Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-06-09Bitstream added on 2014-06-13T20:16:35Z : No. of bitstreams: 1 silva_cm_me_sjrp.pdf: 624368 bytes, checksum: 527ab11904f1d5551c5d3ed9ee3c5385 (MD5) / Embora com hábito primariamente aquático, a flora de algas terrestres, em especial de cianobactérias, é relativamente luxuriante e tais organismos desempenham papel ecológico importante. Dentre estes organismos, Scytonema é um dos gêneros mais frequentes, abundantes e diversificados em ambientes terrestres e a taxonomia infragenérica tem se revelado problemática. Considerando-se a importância e representatividade do gênero, tornam-se necessárias investigações para melhor definição e distinção de espécies de Scytonema, bem como um melhor estabelecimento dos limites com gêneros próximos (Petalonema e Brasilonema, por exemplo). Tal estudo tem como objetivos aprofundar os estudos taxônomicos dos gêneros Brasilonema, Petalone e Scytonema; comparar espécies de Scytonema de ambientes aerofíticos brasileiros com registros das espécies encontradas em diferentes ambientes mundiais inicialmente quanto a características morfológicas e, em alguns casos, segundo características moleculares; reavaliar critérios taxonômicos utilizados na classificação; avaliar relações biogeográficas de espécies selecionadas. Os trabalhos de campo resultaram na coleta de 44 amostras com a presença de 22 táxons pertencentes às Nostocales com ramificações falsas. Foram identificadas 14 populações como Scytonema, três como Brasilonema e cinco como Petalonema, sendo descritas morfologicamente e apresentadas as condições ambientais de ocorrência. Na tentativa de se obter culturas desses organismos, foram utilizados diferentes meios de cultivo, diferentes temperaturas e irradiância, entretanto não foi uma etapa bem sucedida. As análises moleculares foram positivas para sete populações, com sequencias de aproximadamente 600 pb. As análises revelaram que há grande similaridade molecular entre espécies do gênero Brasilonema e aqueles inicialmente identificados como Scytonema... / Not available

Made available in DSpace on 2016-08-12T18:48:46Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-08-06. Added 1 bitstream(s) on 2016-08-12T18:51:01Z : No. of bitstreams: 1 000854199.pdf: 5245942 bytes, checksum: 78603c065ca6ba2cb04fe0531fde9643 (MD5) / A técnica de ionização MALDI (Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization) foi uma das responsáveis por revolucionar a Espectrometria de Massas, tornando possível sua aplicação a moléculas termolábeis e de alta massa molecular, como as proteínas. Apesar de seu grande desenvolvimento, esta técnica ainda apresenta algumas limitações como a seleção da matriz utilizada e o método de preparo de amostras. Estes fatores são determinantes na reprodutibilidade da análise e na faixa de aplicação de m/z. Neste trabalho, inicialmente analisou-se diferentes linhagens de cianobactérias por MALDI-TOF-MS, com a finalidade de se buscar por novos analitos para os quais fosse possível o monitoramento utilizando-se as matrizes iônicas. Posteriormente avaliou-se as características destas matrizes, a metodologia de preparo de amostras, a composição do analito e a intensidade do laser da fonte de MALDI, com o objetivo de selecionar as melhores metodologias de análise. Após esta etapa, as matrizes iônicas e metodologias selecionadas foram aplicadas na detecção e quantificação de cianotoxinas e na análise de fármacos por MALDI-MS. Neste estudo obteve-se como resultados: a diferenciação de linhagens de cianobactérias através dos fingerprints obtidos por MALDI-TOF-MS que também permitiram a detecção de importantes metabólitos; a detecção da homoanatoxina-a, uma cianotoxina de baixa massa molecular, diretamente de células de cianobactérias; o desenvolvimento de um método quantitativo de análise de microcistinas com ótima precisão; e o desenvolvimento de uma metodologia inédita para a detecção dos componentes ativos de medicamentos, ampliando, portanto, o leque de aplicações da técnica de MALDI. / The Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization technique was one of the ionization sources responsible for revolutionizing Mass Spectrometry, making possible its application to labile and high molecular weight molecules, such as proteins. Despite its great development, this technique still has some limitations like the selection of the matrix and the sample preparation method. These factors determine the reproducibility of analysis and the m/z application range. Initially, in this work, we analyzed different cyanobacteria strains by MALDI-TOF-MS, in order to check for new analytes to be monitored using ionic matrices. Subsequently, the characteristics of these matrices, the sample preparation method, the composition of the analyte and laser intensity of the MALDI source were evaluated aiming to select the best methodologies of analysis. After this step, the selected ionic matrices and methodologies have been applied in the detection and quantification of cianotoxins and analysis of pharmaceutical drugs by MALDI-MS. In this study we obtained as results: the differentiation of strains of cyanobacteria through the fingerprints obtained by MALDI-TOF-MS which allowed the detection of important metabolites; the detection of homoanatoxin-a, a low molecular weight cyanotoxin, directly from cyanobacteria cells; the development of a quantitative method for the analysis of microcystins with great precision; and the development of a new methodology for the detection of active compounds of medicines, increasing, therefore, the application range of MALDI technique.

