Orientador: Iara Jose Taborda de Messias / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Cardiologia / Resumo: A participação do Sistema Complemento na imunopatologia da Doença de Chagas é algo já definido. Considerando-se que a Doença de Chagas pode apresentar-se de forma bastante polimórfica, o presente trabalho teve como objetivo estudar a susceptibilidade ou resistência genética conferida pelo complemento em pacientes chagásicos. Para tanto, determinamos o polimorfismo genético de C2, C3, BF, C4A e C4B numa população de 100 pacientes chagásicos, sendo 577. da "forma cardíaca" e 43"/. da "forma indeterminada". Como controles foram estudados indivíduos adultos normais, pareados com a máxima proximidade possível com a amostra dos pacientes, segundo o grupo étnico, sexo, idade e origem geográfica. A idade média dos pacientes chagásicos como um todo foi de 41 anos, sendo que os chagásicos considerados como "forma indeterminada" apresentaram uma idade média de 38 anos e os de "forma cardíaca" de 44 anos. A idade média dos pacientes que foram a óbito durante a realização do estudo (47.) foi de 38 anos. 657. dos pacientes chagásicos eram do sexo masculino, sendo que entre eles 36 (55,387.) tinham forma cardíaca e 29 (44,627.) forma indeterminada. Os pacientes restantes (357.) eram do sexo feminino e entre eles 21 (607.) tinham forma cardíaca e 14 (407.) forma indeterminada. Considerando o grupo étnico, 57. dos pacientes chagásicos eram brancos europeus, 497. brancos brasileiros, 447. mulatos e 27. negros. Dos pacientes com forma cardíaca 48 (83,227.) eram do Norte do Paraná e 34 (79,06%) com forma indeterminada tinham a mesma procedência. 0 tempo médio entre a possível época de infecção com o T.cruzi e a realização do estudo foi de 36 anos nos chagásicos forma cardíaca e de 30 anos nos chagásicos forma indeterminada. A idade média dos controles foi de 34 anos, sendo 687. do sexo masculino e 327. do sexo feminino, rnnc í ricratiiin r" grMpn itni rn, ripe rnntrnlaq prgm branco"* europeus, 497. brancos brasileiros, 447. mulatos e 27. negros. Todos os controles eram do Paraná. As variantes polimórficas de BF, C3 e C4 foram detectadas através de eletroforese em gel de agarose, sob alta voltagem e refrigeração contínua. BF e C4 foram visualizados após imunofixação. Na determinação das variantes de C2 foi empregado o método de focalização isoelétrica em gel de po1iacri1amida, seguida de teste hemolítico. Os resultados demonstraram uma associação positiva do alótipo C3 F nos pacientes chagásicos com forma cardíaca quando comparados com os controles (p = 0,0494) e pacientes com forma indeterminada (p = 0,008). Após correção para o número de alelos testados a associação positiva de C3 F persiste apenas quando os pacientes chagásicos forma cardíaca foram comparados com os de forma indeterminada (pc = 0,016), o que sugere este alelo como marcador de susceptibilidade para a evolução de forma cardíaca da Doença de Chagas. O alótipo BF S apresentou uma associação negativa com os pacientes chagásicos de forma cardíaca (p = 0,0143) e com o grupo de Chagas total (p = 0,0233), quando comparados com os controles. Considerando a correção para o número de alelos testados a associação negativa de BF S persiste apenas quando os pacientes chagásicos forma cardíaca eram comparados com os controles (pc = 0,0429), o que sugere que indivíduos portadores deste alótipo apresentam uma maior resistência contra o desenvolvimento da Doença de Chagas na sua forma cardíaca de evolução. A análise da distribuição dos alelos de C2, C4A e C4B não apresentou nenhuma diferença estatisticamente significante entre os diferentes grupos estudados o que corrobora a importância da via alternativa do complemento nos mecanismos de defesa contra o T.cruzi. üs resultados obtidos sugerem um papel imunogenético da via alternativa do complemento na Doença de Chagas, influenciando a forma clínica de evolução dos pacientes chagásicos. / Sem abstract

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de medicina núcleo de medicina tropical, Programa de Pós-Graduação em Medicina Tropical, 2011. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2012-05-24T15:48:24Z No. of bitstreams: 1 2011_MaiconHitoshiMaeda.pdf: 2933593 bytes, checksum: ff0b2443f49540b27c906d3f91547321 (MD5) / Approved for entry into archive by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br) on 2012-05-25T11:36:39Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_MaiconHitoshiMaeda.pdf: 2933593 bytes, checksum: ff0b2443f49540b27c906d3f91547321 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-05-25T11:36:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_MaiconHitoshiMaeda.pdf: 2933593 bytes, checksum: ff0b2443f49540b27c906d3f91547321 (MD5) / A vigilância entomológica da doença de Chagas (DC) no Distrito Federal (DF) é feita de forma passiva, com participação comunitária. A eficiência dessa estratégia depende do conhecimento da população em relação aos vetores. Além disso, a análise da ocorrência de triatomíneos sinantrópicos no DF nos últimos anos é necessária para avaliação do programa de vigilância e controle. O presente trabalho tem duas abordagens. Na primeira o objetivo foi analisar a percepção de moradores de duas regiões administrativas do DF, Planaltina (NRT) e Águas Claras (SHA) sobre identificação, biologia, controle dos triatomíneos e características da doença de Chagas. Na segunda, o objetivo foi analisar a ocorrência espacial e temporal das espécies de triatomíneos no DF, assim como seus índices de infecção natural por tripanosomatídeos. A coleta de informações foi feita com 115 moradores, utilizando entrevistas