, Kluyveromyces marxianus NCYC 587 e Hansenula mrakii NCYC 500. As linhagens K marxianus NCYC 587 e H. mrakii NCYC 500 mostraram-se mais sensíveis à ação das b-1,3 glucanases e as linhagens de levedura ltaiquara e C. glabrata NCYC 388 mostraram-se mais resistentes à ação das b-1,3 glucanases, quando comparada com a susceptibilidade das células da linhagem de S. cerevisiae KL-88 à preparação enzimática. A adição da preparação de quitinase, obtida do sobrenadante do meio de cultura através de ftacionamento com sulfato de amônio, da linhagem C. cartae nº191, em alguns casos aumentou a susceptibilidade das leveduras à lise celular. O pré-tratamento das suspensões das leveduras com as preparações de protease obtidas dos sobrenadantes dos meios de culturas através de fracionamento com sulfato de amônio, da linhagem C. cartae nº191, diminuiu a lise da leveduras principalmente quando utilizada em altas concentrações. A maior produção de b-1,3 glucanase da linhagem C. cartae nº191 em meio de cultura m ocorreu a 35°C após 48 horas de fermentação a 200 rpm, entretanto, atividade de b-1,3 glucanase muito próxima foi obtida na fermentação do microrganismo a 30°C durante 24 horas. A maior produção de protease da linhagem C. cartae nO191 em meio de cultura II ocorreu a 35°C após 30 horas de fermentação a 150 rpm, enquanto que a maior produção de quitinase da linhagem C. cartae nO191 em meio de cultura N ocorreu a 35°C após 72 horas de fermentação a 150 rpm. No estudo das superfícies de respostas e das curvas de contorno referentes ao planejamento fatorial completo, foi obtido maior atividade de lise da levedura S. cerevisiae KL-88 utilizando-se a preparação enzimática de _-1,3 glucanase em pH 6,5 e a 35°C. As células de leveduras obtidas após 10 horas de fermentação em frascos sem agitação mostraram-se mais susceptíveis à lise pela b-1,3 glucanase de C. cartae nº191. Foi obtido maior lise da levedura S. cerevisiae KL-88 quando a suspensão de células da levedura foi submetida ao tratamento com b-1,3 glucanase e cisteína 1mM. A enzima invertas e intracelular ou ligada à célula de S. cerevisiae KL-88 e K marxianus NCYC 587 foi extraída após tratamento da suspensão celular de levedura com b-1,3 glucanase da linhagem C. cartae nº191. O tratamento prévio das células de S. cerevisiae KL-88 e K marxianus NCYC 587 com a enzima b-1,3 glucanase da linhagem C. cartae nº191, aumentou a susceptibilidade das células de levedura à lise com ultra-som / Abstract: The aim of this work was the study of b-1,3 glucanases, proteases and chitinases production by B1, B22, B26, FXX, Oerskovia sp. nO4 and Cellulomonas cartae nº191 strains in culture media containing differents inductors as well as their application on yeast cell lysis. The strains B26 and Cellulomonas cartae nO191 showed highest protease production using the culture medium II containing 8% of instant yeast. The strains Bl and C. cartae nº191 showed highest b-1,3 glucanase production using the culture medium III containing 1% of yeast cell wall obtained by Dyno-Mill. The strain C. cartae nº191 showed highest chitinase production using the culture medium IV containing 1.5% of chitin neutralized. The culture medium III supernatants obtained by fermentation of strains B1 and C. cartae nº191 demonstrated the biggest yeast cell lysis activity. The enzymes precipitation studies revealed that 60% ammonium sulphate was the best concentration for protease, b-1,3 glucanase and chitinase separation. The b-1,3 glucanase extract obtained by Bl and C. cartae nº191 strains demonstrated lysis activity against Kluyveromyces lodderi, Saccharomyces cerevisiae (yeast Fleischmann), Saccharomyces cerevisiae (yeast Itaiquara), Saccharomyces cerevisiae KL-88, Saccharomyces diastaticus NCYC 713, Saccharomyces cerevisiae NCYC 1001, Candida glabrata NCYC 388, Kluyveromyces marxianus NCYC 587 and Hansenula mrakii NCYC 500. K. marxianus NCYC 587 and H mrakii NCYC 500 were more sensitive to b-1,3 glucanases action, whereas Itaiquara yeast and C. glabrata NCYC 388 were more resistant when compared with S. cerevisiae KL-88 susceptibility. The chitinase extract obtained by C. cartae nO191, in some cases increased the susceptibility of yeast to cellular lysis. The previous treatment of the yeast suspensions with protease from C. cartae nº191, decreased the yeasts cell lysis, mainly when used at high concentrations. The maximum b-1,3 glucanase production by C. cartae nº191, using culture medium III, occurred after 48 hours of fermentation at 35°C and 200 rpm. However, when the fermentation was perform after 24 hours of fermentation at 30ºC and 200 rpm, the b-1,3 glucanase activity obtained was almost the same. The maximum protease production by C. cartae nº191, using culture medium II, occurred after 30 hours of fermentation at 35ºC and 150 rpm, while the highest chitinase production by C. cartae nº191, using culture medium IV, occurred after 72 hours of fermentation at 35°C and 150 rpm. The experimental design study showed that the best conditions to S. cerevisiae KL-88 lysis by b-1,3 glucanase extract were pH 6,5 and 35°C. This study also demonstrated that the yeast cells were more susceptible to lysis after 10 hours cultivation in flasks without agitation. Lysis activity was increased when S. cerevisiae KL-88 cell suspension was treated b-1,3 glucanase and cystein 1mM. The enzyme invertase of S. cerevisiae KL-88 and K marxianus NCYC 587 was extracted after treatment of cell suspension with b-1,3 glucanase obtained from C. cartae nº191. The previous treatment of S. cerevisiae KL-88 and K marxianus NCYC 587 with b-1,3 glucanase, increased the susceptibility to lysis when ultrasonic treatment was used. / Mestrado / Mestre em Ciência de Alimentos

京都大学 / 0048 / 新制・論文博士 / 博士(農学) / 乙第13347号 / 論農博第2890号 / 新制||農||1080(附属図書館) / 学位論文||R2||N5254(農学部図書室) / (主査)教授 杉山 淳司, 教授 髙部 圭司, 教授 渡邊 隆司 / 学位規則第4条第2項該当 / Doctor of Agricultural Science / Kyoto University / DFAM