Orientador: Luis Henrique Zanini Branco / Coorientador: Janaina Rigonato / Banca: Célia Leite Sant'anna / Banca: Marli de Fátima Fiore / Banca: Orlando Necchi Jr. / Banca: Vera Regina Werner / Resumo: Os membros da subfamília Phormidioideae são encontrados em ambientes terrestres e aquáticos ocorrendo em uma grande variedade substratos (solos, rochas, troncos e objetos artificiais). Segundo o sistema de classificação vigente, a subfamília é composta por dez gêneros, sendo Phormidium, Trichodesmium, Arthrospira, Porphyrosiphon e Planktothrix os mais abundantes em número de espécies e frequentes em ocorrência, com amplo destaque para o primeiro. Devido à morfologia relativamente simples, os integrantes de Phormidioideae formam um grupo taxonomicamente complexo e sua plasticidade morfológica está relacionada a fatores ambientais, tornando confusa a distinção de gêneros e espécies. O presente estudo visou contribuir com o conhecimento taxonômico do grupo, por meio de levantamento florístico em diferentes localidades do Brasil. O material coletado foi utilizado para detalhamento taxonômico do grupo, com o uso de ferramentas moleculares (RNAr 16S e ITS 16S-23S), além das ferramentas morfológicas clássicas. Os estudos de identificação revelaram 27 espécies, das quais 22 pertencem ao gênero Phormidium, três ao Porphyrosiphon, uma ao Planktothrix e uma ao Planktothricoides. Entre as 27 espécies, Phormidiumanimale é primeiro registro de ocorrência para o Brasil e 11 são possíveis novos táxons. Estudos morfológicos e moleculares reforçam que a circunscrição de gêneros e espécies de Phormidioideae ainda é bastante confusa. Enquanto os marcadores morfológicos utilizados não refletiram a história evolutiva do grupo, os moleculares revelaram-se taxonomicamente válidos, devendo ser considerados a base para a construção da classificação de Phormidioideae. As análises revelaram que a subfamília é polifilética. Porphyrosiphon revelou-se um gênero geneticamente suportado, porém, P. notarisii trata-se de um complexo de espécies. A flora brasileira mostrou-se diversa, com sete novos gêneros morfológica ... / Abstract: The Phormidioideae members are found in terrestrial and aquatic environments, growing on a wide variety of substracts (soil, rocks, barks of trees and artificial objects). According to the usual classification, the subfamily comprises ten genera, of which Phormidium, Trichodesmium, Arthrospira, Porphyrosiphon e Planktothrix are the most abundant in number of species. Due to its relatively simple morphology, the members of Phormidioideae form a taxonomically complex group and its morphological plasticity is related to environmental factors, making confusing the distinction of genera and species. This study aimed to contribute to the taxonomic knowledge of the group through floristic survey in different regions of Brazil. The collected material was used for detailed taxonomic group, using molecular tools (16S rRNA gene and the 16S-23S ITS), besides the classic morphological tools. The identification studies revealed 27 species, 22 belong to Phormidium, three to Porphyrosiphon, one to Planktothrix and one to Planktothricoides. Among them, Phormidium animale is the first occurrence in Brazil and 11 are new species to science. Morphological and molecular studies reinforce that the division of genera and species of Phormidioideae is still quite confusing. While the morphological markers used did not reflect the evolutionary history of the group, the molecular proved taxonomically valid and should be considered the basis for the construction of classification of Phormidioideae. Analyses revealed that the subfamily is polyphyletic. Porphyrosiphon is genetically supported genus, but P. notarisii is a collective species. The flora proved to be diverse, with seven new genera morphologically and genetically defined / Doutor

