Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-12-07T14:13:22Z No. of bitstreams: 1 Dissertação - Emily M. S. Silva.pdf: 2118553 bytes, checksum: fb456947468dd022b648c7c49c3b3a0a (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-12-07T14:13:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Emily M. S. Silva.pdf: 2118553 bytes, checksum: fb456947468dd022b648c7c49c3b3a0a (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-12-07T14:14:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Emily M. S. Silva.pdf: 2118553 bytes, checksum: fb456947468dd022b648c7c49c3b3a0a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-07T14:14:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação - Emily M. S. Silva.pdf: 2118553 bytes, checksum: fb456947468dd022b648c7c49c3b3a0a (MD5) Previous issue date: 2014-07-10 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Tuberculosis (TB) caused by Mycobacterium tuberculosisis one of the most lethal diseases in the world, causing millions of deaths every year. Due to the inadequate treatment and the emergence of multidrug-resistant strains, the search for new antimicrobial compounds have been often reported in the scientific literature. Drugs developed from natural products have been a frequent research target and promising results have been obtained with the discovery of antimicrobial compounds synthesized by endophytic microorganisms. Previous work demonstrated that an endophytic Aspergillus fumigatusspecies,isolated from Copaifera multijugaHayne (copaíba), produces antimicrobial compounds, which are released into the growth substrate. The direct use of this substrate (fermentation broth) in antibiosis assaysagainst M. tuberculosisin vitro allowed detectingantimicrobial activity against the pathogen when compared to the negative control. So, the objective of this work was the analysis and purification of these compounds by the fractionation of A. fumigatusmutant and non-mutantfermentation broth, aiming the selection of fractions with higher capacityfor inhibitM. tuberculosis. Mutants were obtained by the induction of the fungal culture to ultraviolet lightexposition. The wild and mutant derivatives isolateswere tested for antibiosis against the indicator organism, Staphylococcusaureusandthe antimicrobial activity has been evaluated by comparing in vitro antibiosis assaysand fungal extractson n-butanol by High Performance Liquid Chromatography (HPLC). After, n-butanolextracts of wild isolates were subjected to fractionation by Medium PressureLiquid Chromatography (MPLC), and the fractions were evaluated against M. smegmatis. After this test, the fractions that showed antagonistic activity were selected for testing against M. tuberculosis, and analyzed in analyticalHPLC. Among 18 mutants selected, eight showed antagonismagainst S. aureus. A peak with less than a minute of retention was correlated with the antimicrobial activity. On the fractionation, 30 fractions were obtained and among these, only two (F4 and F13) showed activity against M. smegmatisandonly F4 showed antagonism against M. tuberculosiswith an MIC of 256µg/mL. The chromatograms of both F4 andF13 showedpeaks atthe beginning of the analysis. The F4chromatogram showedtwo peaks with retention times of 2.1 and 2.4 minutes. These data will be useful in future optimization and purification of compounds / A tuberculose (TB), causada por Mycobacterium tuberculosisé uma das enfermidades mais letais do mundo, causando milhões demortes todos os anos. Devido aos tratamentos inadequados e ao surgimento de cepas multirresistentes aos fármacos utilizados nos tratamentos, a busca por novos compostos antimicrobianos tem sido reportada com freqüência na literatura científica. Fármacos desenvolvidos a partir de produtos naturais têm sido um alvo frequente de pesquisa e dentre as perspectivas, resultados promissores têm sido obtidos com a descoberta de compostos antimicrobianos sintetizados por micro-organismos endofíticos. Trabalhos anteriores demonstraram que um fungo endofítico da espécie Aspergillus fumigatusisolado de Copaifera multijuga Hayne (copaíba), produz compostos antimicrobianos, os quais são secretadospara o substrato de crescimento. A utilização direta desse substrato (caldo de fermentação) em testes de antibiose in vitro contra M. tuberculosispermitiram