Introdução: A dermatite atópica (DA) é uma doença cutânea inflamatória crônica que cursa em surtos. Possui manifestação clínica variável, mas o prurido e a xerose são características frequentes, e pode estar associada a outras manifestações extra-cutâneas de atopia. Pacientes com DA apresentam maior risco de infecções por bactérias e vírus, destacando-se a erupção variceliforme de Kaposi, causada por herpes simples. A DA mostra-se como exemplo de dermatose com comprometimento da barreira cutânea, aliado a disfunção imunológica. São descritas alterações das proteínas da barreira cutânea na DA (filagrina e claudinas ), relacionadas ao maior risco de infecção . Objetivo: Avaliar a expressão de proteínas relacionadas à barreira cutânea como a filagrina, e as claudinas -1 e -4 na pele de pacientes adultos com dermatite atópica, acompanhados no Departamento de Dermatologia da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo. Métodos: 32 indivíduos com diagnóstico de DA (estabelecido pelos critérios de Hanifin & Rajka) e 23 controles (indivíduos sem DA), maiores de 18 anos, foram submetidos a biópsias cutâneas. Os indivíduos com DA foram biopsiados em dois pontos, tanto na pele lesada, quanto na pele não-lesada. O material obtido foi analisado por imuno-histoquímica, através de marcadores específicos para filagrina, claudina-1 e claudina-4. As lâminas foram digitalizadas pelo Panoramic Scan - 3DHistech - Hungria, e as imagens analisadas pelo software Image Pro Plus 4,5, quanto à intensidade da expressão do marcador. A espessura média da epiderme do local estudado foi também avaliada. O grupo com DA foi também analisado quanto à gravidade da doença (EASI), níveis séricos de IgE e grau de eosinofilia. Resultados: Houve redução da expressão da filagrina na pele de doentes de DA em relação aos controles, tanto na pele com lesão quanto na pele sem lesão. Demonstrou-se correlação inversa na expressão da filagrina, tanto com relação à gravidade da doença quanto à espessura da epiderme. A análise das claudinas -1 e -4 demonstrou redução de ambas na pele dos doentes de DA, mas não houve correlação com a gravidade, espessura da epiderme, níveis de IgE sérica ou eosinofilia. Conclusão: No adulto com dermatite atópica, existe redução da expressão das proteínas relacionadas à barreira cutânea, como a filagrina e as claudinas -1 e -4. A redução da expressão da filagrina relacionou-se inversamente com a gravidade da doença, e com a espessura da epiderme, sugerindo cronicidade das lesões. Houve redução da expressão das claudinas -1 e -4, sem relação com a gravidade da doença, espessura da epiderme, eosinofilia ou com os níveis séricos de IgE / Introduction: Atopic dermatitis (AD) is a chronic, inflammatory dermatosis with ocasional flares. Its clinical features are variable, but pruritus and xerosis are frequent, and the disease may be associated to extracutaneous atopy. Patients with AD have increased risk for bacterial or viral infection, with emphasis on eczema herpeticum due to herpes simplex. AD is an example of a compromised skin barrier, allied to na imune dysfunction. There are reports on efective proteins of the skin barrier (filaggrin and claudins), related to increased risk for infection. Objectives: To evaluate the expression of proteins related to the skin barrier, such filaggrin and claudins-1 and-4 in the skin of adults with AD, followed at the Department of Dermatology, University of Sao Paulo Medical School. Methods: 32 individuals diagnosed as AD, according to Hanifin & Rajka\'s criteria, and 23 non-atopic controls, above the age of 18, were biopsied. Individuals with AD were biopsied in two different sites (lesional and nonlesional skin). The specimens were analyzed by immunohistochemistry through specific markers for filaggrin, claudins 1 and 4. The slides were scanned utilizing Panoramic Scan - 3DHistech - Hungary, and images analyzed by Image Pro Plus 4,5 for the intensity of each marker. The mean epidermal thickness was also evaluated. AD patients were also analyzed for disease severity (EASI), circulating IgE levels and eosinophilia. Results: In lesional and nonlesional skin of AD patients there was a reduced expression of filaggrin, when compared to nonatopic controls. There was an inverse correlation of filaggrin expression with disease severity and epidermal thickness. In the skin of AD individuals, there was reduced expression of claudins 1-and-4, which did not correlate with disease severity, epidermal thickness or eosinophilia. Conclusion: In adults with AD, there is reduced expression of skin barrier proteins, such as filaggrin, claudins 1 and 4. The reduction of filaggrin expression had an inverse correlation with disease severity and epidermal thickness, suggesting disease chronicity. There was reduction of claudins 1 and 4, with no relation with disease severity, epidermal thickness, circulating IgE levels or eosinophilia