Orientador: Iraê Amaral Guerrini / Banca: Maria de Lourdes B.Trindade Galo / Banca: Luis Rodrigo Miyamoto Barberis / Banca: Robinson Antonio Pitelli / Banca: Marcelo Rocha Correa / Resumo: A água corresponde ao recurso da maior importância para a sobrevivência de toda a vida do planeta. O aumento das atividades agrícolas, urbanas e industriais, acarretam o acúmulo de efluentes ricos em fósforo e nitrogênio nos corpos d'água, causando a eutrofização. Em termos de qualidade de água, a eutrofização pode causar alteração na disponibilidade de oxigênio dissolvido, morte extensiva de peixes e aumento da incidência de florações de cianobactérias. A principal preocupação com as cianobactérias é a capacidade produzirem e liberarem as microcistinas, um grupo de hepatotoxinas, que é muito associada a incidentes de intoxicação em todo o mundo. O Guanandi (Calophyllum brasiliense Cambess) é uma árvore de grande porte, que cresce em regiões de floresta da Mata atlântica, amazônica e em determinados locais do cerrado, desde a América Central até litoral norte de Santa Catarina, apresenta em extratos brutos de diferentes partes da planta (raízes, caules e folhas) atividade antibacteriana contra bactérias Gram-positivas e sobre algumas cepas Gram-negativas. O objetivo deste trabalho, foi avaliar o efeito de extratos ... / Abstract: The expansion of the agricultural, urban and industrial activities leads to the accumulation of effluents like phosphorus and nitrogen in water bodies, causing eutrophication. In terms of water quality, eutrophication, can affect the oxygen dissolved availability, fish mortality and increased incidence of cyanobacteria blooms. The main concern with cyanobacterias is its ability to produce and release microcystins, a group of hepatotoxins, which is closely associated with poisoning incidents worldwide. Guanandi (Calophyllum brasiliense Cambess) is a tree that grows in areas of Atlantic Forest, Amazon and certain sites of Cerrado, from Central America until the northern coast of Santa Catarina. Crude extracts from different parts of the tree (roots, stems and leaves) has demonstrated 4 antibacterial activity against Gram-positive bacteria and some of gram-negative strains. The objective of this work was to use an extract made with leaves of fifteen Guanandi plants (Calophyllum brasiliense Cambess) to control the growth of a strain of Microcystis aeruginosa, that can produces microcystin. The preparation of the extracts, was performed with the decomposition of leaves, in water from the reservatory of Barra Bonita, Brazil. The experiments were conducted in BG 11 culture medium, where 10% of the volume of the medium was supplemented with the extracts from the leaves, with different periods of decomposition (7, 15, 30 and 60 days), inoculated with approximately 109 cells of Microcystis aeruginosa and incubated in a climatic chamber under controlled conditions (30 ° C and 12 hour photoperiod), after 10 days analyzes were performed for: chlorophyll content to determine the growth and the content of microcystin produced and released in the supernatant. The results showed that the extracts can reach 90% of cyanobacteria growth inhibition in culture medium, with growth inhibition also reduces the amount ... / Doutor

