Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2016-09-06T20:11:44Z No. of bitstreams: 1 MariaEduardaDeSouzaMenezesDaCosta_DISSERT.pdf: 2415680 bytes, checksum: c90f35fd25510d290113b437f4a11687 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2016-09-06T23:03:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 MariaEduardaDeSouzaMenezesDaCosta_DISSERT.pdf: 2415680 bytes, checksum: c90f35fd25510d290113b437f4a11687 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-06T23:03:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MariaEduardaDeSouzaMenezesDaCosta_DISSERT.pdf: 2415680 bytes, checksum: c90f35fd25510d290113b437f4a11687 (MD5) Previous issue date: 2016-01-27 / O Toxoplasma gondii ? um parasito mundialmente distribu?do, que pode causar desde sintomas parecidos com a gripe at? problemas neurol?gicos. As cepas do T. gondii apresentam grande variabilidade gen?tica na Am?rica do Sul, sendo fundamental a an?lise de sequ?ncias para auxiliar no diagn?stico confi?vel e para classifica??o dos diferentes gen?tipos. O objetivo deste trabalho foi desenvolver dois m?todos moleculares, um para detec??o e o outro para genotipagem do T. gondii, possibilitando a identifica??o de todas as cepas conhecidas e a gera??o de dados que possam ser correlacionados com a virul?ncia. Inicialmente, foi utilizado o programa MUSCLE para alinhamento de 685 sequencias nucleot?dicas obtidas do GenBank, em seguida os alinhamentos foram analisados no programa MEGA 6.0 para determina??o de sua variabilidade gen?tica. O gene GRA7 foi selecionado como alvo para os iniciadores, que foram desenhados em regi?es conservadas do gene utilizando os programas Geneious 9.0 e Primer BLAST. O protocolo de amplifica??o utilizando-se os primers para o gene GRA7 foi ent?o comparado com outros protocolos padronizados para amplifica??o do gene B1 e do elemento repetitivo de 529 pb, que s?o os marcadores mais utilizados para o diagn?stico do T. gondii. Para o desenvolvimento do sistema de genotipagem foram selecionados os genes ROP5, ROP18 e GRA7, que est?o relacionados ao mecanismo de virul?ncia melhor descrito em T. gondii. O sistema de genotipagem desenvolvido se baseia na an?lise de polimorfismos presentes em fragmentos sob sele??o positiva desses genes, que permite identificar cepas pertencentes as linhagens clonais e cepas at?picas. Utilizando-se essa nova abordagem para a sele??o de marcadores, ser? necess?rio investigar um n?mero de regi?es do genoma consideravelmente menor que o utilizado pelo m?todo utilizado tradicionalmente, simplificando o processo. Concluindo, o desenho de primers em regi?es conservadas do gene GRA7 permitiu o desenvolvimento de um sistema de detec??o utilizando PCR com excelente positividade e sensibilidade, principalmente para detec??o de cepas at?picas do T. gondii. Ainda, a genotipagem baseada na detec??o de polimorfismos em genes de virul?ncia permitiu a diferencia??o genot?pica das diferentes cepas de forma mais simples que a t?cnica de RFLP utilizada atualmente.