detectar sua atividade antimicrobiana contra o patógeno, quando comparadaao controle negativo. Partindo desse resultado, foi objetivo do presentetrabalhoproceder à análise e purificação desses compostos, através do fracionamento do caldo de fermentação de A. fumigatusmutantes e não mutantes, visando à seleção de frações que apresentem maiorcapacidade de inibição contra M. tuberculosis.Induziu-sea mutação do isolado selvagempor meio da exposição da cultura fúngica à luz ultravioleta. O isolado selvagem e os mutantes derivados desse isolado foram testados quanto à antibiose contrao micro-organismoindicador,Staphylococccusaureus, tendo sido a atividade antimicrobianaavaliada por meio de comparações entre os testes de antibiose in vitroe os cromatogramas dos extratos fúngicos fracionados em n-butanolpor Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE). Após isso, extratos em n-butanolde isolados selvagens foram submetidos ao fracionamento químico por Cromatografia Líquida de Média Pressão (MPLC)e as frações obtidas foram avaliadas contra M. smegmatis. Após este ensaio, as frações que apresentaram antagonismo foram selecionadas para o ensaio contra M. tuberculosis, além de serem analisadasem CLAEAnalítica. Foram selecionadas 18 colônias mutantes e destas, oito apresentaram antagonismo contra S. aureus. A partir da análise dos cromatogramas dos isolados, correlacionou-se à atividade antimicrobiana um pico com menos de um minuto de retenção.No fracionamento químico, foram obtidas 30 frações e destas,apenas duas (F4 e F13)apresentaram atividade contra M. smegmatis.Das duas frações, apenas F4 apresentou antagonismo frente a M. tuberculosiscom CIM de 256µg/mL. Os cromatogramas, tanto de F4 quanto de F13, apresentampicos no início da análise. O cromatograma de F4 mostra dois picos, com tempos de retenção de 2,1 e 2,4 minutos. Esses dados iniciais auxiliarão na otimização e futurapurificação dos compostos.

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-12-13T14:18:51Z No. of bitstreams: 1 Dissertação - Cristiane N. Coelho.pdf: 260294767 bytes, checksum: c58e766f40f09c7f21e336aedbafb454 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-12-13T14:23:26Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Cristiane N. Coelho.pdf: 260294767 bytes, checksum: c58e766f40f09c7f21e336aedbafb454 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-12-13T14:23:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Cristiane N. Coelho.pdf: 260294767 bytes, checksum: c58e766f40f09c7f21e336aedbafb454 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-13T14:23:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação - Cristiane N. Coelho.pdf: 260294767 bytes, checksum: c58e766f40f09c7f21e336aedbafb454 (MD5) Previous issue date: 2011-08-22 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The cleaning procedure is a step in cavity preparation of tooth structure to receive the restorative treatment, this step aims to remove debris and microorganisms of the cavity, allowing a direct interface between tooth and restoration. Oil-copal resin is a natural product, used by Amazonian populations and recognized for its medicinal properties such as antimicrobial activity against the microorganisms in the oral cavity. This study evaluated the biological compatibility and antimicrobial activity in mouse molar of the emulsions formulated cleaning the cavity of the base oil-resin of copaiba (Copaifera multijuga), the following concentrations: 10% copal, copal to 10% with amyrin, copal 30% and 30% with copal amyrin. The antibacterial activity of these emulsions were analyzed by the minimum inhibitory concentration, minimum bactericidal concentration and cell viability analysis by fluorescence techniques, compared to ATCC 25175 Streptococcus mutans, Streptococcus oralis ATCC 10557, Streptococcus salivarius ATCC 7073 and Lactobacillus casei ATCC 7469. The cytotoxic activity of emulsions were evaluated by tests of the hemolysis tests and cell culture, compared to murine fibroblasts NHI3T3 by the Alamar Blue test. The color change was evaluated difference between the starting and ending of the specimens of dentin when in contact with the test emulsions at different times, 10 seconds, 30 seconds and 10 minutes. The biological compatibility of the copal emulsions were evaluated