Las trágicas consecuencias del impacto de los maremotos motivan las investigaciones en este campo. En el presente trabajo se estudia la influencia de la aceleración de Coriolis en la propagación de un maremoto. La fuerza “aparente“de Coriolis surge en los cuerpos en movimiento respecto a la Tierra considerada como un sistema de referencia no inercial. En el estudio de la influencia del término de Coriolis sobre la propagación de las ondas de maremoto, se emplea el modelo numérico TUNAMI, el cual considera las ecuaciones de propagación de ondas en coordenadas esféricas sin incluir el término de Coriolis. Este término se ha implementado mediante una subrutina en los códigos de programación del modelo numérico. La versión resultante del modelo se verifica para el escenario del maremoto de Chile del 27 de febrero del 2010, ocurrido a las 06:34 UTC. El cual impactó mente la costa central de Chile. Severamente la costa central de Chile. Los resultados muestran que la influencia de la aceleración de Coriolis es mayor en zonas de bajas profundidades que en batimetrías profundas. / Tesis

Trata sobre un método para determinar el tamaño de cianobacterias haciendo uso de la difracción de campo lejano también conocido como difracción de Fraunhofer. Se han definido algunos conceptos fundamentales sobre bacterias, acentuando nuestra atención en una familia de ellas llamadas cianobacterias cuya característica anatómica principal es ser alargada y se aprovechó esto para usarlo como un obstáculo al incidir luz verde y así producir su patrón de difracción. Para obtener el espectro de difracción limpio se trató de minimizar los efectos de reflexión, refracción, interferencia y reflexión interna total. Al incidir luz verde en las cianobacterias (obstáculos) se produjo un patrón de difracción en la cual hemos medido su tamaño luego se calculó su tamaño real haciendo uso de una regresión lineal, dando un resultado muy conforme al tamaño de las cianobacterias de los humedales de Ventanilla. Sistemas de comunicaciones inalámbricos. / Trabajo de suficiencia profesional

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:20Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-03-18Bitstream added on 2014-06-13T19:35:18Z : No. of bitstreams: 1 ferreira_v_me_sjrp.pdf: 538455 bytes, checksum: 8d5166c99baf599f17059bcb2837c59a (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / As Cyanobacteria são dominantes em diversos tipos de ambientes, são especialmente bem distribuídas e abundantes em ambientes terrestres e possuem importante função ecológica no ecossistema. Em ambientes aerofíticos, atuam como colonizadores primários e na economia na produção de compostos de interesse industrial como auxinas, antivirais, antifúngicos, antibacterianos, biofertilizantes, entre outros. Atualmente, para o estudo de cianobactérias tornou-se importante o cultivo laboratorial para que se consiga biomassa e controle de contaminantes. Porém, são escassos os trabalhos sobre o cultivo, em particular das Nostocales com ramificações verdadeiras, e vários dos poucos existentes relatam tentativas frustradas na obtenção de cultivos específicos demonstrando a forte resistência destes organismos ao crescimento em condições laboratoriais. Os resultados presentemente obtidos indicaram que in vitro as Nostocales com ramificações verdadeiras seguem as mesmas características de crescimento quando em hábitat natural: crescimento lento, baixa taxa de colonização e competição. Dentre as variações testadas, a diluição de 2:1 (tanto líquido quanto sólido) foi considerada a melhor concentração do meio de cultivo e a agitação em shaker resultou em melhorias para o crescimento. A realização ou não de repicagens não foi suficiente para o estabelecimento de coleções, pois estes organismos não resistem a muitos meses sob condições de cultura. O teste de antibióticos para o controle de contaminantes mostrou-se ineficiente e, portanto, não foi possível estabelecer quantidade segura para o seu emprego. As pesquisas em relação ao cultivo destes organismos são ainda muito escassas. Neste estudo pôdese indicar um conjunto de condições de crescimento mais favoráveis para estes organismos, mas para um melhor estabelecimento das condições ainda são necessários estudos mais abrangentes e aprofundados.