semi-estruturadas. Os dados entomológicos foram obtidos a partir de registros mensais de triatomíneos entre 2002 e 2010, em 20 regiões administrativas. Foi analisado o número de adultos e ninfas capturados e infectados de cada espécie no intra e peridomicílio. Os moradores do NRT e SHA souberam identificar triatomíneos adultos. A maioria dos entrevistados não conhecia hábitos alimentares e reprodução. Disseram que são mais freqüentes na época das chuvas. Ninguém soube relatar quanto tempo os triatomíneos vivem. A maioria dos moradores compreende que os triatomíneos transmitem a DC. No entanto, houve diferença quanto ao nome e tratamento da doença, os moradores do SHA tinham um maior conhecimento sobre o assunto em relação aos do NRT. Quando perguntado o que faria se encontrasse na sua casa e/ou quintal a resposta “mataria apenas” foi a mais comum. Entre as medidas de controle destacaram-se limpeza do ambiente, uso de inseticidas e tapar rachaduras. O coração foi o principal órgão comprometido pela doença segundo os moradores. Em relação ao estudo da ocorrência dos triatomíneos no DF observou-se que nos últimos 9 anos foram capturados 754 triatomíneos em 252 unidades domiciliares notificadas, em média, 84 triatomíneos ao ano. P. megistus foi a espécie mais freqüente (65%), seguida de T. pseudomaculata (14%). Dos 309 triatomíneos examinados, 3 espécimes de P. megistus (1,0%) estavam infectados por flagelados morfologicamente similares a Trypanosoma cruzi. A ocorrência espacial mostrou que em Planaltina, região predominantemente rural, houve maior diversidade de triatomíneos e maior frequência de T. sordida. Nas áreas urbanas houve predominância de P. megistus, principalmente no Park Way. O número de registros de P. megistus no período chuvoso foi duas vezes maior que no período seco, sendo o maior número de capturas observado no mês de novembro. Esses resultados mostram que a maioria dos moradores consegue identificar os triatomíneos e alguns aspectos importantes sobre os vetores e DC, mas medidas educativas são necessárias para aprimorar a vigilância entomológica e transmitir esse conhecimento às futuras gerações. A presença de colônias de P. megistus infectadas por T. cruzi em domicílios evidencia o risco de infecção humana no DF. Dessa forma, é fundamental que continue a vigilância entomológica, intensificando-a no período chuvoso e nas regiões onde há maior infestação. / The entomological surveillance of Chagas disease in the Federal District (DF) is done passively, with community participation. The efficiency of this strategy depends of knowledge the population in relation to the vectors. In addition, analysis of the occurrence of synanthropic triatomines in DF in recent years is needed to evaluate the program of surveillance and control. This work has two approaches. At first the goal was to analyze the perception of residents of two administrative regions of the DF, Planaltina (NRT) and Águas Claras (SHA) on identification, biology, control of insects and characteristics of Chagas disease. In the second, the goal was to analyze the spatial and temporal occurrence of triatomine species in the DF, as well as their rates of natural infection with trypanosomatids. Data collection was conducted with 115 residents, using semi-structured interviews. The entomological data were obtained from monthly records of insects collected between 2002 and 2010 in 20 administrative regions. We analyzed the number of adults and nymphs captured and infected with each species inside and around houses. The residents of NRT and SHA could identify adults triatomines. Most respondents did not know about feeding habits and reproduction of these insects. They said that triatomines are more frequent during the rainy season. Nobody could tell how long triatomines live. Most residents understand that the triatomines transmit DC. However, there was statistical difference related to the name of the disease and treatment between rural and urban residents. The main attitude reported by residents in relation to the gathering triatomines in the house was to kill the insects. Cleanliness of the environment, use of insecticides and seal cracks were the main control measures reported. Heart was the principal organ affected by the disease according to residents. In relation to the study of the occurrence of triatomines in the DF we showed that in the last 9 years 754 triatomines were captured in 252 households reported, on average, 84 triatomines year. P. megistus was the most frequent species (65%), followed by T. pseudomaculata (14%). Of the 309 triatomines examined, three specimens of P. megistus (1.0%) were infected with flagellates morphologically similar to Trypanosoma cruzi. The spatial occurrence showed that in Planaltina, a predominantly rural region, a greater diversity of insects and higher frequency of T. sordida were observed. In urban areas there was a predominance of P. megistus, especially in Park Way. The number of records of P. megistus in the rainy season was two times higher than during the dry season, the largest number of triatomines was collected in November. These results show that most residents can identify triatomines and some important aspects of vectors and DC, but educational measures are necessary to improve the entomological surveillance and transmit this knowledge to future generations. The presence of colonies of P. megistus infected by T. cruzi in households highlights the risk of human infection in the Federal District. Thus, it is essential to continue to entomological surveillance, intensifying it in the rainy season and in the regions with the largest infestation.

