La dystrophie cornéenne endothéliale de Fuchs (FECD, pour l’abréviation du terme anglais « Fuchs endothelial corneal dystrophy ») est une maladie de l'endothélium cornéen. Sa pathogenèse est mal connue. Aucun traitement médical n’est efficace. Le seul traitement existant est chirurgical et consiste dans le remplacement de l’endothélium pathologique par un endothélium sain provenant de cornées de la Banque des yeux. Le traitement chirurgical, en revanche, comporte 10% de rejet immunologique. Des modèles expérimentaux sont donc nécessaires afin de mieux comprendre cette maladie ainsi que pour le développement de traitements alternatifs. Le but général de cette thèse est de développer un modèle expérimental de la FECD en utilisant le génie tissulaire. Ceci a été réalisé en trois étapes. 1) Tout d'abord, l'endothélium cornéen a été reconstruit par génie tissulaire en utilisant des cellules endothéliales en culture, provenant de patients atteints de FECD. Ce modèle a ensuite été caractérisé in vitro. Brièvement, les cellules endothéliales cornéennes FECD ont été isolées à partir de membranes de Descemet prélevées lors de greffes de cornée. Les cellules au deuxième ou troisième passages ont ensuite été ensemencées sur une cornée humaine préalablement décellularisée. Suivant 2 semaines de culture, les endothélia cornéens reconstruits FECD (n = 6) ont été évalués à l'aide d'histologie, de microscopie électronique à transmission et d’immunomarquages de différentes protéines. Les endothélia cornéens reconstruits FECD ont formé une monocouche de cellules polygonales bien adhérées à la membrane de Descemet. Les immunomarquages ont démontré la présence des protéines importantes pour la fonctionnalité de l’endothélium cornéen telles que Na+-K+/ATPase α1 et Na+/HCO3-, ainsi qu’une expression faible et uniforme de la protéine clusterine. 2) Deux techniques chirurgicales (DSAEK ; pour « Descemet stripping automated endothelial keratoplasty » et la kératoplastie pénétrante) ont été comparées pour la transplantation cornéenne dans le modèle animal félin. Les paramètres comparés incluaient les défis chirurgicaux et les résultats cliniques. La technique « DSAEK » a été difficile à effectuer dans le modèle félin. Une formation rapide de fibrine a été observée dans tous les cas DSAEK (n = 5). 3) Finalement, la fonctionnalité in vivo des endothélia cornéens reconstruits FECD a été évaluée (n = 7). Les évaluations in vivo comprenaient la transparence, la pachymétrie et la tomographie par cohérence optique. Les évaluations post-mortem incluaient la morphométrie des cellules endothéliales, la microscopie électronique à transmission et des immunomarquage de protéines liées à la fonctionnalité. Après la transplantation, la pachymétrie a progressivement diminué et la transparence a progressivement augmenté. Sept jours après la transplantation, 6 des 7 greffes étaient claires. La microscopie électronique à transmission a montré la présence de matériel fibrillaire sous-endothélial dans toutes les greffes d’endothelia reconstruits FECD. Les endothélia reconstruits exprimaient aussi des protéines Na+-K+/ATPase et Na+/HCO3-. En résumé, cette thèse démontre que les cellules endothéliales de la cornée à un stade avancé FECD peuvent être utilisées pour reconstruire un endothélium cornéen par génie tissulaire. La kératoplastie pénétrante a été démontrée comme étant la procédure la plus appropriée pour transplanter ces tissus reconstruits dans l’œil du modèle animal félin. La restauration de l'épaisseur cornéenne et de la transparence démontrent que les greffons reconstruits FECD sont fonctionnels in vivo. Ces nouveaux modèles FECD démontrent une réhabilitation des cellules FECD, permettant d’utiliser le génie tissulaire pour reconstruire des endothelia fonctionnels à partir de cellules dystrophiques. Les applications potentielles sont nombreuses, y compris des études physiopathologiques et pharmacologiques. / Fuchs endothelial corneal dystrophy (FECD) is a primary disease of the corneal endothelium. Its pathogenesis is poorly understood. No medical treatment is effective. Surgical treatment (the only available treatment) carries 10% of immunogenic rejection. Experimental models are needed in order to better understand the disease and to investigate potential autologous treatments (to prevent immunogenic rejection). The overall goal of this thesis is to develop an experimental model for FECD using tissue engineering. This was achieved in three steps. 