Made available in DSpace on 2016-04-28T20:17:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009 - Felipe Victorio de Castro Bath.pdf: 899860 bytes, checksum: 4fd602f8c11878cd5b06034ba2ab2b10 (MD5) Previous issue date: 2009-03-26 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / The objective of this work was checked Candida's percentage spp in oropharynx of ostriches (Struthio camelus) and he valued in vitro the virulence of the isolated strains. The motivation for this research was due to the fact of the ostrich be exotic sorts and for the ignorance of the potential microrganisms that this one has. The animals were divided in four groups, totalizing 80 samples. The research of the presence of the agent in swabs originating from the birds was done in the Laboratory of Patogenic Yeasts and You set, Depto of Microbiology and Imunology Veterinary, Institute of Veterinary, UFRRJ, for processing of same, with sowings in environment of cultivation on Sabouraud dextrose agar. The confirmation of isolations were carried out through tests of macromorphology, micromorphology, realization of auxanogram, zimogram and complementary proofs. Of the total of samples of the oropharynx, 32,5 % obtained growth with yeasts, only or accompanied by moulds. The growth of C. albicans corresponded to 65,38 % of the total of isolates. The most of the isolated ones were strongly positive for production of protease and approximately also they showed half of these positive samples for the production of phospholipases what suggests some degree of virulence of these strains. / O objetivo deste trabalho foi verificar o percentual de Candida spp em orofaringe de avestruzes (Struthio camelus) e avaliar a virul?ncia in vitro das esp?cies isoladas. A motiva??o para esta pesquisa deveu-se ao fato do avestruz ser uma esp?cie ex?tica e pelo n?o conhecimento do potencial de microrganismos que esta possui. Os animais foram divididos em quatro grupos, totalizando 80 amostras. A pesquisa da presen?a do agente nos swabs oriundos das aves foi feita no Lab. de Leveduras. Patog?nicas e Ambientais, Depto de Microbiologia e Imunologia Veterin?ria, IV, UFRRJ, por processamento dos mesmos, com semeadura em meio de cultivo ?gar Sabouraud dextrose. As confirma??es de isolamento foram realizadas por meio de testes de macromorfologia, micromorfologia, realiza??o de auxanograma, zimograma e provas complementares. Do total de amostras processadas da orofaringe, 32,5% obtiveram crescimento leveduriforme, ?nico ou acompanhado de fungos filamentosos. O crescimento de C. albicans correspondeu a 65,38% do total de isolados leveduriformes. A maioria dos isolados foi fortemente positiva para produ??o de protease e aproximadamente metade destas amostras tamb?m mostraram-se positivas para a produ??o de fosfolipases o que sugere a alta virul?ncia destas amostras. Palavras chave: Candida, avestruzes, virul?ncia.

Made available in DSpace on 2016-04-28T20:16:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008 - Shana de Mattos de Oliveira Coelho.pdf: 1309260 bytes, checksum: d56e11e43855d92c6e9b5e2b5f5f4ab0 (MD5) Previous issue date: 2008-12-18 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / The present study was done to characterize phenotypic and genotypically the virulence factors and resistance profile to antibiotics, specifically to the oxacillin, of species of Staphylococcus spp. coagulase-positives isolated from milk samples of cows with mastitis. Of 150 isolated, the species S.aureus, S.intermedius and S.hyicus were identified. The antimicrobial susceptibility test yielded high resistance to penicillin and ampicillin and distinct antibiotyps had been identified, being of sensitivity to all the antibiotics prevalent. A total of 94,6% and 70,7% was positive for the production of betalactamases and presence of the mecA gene, respectively. The femA gene was detected in 80,9% of isolated mecA positive. The isolated presented distinct standards of growth in the tests of susceptibility to oxacillin. The tests of agar screen and the evaluation of the microdilution in plate, presented considerable values of sensitivity and specificity when the isolated ones were considered as an only group (Staphylococcus spp coagulase-positives) or when the species had been discriminated, respectively. The addition of 4% of NaCl in the agar plate can have effect in the increase of the sensitivity of the test of diffusion using the oxacillin and the test of diffusion presented the better capacity in the detention of the resistance isolates with cefoxitin disk. A total of 80% of the S.aureus was classified as MRSA and had presented resistance higher than 15% to the ampicillin and sulbactam association, vancomicin and gentamicin. About the virulence factors, the technique of the microplate disclosed 82.8% of isolated producers of slime and the intensity of the production was not associated with the presence of the icaA and icaD genes. In addition, the agar with the congo red presented effectiveness in the detention of isolated the not producing ones of slime . In all hemolitics isolates were detected the beta-hemolisin and 11.3% of the non-hemolitics had produced hemolisins in the presence of beta-hemolitic strain, indicating the presence of the delta hemolisin. spaA, coa and agr genes had been carried through the amplifications of the genes the S.aureus. The spaA gene, that it codifies protein A region X, was positive in all isolated ones, disclosed only amplicon for each isolated one and presented polimorfism being the prevalent size of 315pb. The amplification of the coa gene presented three distinct polimorfics types, with only amplicon for each isolated and the prevalent profile was of 900pb. The amplification of the agr gene resulted in amplicons with 350 and 550 pb in 74% of the isolated. The test of biotyping disclosed the bovine ecovar as the prevalent in