Orientador: Domingos Alves Meira / Resumo: Clicar acesso eletrônico abaixo. / Abstract: Click electronic access below. / Doutor

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2006. / Submitted by Allan Wanick Motta (allan_wanick@hotmail.com) on 2010-07-14T19:15:45Z No. of bitstreams: 1 2006_AdrianaDiasMagalhaes.pdf: 4334761 bytes, checksum: db31def2dc9f9ea1bec02b091af443c7 (MD5) / Approved for entry into archive by Lucila Saraiva(lucilasaraiva1@gmail.com) on 2010-07-14T22:45:57Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006_AdrianaDiasMagalhaes.pdf: 4334761 bytes, checksum: db31def2dc9f9ea1bec02b091af443c7 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-07-14T22:45:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006_AdrianaDiasMagalhaes.pdf: 4334761 bytes, checksum: db31def2dc9f9ea1bec02b091af443c7 (MD5) Previous issue date: 2006 / O Trypanosoma cruzi é o parasita causador da doença de Chagas, a qual atinge 16-18 milhões de pessoas. Recentemente, o seqüenciamento do genoma do T. cruzi foi concluído, o que deu novo impulso aos projetos pós-genômicos visando a elucidação da expressão diferencial de proteínas ao longo do ciclo de vida do parasita. A proteômica é bastante apropriada para este fim, já que a regulação da expressão de proteínas em T. cruzi ocorre em nível póstranscricional. Objetivando-se o estudo das proteínas básicas do proteoma de T. cruzi, condições para eletroforese bidimensional (2-DE) em pH alcalino das formas epimastigotas, tripomastigotas e amastigotas foram estabelecidas. Tornou-se necessário otimizar as condições experimentais para tais géis, já que nessa faixa de pH é normal o aparecimento de longas listras horizontais (streaking), baixa resolução de spots e baixa reprodutibilidade. O protocolo final, desenvolvido para formas epimastigotas, consistiu na adição de 10% de isopropanol ao tampão de reidratação do gel de gradiente imobilizado de pH, aplicação da amostra em uma fita de papel de filtro conectada ao anôdo, uso de fita embebida com solução de DTT junto ao catôdo e focalização isoelétrica utilizando-se o equipamento Multiphor II (GE Healthcare). Um total de 10 spots do gel de epimastigotas foram identificados por impressão digital do mapa peptídico (peptide mass fingerprint). As proteínas identificadas foram: fosfoglicerato quinase, prostaglandina F2a sintase, peptídeo metionina sulfóxido redutase, metiltioadenosina fosforilase, proteína dissulfeto isomerase, AKB ligase e quatro proteínas hipotéticas (hipotéticas). As condições padronizadas para a 2-DE foram aplicadas na construção de mapas bidimensionais das formas tripomastigotas e amastigotas. Os mapas resultantes permitiram verificar diferenças de expressão entre os proteomas. Por último, foi testada a metodologia do gel “dois em um” para 2-DE em faixa ampla de pH, que mostrou resultados promissores para futuras análises da expressão comparativa de proteínas em T.cruzi. / Trypanosoma cruzi is the parasite that causes Chagas disease, a chronic illness that affects 16-18 million people. Recently, the sequencing of T. cruzi genome was concluded. This accomplishment stimulated post-genomic projects aiming at elucidating the differential protein expression through the parasite life cycle. Proteomics is the most suitable methodology for this since T. cruzi protein expression regulation occurs at post-transcriptional level. In order to study the basic proteins from T. cruzi proteome, conditions for two-dimensional gel electrophoresis (2-DE) of epimastigote, trypomastigote and amastigote life forms were developed. It was necessary to optimize the 2-DE experimental conditions since in the alkaline pH range the gels usually presents spot streaking, low resolution and poor reproducibility. The final protocol, developed for epimastigotas, consisted of the addition of 10% isopropanol to the IPG gel strip rehydration buffer, sample loading using the “paper bridge” method, use of paper strip embedded in DTT solution near the cathode and isoelectric focusing using the Multiphor II apparatus (GE Healthcare). A total of 10 spots from the epimastigote gel were identified by peptide mass fingerprinting. The identified proteins were phosphoglycerate kinase, prostaglandin F2a synthase, methionine peptide sulfoxide reductase, methylthioadenosin phosphorylase, protein disulfide isomerase, AKB ligase and four hypothetical proteins. The optimized 2-DE conditions were applied to the construction of trypomastigotes and amastigotas two dimensional maps. The resulting maps permitted the visualization of differences in protein expression among the proteomes. Finally, the “two-in-one” 2-DE methodology for wide range pHs was tested and gave promising results that may be used in future studies on T. cruzi comparative protein expression.