1) An in vitro tissue-engineered FECD model was created and characterized. Briefly, Descemet’s membranes from patients with late-stage FECD undergoing Descemet’s Stripping Automated Endothelial Keratoplasty (DSAEK) were used to isolate and culture FECD endothelial cells. Second or third-passaged FECD endothelial cells were seeded on a previously decellularized human cornea. After 2 weeks in culture, TE-FECD corneas (n=6) were assessed using histology, transmission electron microscopy (TEM) and immunofluorescence labeling of various proteins. TE-FECD endothelium yielded a monolayer of polygonal cells well adhered to Descemet’s membrane. The TE-FECD corneal endothelium expressed the function-related proteins Na+-K+/ATPase α1 and Na+/HCO3-. Clusterin expression was faint and uniform. 2) In order to determine the best surgical procedure to transplant the TE-FECD corneas in the feline model, a DSAEK procedure was evaluated and compared to penetrating keratoplasty technique. DSAEK assessments included surgical challenges and clinical outcomes. DSAEK technique was challenging to perform in the feline model. Rapid fibrin formation was observed in all DSAEK cases (n=5). 3) The in vivo functionality of the TE-FECD corneas was assessed. TE-FECD corneas were grafted in the feline model (n=7) using penetrating keratoplasty procedure and observed for seven days. In vivo assessments included transparency, pachymetry, optical coherence tomography, endothelial cell morphometry, TEM and immunostaining of function-related proteins. After transplantation, pachymetry gradually decreased and transparency gradually increased. Seven days after transplantation, 6 out of 7 grafts were clear. Post-mortem TEM showed subendothelial loose fibrillar material deposition in all TE-FECD grafts. The TE grafted endothelium expressed Na+-K+/ATPase and Na+/HCO3-. This thesis demonstrates that endothelial cells from late-stage FECD corneas can be used to engineer a corneal endothelium. Compared to DSEAK, penetrating keratoplasty is a more appropriate procedure for corneal transplantation in the feline model, since the DSAEK procedure in the feline model presently yields inconsistent clinical results. Restoration of corneal thickness and transparency demonstrates that the TE-FECD grafts are functional in vivo. This novel FECD living model suggests a potential role of tissue engineering for FECD cell rehabilitation. Potential applications are numerous, including pathophysiological and pharmacological studies.

Introduction : Malgré leur état non-prolifératif in vivo, les cellules endothéliales cornéennes (CEC) peuvent être amplifiées in vitro. Leur transplantation subséquente par injection intracamérale pourrait surmonter la pénurie de tissus associée à l’allo-greffe traditionnelle – l’unique traitement définitif disponible pour les endothéliopathies cornéennes. Objectif : Évaluer la fonctionnalité d’un endothélium cornéen reconstitué par injection de CEC dans la chambre antérieure du félin. Méthodes : Les yeux droits de 16 animaux ont été opérés. Huit ont été désendothélialisés centralement avec injection de 2x10e5 (n=4) ou 1x10e6 (n=4) CEC félines supplémentées avec Y-27632 et marquées avec SP-DiOC18(3). Deux ont été désendothélialisés complètement et injectés avec 1x10e6 CEC et Y-27632. Six contrôles ont été désendothélialisés centralement (n=3) ou complètement (n=3) et injectés avec Y-27632 sans CEC. La performance clinique, l’intégrité anatomique, le phénotype fonctionnel et l’expression de SP-DiOC18(3) du nouvel endothélium ont été étudiés. Résultats : Les cornées greffées avec 2x10e5 CEC et les contrôles désendothélialisés centralement ont réussi le mieux cliniquement. Les contrôles désendothélialisés complètement sont restés opaques. L’histopathologie a révélé une monocouche endothéliale