the S.aureus. Seven S.aureus that had presented the same profiles of the coa, spaA, agr genes, antibiotyps and ecovars was detected being 4 pertaining the same properties and 3 isolated from distinct properties. / O presente estudo foi conduzido para caracterizar feno-genotipicamente os fatores de virul?ncia e perfil de resist?ncia aos antibi?ticos, especificamente ? oxacilina, de esp?cies de Staphylococcus spp. coagulase-positivos isolados de amostras de leite de vacas com mastite. Do total de 150 isolados, foram identificadas as esp?cies S.aureus, S.intermedius e S.hyicus. O teste de suscetibilidade antimicrobiana revelou elevada resist?ncia ? penicilina e ampicilina e distintos antibiotipos foram identificados, sendo o de sensibilidade a todos os antibi?ticos o prevalente. Um total de 94,6% e 70,7% foi positivo para a produ??o de betalactamases e presen?a do gene mecA, respectivamente. O gene femA foi detectado em 80,9% dos isolados mecA positivos. Os isolados apresentaram distintos padr?es de crescimento nos testes de suscetibilidade ? oxacilina. Os testes de ?gar screen e a avalia??o da microdilui??o em placa, apresentaram valores consider?veis de sensibilidade e especificidade quando os isolados foram considerados como um ?nico grupo (Staphylococcus spp coagulase-positivos) ou quando as esp?cies foram discriminadas, respectivamente. A adi??o de 4% de NaCl no meio de cultura pode ter efeito no aumento da sensibilidade do teste de difus?o em disco utilizando o disco de oxacilina e o teste de difus?o em disco apresentou melhor capacidade na detec??o dos isolados resistentes ? oxacilina com discos de cefoxitina. Um total de 80% dos S.aureus foi classificados como MRSA e apresentaram resist?ncia superior a 15% ? associa??o de ampicilina e sulbactam, vancomicina e gentamicina. Quanto aos fatores de virul?ncia, a t?cnica da microplaca revelou 82,8% de isolados produtores de slime e a intensidade da produ??o n?o foi associada ? presen?a dos genes icaA e icaD. Em adi??o, o ?gar contendo vermelho congo apresentou efic?cia na detec??o do isolados n?o produtores de slime . Em todos os isolados hemol?ticos foi detectada a beta hemolisina e 11,3% dos n?o-hemol?ticos produziram hemolisinas na presen?a da cepa beta-hemol?tica, indicando a presen?a da delta hemolisina. Foram realizadas as amplifica??es dos genes spaA, coa e agr em todos os S.aureus. O gene spaA, que codifica a regi?o X, foi positivo em todos isolados, revelou um ?nico amplicon para cada isolado e apresentou polimorfismo sendo o tamanho prevalente o de 315pb. A amplifica??o do gene coa apresentou tr?s tipos polim?rficos distintos, com ?nico amplicon para cada isolado e o perfil prevalente foi o de 900 bp. A amplifica??o do gene agr resultou em amplicons com 350 e 550 pb em 74% dos isolados. A prova de biotipifica??o revelou o ecovar bovino como o prevalente nos S.aureus. Foram identificados 7 S.aureus que apresentaram os mesmos perfis dos genes coa, spaA, agr, antibiotipos e ecovares, sendo 4 pertencentes mesma propriedades e 3 provenientes de propriedades distintas.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2016-09-06T20:11:44Z No. of bitstreams: 1 MariaEduardaDeSouzaMenezesDaCosta_DISSERT.pdf: 2415680 bytes, checksum: c90f35fd25510d290113b437f4a11687 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2016-09-06T23:03:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 MariaEduardaDeSouzaMenezesDaCosta_DISSERT.pdf: 2415680 bytes, checksum: c90f35fd25510d290113b437f4a11687 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-06T23:03:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MariaEduardaDeSouzaMenezesDaCosta_DISSERT.pdf: 2415680 bytes, checksum: c90f35fd25510d290113b437f4a11687 (MD5) Previous issue date: 2016-01-27 / O Toxoplasma gondii ? um parasito mundialmente distribu?do, que pode causar desde sintomas parecidos com a gripe at? problemas neurol?gicos. As cepas do T. gondii apresentam grande variabilidade gen?tica na Am?rica do Sul, sendo fundamental a an?lise de sequ?ncias para auxiliar no diagn?stico confi?vel e para classifica??o dos diferentes gen?tipos. O objetivo deste trabalho foi desenvolver dois m?todos moleculares, um para detec??o e o outro para genotipagem do T. gondii, possibilitando a identifica??o de todas as cepas conhecidas e a gera??o de dados que possam ser correlacionados com a virul?ncia. Inicialmente, foi utilizado o programa MUSCLE para alinhamento de 685 sequencias nucleot?dicas obtidas do GenBank, em seguida os alinhamentos foram analisados no programa MEGA 6.0 para determina??o de sua variabilidade gen?tica. O gene GRA7 foi selecionado como alvo para os iniciadores, que foram desenhados em regi?es conservadas do gene utilizando os programas Geneious 9.0 e Primer BLAST. O protocolo de amplifica??o utilizando-se os primers para o gene GRA7 foi ent?o comparado com outros protocolos padronizados para amplifica??o do gene B1 e do elemento repetitivo de 529 pb, que s?o os marcadores mais utilizados para o diagn?stico do T. gondii. Para o desenvolvimento do sistema de genotipagem foram selecionados os genes ROP5, ROP18 e GRA7, que est?o relacionados ao mecanismo de virul?ncia melhor descrito em T. gondii. O sistema de genotipagem desenvolvido se baseia na an?lise de polimorfismos presentes em fragmentos sob sele??o positiva desses genes, que permite identificar cepas pertencentes as linhagens clonais e cepas at?picas. Utilizando-se essa nova abordagem para a sele??o de marcadores, ser? necess?rio investigar um n?mero de regi?es do genoma consideravelmente menor que o utilizado pelo m?todo utilizado tradicionalmente, simplificando o processo. Concluindo, o desenho de primers em regi?es conservadas do gene GRA7 permitiu o desenvolvimento de um sistema de detec??o utilizando PCR com excelente positividade e sensibilidade, principalmente para detec??o de cepas at?picas do T. gondii. Ainda, a genotipagem baseada na detec??o de polimorfismos em genes de virul?ncia permitiu a diferencia??o genot?pica das diferentes cepas de forma mais simples que a t?cnica de RFLP utilizada atualmente.