by washing the cavity with the test emulsion followed by pulp capping with calcium hydroxide pastes associated with oil-resin of copaiba amyrin 10% + 1% in molars of rats. The test emulsions at all concentrations showed antibacterial activity against microorganisms relevant to dentistry. In cytotoxic activities, all emulsions tested showed cell lysis, with an EC50 ranging from 11 to 32μL/mL. The emulsions of the oil-resin of copaiba with amyrin showed better behavior and hemolytic activity that the emulsions without amyrin. In the test cell culture was observed that the emulsions of the oil-resin of copaiba decrease cell viability showing cytotoxicity. Evaluating the color change, the emulsions of the oil-resin of Copaiba with amyrin were less clinically noticeable color change, ΔE <3.3, within 10 minutes. The pulp capping with emulsions and pastes the oil-resin of Copaiba observed behavior was similar to control, when used in the emulsion of the oil-resin of Copaiba to 10% with amyrin. The authors concluded that testing of emulsions and pastes the base of the oilresin of Copaiba are promising for application in dentistry, requiring more research to improve the pharmacological, physical, mechanical and biological properties. / O procedimento de limpeza da cavidade é uma etapa do preparo da estrutura dentária para receber o tratamento restaurador, esta etapa visa remover resíduos e microrganismos da cavidade, permitindo uma interface direta entre dente e restauração. Óleo-resina da copaíba é um produto natural, utilizado pelas populações amazônicas e reconhecido pelas suas propriedades medicinais, como atividade antimicrobiana frente aos microrganismos presentes na cavidade oral. Este estudo avaliou a atividade antibacteriana, citotoxicidade, alteração de cor e a compatibilidade biológica em molares de rato das emulsões de limpeza de cavidade formulada a base do óleo-resina da copaíba (Copaifera multijuga), nas seguintes concentrações: copaíba a 10%, copaíba a 10% com amirina, copaíba a 30% e copaíba a 30% com amirina. A atividade antibacteriana destas emulsões foram analisadas pelos testes da Concentração Inibitória Mínima, Concentração Bactericida Mínima e Análise da Viabilidade Celular por Técnica de Fluorescência, frente aos Streptococcus mutans ATCC 25175; Streptococcus oralis ATCC 10557; Streptococcus salivarius ATCC 7073 e Lactobacillus casei ATCC 7469. A atividade citotóxica das emulsões testes foram avaliadas através dos testes de hemólise e de cultura de células, frente a fibroblastos murinos NHI3T3, através do ensaio de Alamar Blue. A alteração de cor avaliou diferença entre a cor inicial e final dos corpos de prova de dentina quando em contato com as emulsões testes, em diferentes períodos, 10 segundos, 30 segundos e 10 minutos. A compatibilidade biológica das emulsões da copaíba foram avaliadas através da lavagem da cavidade com as emulsões testes nas concentrações de 10% e 30% com amirina, seguida do capeamento pulpar com pastas de hidróxido de cálcio associadas com óleo-resina da copaíba 10% com amirina 1% em molares de ratos. As emulsões testes, em todas as concentrações, apresentaram atividade antibacteriana frente aos microrganismos relevantes na odontologia. Nas atividades de citotoxicidade, todas as emulsões testadas apresentaram lise celular, com uma EC50 variando de 11 a 32μL/mL. As emulsões do óleo-resina da copaíba com amirina apresentaram melhor comportamento quanto a atividade hemolítica que as emulsões sem amirina. No teste de cultura de células foi observado que as emulsões do óleo-resina da copaíba diminuem a viabilidade celular apresentando atividade citotóxica. Comparando a cor inicial e final dos corpos de prova quando em contato com as emulsões testes, as emulsões do óleo-resina da copaíba com amirina apresentaram menor alteração de cor perceptível clinicamente, ΔE <3,3, no período de 10 minutos. O capeamento pulpar com emulsões e pastas do óleo-resina da copaíba foi observado um comportamento semelhante ao controle, quando utilizado a emulsão do óleo-resina da copaíba a 10% com amirina. Os autores concluíram que as emulsões e pastas testes a base do óleoresina da copaíba são promissores para aplicação na odontologia, necessitando de mais pesquisas para melhorar a farmacotécnica, propriedades físicas, mecânicas e biológicas.