Tesis presentada a la Universidad de Chile para optar al grado académico de Magíster en Bioquímica área de especialización en Bioquímica Ambiental y Memoria para optar al título profesional de Bioquímico / Chile en particular es uno de los países del mundo que alberga una mayor variedad de ecosistemas considerados extremos, por tener condiciones hostiles para la vida. Estas condiciones suponen un obstáculo al cual los organismos que los habitan deben sobreponerse adoptando distintas estrategias de supervivencia. Uno de estos ambientes extremos son los sistemas hidrotermales que se encuentran repartidos a lo largo de toda nuestra geografía. En muchos de los sistemas termales de todo el mundo con la característica de poseer un pH neutro o alcalino, se ha descrito a las cianobacterias de la subsección V (Stigonematales) como uno de los principales organismos que impactan los ciclos biogeoquímicos sobre todo del carbono y nitrógeno. La adaptación a las altas temperaturas de este grupo tan relevante de microorganismos en estos sistemas no ha sido todavía muy estudiada. Una de las posibles causas que hasta la fecha no ha sido explorada, y que podría explicar esta adaptación, es el efecto positivo de su asociación con cianofagos, virus de DNA de doble hebra que las infectan. En otros ecosistemas acuáticos como el marino, se ha sugerido que la interacción cianofago-cianobacteria implica una marcada co-evolución por parte de ambos, lo que tiene un impacto ecológico preponderante. En ambientes marinos los cianofagos han sido estudiados tanto morfológica como filogenéticamente utilizando diversos marcadores moleculares y métodos de observación, mientras que estas metodologías no se han aplicado en relación a la caracterización de cianofagos en sistemas hidrotermales. Debido a este vacío en la literatura en relación a los cianofagos de sistemas termales, es que en el presente proyecto se plantea caracterizar la diversidad tanto morfológica como filogenética de cianofagos presentes tanto en muestras naturales como en aislados en cultivo de cianobacterias del sistema hidrotermal de Porcelana, localizado (42º 27’ 29.1’’S - 72º 27’ 39.3’’O) en la Patagonia norte de Chile (X Región de los Lagos). En este sistema termal prístino, se ha identificado la presencia (Mackenzie et al. 2013) y aislado en cultivo (Alcamán et al. 2017) de cianobacterias de la subsección V. Los miembros de este grupo son dominantes en los tapetes microbianos a temperaturas entre 40°C y 60ºC en este sistema. Se llevarán a cabo análisis morfológicos y estructurales mediante microscopía electrónica (TEM), así como análisis basados en marcadores genéticos como el gen g20 (correspondiente a una proteína de ensamblaje de la cápside viral), psbA (gen de proteína de fotosistema), g23 (codifica para MCP, proteína mayor de la cápside), dnapol (DNA polimerasa), entre otros; análisis de secuencias encontradas en los metagenomas, metatranscriptoma y metaviroma, y en el genoma de los aislados para la detección de profagos. Los resultados que se obtengan en este estudio particular en la terma Porcelana se espera proporcionen la primera información que ayude a identificar los principales cianofagos asociados a cianobacterias termófilas de la subsección V, ayudando así a dilucidar su rol ecológico en este sistema y quizás en muchos otros sistemas termales similares a este repartidos por todo el mundo / Chile in particular is one of the countries in the world that shelters a greater variety of ecosystems considered extreme, because of their hostile conditions to life. These conditions constitute an obstacle to which the organisms that inhabit them must overcome by adopting different strategies of survival. One of these extreme environments are hydrothermal systems that are distributed throughout our geography. In many of the thermal systems of the world with the characteristic of having a neutral or alkaline pH, subsection V cyanobacteria (Stigonematales) have been described as one of the main organisms impacting the biogeochemical cycles, especially carbon and nitrogen. The adaptation to the high temperatures of this group of relevant microorganisms in these systems has not yet been studied. One of the possible causes that until now has not been explored, and which could explain this adaptation is the positive effect of its association with cyanophages, double-stranded DNA viruses that infect them. In other aquatic ecosystems such as the marine, it has been suggested that the cyanophage-cyanobacteria interaction implies a marked co-evolution, which has a preponderant ecological