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2016-04-25T22:57:38Z No. of bitstreams: 1 DianaLuziaZuzaAlves_DISSERT.pdf: 2035213 bytes, checksum: 1604df1e90593ddd103ab0202e591e9e (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2016-04-27T22:44:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DianaLuziaZuzaAlves_DISSERT.pdf: 2035213 bytes, checksum: 1604df1e90593ddd103ab0202e591e9e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-27T22:44:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DianaLuziaZuzaAlves_DISSERT.pdf: 2035213 bytes, checksum: 1604df1e90593ddd103ab0202e591e9e (MD5) Previous issue date: 2015-03-26 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (CAPES) / V?rios estudos t?m sido desenvolvidos com rela??o aos riscos ? sa?de humana associados ao uso recreativo de praias contaminadas com esgotos dom?sticos. Esses res?duos cont?m v?rios micro-organismos, incluindo Candida tropicalis, agente etiol?gico tanto de infec??es superficiais quanto sist?micas, al?m de indicador de contamina??o fecal do meio ambiente. Nesse contexto, o presente trabalho teve como objetivo caracterizar isolados de C. tropicalis oriundos da areia da Praia de Ponta Negra, Natal, Rio Grande do Norte, Brasil, quanto a express?o de fatores de virul?ncia in vitro, a adapta??o ao estresse osm?tico e a susceptibilidade ?s f?rmacos antif?ngicos. Foram analisados 62 isolados ambientais de C. tropicalis, observando-se grande varia??o entre os mesmos para os diversos fatores de virul?ncia avaliados. Em geral, os isolados ambientais foram mais aderentes a c?lulas epiteliais bucais humanas (CEBH) do que a cepa de refer?ncia de C. tropicalis ATCC13803, al?m de serem altamente produtoras de biofilme. Em rela??o ? morfog?nese, a maioria dos isolados exibiu fen?tipo rugoso em meio Spider (34 isolados, 54,8%). Na avalia??o da atividade enzim?tica, a maioria dos isolados teve maior produ??o de proteinase do que a cepa de refer?ncia de C. tropicalis ATCC13803. Adicionalmente, 35 isolados (56,4%) tiveram alta atividade hem?litica (?ndice de hem?lise > 55). Com rela??o ? resist?ncia de C. tropicalis ao estresse osm?tico, 85,4% dos isolados foram resistentes em meio contendo 15% de cloreto de s?dio, o que corrobora com a alta capacidade de sobreviv?ncia descrita para essa levedura no ambiente mar?timo. Finalmente, no que diz respeito ? sensibilidade aos antif?ngicos foi observada elevada resist?ncia aos az?licos testados (fluconazol, voriconazol e itraconazol), com ocorr?ncia do fen?meno ?Low-high? e de efeito semelhante ao crescimento paradoxal que ocorre para as equinocandinas. As cepas resistentes aos tr?s az?licos testados foram 15 (24,2%). Para a anfotericina B tamb?m ocorreu resist?ncia (14 isolados, 22,6%), ao passo que para as equinocandinas todas as cepas foram sens?veis. Portanto, nossos resultados demonstram que isolados de C. tropicalis oriundos da areia de praia do nordeste brasileiro podem expressar plenamente atributos de virul?ncia e apresentam alta capacidade de persist?ncia no ambiente costeiro, al?m de serem significativamente resistentes aos antif?ngicos mais empregados na pr?tica cl?nica atual. Isso constitui potencial risco ? sa?de dos frequentadores desse ambiente, especialmente indiv?duos imunocomprometidos e em extremos et?rios. / Several studies have been developed regarding health risks associated with the recreational use of beaches contaminated with domestic sewage. These wastes contain various microorganisms, including Candida tropicalis, etiologic agent of both superficial infections such as systemic, as well as indicator of fecal contamination for the environment. In this context, the objective of this study was to characterize C. tropicalis isolates from the sandy beach of Ponta Negra, Natal, Rio Grande do Norte, Brazil, regarding the expression of in vitro virulence factors, adaptation to osmotic stress and susceptibility to antifungal drugs. We analyzed 62 environmental isolates of C. tropicalis and observed a great variation between them for the various virulence factors evaluated. In general, environmental isolates were more adherent to CEBH than C. tropicalis ATCC13803 reference strain, besides the fact they were also highly biofilm producers. In relation to morphogenesis, most isolates presented wrinkled phenotype in Spider medium (34 isolates, 54.8 %). When assessing enzyme activity, most isolates had higher proteinase production than C. tropicalis ATCC13803 reference strain. In addition, 35 isolates (56.4 %) had high hemolytic activity (hemolysis index > 55). With regard to C. tropicalis resistance to osmotic stress, 85.4% of the isolates were able to grow in a liquid medium containing 15% sodium chloride, corroborating to high survival capacity described for this yeast at marine environment. Finally, with regard to sensitivity to antifungal drugs, it was observed high resistance to the azoles tested, with the occurrence of the "Low-high" phenomenon and similar effect to the paradoxical growth which occurs to the echinocandins. For the three azoles tested we verified that 15 strains were resistant (24.2 %). Some strains were also resistant to amphotericin B (14 isolates, 22.6 %), while all of them were sensitive for the echinocandins tested. Therefore, our results demonstrate that C. tropicalis isolated from the sand of northeast of Brazil can fully express virulence attributes and showed a high persistence capacity on the coastal environment, in addition of being significantly resistant to most applied antifungals in current clinical practice. This constitutes a potential health risk to visitors of this environment, especially immunocompromised individuals and those with extreme age range.