Orientador: Eros Antonio de Almeida / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T17:08:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Figueiredo_DeolindadeMatos_M.pdf: 26531412 bytes, checksum: 5dcc9a7ba7c9c7928f6a258c07b3956c (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: o objetivo deste trabalho foi verificar a apresentação clínica da doença de Chagas em indivíduos com neoplasia maligna, assim como a evolução desta doença num período de doze meses. 20 doentes com idade média de 59,75:i:8,24 anos foram analisados e comparados com um grupo de chagásicos crônicos sem neoplasia. Os tipos de neoplasias corresponderam a 40% de adenocarcinomas, 30% de carcinomas e 30% a neoplasias de origem hematológica. Ocorreram 35% de indivíduos sintomáticos, apresentando 55% de eletrocardiogramas alterados e 20% de radiografias do tórax alteradas. Estas variáveis, após 12 meses, apresentaram-se em 35%, 60%, e 20% respectivamente. A positividade doxenodiagnóstico dos indivíduos que o realizaram foi de 20%. No subgrupo de indivíduos tratados com quimioterapia ocorreram sintomas em 33%, alterações eletrocardiográficas em 75% e radiografias do tórax alteradas em 25%. A positividade do xenodiagnóstico foi de 16% nos indivíduos que o realizaram. Doze meses após, estas variáveis apresentaram as :&eqüênciasde 41%, 83%, 33% e 33% respectivamente. Dos 20 doentes acompanhados, quatro doentes permaneceram na forma indeterminada, 11 na forma cardíaca, dois na forma digestiva e dois na mista. Apenas um doente evoluiu da forma indeterminada para a forma cardíaca. O tratamento específico para doença de Chagas não foi instituído em nenhum doente durante o período de doze meses. Os dados sugeriram que não houve mudança na evolução natural da doença de Chagas determinada pela presença de neoplasia no período de avaliação. Conclui-se que a preocupação com a parasitemia nos doentes com doença de Chagas e neoplasia maligna, principalmente em regime de tratamento imunossupressor, deva ser mantida / Abstract: The aim ofthis study was to verífy the clinical presentation ofChagas' disease in patients with malígnant neoplasm, as well as the evolution ofthis disease in a 12-month period. We analyzed 20 (twenty) patients with an mean age of 59,75:1:8,24years old and they were compared to a group of chagasic patients without neoplasm. The types of neoplasias were the following: 57,1% of adenocarcinomas, 42,8% of carcinomas and 30% of neoplasias :&omhematologic origino It was found an occurrence of 35% of symptomatic patients, showing 55% of alterations in the electrocardiogram (ECG) as well as and 20% of alterationsin the chestXray. Thesevariablesafter 12- monthperiodpresentedthemselves as 35%, 600./0and 20% respectively. The positivity of xenodiagnostic was of 20% among the patients who had performed it. At the subgroup of treated patients with chemotherapy, symptoms had occurred in 33% of the patients, 75% of changed electrocardiogram and 25% of changed chest X ray. The positivity of the xenodiagnostic was of 16% in the patients who had performed it. Twelve months after, these variables showed the following :&equences:41%, 83%, 33% and 33% respectively. Among the 20 (twenty) analyzed patients, 4 (four) remained in the undetermined form, 11 (eleven) in the cardiac form, 2 (two) in the digestive form and 2 (two) in the mixed form. Only one patient evolved :&om the undetermined form to the cardiac form. The specific treatment for Chagas' disease was not used in any patient during the 12-month period. In doing so, the data suggested that there had been no changes in the natural evolution of Chagas' disease, determined by the presence of neoplasm during the evaluation período We found that the worry with parasitemia in patients with Chagas' disease/malígnant neoplasm, mainly in immunosuppressive agents regimen should be maintained. / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

Orientadores: Maria Elena Guariento, Eros Antonio de Almeida / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-24T11:25:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Wanderley_JamirodaSilva_D.pdf: 5533989 bytes, checksum: 65f001e164cba9ac03edaaf5070a6eaf (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: Foram avaliados 250 indivíduos portadores da infecção pelo T. cruzi com pelo menos duas sorologias positivas, com vínculo empregatício regulamentado. Divididos em dois grupos após entrevista, exame clínico e complementares: grupo FI com 143 indivíduos (forma indeterminada) e FC com 99 indivíduos (com algum grau de cardiopatia), sendo retirados os casos com megavísceras isoladas. Avaliados quanto ao sexo, raça, grau de escolaridade, tipo de serviço, vínculo previdenciário, salários, exame médico admissional, recusa ao exame admissional. O estudo constatou a existência de inadequação quanto a capacidade de trabalho dos portadores de T cruzi e a função desempenhada. Alguns elementos sugestivos de discriminação com os trabalhadores