O gene TrCit do fungo filamentoso Trichoderma reesei codifica a proteína citrato sintase, uma enzima chave do ciclo de Krebs. Análise da região 5´ upstream de TrCit mostra que o gene está adjacente ao gene TrIcl (que codifica a proteína isocitrato liase, uma enzima do ciclo de glioxalato), em uma orientação cabeça-cabeça. A região promotora intergênica de 647 pb rica em G + C, apresenta uma ilha CpG, seqüência INR, caixas GC, caixas CAAT, sítios de ligação para diversos fatores de transcrição e é isenta de caixa TATA. O gene TrCit de 1573 pb contém 3 éxons e 2 íntrons. Sua seqüência codificadora de 1422 pb produz uma proteína de 474 aminoácidos, com um peso molecular estimado de 52,3 kD. O gene TrIcl de 1880 pb contém 3 éxons e 2 íntrons. Sua seqüência codificadora de 1788 pb produz uma proteína de 596 aminoácidos, com um peso molecular estimado de 65,4 kD. A atividade transcricional da região promotora foi analisada utilizando como repórter o gene de higromicina B fosfotransferase (hph). Uma região funcional necessária à transcrição de ambos os genes foi identificada na região central do promotor e contém uma caixa GC que liga o putativo fator de transcrição Sp1 de T. reesei (TrZnFSp1). O gene do putativo fator de transcrição “zinc-finger" TrZnFSp1 de 1500 pb contém 3 éxons e 2 íntrons. Sua seqüência codificadora de 1344 pb produz uma proteína de 448 aminoácidos, com um peso molecular estimado de 48,4 kD. Os resultados mostram que ambos os genes são transcritos de forma divergente a partir de um promotor bidirecional que compartilha na região central uma caixa GC, necessária para a transcrição de ambos os genes. / The TrCit gene from the filamentous fungus Trichoderma reesei codes for the citrate synthase protein, a key enzyme in the Krebs cycle. Analysis of TrCit 5’ upstream region showed that it is adjacent to the TrIcl gene that codes for isocitrate lyase protein, an enzyme involved in the glyoxylate cycle. Both genes, on a head-to-head orientation, are separated by an intergenic GC-rich and TATA-less promoter region of 647 base pairs. This bidirectional promoter has diverse cis regulatory elements: a CpG island, two INR sequences, GC boxes, CAAT boxes and several putative interaction sites for different transcription factors. The TrCit gene, 1,573-base pair-long, has an open reading frame of 1,422 base pairs interrupted by two introns. The gene codes for a protein with an estimated molecular weight of 52.3 kD. The TrIcl gene, 1,880-base pair-long, contains 3 exons and 2 introns and a putative coding sequence of 1,788 base pairs. The estimated molecular weight of TrICL is 65.4 kD. he transcriptional activity of the intergenic promoter region was analyzed using hygromicin B phosphotransferase (hph) as a reporter gene. A functional region required for the transcription of both genes was identified in the centre of this promoter. It has a GC box that interacts with a putative transcription factor Sp1 from T. reesei (TrZnFSp1). The results presented in this work show that both genes are divergently transcribed from a bidirectional promoter that shares an essential central GC box.

O gene TrCit do fungo filamentoso Trichoderma reesei codifica a proteína citrato sintase, uma enzima chave do ciclo de Krebs. Análise da região 5´ upstream de TrCit mostra que o gene está adjacente ao gene TrIcl (que codifica a proteína isocitrato liase, uma enzima do ciclo de glioxalato), em uma orientação cabeça-cabeça. A região promotora intergênica de 647 pb rica em G + C, apresenta uma ilha CpG, seqüência INR, caixas GC, caixas CAAT, sítios de ligação para diversos fatores de transcrição e é isenta de caixa TATA. O gene TrCit de 1573 pb contém 3 éxons e 2 íntrons. Sua seqüência codificadora de 1422 pb produz uma proteína de 474 aminoácidos, com um peso molecular estimado de 52,3 kD. O gene TrIcl de 1880 pb contém 3 éxons e 2 íntrons. Sua seqüência codificadora de 1788 pb produz uma proteína de 596 aminoácidos, com um peso molecular estimado de 65,4 kD. A atividade transcricional da região promotora foi analisada utilizando como repórter o gene de higromicina B fosfotransferase (hph). Uma região funcional necessária à transcrição de ambos os genes foi identificada na região central do promotor e contém uma caixa GC que liga o putativo fator de transcrição Sp1 de T. reesei (TrZnFSp1). O gene do putativo fator de transcrição “zinc-finger” TrZnFSp1 de 1500 pb contém 3 éxons e 2 íntrons. Sua seqüência codificadora de 1344 pb produz uma proteína de 448 aminoácidos, com um peso molecular estimado de 48,4 kD. Os resultados mostram que ambos os genes são transcritos de forma divergente a partir de um promotor bidirecional que compartilha na região central uma caixa GC, necessária para a transcrição de ambos os genes. / The TrCit gene from the filamentous fungus Trichoderma reesei codes for the citrate synthase protein, a key enzyme in the Krebs cycle. Analysis of TrCit 5’ upstream region showed that it is adjacent to the TrIcl gene that codes for isocitrate lyase protein, an enzyme involved in the glyoxylate cycle. Both genes, on a head-to-head orientation, are separated by an intergenic GC-rich and TATA-less promoter region of 647 base pairs. This bidirectional promoter has diverse cis regulatory elements: a CpG island, two INR sequences, GC boxes, CAAT boxes and several putative interaction sites for different transcription factors. The TrCit gene, 1,573-base pair-long, has an open reading frame of 1,422 base pairs interrupted by two introns. The gene codes for a protein with an estimated molecular weight of 52.3 kD. The TrIcl gene, 1,880-base pair-long, contains 3 exons and 2 introns and a putative coding sequence of 1,788 base pairs. The estimated molecular weight of TrICL is 65.4 kD. he transcriptional activity of the intergenic promoter region was analyzed using hygromicin B phosphotransferase (hph) as a reporter gene. A functional region required for the transcription of both genes was identified in the centre of this promoter. It has a GC box that interacts with a putative transcription factor Sp1 from T. reesei (TrZnFSp1). The results presented in this work show that both genes are divergently transcribed from a bidirectional promoter that shares an essential central GC box.