Made available in DSpace on 2016-04-28T20:16:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lidiane de Castro Soares.pdf: 3621583 bytes, checksum: ed47c1ba184a35cfda362913c8e922a3 (MD5) Previous issue date: 2010-02-22 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / Coagulase-negative staphylococci (SCN) take part of the normal microbiota. Although this bacteria has been considered saprophytic, nowadays there is a concern about its pathogenic potential. Nevertheless, the improvement in SCN identification assays, it continues to be neglected in laboratorial routine of infectious diseases because of the wide range of species. In spite of this, the appropriated identification of the species is necessary in order to differentiate the potential pathogenic agents and to determine its antimicrobial susceptibility pattern. The present study was performed to characterize phenotypically and genotypically the antibiotic resistance profile and virulence factors of coagulase-negative Staphylococcus spp. isolated from milk samples of cows with subclinical mastitis. Staphylococcus xylosus, S. haemolyicus, S. cohnii and S. hominis were the identified species. Antimicrobial susceptibility test yielded a high level of resistance to penicillin and ampicillin. A total of 100 isolates were studied, mecA gene was detected in 4% of isolates, also mecR1 positive. The mecI gene was detected in 47% of isolates. All mec genes (mecA-mecI-mecR1) were detected in only 2 isolates. The production of betalactamases and blaZ gene were detected in 16% of the isolates. From this, only 3 isolates showed all bla genes (blaZ, blaI e blaRI). All bla positive isolates were penicillin and ampicillin resistant and positive to nitrocefin test. The femA gene was not detected in any of the isolates. Concerning to the virulence factors, microplate technique and the congo red agar presented production of slime in 46% and 77% of the isolates, respectively. The icaA and icaD genes were detected in 9% and 10% of isolates, respectively. Hemolysis was detected in 13% of the isolates, 15,4% of total hemolysis and 84,6% partial hemolysis. The hla and hlb genes were not detected in any isolate. The hemolytic synergism was positive in 15 isolates, of these 14 showed no hemolysins. Unable to establish a correlation between phenotypic and genotypic resistance to beta-lactam antibiotics in isolates. / Os estafilococos coagulase-negativos (ECN) fazem parte da microbiota normal da pele e apesar de terem sido considerados sapr?fitas por muito tempo, o seu significado cl?nico como agente etiol?gico tem aumentado com o passar dos anos. No entanto, apesar de todo avan?o nas t?cnicas de identifica??o dos ECN e do conhecimento destes como agentes etiol?gicos em diversos processos infecciosos, estes microrganismos muitas vezes s?o negligenciados na rotina laboratorial. A identifica??o das esp?cies de ECN, embora de dif?cil realiza??o para a maioria dos laborat?rios cl?nicos, ? necess?ria para diferenciar o potencial patog?nico e o perfil de resist?ncia de cada isolado. O presente estudo foi conduzido para caracterizar fenot?pica e genotipicamente o perfil de resist?ncia aos antibi?ticos, especialmente ? oxacilina, e fatores de virul?ncia de isolados de Staphylococcus spp. coagulase-negativos provenientes de amostras de leite de vacas com mastite subcl?nica. Foram identificadas as esp?cies Staphylococcus xylosus, S. haemolyicus, S. cohnii e S. hominis. O teste de suscetibilidade antimicrobiana revelou elevada resist?ncia ? penicilina e ampicilina. Do total de 100 isolados estudados, o gene mecA foi detectado em apenas 4 (4%), os quais tamb?m foram mecR1 positivos. O gene mecI foi detectado em 47% dos isolados. Em 2 isolados foram detectados todos os genes do sistema mec (mecA-mecI-mecR1). A produ??o de beta-lactamases e do gene blaZ foi detectada em 16% dos isolados. Em 3 isolados foram detectados todos os genes do sistema bla (blaZ, blaI e blaRI). Todos os isolados bla positivos foram resistentes a penicilina e ampicilina e positivos no teste do nitrocefin. O gene femA n?o foi detectado em nenhum dos isolados avaliados. Em rela??o aos fatores de virul?ncia, a t?cnica da microplaca e o ?gar contendo vermelho congo revelaram 46% e 77% de isolados produtores de slime , respectivamente. Os genes icaA e icaD foram detectados em 9% e 10% dos isolados, respectivamente. A hem?lise foi detectada em 13% dos isolados, destes 15,4% apresentaram hem?lise total e 84,6% a hem?lise parcial. Os genes hla e hlb n?o foram detectados em nenhum isolado. O sinergismo hemol?tico foi positivo em 15 isolados sendo que destes, 14 n?o apresentaram hemolisinas. N?o foi poss?vel estabelecer uma correla??o entre os testes fenot?picos e genot?picos de resist?ncia aos antibi?ticos beta-lact?micos nos isolados avaliados.