soropositivos. Seria necessário adotar-se estratégias de esclarecimento aos profissionais da área da saúde quanto a capacidade de trabalho dos portadores de infecção pelo T cruzi, bem como os peritos da Previdência Social / Abstract: We studied two hundred fifty confinned Chagas' disease patients with regular jobs. They were distributed in two groups: FI - N= 143 patients in the undetennined fonn; FC - N= 99 patients with cardiopathy. We excluded Chagas' disease patients with megaesophagus and megacolon but no cardiopathy. Age, gender, race, educational leveI, kind of job, regular employment, wages, admittance physical condition and rejection in the admittance physical exam. In the present report we demonstrate that Chagas' disease patients jobs are frequently not adapted for the jobs they have. Our data suggest that these patients endure discrimination. We conclude that health workers need more infonnation on Chagas' disease working capability / Doutorado / Medicina Interna / Doutor em Ciências Médicas

Orientador : Irineu Jose Barsanti de Camargo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-14T03:26:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Balestieri_FilomenaMariaPerrella_M.pdf: 8243791 bytes, checksum: ade0ec7e842d583a8a0ca05dfb63f7a8 (MD5) Previous issue date: 1985 / Resumo: O presente trabalho teve como principal objetivo a análise das alterações nas populações celulares de gânglios poplíteos induzidas durante infecção pelo T.cruzi e sua relação com os diferentes graus de resistência/susceptibilidade das linhagens isogênicas de camundongos. O objetivo secundário foi a adaptação, às nossas condições, de uma metodologia sensivel para a detecção das populações de linfócitos T e B. As principais conclusões de trabalho estão abaixo relacionadas. A obtenção do complexo PAP, em nosso laboratório, permitiu a padronização de uma técnica mais sensível,com a utilização de altas diluições dos soros anti-linfócito T e anti-imunoglobulinas e a consequente redução de reações inespecíficas. O soro anti-linfócito T produzido evidenciou células T com diferentes distribuições do antígeno Thy1.2, contra o qual foi produzido. O soro de coelho anti-imunoglobulinas detectou células B com diferentes padrões de distribuição de imunoglobulinas de superficie, principalmente da classe IgG e cadeias leves de outras classes de imunoglobulinas. - As principais alterações de gânglios poplíteos,nas três linhagens ,evidenciadas através do peso, número de células e proporções de linfócitos T e B foram muito mais acentuadas no gânglio de drenagem do que no contralateral. - O aumento de peso observado em gânglios poplíteos da linhagem CBA/J ocorreu devido ao aumento no número de células recrutadas durante a infecção,enquanto que nas linhagens resistentes este aumento foi correlacionado a este fator e ao provável acúmulo de produtos celulares,induzidos pela infecção ...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Not informed. / Mestrado / Imunologia / Mestre em Ciências Biológicas

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2008. / Submitted by Guimaraes Jacqueline (jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2009-03-19T15:38:03Z No. of bitstreams: 1 2008_AdrianaAlvesSa.pdf: 2683586 bytes, checksum: 23691b0c8f572a55cb6c82469e6b0425 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2009-03-20T16:44:53Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_AdrianaAlvesSa.pdf: 2683586 bytes, checksum: 23691b0c8f572a55cb6c82469e6b0425 (MD5) / Made available in DSpace on 2009-03-20T16:44:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_AdrianaAlvesSa.pdf: 2683586 bytes, checksum: 23691b0c8f572a55cb6c82469e6b0425 (MD5) / O tratamento das infecções pelo Trypanosoma cruzi tem sido alvo de muitas investigações porque a busca da cura da doença de Chaga tem alta relevância social. Este trabalho teve como objetivo geral avaliar diferentes esquemas terapêuticos na doença de Chagas experimental. Seus objetivos específicos visaram a comparar aspectos clínicos, parasitológicos e sobrevivência nos grupos experimentais e controles, para avaliação do efeito de diferentes esquemas terapêuticos de tratamento e doses dos fármacos utilizados. Esses parâmetros foram usados como critério de avaliação dos esquemas de tratamento com drogas inibidoras de vias metabólicas, envolvidas em divisão e diferenciação celulares, que poderiam impedir a integração do kDNA do T. cruzi no genoma do hospedeiro. Grupos de 20 camundongos BALB/c infectados com Trypanosoma cruzi do estoque Berenice, pesando 20 a 25 g, de ambos os sexos, foram tratados com benzonidazol, nas fases aguda e crônica da infecção. Formaram-se novos grupos também com 20 animais, que receberam benzonidazol, associados com uma, duas ou três drogas. As drogas utilizadas foram praziquantel (inibidor de proteína-quinase), ciprofloxacina (inibidor de topoisomerase) e zidovudina (inibidor da transcriptase reversa). Foi previamente demonstrado que essas drogas