Introdução: A dermatite atópica (DA) é uma doença cutânea inflamatória crônica que cursa em surtos. Possui manifestação clínica variável, mas o prurido e a xerose são características frequentes, e pode estar associada a outras manifestações extra-cutâneas de atopia. Pacientes com DA apresentam maior risco de infecções por bactérias e vírus, destacando-se a erupção variceliforme de Kaposi, causada por herpes simples. A DA mostra-se como exemplo de dermatose com comprometimento da barreira cutânea, aliado a disfunção imunológica. São descritas alterações das proteínas da barreira cutânea na DA (filagrina e claudinas ), relacionadas ao maior risco de infecção . Objetivo: Avaliar a expressão de proteínas relacionadas à barreira cutânea como a filagrina, e as claudinas -1 e -4 na pele de pacientes adultos com dermatite atópica, acompanhados no Departamento de Dermatologia da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo. Métodos: 32 indivíduos com diagnóstico de DA (estabelecido pelos critérios de Hanifin & Rajka) e 23 controles (indivíduos sem DA), maiores de 18 anos, foram submetidos a biópsias cutâneas. Os indivíduos com DA foram biopsiados em dois pontos, tanto na pele lesada, quanto na pele não-lesada. O material obtido foi analisado por imuno-histoquímica, através de marcadores específicos para filagrina, claudina-1 e claudina-4. As lâminas foram digitalizadas pelo Panoramic Scan - 3DHistech - Hungria, e as imagens analisadas pelo software Image Pro Plus 4,5, quanto à intensidade da expressão do marcador. A espessura média da epiderme do local estudado foi também avaliada. O grupo com DA foi também analisado quanto à gravidade da doença (EASI), níveis séricos de IgE e grau de eosinofilia. Resultados: Houve redução da expressão da filagrina na pele de doentes de DA em relação aos controles, tanto na pele com lesão quanto na pele sem lesão. Demonstrou-se correlação inversa na expressão da filagrina, tanto com relação à gravidade da doença quanto à espessura da epiderme. A análise das claudinas -1 e -4 demonstrou redução de ambas na pele dos doentes de DA, mas não houve correlação com a gravidade, espessura da epiderme, níveis de IgE sérica ou eosinofilia. Conclusão: No adulto com dermatite atópica, existe redução da expressão das proteínas relacionadas à barreira cutânea, como a filagrina e as claudinas -1 e -4. A redução da expressão da filagrina relacionou-se inversamente com a gravidade da doença, e com a espessura da epiderme, sugerindo cronicidade das lesões. Houve redução da expressão das claudinas -1 e -4, sem relação com a gravidade da doença, espessura da epiderme, eosinofilia ou com os níveis séricos de IgE / Introduction: Atopic dermatitis (AD) is a chronic, inflammatory dermatosis with ocasional flares. Its clinical features are variable, but pruritus and xerosis are frequent, and the disease may be associated to extracutaneous atopy. Patients with AD have increased risk for bacterial or viral infection, with emphasis on eczema herpeticum due to herpes simplex. AD is an example of a compromised skin barrier, allied to na imune dysfunction. There are reports on efective proteins of the skin barrier (filaggrin and claudins), related to increased risk for infection. Objectives: To evaluate the expression of proteins related to the skin barrier, such filaggrin and claudins-1 and-4 in the skin of adults with AD, followed at the Department of Dermatology, University of Sao Paulo Medical School. Methods: 32 individuals diagnosed as AD, according to Hanifin & Rajka\'s criteria, and 23 non-atopic controls, above the age of 18, were biopsied. Individuals with AD were biopsied in two different sites (lesional and nonlesional skin). The specimens were analyzed by immunohistochemistry through specific markers for filaggrin, claudins 1 and 4. The slides were scanned utilizing Panoramic Scan - 3DHistech - Hungary, and images analyzed by Image Pro Plus 4,5 for the intensity of each marker. The mean epidermal thickness was also evaluated. AD patients were also analyzed for disease severity (EASI), circulating IgE levels and eosinophilia. Results: In lesional and nonlesional skin of AD patients there was a reduced expression of filaggrin, when compared to nonatopic controls. There was an inverse correlation of filaggrin expression with disease severity and epidermal thickness. In the skin of AD individuals, there was reduced expression of claudins 1-and-4, which did not correlate with disease severity, epidermal thickness or eosinophilia. Conclusion: In adults with AD, there is reduced expression of skin barrier proteins, such as filaggrin, claudins 1 and 4. The reduction of filaggrin expression had an inverse correlation with disease severity and epidermal thickness, suggesting disease chronicity. There was reduction of claudins 1 and 4, with no relation with disease severity, epidermal thickness, circulating IgE levels or eosinophilia