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:19:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissWHBV.pdf: 1262408 bytes, checksum: 46ed12e3f59bfa6a851e19038a1181ec (MD5) Previous issue date: 2004-12-14 / Universidade Federal de Sao Carlos / The purpose of this study was to evaluate relative the physiological adaptation the activities of enzymes Lactate Dehidrogenase LDH (glycolytic) e Citrate Synthase CS (oxidative) and to the Anaerobic Threshold (AT), to the exercise in treadmill in rats submitted to the photostimulation for low-intensity laser (780 ηm) in the main participant muscles of the march. Fifty-four male Wistar rats had been part of the study. These animals were divided in four groups: Two had remained in rest (1) GRC, being one of them irradied (2) GRL, and other two were submitted to an aerobic treadmill training program during 5 weeks and to a multistage treadmill test of increasing intensity (3) GEC, being one of them irradied (4) GEL. The irradiation for infra-red laser (780 ηm) was made daily in number of four (quadriceps, maximum glúteo, soleus, tibialis anterior) in each back leg of the animals, totalizing 8 applications for animal/day, using (dose, 3,8 J/cm2; power, 15 mW; time, 10 s, continuous) during 5 weeks consecutives. The multistage treadmill tests of increasing intensity were made once a week totalizing 5 evaluation, in order to obtain blood samples for determination of the AT. In the analyses electrophoretics and spectrophotometic of the LDH and CS muscles samples (soleus, TA and cardiac) were removed 48 hours after the last exercise bout. The laser to promote increase in the oxidative metabolism of 2% a 78%, the exercise of 18% a 75%, and action combined of 43% a 92%; Apparent systemic action of the laser was detected in cardiac muscle with increase in the activity of the CS and reduction of the LDH. The group GEC and GEL showed increase in the maximum speed, in the speed corresponding to the AT and a trend reduction of the blood lactate concentration during the training period. However, no significant difference occurred between two groups though the GEL had shown higher values. These data suggest that the aerobic treadmill-training partner to the low-intensity laser can to promote physiological adaptation in the direction of increase oxidative capacity in the animals, represented by increase of the CS, reduction of the LDH and by the higher degree of effort to reach the Anaerobic Threshold. This similarity has a utility therapeutic practical. / O presente estudo avaliou as adaptações fisiológicas relativas as atividades das enzimas Lactato Desidrogenase - LDH (glicolítica) e Citrato Sintase - CS (oxidativa) e ao Limiar de Anaerobiose (LA), ao exercício em esteira em ratos submetidos à fotoestimulação por laser de baixa intensidade (780nm) nos principais músculos participantes da marcha. Fizeram parte do estudo 54 ratos machos, jovens (30 dias), Wistar, que foram divididos em quatro grupos: dois permaneceram em repouso: (1) GRC, sendo um deles irradiado (2) GRL, e dois foram submetidos a um protocolo de treinamento aeróbio em esteira por 5 semanas e a testes de esforços crescentes (3) GEC, sendo um deles irradiado (4) GEL. A irradiação por laser infravermelho foi feita, diariamente, em número de quatro: quadríceps, glúteo máximo, Tibial Anterior (TA) e sóleo, em cada pata traseira, totalizando 8 aplicações por animal/dia, sob os parâmetros: Dose: 3,8 J/cm2, Potência: 15 mW, Tempo: 10 segundos, modo contínuo, durante 5 semanas consecutivas. Os testes de esforço crescente foram realizados, uma vez por semana, totalizando 5 avaliações durante as quais foram obtidas amostras de sangue visando a determinação do LA. Nas análises eletroforéticas e espectrofotométricas da LDH e CS, foram utilizadas frações de músculo TA, sóleo e cardíaco retiradas 48 horas após a última sessão de exercício. O laser provocou aumentos do metabolismo aeróbio de 2% à 78%, o exercício de 18% à 75% e suas ações combinadas de 43% à 92%. Aparente ação sistêmica do laser foi detectada em músculo cardíaco, com aumento da atividade da CS e diminuição da atividade LDH. Os grupos GEC e GEL exibiram aumento na velocidade máxima, LA deslocado para um nível de maior esforço e uma ligeira tendência de redução do lactato sérico no decorrer das avaliações. Entretanto, não houve diferenças estatisticamente significantes entre os grupos, apesar do GEL ter exibido maiores valores. Esses dados sugerem que o treinamento aeróbio em esteira associado ao laser de baixa intensidade possa acarretar adaptações fisiológicas no sentido de aumento na capacidade oxidativa dos animais representada pelo aumento na atividade da CS, diminuição da LDH e maior grau de esforço para a obtenção do LA, fato este, de grande utilidade na prática terapêutica.