inibem a integração do kDNA no genoma de célula hospedeira de mamífero in vitro. De acordo com os parâmetros de avaliação, apenas o grupo de animais tratados na fase crônica da infecção com benzonidazol associado à ciprofloxacina durante 30 dias teve a parasitemia negativada, com decréscimo significativo dos títulos de anticorpos e ausência de amplificação de seqüências de kDNA. O achado sugeriu que o tratamento eliminou a infecção e preveniu as mutações no genoma do hospedeiro. Nos demais grupos experimentais os resultados foram similares àqueles obtidos nos grupos tratados apenas com benzonidazol, pois, não houve negativação das parasitemias e o kDNA podia ser encontrado no genoma dos camundongos testados. Assim somente a associação de benzonidazol com ciprofloxacina na concentração ótima testada, sugeriu a eliminação da infecção, e o kDNA não integrou no genoma dos camundongos. Nos demais grupos experimentais analisados os resultados obtidos, sugerem que as drogas administradas não eliminaram as infecções pelo T. cruzi. / The treatment of the T. cruzi infections has been sought by many investigators because the cure of Chagas disease has high social and economic importance. This work aimed at the use of various therapeutic formulations to treat the experimental Chagas disease in mice. Specifically, it was aimed at the clinical, parasitological and survival aspects related to the T. cruzi infections in experimental and control groups of BALB/c mice. Secondly, this work aimed at to evaluate therapeutic protocols, using different pharmacological compounds. The parameters used to evaluate the therapeutic protocol were the elimination of the parasitic infections and abrogation of the integration of the T. cruzi kDNA minicircle sequences by the administration of inhibitors of metabolic pathways of cell growth and differentiation. Groups of 20 mice of both sexes, weighing 20 to 25 g, received the T. cruzi intraperitoneally and were treated in the acute and chronic phases of the infections. The experimental groups received benznidazole (0.86 mg/day) alone or in association with one, two or three different inhibitors. The inhibitors used were: praziquantel (inhibitor of protein-kinases, 0.93 mg/day), ciprofloxacin (inhibitor of Topoisomerase II, (1.2 mg/day), and zidovudine (inhibitor of reverse transcriptase, 1.2 mg/day). In a previous study, it was shown that these inhibitors prevent the integration of kDNA minicircle sequences into the host mammalian cell in vitro. The drugs were administered by gavage of mice for a period of 15, 30 or 60 days. Following the parameters set for evaluating the effects of each therapeutic regime, only a group of chronically infected mice treated with benznidazole and ciprofloxacin for 30 days eliminated the parasitemia, and showed consistent fall of the specific anti-T. cruzi antibody titers, and abrogated the integration of the kDNA into the mouse genome. This finding has suggested that this therapeutic regime was indeed efficient because it abrogated the infection, the specific antibody titers and the kDNA integrations. However, when half-dose benznidazol and ciprofloxacin were used the mice the infections sere set free. Also in all the other experimental groups the results obtained indicated therapeutic failure, because the results were similar to those obtained with benznidazole alone: the parasitemias were patent and the kDNA was recovered from infected-treated animals. In summary, the administration of benznidazole combined with ciprofloxacin to T. cruzi-infected mice eliminated the infection and kDNA did not integrate into the mouse genome. In relationship to the remaining infectedand treated groups it was observed therapeutic regimes did not eliminate the infections.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Biologia, Pós-Graduação em Biologia Microbiana, 2017. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2017-05-11T17:55:25Z No. of bitstreams: 1 2017_JulianaVieiraFerreiraName.pdf: 1833058 bytes, checksum: b4c218ac98286257ce515f3efda357b8 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline (jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2017-05-17T12:34:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_JulianaVieiraFerreiraName.pdf: 1833058 bytes, checksum: b4c218ac98286257ce515f3efda357b8 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-17T12:34:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_JulianaVieiraFerreiraName.pdf: 1833058 bytes, checksum: b4c218ac98286257ce515f3efda357b8 (MD5) / A Doença de Chagas ou tripanossomíase americana é uma doença causada pelo parasita protozoário Trypanosoma cruzi (T. cruzi) e é considerada endêmica em 21 países da América Latina. Estudos mostraram que a infecção por T. cruzi interfere na expressão em nível pós-transcricional de proteínas da via de apresentação MHC classe I, especificamente as subunidades induzíveis do imunoproteassoma (β1i, β2i e β5i), a subunidade PA28α, a proteína TAP