fonctionnelle dans les cornées greffées avec 2x10e5 CEC et les contrôles désendothélialisés centralement, une multicouche endothéliale non-fonctionnelle dans les cornées désendothélialisées centralement et greffées avec 1x10e6 CEC, et un endothélium fibrotique non-fonctionnel dans les cornées désendothélialisées complètement. L’expression de SP-DiOC18(3) était rare dans les greffes. Conclusion : La thérapie par injection cellulaire a reconstitué un endothélium partiellement fonctionnel, auquel les CEC injectées n’ont contribué que peu. L’injection de Y-27632 sans CEC a reconstitué l’endothélium le plus sain. Des études additionnelles investiguant l’effet thérapeutique de Y-27632 seul sont justifiées. / Introduction : Despite their growth arrest in vivo, corneal endothelial cells (CEC) can be amplified in vitro. Their subsequent transplantation by cell-injection therapy could overcome the tissue scarcity associated with traditional allo-transplantation, which is the only currently available treatment for irreversible corneal endothelial failure. Objective : To evaluate the functionality of a corneal endothelium reconstituted by cell- injection therapy in the feline. Methods: The right eyes of 16 animals underwent surgery. Eight underwent central endothelial scraping and injection with 2x10e5 (n=4) or 1x10e6 (n=4) feline CEC supplemented with Y-27632 and labeled with SP-DiOC18(3). After total scraping, two eyes were injected with 1x10e6 labeled CEC and Y-27632. The central (n=3) or entire (n=3) endothelium was scraped in six controls followed by Y-27632 injection without CEC. Outcomes included clinical performance, anatomical integrity, functional phenotype and SP-DiOC18(3) expression of the new endothelium. Results: Corneas grafted with 2x10e5 CEC and centrally scraped controls performed the best clinically. Entirely scraped controls remained hazy and thick. Histopathology revealed a confluent, functional endothelial monolayer in corneas grafted with 2x10e5 CEC and centrally scraped controls, a non-uniform, non-functional endothelial multilayer in centrally scraped corneas grafted with 1x10e6 CEC, and a non-functional fibrotic endothelium in entirely scraped grafts and controls. SP-DiOC18(3) was scarce in grafts and absent in controls. Conclusion : Cell-injection therapy reconstituted an incompletely functional endothelium, to which injected CEC contributed little. Y-27632 injection without CEC reconstituted the healthiest endothelium. Further studies investigating the therapeutic effect of Y-27632 alone are warranted.

Introdução: As doenças da córnea são responsáveis por cerca de 5% da cegueira reversível no mundo e o transplante de córnea (TC) é importante para o tratamento dessas enfermidades. A partir de fontes de dados oficiais e públicas, foram analisados o progresso e as dificuldades relacionados ao TC no Brasil nos últimos 16 anos, bem como desigualdades regionais, gastos do Sistema Único de Saúde (SUS) e indicadores de qualidade dos bancos de tecido ocular (BTOs). Métodos: Estudo retrospectivo e analítico com dados sobre TCs e BTOs no Brasil, no período de janeiro de 2001 a dezembro de 2016, divulgados pelo Sistema Nacional de Transplantes (SNT), pela Associação Brasileira de Transplante de Órgãos (ABTO) e pela Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA). Para verificação de existência de tendência, comparação de médias entre as regiões e verificação da diferença de médias, foram utilizados o teste de Cochran-Armitage, a Análise de Variância e as comparações múltiplas de Duncan, respectivamente. Em todos os testes foi utilizado um nível de significância de 5%. Resultados: No Brasil, houve aumento: de 2,4 vezes no número de TCs (de 6.193 - 35,2 pmp para 14.641 - 71,0 pmp - p < 0,001); de 50,7% na eficácia do atendimento à demanda populacional por TCs (de 35,3% para 53,2% - p < 0,001); de 27,8% no número de globos e córneas in situ doados (de 24.608 - 127,1 pmp para 31.450 - 152,6 pmp - p < 0,001); de 31,7% nas córneas preservadas (de 21.012 para 27.674); de 2,4 vezes no gasto financeiro total com TCs (de R$ 9.179.688 para R$ 22.060.973); e de 2,2 vezes no gasto