impact. In marine environments, cyanophages have been studied both morphologically and phylogenetically using different molecular markers and observation methods, whereas these methodologies have not been applied in relation to the characterization of cyanophages in hydrothermal systems. The lack of information in the literature regarding on cyanophages of thermal systems, the present project aims to characterize the morphological and genetic diversity of cyanophages present in both natural and cyanobacterial culture isolates of the Porcelana hydrothermal system, located (42º 27 '29.1''S - 72º 27 '39.3''O) in the northern Patagonia of Chile (X Region de los Lagos). In this pristine thermal system, the presence (Mackenzie et al. 2013) and isolated in culture (Alcamán et al. 2017) of subsection V was identified. The members of this group are dominant in the microbial mats at temperatures between 40°C And 60°C in this system. Morphological and structural analyzes will be performed using electron microscopy (TEM), as well as analyzes based on genetic markers such as the g20 gene (corresponding to a viral capsid assembly protein), psbA (photosystem protein gene), g23 (Major capsid protein), dnapol (DNA polymerase), among others; analysis of sequences found in metagenomes, metatranscriptome and metavirome, and in the genome of the isolates for the detection of prophages. The results obtained in this particular study in the Porcelana termal system are expected to provide the first information that will help to identify the main cyanophages associated to thermophilic cyanobacteria of subsection V, helping to elucidate their ecological role in this system and perhaps in many other thermal systems similar to this one, spread all over the world

Título original: Avaliação dos efeitos tóxicos e genéticos de microcistinas naturais e sintéticas, sob sistemas testes animais e vegetais / Orientador: Maria Aparecida Marin Morales / Coorientador: Maria do Carmo Bittencourt-Oliveira / Banca: Cesar Koppe Grisolia / Banca: Silvia Tamie Matsumoto / Banca: Dejanira de Franceschi de Angelis / Banca: Carmen Silvia Fontanetti Christofoletti / Resumo: As cianobactérias são organismos procarionte fotossintetizantes que apresentam capacidade de produzir metabólitos secundários de alto efeito tóxico para seres vivos, denominados de cianotoxinas. A presença desses organismos nos ambientes aquáticos se dá, inicialmente, pelo excesso de nutrientes, derivados, principalmente, de excessivo descarte de efluentes urbanos e industriais e de poluentes oriundos das atividades agrícolas. As cianobactérias produzem cianotoxinas do tipo endotoxinas, cuja toxicidade se dá, geralmente, quando a toxina é liberada para o meio extracelular, em decorrência de lise celular, devido ao envelhecimento ou morte das cianobactérias. São substâncias presentes nas paredes celulares de muitas cianobactérias; e exotoxinas, que apresentam uma potente ação tóxica e estão relacionadas com o metabolismo de manutenção da cianobactéria. Neste trabalho, foram desenvolvidos ensaios biológico com o organismo Allium cepa, um organismo teste muito utilizado em avaliações de ação de drogas e em ensaios ambientais, e com células hepáticas de peixe (ZFL) e humanas (HepG2) mantidas em cultura. Neste estudo foram avaliados os efeitos citotóxico, genotóxico e mutagênico da microcistina purificada, adquirida comercialmente; de amostras ambientais coletadas em um ambiente com recorrentes florações por cianobactérias; com biomassa de Microcistis aeruginosa, obtidas em laboratório, para inferir efeitos das endotoxinas produzidas por essa espécie; e com o meio de cultivo da M.... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Cyanobacteria are prokaryote photosynthetic organisms that can produce secondary metabolites with a high toxic effect on living organisms, known as cyanotoxins. The presence of these organisms in aquatic environments is initially due to nutrients excess, mainly derived from excessive disposal of urban and industrial effluents and pollutants from agricultural activities. Cyanobacteria produce cyanotoxins of two types: endotoxin, the toxicity of which generally occurs when the toxin is released into the extracellular medium because of cell lysis due to the aging or death of the cyanobacteria. They are substances present in the cell walls of many cyanobacteria; and exotoxins, which present a potent toxic action and are related to the maintenance metabolism of cyanobacteria. In this work, biological assays were developed with the organism Allium cepa, a test organism widely used in evaluations of drug action and in environmental analyses, and with hepatic fish (ZFL) and human (HepG2) cells maintained in culture. In this study the cytotoxic, genotoxic and mutagenic effects of the commercially acquired purified microcystin were evaluated; of environmental samples collected in an environment with recurrent cyanobacterial blooms; with biomass of Microcystis aeruginosa, obtained in the laboratory, to infer effects of the endotoxins produced by this species; and with M. aeruginosa culture medium, to infer the effects of the exotoxins of these prokaryotes. For this evaluation, in vivo t... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Maria do Carmo Bittencourt de Oliveira / Banca: Orlando Necchi Junior / Banca: Daniel Scherer de Moura / Resumo: Florações de cianobactérias tóxicas são atualmente um problema mundial devido a produção de toxinas. A microcistina é uma hepatotoxina comumente encontrada em corpos d'água e é produzida principalmente pelo gênero Microcystis. Recentemente a identificação, clonagem e seqüenciamento do agrupamento de genes responsáveis pela codificação da sintetase de microcistina (MS) tornaram possível a abordagem molecular na detecção de populações tóxicas baseada na técnica de PCR (Polymerase Chain Reaction). A técnica de PCR tornou-se viável e útil pelo fato do agrupamento de genes da sintetase de microcistina estar presente apenas em organismos tóxicos e pela ausência de diferenças morfológicas entre aqueles tóxicos e não tóxicos. Este estudo objetivou desenvolver e avaliar a técnica de PCR competitiva para quantificação de células de Microcystis tóxicas e não tóxicas utilizando os genes cpcBA e mcyB envolvidos respectivamente, na formação da ficocianina e biossíntese da MS. Testou-se a hipótese de que a PCR competitiva pode ser utilizada como metodologia de quantificação de células tóxicas e não tóxicas de Microcystis em substituição a contagem direta de células por microscopia óptica para atender a Portaria do Ministério da Saúde 518/2004. Para obtenção de DNA competidores foram realizadas amplificações seqüenciais de "células DNA equivalente" das linhagens tóxica (BCCUSP18) e não tóxica (BCCUSP03) de Microcystis spp. utilizando primers descritos na literatura, bem como aqueles desenhados para este estudo. Avaliaram-se os DNA competidores amplificando-os com células DNA equivalente das linhagens. Após determinada a quantidade mais próxima de DNA competidores para quantificar 2,0 x 104 células, realizou-se a PCR competitiva com células DNA equivalente de uma amostra ambiental (reservatório de Duas Unas, PE)... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Blooms of microcystin-producing cyanobacteria are a problem worldwide. Mycrocystin is a liver hepatotoxin commonly found in bodies of water and is produced mainly by the genus Microcystis. The recent identification, cloning and sequencing of the genes responsible for coding microcystin synthetase (MS) has allowed a molecular approach to the detection of micocystin-producing populations based on the Polymerase Chain Reaction (PCR) method. Considering the lack of morphological differences between microcystin-producing and non-microcystin-producing organisms, PCR is viable and useful, as the cluster of microcystin synthetase genes is found in only microcystinproducing organisms. The aim of the present study was to develop and assess an competitive PCR method for the quantification of toxic and non-toxic Microcystis cells using the cpcBA and mcyB genes, which are respectively involved in the formation of phycocyanin and biosynthesis of MS. The hypothesis was that competitive PCR could be used as a quantification method for toxic and non-toxic Microcystis cells, replacing the direct cell count under an optical microscope, while fulfilling Brazilian Ministry of Health Ordinance 518/2004. For the acquisition of competitor DNA, sequences amplifications were carried out of the "cell DNA equivalent" of microcystin-producing (BCCUSP18) and non-microcystin-producing (BCCUSP03) strains of Microcystis spp. using primers described in the literature as well as others designed for the present study. Competitor DNA was assessed by amplifying "cells DNA equivalent" of the strains. After determining the quantity closest to the competitor DNA for quantifying 2.0 x 104 cells, competitive PCR was carried out with "cells DNA equivalent" from an environmental sample (Duas Unas Reservoir, PE, Brazil). The constructed competitor cpcBA quantified 1.45 x 104 cells (R2= 0.989)... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre