Submitted by Amanda Silva (amanda.osilva2@ufpe.br) on 2015-03-13T15:17:34Z No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO Nayara Evaristo Pontes.pdf: 1260344 bytes, checksum: 91a47c546488e8c96e02bf7cbc6d3631 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-13T15:17:34Z (GMT). No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO Nayara Evaristo Pontes.pdf: 1260344 bytes, checksum: 91a47c546488e8c96e02bf7cbc6d3631 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2014 / CNPq; CAPES / O Circovírus suíno tipo 2 (PCV2) é um vírus sem envelope e contém um DNA fita simples circular com 1,7 kb de tamanho. O vírus pertence ao gênero Circovírus da família Circoviridae. O PCV2 é o agente etiológico da Síndrome Multissistêmica do Definhamento dos Suínos (PMWS), doença que causa grande impacto econômico na suinocultura mundial. O objetivo deste trabalho foi desenvolver a técnica de STNPCR para detecção do Circovírus suíno tipo 2 (PCV2) bem como avaliar a presença de diferentes variantes virais em Pernambuco. Foram utilizados controles positivos, negativos, e 55 amostras de tecidos de animais clinicamente normais obtidas em abatedouro. Para o desenvolvimento da STNPCR foram avaliadas diferentes temperaturas de anelamento para os primers externos e internos. A atuação de ambos os pares de primers foi realizada de forma independente, sendo que o segundo par de primers foi imobilizado na parte interna da tampa do microtubo e após a primeira etapa de amplificação os primers foram eluídos por inversão do microtubo. Além disso, foi realizada a análise de achado técnico buscando encontrar os genótipos do PCV2 já descritos no Brasil e mundialmente, os subtipos PCV2a e PCV2b. Na aplicação clínica, a STNPCR foi comparada com a NPCR e resultaram em reações positivas para o PCV2 em 100% (55/55) das amostras analisadas, revelando igual sensibilidade e especificidade, porém, com menor risco de contaminação cruzada. Na análise de achado técnico (sequências da ORF2 do PCV2), foi possível identificar os genótipos PCV2a e PCV2b. A técnica molecular STNPCR demonstrou ser eficaz para detecção do DNA viral e pode ser aplicada em estudos epidemiológicos para o PCV2 e auxiliar no diagnóstico laboratorial da PMWS.

Made available in DSpace on 2016-12-08T16:24:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGCA09MA052.pdf: 726948 bytes, checksum: 2a141d4d92b1c5ac552655f7c9ad3c1a (MD5) Previous issue date: 2009-11-06 / Many infectious agents have been associated with reproductive failure in swine, representing significantly economic losses for production. Recently, Porcine Circovirus Type 2 (PCV2), etiologic agent of PCVAD or PCV2 associated diseases, was associated with reproductive failure in swine around the world. To confirm the pathogenic potential of PCV2 inducing reproductive failure in sows, it s necessary the viral isolation and antigen and nucleic acid demonstration in fetuses. Other viral agent, Torque Teno Vírus (TTV), also have been recently associated with infections caused by PCV2. TTV alone has not showed pathogenic signals in swine, but, its role in co-infections with other pathogens has been investigated. The present study aimed the diagnostic of PCV2 in natural infections where there was reproductive failure, as well as to establish and apply the Polimerase Chain Reaction (PCR) technique for TTV from organs. Samples from field cases, as aborted fetuses, mummified, stillborn, fragile piglets and material from abattoir sows were collected and processed to diagnostic infection in order to detect PCV2 by PCR and immunohistochemistry (IHC). Samples were collected from 21 farms; and a total of 169 fetuses were necropsied. Moreover, reproductive samples from 83 abattoir sows were collected in 4 slaughterhouses of Santa Catarina State. In the present study was possible detect viral DNA by PCR in 29 (17,1%) of 169 analyzed fetuses, where heart and lymphoid tissues showed virus DNA more frequently, 41,4% and 37,8%, respectively. Viral presence was confirmed by IHC in tissues, which detected viral antigens in 17 PCV2 positives fetuses by PCR. Samples of reproductive tissues from sows also were tested by PCR and PCV2 was identified in 4 sows (4,8%). PCR technique aimed to detect TTV was established for viral DNA from organs. Samples of reproductive tissues from sows were tested, and were found both genogroups of TTV (TTV1 and TTV2), in 25 (30,1%) and 41 (49,3%) sows, respectively. Fetuses samples that resulted positive to PCV2 by PCR were also tested to TTV, and it was observed the occurrence of co-infection between these agents. The results obtained here suggest the involvement of PCV2 in reproductive failure in sows, besides show that TTV was present in analyzed samples, corroboring the association with PCV2 / Muitos agentes infecciosos têm sido associados às falhas reprodutivas na produção de suínos, representando significativas perdas econômicas para os suinocultores. Recentemente o Circovirus Suíno tipo 2 (PCV2), agente etiológico da circovirose suína, foi associado a falhas reprodutivas em suínos em diversas partes do mundo. Para confirmar o potencial patogênico do PCV2 causando falhas reprodutivas em porcas, é necessário o isolamento do vírus e demonstração de antígeno e ácido nucléico viral em fetos. Outro agente viral, o Torque Teno Vírus (TTV), também foi recentemente associado às infecções causadas pelo PCV2. O TTV sozinho ainda não tem se mostrado patogênico em suínos, porém, seu papel em co-infecções com outros patógenos vem sendo investigado. O presente trabalho teve por objetivos diagnosticar o PCV2 em infecções naturais onde existiam falhas reprodutivas, assim como padronizar e aplicar a técnica de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) para TTV a partir de órgãos. Amostras provenientes de casos clínicos de campo, como fetos abortados, mumificados, natimortos, leitões inviáveis e material de fêmeas descartadas foram coletadas e processadas para diagnóstico da infecção pelo PCV2 através de PCR e imunoistoquímica (IHQ). Foram colhidas amostras de 21 granjas produtoras de suínos, totalizando 169 fetos, que foram necropsiados para coleta de órgãos. Além disso, amostras de órgãos reprodutivos de 83 fêmeas descartadas foram colhidas em 4 abatedouros da região oeste catarinense. No presente estudo foi possível detectar DNA viral por PCR em 29 (17,1%) dos 169 fetos analisados, sendo coração e tecidos linfóides os órgãos onde o vírus foi identificado com maior freqüência, 41,4% e 37,8%, respectivamente. A presença do vírus foi confirmada por teste de IHQ dos tecidos, sendo encontrado antígeno viral em 17 fetos positivos para PCV2 por PCR. As amostras de tecido reprodutivo das fêmeas também foram testadas por PCR e o PCV2 foi identificado em 4 porcas (4,8%). Visando a detecção de TTV foram testadas por PCR amostras de órgãos reprodutivos de fêmeas suínas, sendo diagnosticados os dois genogrupos de TTV, TTV1 e TTV2 em 25 (30,1%) e 41 (49,3%) fêmeas, respectivamente. As amostras de fetos que resultaram positivas para PCV2 pela técnica de PCR também foram testadas para TTV, observando-se a ocorrência de coinfecção entre estes agentes. Os resultados obtidos evidenciam o provável envolvimento do PCV2 em falhas reprodutivas em fêmeas suínas, bem como mostram que o TTV está presente nas amostras analisadas, confirmando a associação com o PCV2