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:16:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MarianaGD_DISSERT.pdf: 1350118 bytes, checksum: 5e25fd552ff8be29e71b6c0ae2fa383c (MD5) Previous issue date: 2011-02-25 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / Despite Candida species are often human commensals isolated from various oral sites such as: tongue, cheek and palatal mucosa plus subgingival region, there are some properties linked to the organism commonly known as virulence factors which confer them the ability to produce disease. Oral candidiasis is one of the main oral manifestations reported in literature related to kidney transplant patients. The objectives of the present study were to identify and investigate virulence factors of yeasts isolated from the oral cavity of kidney transplant recipients admitted at the Hospital Universit?rio Onofre Lopes, in Natal RN. Seventy Candida species isolated from 111 kidney transplant recipients were investigated in this study. Identification of the isolates was performed by using the evidence of germ tube formation, hypertonic broth, tolerance to grow at 42?C, micromorphology and biochemical profiles. We observed a high rate of isolation of yeasts from the oral cavity of kidney transplant recipients (63.1%) being C. albicans was the most prevalent species. Oral candidiasis was diagnosed in 14.4% of transplant recipients. We evaluated virulence properties of the isolates regarding to: biofilm formation on polystyrene microplates as well as XTT reduction, adherence to acrylic resin and human buccal epithelial cells and proteinase activity. Most isolates were able to form biofilm by the method of adhesion to polystyrene. All isolates of Candida spp. remained viable during biofilm formation when analyzed by the method of XTT reduction. The number of CFU attached to the acrylic resin suggested high adherence for C. parapsilosis. C. albicans isolates showed higher median adherence to human buccal epithelial cells than non-C. albicans Candida isolates. Nevertheless, this difference was not statistically significant. C. dubliniensis showed low ability to adhere to plastic and epithelial cells and biofilm formation. Proteolytic activity was observed for all the isolates investigated, including the unique isolate of C. dubliniensis. There was a statistically significant association between proteinase production and the presence of oral candidiasis. Studies related to oral candidiasis in renal transplant recipients are limited to clinical and epidemiological data, but investigations concerning Candida spp. virulence factor for this group of individuals are still scarce. We emphasize the importance of studies related to virulence factors of yeasts isolated from this population to contribute to the knowledge of microbiological aspects of oral candidiasis / Apesar das leveduras do g?nero Candida serem frequentemente comensais humanos, isoladas de diferentes s?tios orais, incluindo l?ngua, mucosa jugal, mucosa palatal e regi?o subgengival, existem algumas propriedades ligadas a Candida spp., comumente denominadas fatores de virul?ncia, que lhes conferem a capacidade de produzir doen?a. Candid?ase bucal ? uma das principais manifesta??es orais citadas na literatura em rela??o aos pacientes transplantados renais. O objetivo deste estudo foi realizar identifica??o e avaliar os fatores de virul?ncia de leveduras isoladas da cavidade bucal de receptores de transplante renal que s?o acompanhados no Hospital Universit?rio Onofre Lopes, na cidade do Natal RN. Foram utilizadas 70 leveduras do g?nero Candida isoladas de 111 receptores de transplante renal. A identifica??o dos isolados foi realizada atrav?s das provas de forma??o de tubo germinativo, caldo hipert?nico, toler?ncia ? temperatura de 42?C, an?lise da micromorfologia e perfil bioqu?mico das leveduras. Observamos elevado ?ndice de isolamento de leveduras na cavidade bucal dos receptores de transplante renal (63,1%), havendo predom?nio de C. albicans. Candid?ase bucal foi diagnosticada em 14,4% dos transplantados. Avaliou-se o potencial de virul?ncia das leveduras atrav?s da forma??o de biofilme pelo m?todo de ader?ncia a microplaca de poliestireno, redu??o do XTT, habilidade de ader?ncia a corpos de prova de resina acr?lica e a c?lulas epiteliais bucais, bem como atividade de proteinase. A maioria dos isolados foi capaz de produzir biofilme pelo m?todo de ader?ncia ao poliestireno, determinada atrav?s de leitura em espectrofot?metro. Todos os isolados de Candida spp. permaneceram vi?veis durante a forma??o do biofilme pelo m?todo da redu??o do XTT. A contagem do n?mero de UFC aderidas ao corpo de prova demonstrou alta capacidade de ader?ncia de C. parapsilosis. Os isolados de C. albicans apresentaram maior mediana de ades?o ? c?lula epitelial bucal humana do que os isolados de C. n?o-C. albicans, contudo essa diferen?a n?o foi estatisticamente significativa. C. dubliniensis apresentou baixa capacidade de ader?ncia ao pl?stico e c?lulas epiteliais e forma??o do biofilme. Observamos atividade proteol?tica em todos os isolados pesquisados, inclusive o isolado de C. dubliniensis, e associa??o estatisticamente significativa entre a produ??o de proteinase e a presen?a de candid?ase bucal. Estudos relacionados ? candid?ase bucal em receptores de transplante renal limitam-se ? investiga??o de aspectos cl?nicos e epidemiol?gicos, n?o havendo dados concernentes a fatores de virul?ncia. Ressaltamos a import?ncia da realiza??o de estudos relacionados aos fatores de virul?ncia de leveduras isoladas nessa popula??o, a fim de que se aprofunde o conhecimento dos aspectos microbiol?gicos da candid?ase bucal / 2020-01-01