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O câncer colo-retal (CCR) representa o quarto tipo de câncer mais freqüente no Brasil entre homens e mulheres e a sobrevida para esse tipo de neoplasia é considerada boa, se a doença for diagnosticada em estádio inicial. Neste tipo de câncer a progressão do adenoma (tumor benigno) para o adenocarcinoma (tumor maligno) é dependente do acúmulo de mutações em diversos oncogenes e genes supressores de tumor. Estas mutações podem levar a alterações de importantes vias de sinalização que controlam estes eventos como, por exemplo, as vias Wnt e EGFR. No entanto, os mecanismos moleculares e celulares mediados por estas vias durante a progressão do CCR permanecem por serem definidos. Neste trabalho foi avaliada a participação da via Wnt e do EGFR durante a progressão do CCR usando células Caco-2, uma linhagem celular derivada de adenocarcinoma de cólon humano como modelo. As células foram tratadas com EGF, ativador da via EGFR, e cloreto de lítio (LiCl), um conhecido inibidor da enzima GSK-3β e conseqüentemente, ativador da via Wnt, ou alternativamente com a combinação de ambas drogas. Após os tratamentos, foi avaliada a morfologia celular, localização e expressão de proteínas juncionais, os padrões proliferativos e do ciclo celular e o potencial tumorigênico (migração e formação de colônias). Nossos resultados mostram que a localização subcelular das proteínas juncionais claudina-1 e β-catenina foi alterada após tratamento com EGF e LiCl, porém a expressão não foi afetada. A localização nuclear de β-catenina, um marcador da ativação da via Wnt, foi observada após tratamento com ambos os compostos, no entanto estes agentes modularam a enzima GSK-3β de forma diferencial. Além disso, tratamento com EGF aumentou a capacidade proliferativa e migratória da célula, mas não alterou a formação de colônias. LiCl, apesar de ser um conhecido ativador da via Wnt, inibiu o aumento da proliferação e migração causado pelo EGF, como visto pelo tratamento das células com EGF+LiCl, e reduziu a formação de colônias. Nossos resultados revelaram que LiCl possui uma atividade supressora de tumor o que pode representar um novo papel para este composto como um possível agente terapêutico para o tratamento do CCR. / Colorectal cancer (CCR) represents the fourth type of cancer most common in Brazil among men and women and the survival for this tumor type is considered good if the disease is diagnosed at early stage. The progression of an adenoma (benign tumor) to an adenocarcinoma (malign tumor) is dependent on the accumulation of mutations in a variety of oncogenes and tumors suppressors genes. These mutations can lead to alterations of important cell signaling pathways that control these events, such as Wnt e EGFR. However, the molecular and cellular mechanisms mediated by these pathways during CCR progression remain to be defined. In the present study we assesses the role that Wnt and EGFR pathway play during CCR progression using Caco-2 cells, a human cell line derived of colorectal cancer, as a model. Cells were treated with EGF, an EGFR pathway activator, and lithium chloride, (LiCl) a known inhibitor of the enzyme GSK-3β and, therefore a Wnt pathway activator or alternatively by using combination of both drugs. After treatments, we monitored cell morphology, localization and expression of junctional proteins, proliferative and cell cycle patterns, and the tumorigenic potential (cell migration and colony formation). We show that subcellular localization of the junctional proteins claudin-1 and β-catenin was altered after treatment with EGF and LiCl, however the expression were not affected. Nuclear localization of β-catenin, a marker of Wnt pathway activation, was observed after treatment with both compounds, however these agents modulated in a differential fashion the enzyme GSK-3β. Furthermore, EGF treatment increased the proliferative and migratory capacity of the cells, but did not alter colony formation potential. LiCl, despite being a known activator of the Wnt pathway, inhibited the increase of proliferation and migration caused by EGF, as demonstrated by the cell treatments with EGF+LiCl, and reduced the cell colony formation. Our results reveal that LiCl present a suppressor tumor activity, which may represent a new role for this compound as potential therapeutic agent in the CCR treatment.