Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-01-29T10:38:38Z No. of bitstreams: 2 Tese - Luciana Silva Lobo - 2015.pdf: 2839978 bytes, checksum: 0ef10b35664e1c515db65675ee0208fa (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-01-29T10:44:04Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Luciana Silva Lobo - 2015.pdf: 2839978 bytes, checksum: 0ef10b35664e1c515db65675ee0208fa (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-01-29T10:44:04Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Luciana Silva Lobo - 2015.pdf: 2839978 bytes, checksum: 0ef10b35664e1c515db65675ee0208fa (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2015-07-22 / Triatoma infestans is the main vector of Chagas disease in Argentina, Bolívia and Paraguai. Beauveria bassiana is effective against all developmental stages of T. infestans. The dynamics of the host infection with B. bassiana has not been well studied yet and more basic research is necessary to elucidate aspects of this interaction. The present study characterized volatile organic compounds (VOC) secreted by T. infestans physically disturbed and infected with B. bassiana employing gas cromatography coupled to mass spectrometry. The expression of genes potentially involved in the biosynthesis of this volatiles (Ti-brnq and Ti-bckdc) was analysed according to the progress of infection with quantitative reverse transcription real-time (qPCR) methodology. The time-related expression of B. bassiana genes envolved in the biosynthesis of fungal toxins (BbtenS, BbbeaS, BbbslS) in nymphs treated with conidia or blastospores was measured, as well as the gene expression levels of insect proteins belonging to the humoral immune response (TiPPO, TiHL, TiDEF) in the same nymphs. Moreover, the influence of conidia on nymphal behavior was analysed. No clear repellent effect of conidia was found. Isobutyric acid was the most abundant VOC found, however, significant effect of the fungal on propionic acid secretion was found 1–3 days after treatment (a.t.). Ti-brnq and Ti-bckdc expression was higher 4 d a.t. than at 10 d a.t. in both conidial concentrations tested, but a significant effect of the time was found only with the first gene. In individuals immersed in the higher conidial concentration the expression of BbtenS and BbbeaS peaked 3 and 12 days a.t. respectively, and 9 days a.t with individuals treated with the lower concentration. In blastospore-injected nymphs, these genes peaked 24 h a.t. and in dead insect exposed in humid chamber. A significant effect of time on the expression of TiPPO in nymphs immersed in both conidial concentrations was found. TiDEF and TiHL peaked 6 days a.t. to both conidial concentration tested. In insects injected with blastospores significant increase in the expression pattern of all genes was found at the lower dose tested. Results emphasized the importance to elucidate better the dynamics of infection of T. infestans with B. bassiana in order to develop biological control estrategies of these vectors with entomopathogenic fungi. / Triatoma infestans é o vetor principal da doença de Chagas na Argentina, Bolívia e Paraguai. Beauveria bassiana se destaca por ser eficiente contra todos os estágios de vida de T. infestans. A dinâmica da infecção desse fungo em seus hospedeiros ainda não foi muito estudada, e são necessários mais estudos básicos para a elucidação de aspectos dessa interação. O presente estudo caracterizou compostos voláteis orgânicos (CVO) liberados por T. infestans fisicamente perturbados e infectados por B. bassiana através de cromatografia gasosa acoplada à espectrofotometria de massa, e analisou o padrão de expressão de genes envolvidos na produção e liberação desses voláteis (Ti-brnq e Ti-bckdc) em função do progresso da infecção, através de PCR em tempo real. Foi estudado também o padrão de expressão de genes envolvidos na biossíntese de toxinas de B. bassiana (BbtenS, BbbeaS, BbbslS) durante o processo da infecção em ninfas tratadas com conídios ou blastosporos, e de genes envolvidos na resposta imune humoral (TiPPO, TiHL, TiDEF) nas mesmas ninfas. Além disso, foi analisada a influência de conídios de B. bassiana sobre o comportamento de T. infestans. Não foi encontrado efeito claro de repelência de ninfas a conídios. O CVO majoritário encontrado foi o ácido isobutírico, mas houve efeito da infecção somente sobre a produção do ácido propiônico 1–3 dias após o tratamento (a.t.). A expressão de Ti-brnq e Ti-bckdc foi significativamente maior aos 4 dias a.t. que aos 10 dias para as duas concentrações de conídios testadas, com efeito significativo somente para o primeiro gene. Em indivíduos imersos em conídios na maior concentração, a expressão de BbtenS e BbbeaS apresentou um pico 3 e 12 dias a.t., já na menor concentração, o pico de expressão ocorreu aos 9 dias a.t. Em insetos injetados com blastosporos, o pico da expressão desses genes ocorreu 24 h a.t. e em cadáveres expostos a câmara úmida. Para ninfas imersas em suspensão de conídios, foi encontrado efeito significativo do tempo sobre a expressão de TiPPO nas duas concentrações testadas. TiDEF e TiHL tiveram um pico de expressão aos 6 dias a.t. para as duas concentrações testadas. Em ninfas injetadas com blastosporos, a expressão dos três genes de imunidade variou significativamente de acordo com o tempo de infecção somente com a menor dose de blastosporos. Os resultados ressaltaram a importância de esclarecer melhor a dinâmica da infecção de T. infestans com B. bassiana para o desenvolvimento de estratégias de controle biológico desse vetor com fungos entomopatogênicos.

Doctorat en Sciences médicales / info:eu-repo/semantics/nonPublished