e o MHC I. O presente estudo teve como objetivo avaliar se as regiões 5’ e 3’ UTR dos mRNAs dessas proteínas estão envolvidas na inibição da expressão no nível traducional pelo parasita, utilizando como modelo a subunidade β1i do imunoproteassoma. Para isso, essas duas regiões foram amplificadas e clonadas flanqueando o gene repórter EGFP em um vetor de expressão para células eucarióticas. Células transfectadas foram infectadas com T. cruzi e após quatro dias foram realizadas citometria de fluxo e microscopia de fluorescência para analisar a expressão da EGFP. Foi possível observar que as células HeLa transfectadas com a montagem do gene EGFP contendo as regiões 5’UTR e 3’UTR da subunidade B1i e infectadas com o parasita apresentaram queda na expressão da EGFP em sua população. Em uma visão mais individualizada por microscopia foi observado que células que apresentavam uma parasitemia elevada não emitiam fluorescência, ou apresentavam menor intensidade que as células na mesma população não infectadas. Nas células transfectadas com o gene EGFP sem as regiões UTRs observamos que a presença dos parasitas no interior das células não interferiu na expressão da EGFP. Esses resultados indicam que há uma interferência na expressão da subunidade β1i do imunoproteassoma durante a infecção por T. cruzi e que as regiões UTR são alvos nesse processo de inibição pós-transcricional. / Chagas disease or American trypanosomiasis is a disease caused by the protozoan parasite Trypanosoma cruzi (T. cruzi) and is considered endemic in 21 countries in Latin America. Studies have shown that T. cruzi infection interferes in post-transcriptional level expression of MHC class I pathway proteins, specifically the inducible subunits of the immunoproteasome (β1i, β2i and β5i), the PA28α subunit, the TAP protein and the MHC I. The present study aimed to evaluate whether the 5 'and 3' UTR regions of the mRNAs of these proteins are involved in the inhibition of expression at the translational level by the parasite, using as template the β1i subunit of the immunoproteasome. To that end, these two regions were amplified and cloned flanking the EGFP reporter gene into an expression vector for eukaryotic cells. Transfected cells were infected with T. cruzi and after four days flow cytometry and fluorescence microscopy were performed to analyze EGFP expression. It was possible to observe that HeLa cells transfected with EGFP gene assembly containing the 5'UTR and 3'UTR regions of the β1i subunit and infected with the parasite showed a decrease in EGFP expression in their population. In a more individualized view by microscopy it was observed that cells that had a high parasitemia did not emit fluorescence or were emitted much less intensely than cells in the same uninfected population. In cells transfected with the EGFP gene without the UTRs regions we observed that the presence of the parasites inside the cells did not interfere in the EGFP expression. These results indicate that there is interference in the expression of the β1i subunit of the immunoproteasome during T. cruzi infection and that the UTR regions are targets in this post-transcriptional inhibition process.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Núcleo de Medicina Tropical, Programa de Pós-graduação em Medicina Tropical, 2014. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2015-06-29T17:31:34Z No. of bitstreams: 1 2014_AglaerAlvedaNobrega_Parcial.pdf: 2108035 bytes, checksum: 38a54a988bf0a4b5cd4f0ce7e4bb24ab (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2015-07-20T14:48:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_AglaerAlvedaNobrega_Parcial.pdf: 2108035 bytes, checksum: 38a54a988bf0a4b5cd4f0ce7e4bb24ab (MD5) / Made available in DSpace on 2015-07-20T14:48:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_AglaerAlvedaNobrega_Parcial.pdf: 2108035 bytes, checksum: 38a54a988bf0a4b5cd4f0ce7e4bb24ab (MD5) / Introdução: A cardiomiopatia chagásica crônica (CCC) é a forma clínica mais frequente e importante da doença de Chagas (DC) devido ao seu impacto na morbimortalidade. Ocorre em 20% a 40% das pessoas infectadas por T. cruzi, porém não há registros de mensuração da carga da cardiomiopatia chagásica no Brasil. Objetivos: Mensurar a carga da cardiomiopatia chagásica no Brasil no período de 2000 a 2010 por meio da estimativa dos anos de vida ajustados por incapacidade (DALY) e caracterizar os padrões da mortalidade por doença de Chagas segundo causa específica, sexo, faixa etária e região do país. Métodos: Para responder aos objetivos, foram realizados três estudos: a) análise descritiva dos óbitos por DC, registrados no banco de dados do Sistema de Informação sobre Mortalidade (SIM); b) revisão sistemática com busca em cinco bases eletrônicas de dados de artigos publicados entre 1980 e março de 2014. Foram extraídos dados sobre ano de estudo, objetivo da pesquisa, tipo de publicação, local, idade do grupo, critério de inclusão, tamanho da