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O câncer colo-retal (CCR) representa o quarto tipo de câncer mais freqüente no Brasil entre homens e mulheres e a sobrevida para esse tipo de neoplasia é considerada boa, se a doença for diagnosticada em estádio inicial. Neste tipo de câncer a progressão do adenoma (tumor benigno) para o adenocarcinoma (tumor maligno) é dependente do acúmulo de mutações em diversos oncogenes e genes supressores de tumor. Estas mutações podem levar a alterações de importantes vias de sinalização que controlam estes eventos como, por exemplo, as vias Wnt e EGFR. No entanto, os mecanismos moleculares e celulares mediados por estas vias durante a progressão do CCR permanecem por serem definidos. Neste trabalho foi avaliada a participação da via Wnt e do EGFR durante a progressão do CCR usando células Caco-2, uma linhagem celular derivada de adenocarcinoma de cólon humano como modelo. As células foram tratadas com EGF, ativador da via EGFR, e cloreto de lítio (LiCl), um conhecido inibidor da enzima GSK-3β e conseqüentemente, ativador da via Wnt, ou alternativamente com a combinação de ambas drogas. Após os tratamentos, foi avaliada a morfologia celular, localização e expressão de proteínas juncionais, os padrões proliferativos e do ciclo celular e o potencial tumorigênico (migração e formação de colônias). Nossos resultados mostram que a localização subcelular das proteínas juncionais claudina-1 e β-catenina foi alterada após tratamento com EGF e LiCl, porém a expressão não foi afetada. A localização nuclear de β-catenina, um marcador da ativação da via Wnt, foi observada após tratamento com ambos os compostos, no entanto estes agentes modularam a enzima GSK-3β de forma diferencial. Além disso, tratamento com EGF aumentou a capacidade proliferativa e migratória da célula, mas não alterou a formação de colônias. LiCl, apesar de ser um conhecido ativador da via Wnt, inibiu o aumento da proliferação e migração causado pelo EGF, como visto pelo tratamento das células com EGF+LiCl, e reduziu a formação de colônias. Nossos resultados revelaram que LiCl possui uma atividade supressora de tumor o que pode representar um novo papel para este composto como um possível agente terapêutico para o tratamento do CCR. / Colorectal cancer (CCR) represents the fourth type of cancer most common in Brazil among men and women and the survival for this tumor type is considered good if the disease is diagnosed at early stage. The progression of an adenoma (benign tumor) to an adenocarcinoma (malign tumor) is dependent on the accumulation of mutations in a variety of oncogenes and tumors suppressors genes. These mutations can lead to alterations of important cell signaling pathways that control these events, such as Wnt e EGFR. However, the molecular and cellular mechanisms mediated by these pathways during CCR progression remain to be defined. In the present study we assesses the role that Wnt and EGFR pathway play during CCR progression using Caco-2 cells, a human cell line derived of colorectal cancer, as a model. Cells were treated with EGF, an EGFR pathway activator, and lithium chloride, (LiCl) a known inhibitor of the enzyme GSK-3β and, therefore a Wnt pathway activator or alternatively by using combination of both drugs. After treatments, we monitored cell morphology, localization and expression of junctional proteins, proliferative and cell cycle patterns, and the tumorigenic potential (cell migration and colony formation). We show that subcellular localization of the junctional proteins claudin-1 and β-catenin was altered after treatment with EGF and LiCl, however the expression were not affected. Nuclear localization of β-catenin, a marker of Wnt pathway activation, was observed after treatment with both compounds, however these agents modulated in a differential fashion the enzyme GSK-3β. Furthermore, EGF treatment increased the proliferative and migratory capacity of the cells, but did not alter colony formation potential. LiCl, despite being a known activator of the Wnt pathway, inhibited the increase of proliferation and migration caused by EGF, as demonstrated by the cell treatments with EGF+LiCl, and reduced the cell colony formation. Our results reveal that LiCl present a suppressor tumor activity, which may represent a new role for this compound as potential therapeutic agent in the CCR treatment.