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:16:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MarianaAPM_DISSERT.pdf: 2606420 bytes, checksum: 97be52d447dc533f85354f32faddd0ad (MD5) Previous issue date: 2013-03-27 / Funda??o de Apoio ? Pesquisa do Estado do Rio Grande do Norte / Vulvovaginal candidiasis (VVC) is one of the most common causes of vaginitis and affects about 75% of women of reproductive age. The majority of cases (80 to 90%) are due to C. albicans, the most virulent species of the genus Candida. Virulence attributes are scarcely investigated and the source of infection remains uncertain. Objective: This study aimed to evaluate the virulence factors and genotypes of clinical isolates of C. albicans sequentially obtained from the anus and vagina of patients with sporadic and recurrent VVC. Materials and methods: We analyzed 62 clinical isolates of C. albicans (36 vaginal and 26 anal strains). Direct examination of vaginal and anal samples and colony forming units (CFU) counts were performed. Yeasts were identified using the chromogenic media CHROMagar Candida? and by classical methodology, and phenotypically characterized regarding to virulence factors, including the ability to adhere to epithelial cells, proteinase activity, morphogenesis and biofilm formation. The genotypes of the strains were investigated with ABC genotyping, microsatellite genotyping with primer M13 and RAPD. Results: We found 100% agreement between direct examination and culture of vaginal samples. Filamentous forms were present in most of the samples of vaginal secretion, which presented CFU counts significantly higher than the samples of anal secretion. There was no statistically significant difference between virulence factors of infecting vaginal isolates and those presented by colonizing anal isolates; as well as for the comparison of the vaginal isolates from patients with different clinical conditions (sporadic or recurrent VVC). There was a decrease in the ability to adhere to HBEC, morphogenesis and biofilm formation of the vaginal isolates during the progress of infection. There was an association between the ability to express different virulence factors and the clinical manifestations presented by the patients. Genotype A was the most prevalent (93.6%), followed by genotype C (6.4%). We found maintenance of the same ABC genotype and greater prevalence of microevolution for the vaginal strains of C. albicans sequentially obtained. Vaginal and anal isolates of C. albicans obtained simultaneously from the same patient presented the same ABC genotype and high genetic relatedness. Conclusion: It is noteworthy that the proliferation of yeast and bud-to-hypha transition are important for the establishment of CVV. The expression of virulence factors is important for the pathogenesis of VVC, although it does not seem to be determinant in the transition from colonization to infection or to the installation of recurrent condition. Genotype A seems to be dominant over the others in both vaginal and anal isolates of patients with VVC. The most common scenario was microevolution of the strains of C. albicans in the vaginal environment. It is suggested that the anal reservoir constituted a possible source of vaginal infection, in most cases assessed / Candid?ase vulvovaginal (CVV) ? uma das causas mais comuns de vaginite e acomete cerca de 75% das mulheres em idade reprodutiva, sendo a maioria dos casos (80 a 90%) devido ? C. albicans, esp?cie mais virulenta do g?nero. Atributos de virul?ncia em CVV s?o pouco investigados, bem como a fonte da infec??o permanece incerta. Objetivo: Este trabalho teve por finalidade avaliar os fatores de virul?ncia e gen?tipos de isolados cl?nicos de C. albicans sequencialmente obtidos do ?nus e da vagina de pacientes com CVV espor?dica e recorrente. Material e m?todos: Foram analisados 62 isolados cl?nicos de C. albicans (36 isolados vaginais e 26 isolados anais). Realizou-se o exame direto das amostras de secre??o vaginal e anal e contagem de unidades formadoras de col?nia (UFC); as leveduras foram identificadas por meio cromog?nico CHROMagar Candida? e por metodologia cl?ssica e caracterizadas fenotipicamente quanto a fatores de virul?ncia, incluindo a capacidade de ader?ncia a CEBH, a atividade de proteinase, a morfog?nese e a forma??o de biofilme. Para a avalia??o da variabilidade genot?pica, empregou-se a t?cnica de genotipagem ABC, al?m da genotipagem por microssat?lites e RAPD. Resultados: Verificou-se 100% de concord?ncia entre o exame direto e a cultura de amostras vaginais, observando-se a presen?a de formas filamentosas na maioria das amostras de secre??o vaginal, as quais apresentaram contagem de UFC significativamente superior ?quela apresentada pelas amostras de secre??o anal. N?o se observou diferen?a estatisticamente significativa quando se comparou os fatores de virul?ncia dos isolados vaginais infectantes com aqueles apresentados pelos isolados anais colonizantes; bem como comparando-se os isolados vaginais de C. albicans obtidos de grupos de pacientes com diferentes condi??es cl?nicas (CVV espor?dica e com CVVR). Observa-se uma tend?ncia ? diminui??o da capacidade de ader?ncia, morfog?nese e forma??o de biofilme do isolado vaginal infectante ao longo do tempo e sugere-se associa??o entre a capacidade de expressar os diferentes fatores de virul?ncia estudados e as manifesta??es cl?nicas apresentadas pelas pacientes. O gen?tipo A foi o mais prevalente (93,6%), seguido do gen?tipo C (6,4%). Houve manuten??o do mesmo gen?tipo ABC e maior preval?ncia de microevolu??o das cepas vaginais de C. albicans obtidas sequencialmente, bem como se observou o mesmo gen?tipo ABC e alta similaridade gen?tica entre isolados vaginais e anais de C. albicans obtidos simultaneamente da mesma paciente. Conclus?o: Ressalta-se que a prolifera??o da levedura e a transi??o levedura-hifa s?o importantes no estabelecimento da CVV. A express?o dos fatores de virul?ncia ? importante na patog?nese de CVV, contudo n?o parece ser determinante na transi??o de coloniza??o para infec??o nem na instala??o de quadro recorrente de CVV. O gen?tipo A demonstra ser dominante em rela??o aos demais tanto em isolados vaginais quanto em isolados anais de pacientes com CVV. Verifica-se a ocorr?ncia de microevolu??o das cepas de C. albicans no ambiente vaginal como cen?rio mais comum. Sugere-se que o reservat?rio anal constituiu uma poss?vel fonte da infec??o vaginal, na grande maioria dos casos avaliados