amostra, origem da população estudada e o valor da prevalência. A qualidade dos estudos foi avaliada por meio de um sistema de pontuação que adota a validade do método, a interpretação e aplicabilidade dos resultados como critérios e somam, no máximo, oito pontos; c) o DALY foi baseado na estrutura conceitual e metodológica da carga global de doença que utiliza um indicador composto por medidas de mortalidade (YLL) e incapacidade (YLD). Resultados: A descrição dos dados do SIM mostrou que 85,9% dos óbitos ocorreram devido ao comprometimento cardíaco, em indivíduos acima de 60 anos de idade, do sexo masculino. A taxa de mortalidade padronizada decresceu 32,4%, de 3,4% em 2000 para 2,3% em 2010. Os óbitos ocorridos devido ao comprometimento cardíaco decresceram em todas as regiões, exceto na região Norte que aumentou 1,6%. O Nordeste teve a menor e o Centro Oeste a maior redução. A busca realizada pela revisão sistemática encontrou 427 artigos e dezessete foram elegíveis para análise. Nenhum estudo referiu cálculo amostral e a proporção da CCC variou de 6% em São Paulo a 48,3% na Bahia, com mediana de 20%. A pontuação atribuída à análise da qualidade dos artigos variou de 1 a 4. Foi incorrido no Brasil um total de 7.402.559 DALY devido à cardiomiopatia chagásica, sendo 674.645 (9%) devido a YLL e 6.727.914 (91%) a YLD. Os indivíduos do sexo masculino apresentaram uma carga 44% maior na mortalidade em relação ao sexo feminino e as mulheres experimentaram uma carga de incapacidade 6% maior que os homens. Conclusão: Os resultados apontam para a necessidade de se investir na melhoria da qualidade de vida das pessoas portadoras da cardiomiopatia chagásica propiciando acesso ao diagnóstico oportuno e tratamento de suporte adequado, além de investir no desenvolvimento de drogas que impeçam ou retardem a evolução da doença. A realização de estudos de custo da CCC no Brasil poderá gerar mais evidência quanto à necessidade de suporte financeira público e privado para prevenção, diagnóstico e tratamento da doença. / Introduction: Chronic Chagas cardiomyopathy (CCC) is the most frequent and important clinical form of Chagas disease because of its impact on morbidity and mortality. Occurs in 20% to 40% of people infected by T. cruzi but there are no records to measure the burden of Chagas cardiomyopathy in Brazil. Objectives: To measure the burden of Chagasic cardiomyopathy in Brazil in the period 2000-2010 by estimating the years of Disability-Adjusted Life Years (DALY) and to characterize the patterns of mortality from Chagas disease (CD) according to specific cause, sex, age and region the country. Methods: To meet the objectives, three studies were conducted: a) descriptive analysis of deaths from CD, registered in the database of the Mortality Information System (SIM); b) Systematic review with search in five electronic databases of articles published data between 1980 and March 2014. Data on years of study, research objective, publication type, location, age group, inclusion criteria, sample size were extracted, origin of the population studied and the value of prevalence. Study quality was assessed by scoring systems which adopted the validity of the method, the interpretation of the results and applicability criteria and add a maximum of eight points; c) the DALY was based on conceptual and methodological framework of the global burden of disease using a composite indicator for measures of mortality (YLL) and disability (YLD). Results: Analysis of the data from the SIM showed that 85.9% of deaths were due to cardiac involvement in patients older than 60 years old, male. The standardized mortality rate (100,000 inhabitants) decreased 32.4%, from 3.4% in 2000 to 2.3% in 2010. The number of deaths due to cardiac involvement decreased in all regions, except in the North region (+1.6%). The Northeast had the smallest (-8.5%) and the Central-West`s largest (-50%) decreased. The search performed by systematic review found 427 articles and seventeen were eligible for analysis. No studies reported sample size calculation and the prevalence of ICC ranged from 6% in São Paulo to 48.3% in Bahia, with a median of 20%. The score to the analysis of the quality of studies ranged from 1 to 4. It was incurred in Brazil a total of 7,402,559 DALYs due to Chagas' cardiomyopathy, and 674.645 (9%) due to YLL and 6,727,914 (91%) the YLD. The males had a 44% greater mortality burden in relation to women and women experienced a charge of 6% greater disability than men. Conclusion: The results point to the need to invest in improving the quality of life of people suffering from Chagas cardiomyopathy providing access to timely diagnosis and appropriate supportive treatment, in addition to investing in the development of drugs that prevent or delay disease progression. Realization of cost studies of CCC in Brazil could generate more evidence on the need for public and private financial support for prevention, diagnosis and treatment of disease.