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Candida spp. possuem fatores de virul?ncia que contribuem para o processo infeccioso, incluindo a capacidade de aderir a c?lulas epiteliais e a forma??o de biofilme em superf?cies bi?ticas e abi?ticas. O extrato obtido a partir das folhas de Eugenia uniflora [acetona: ?gua (7:3, v/v)] tem demonstrado atividade antif?ngica contra Candida spp. Este estudo avaliou a influ?ncia do extrato de E. uniflora na ades?o ?s C?lulas Epiteliais Bucais Humanas (CEBH) e forma??o de biofilme de 42 cepas de Candida spp. isoladas da cavidade oral de pacientes transplantados renais. As cepas de Candida spp. pertencentes a um banco de microorganimos foram reativadas e reidentificadas fenotipicamente atrav?s da metodologia cl?ssica e por m?todos moleculares (genotipagem ABC e RAPD), quando necess?rio, para a conclus?o da identifica??o em n?vel de esp?cie. Para os ensaios de virul?ncia avaliados in vitro, as leveduras foram cultivadas na presen?a e aus?ncia de 1000 ?g/ mL de extrato. Uma propor??o de 10:1 c?lulas (c?lulas Candida spp. x CEBHs) foi incubada durante 1 hora a 37 ?C, 200 rpm, fixadas com formalina a 10% e o n?mero de c?lulas de Candida aderidas a 150 CEBH foram determinadas em microsc?pio ?ptico. Os biofilmes foram formados em microplacas de poliestireno na presen?a e aus?ncia do extrato. A quantifica??o foi realizada com colora??o por cristal violeta a 570 nm. Todos os isolados apresentaram-se vi?veis e na reidentifica??o fenot?pica apresentaram caracter?sticas sugestivas de cada esp?cie identificada. Duas cepas identificadas presuntivamente como Candida dubliniensis foram confirmadas como pertencentes a esta esp?cie atrav?s da genotipagem ABC, e as cepas identificadas como pertencentes ao complexo Candida parapsilosis foram diferenciadas atrav?s da genotipagem por RAPD. Candida albicans destacou-se como a esp?cie com maior potencial de ades?o ao epit?lio bucal, enquanto que C. tropicalis apresentou expressiva forma??o de biofilme. Detectamos que o extrato de E. uniflora foi capaz de reduzir a ades?o ao CEBH tanto para Candida albicans como para as esp?cies de Candida n?o-Candida albicans. Por outro lado, apenas 16 cepas de Candida spp. (36%) apresentaram a forma??o de biofilme reduzida na presen?a do extrato. No entanto, duas cepas de C. tropicalis altamente produtoras de biofilme tiveram uma redu??o expressiva na capacidade de forma??o de biofilme. Este estudo refor?a a ideia de que, al?m da inibi??o do crescimento, E. uniflora pode interferir com a express?o de alguns fatores de virul?ncia de Candida spp., e pode ser eventualmente aplicada no futuro como um poss?vel agente antif?ngico. / Candidiasis is a major oral manifestation in kidney transplant patients. Candida spp. possess essential virulence factors which contribute for the infectious process, including the ability to adhere to epithelial cells and biofilm formation. The extract obtained from the leaves of Eugenia uniflora [acetone: water (7:3, v/v)] has demonstrated antifungal activity against Candida spp. This study evaluated the influence of the extract of E. uniflora in adhesion to human buccal epithelial cells (HBEC) and biofilm formation of 42 strains of Candida spp. isolated from the oral cavity of kidney transplant patients. Candida spp. strains belonging to a culture collection were reactivated and phenotypically re-identified by classical and molecular methods (genotyping ABC and RAPD), when necessary, to complete the identification to the species level. For the virulence tests evaluated in vitro, yeasts were grown in the presence and absence of 1000 ?g/mL of the extract. A ratio of 10: 1 (Candida spp. cells x HBECs) was incubated for 1 hour at 37 ? C, 200 rpm, fixed with 10% formalin and the number of Candida cells adhered to 150 HBEC determined by optical microscope. Biofilms were formed on polystyrene microplates in the presence or absence of the extract. The quantification was performed with crystal violet staining at 570 nm. All isolates were viable and exhibited phenotypic characteristics suggestive of each species identified. Two strains presumptively identified as Candida dubliniensis belonged to this species as determined with genotyping ABC, while strains identified as belonging to the Candida parapsilosis species complex were differentiated by RAPD genotyping. Candida albicans was found to be the most adherent species to the buccal epithelia, while C. tropicalis showed remarkable biofilm formation.We could detect that the extract of E. uniflora was able to reduce adhesion to HBEC for both Candida albicans and non-Candida albicans Candida species. On the other hand, only 16 Candida spp. strains (36 %) showed reduced biofilm formation. However, two highly biofilm producer strains of C. tropicalis had an expressive reduction in biofilm formation. This study reinforces the idea that besides growth inhibition, E. uniflora may interfere with the expression of some virulence factors of Candida spp., and may be possibly applied in the future as a novel antifungal agent.

Submitted by Jorge Silva (jorgelmsilva@ufrrj.br) on 2018-03-28T19:19:31Z No. of bitstreams: 1 2015 - Fernanda Corr?a de Souza.pdf: 1439461 bytes, checksum: 2ae132a0a7316575d458f10db44101a4 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-28T19:19:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015 - Fernanda Corr?a de Souza.pdf: 1439461 bytes, checksum: 2ae132a0a7316575d458f10db44101a4 (MD5) Previous issue date: 2015-10-08 / CAPES / CNPq / FAPERJ / The tomato crop is subject to attack by diseases of different etiologies, especially the gray leaf spot, caused by Stemphylium sp., which infects the aerial part of the plant and has shown higher incidences and losses in growing areas in recent years. Despite the disease importance, few studies are developed to elucidate the aspects of epidemiology and control of the disease. The use of trials involving pathogen inoculations is essential for carrying out these studies, which requires efficient methods of in vitro multiplication. The aim of this study was to verify the influence of some factors applied during incubation on the mycelial growth and sporulation of the pathogen under controlled conditions. Different culture media (V8 juice agar, tomato juice, PDA, oat, carrot, corn flour, tomato leaf and V8+PDA), temperature (25?C; 25+10?C; 25+15?C; 25+20?C; 25/10?C; 25/15?C; 25/20?C), photoperiods (day/night, respectively, of 0h/24h, 4h/20, 6h/18h, 8h/16h and 12h/12h), luminosity (cool white lamps and black light lamps) and stress types applied to the colony (scratching and UV) were tested. Promising factors were determinate and, after this, the virulence of conidia obtained on the selected system was evaluated. Results indicated the tomato juice and V8 juice agar more favorable for growth and sporulation, respectively. The temperature of 25?C continuous favored mycelial growth and alternation of 25?C (day) and 10?C (night) the sporulation. The growth was more stimulated by 12h light/ 12h dark of photoperiod and the sporulation was higher 6h light/ 18h dark. The different light sources had influence on sporulation and cool white lamps were the most stimulating. Not stressed colonies had better results in conidia production. Thus, the suggested protocol in this study consisted in incubation in V8 juice agar media, alternately temperature of 25?C (day) and 10?C (night), 12h light / 12 h dark photoperiod. The produced conidia in this methodology showed great capacity of infection on tomato plants. / A cultura do tomate est? sujeita ao ataque de doen?as de diferentes etiologias, com destaque para a mancha-de-estenf?lio, causada por Stemphylium sp., que infecta a parte a?rea da planta e tem apresentado maiores incid?ncias e perdas nas ?reas de cultivo nos ?ltimos anos. Apesar da import?ncia desta doen?a, s?o poucos os estudos realizados visando esclarecer aspectos da epidemiologia e controle da doen?a. Para realiza??o desses trabalhos ? fundamental o uso de ensaios que envolvam inocula??es do pat?geno o que requer m?todos eficientes de sua multiplica??o in vitro. O presente trabalho teve o objetivo de avaliar a influ?ncia de alguns fatores sobre o crescimento micelial e esporula??o do pat?geno em condi??es controladas. Diferentes meios de cultura (V8, suco de tomate, BDA, aveia, cenoura, farinha de milho, folha de tomate e V8+BDA), temperatura (25 ?C, 25+10 ?C, 25+15 ?C, 25+20 ?C, 25/10 ?C, 25/15 ?C; 25/20 ?C), fotoper?odo (luz/escuro respectivamente, 0h/24h, 4h/20h, 6h/18h, 8h/16h e 12/12h), luminosidade (l?mpadas brancas frias e l?mpadas de luz negra) e tipos de estresse aplicado ? col?nia (raspagem e comprimento de onda) foram testados. Ap?s a determina??o das melhores combina??es de temperatura, fonte de luz e fotoper?odo avaliou-se a virul?ncia dos con?dios obtidos no sistema selecionado. Os resultados indicaram o meio suco de tomate e V8 como os mais favor?veis ao crescimento e esporula??o respectivamente. A temperatura de 25 ?C cont?nuos favoreceu o crescimento micelial e a altern?ncia de 25 ?C (diurno) e 10 ?C (noturno) a esporula??o. O fotoper?odo 12h luz/12h escuro foi o que mais estimulou o crescimento, j? para esporula??o o estimulo foi maior quando foi oferecido 6h luz/18h escuro. As diferentes fontes de luz utilizadas tiveram influ?ncia marcante na esporula??o, sendo as l?mpadas brancas frias as mais estimulantes. As col?nias que n?o sofreram estresse obtiveram melhores resultados na produ??o de con?dios. Dessa forma, o protocolo sugerido neste trabalho consistiu de inocula??o em meio V8, temperatura alternada de 25 ?C (diurno) e 10 ?C (noturno), fotoper?odo de 6 horas de luz branca/18 horas de escuro. Os con?dios produzidos nesta metodologia apresentam grande capacidade de infec??o de plantas de tomateiro.

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:16:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 WalicyranisonPS_DISSERT.pdf: 2780035 bytes, checksum: 20a70f53e533bfb0816b6d9b02b8af32 (MD5) Previous issue date: 2013-06-11 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / Candida albicans is a diploid yeast that in some circumstances may cause oral or oropharyngeal infections. The investigation of natural products is mandatory for the discovery of new targets for antifungal drugs development. This study aimed to determine the genotypes of 48 clinical isolates of C. albicans obtained from the oral cavity of kidney transplant patients from two distinct geographic regions of Brazil. In addition, we investigated three virulence factors in vitro: phospholipase activity, morphogenesis and the ability to evade from polymorphonuclear neutrophils. The expression of these virulence factors in vitro was also investigated in the presence of the crude extract of Eugenia uniflora. The genotype A was the most prevalent (30 isolates; 62.5%), followed by genotype C (15 isolates; 31.5%) and genotype B (3 isolates; 6.25%). When microsatellite technique with primer M13 was applied, 80% of the isolates from the South were placed within the same cluster. All Genotype C strains were grouped together within two different clusters. Genotype C was considered more resistant to PMNs attack than genotypes A and B. Strains isolated from the South of Brazil showed higher ability to combat PMNs phagocytosis. We found a high rate of genotype C strains isolated from the oral cavity of this group of patients. The crude extract of E. uniflora inhibited proper hypha formation and phagocytosis by PMNs, but had no significant effect on phospholipase activity. This study characterized oral C. albicans strains isolated from kidney transplant recipients and will contribute for the better understanding of the pathogenesis and alternative therapeutics for oral candidiasis / Candida albicans ? uma levedura dipl?ide que em certas circunst?ncias pode causar infec??es da cavidade oral e da orofaringe. A investiga??o de produtos naturais ? fundamental para a descoberta de novos alvos para o desenvolvimento de drogas antif?ngicas. Este estudo objetivou determinar os gen?tipos de 48 isolados cl?nicos de C. albicans obtidos da cavidade oral de pacientes transplantados renais de duas distintas regi?es geogr?ficas do Brasil. Al?m disso, foram investigados tr?s fatores de virul?ncia in vitro: atividade de fosfolipase, morfog?nese e a capacidade de escapar do ataque de neutr?filos polimorfonucleares. A express?o destes fatores de virul?ncia tamb?m foi investigada na presen?a do extrato bruto de Eugenia uniflora. O gen?tipo A foi o mais prevalente (30 isolados; 62,5%), seguido do gen?tipo C (15 isolados; 31,5%) e do gen?tipo B (3 isolados; 6,25%). Quando a t?cnica do microssat?lite com o primer M13 foi empregada, 80% dos isolados da regi?o Sul foram agrupados no mesmo cluster. Todos os isolados do gen?tipo C foram agrupados juntos em dois diferentes clusters bem definidos. Isolados do gen?tipo C foram considerados mais resistentes ? a??o de PMNs do que os dos gen?tipos A e B. As cepas isoladas do Sul do Brasil demonstraram maior habilidade em combater a fagocitose por PMNs. Encontrou-se uma alta taxa de isolados do gen?tipo C da cavidade oral deste grupo de pacientes. O extrato bruto de E. uniflora inibiu a forma??o de hifa e fagocitose por PMNs, mas n?o apresentou efeito significativo na atividade de fosfolipase. Este estudo caracterizou isolados cl?nicos de C. albicans da cavidade oral de pacientes transplantados renais, contribuindo para um melhor entendimento da patog?nese e terap?utica alternativa para a candid?ase oral