unitário com TC (de R$ 716 para R$ 1.603). A fila de espera para TC reduziu em 45,4% (de 23.549 - 123,0 pmp para 12.865 - 62,4 pmp - p < 0,001). As duas principais causas para a não doação foram as contraindicações médicas (média de 42,5%) e a recusa familiar (média de 36,6%). As principais causas de descarte de córneas foram a sorologia positiva para hepatite B (média de 33%), validade tecidual (média de 30,9%) e qualidade imprópria do tecido (16,8%). A Eficácia na Preservação de Córnea (EPC), o Coeficiente de Descarte de Córnea (CDC) e a Eficácia no Fornecimento de Córnea para Transplante (ECT) foram em média 88%, 37% e 63% ao longo dos anos, respectivamente. Os melhores índices foram apresentados nas regiões Sul, Centro-Oeste e Sudeste e os piores no Norte e Nordeste. Conclusão: No Brasil, o pequeno número de doações e a grande taxa de descarte de córneas são as principais dificuldades ao adequado atendimento à demanda populacional por TCs. Contudo, o país aumentou a capacidade de transplantar córneas e reduziu as filas de espera em 16 anos / Introduction: Corneal diseases account for about 5% of reversible blindness in the world and Corneal Transplantation (CT) is important for the treatment of these diseases. From official and public data sources, the progress and difficulties related to CT in Brazil in the last 16 years were analyzed, as well as regional inequalities, expenses for the Unified Health System (SUS) and quality indicators of ocular tissue banks (OTBs). Methods: A retrospective and analytical study with data on CT and OTB in Brazil, from January 2001 to December 2016, published by the National Transplantation System (SNT), the Brazilian Organ Transplantation Association (ABTO) and the National Surveillance Agency Sanitary (ANVISA). The Cochran-Armitage test, the Analysis of Variance and the Duncan\'s multiple comparisons were used to verify the existence of trend, comparison of means between regions and verification of the mean difference, respectively. A significance level of 5% was used in all tests. Results: In Brazil, there was an increase: of 2.4 times in the number of CTs (from 6,193 - 35.2 pmp to 14,641 - 71.0 pmp - p < 0.001); of 50.7% in the efficacy of meeting the population demand for CTs (from 35.3% to 53.2% - p < 0.001); of 27.8% in the number of donated globes and corneas in situ (from 24,608 - 127.1 pmp to 31,450 - 152.6 pmp - p < 0.001); of 31.7% in preserved corneas (from 21,012 to 27,674); of 2.4 times in the total finance expense with CTs (from R$ 9,179,688 to R$ 22,060,973); and 2.2 times the unit expense with CT (from R$ 716 to R$ 1,603). The waiting list for CT decreased by 45.4% (from 23,549 - 123.0 pmp to 12,865 - 62.4 pmp - p < 0.001). The two main causes for non-donation were medical contraindications (mean of 42.5%) and family refusal (mean of 36.6%). The main causes of corneal discard were positive serology for hepatitis B (mean of 33%), tissue validity (mean of 30.9%) and inadequate tissue quality (16.8%). Efficacy in Corneal Preservation (EPC), Corneal Discarding Coefficient (CDC) and Efficacy Supply of Corneas for Transplantation (ECT) averaged 88%, 37%, and 63% over the years, respectively. The best indexes were presented in the South, Midwest and Southeast regions and the worst in the North and Northeast. Conclusion: In Brazil, the small number of donations and the high rate of discard of corneas are the main difficulties to the adequate attendance to the population demand by CTs. However, the country increased the ability to transplant corneas and reduced waiting lists in 16 years

Introdução: As doenças da córnea são responsáveis por cerca de 5% da cegueira reversível no mundo e o transplante de córnea (TC) é importante para o tratamento dessas enfermidades. A partir de fontes de dados oficiais e públicas, foram analisados o progresso e as dificuldades relacionados ao TC no Brasil nos últimos 16 anos, bem como desigualdades regionais, gastos do Sistema Único de Saúde (SUS) e indicadores de qualidade dos bancos de tecido ocular (BTOs). Métodos: Estudo retrospectivo e analítico com dados sobre TCs e BTOs no Brasil, no período de janeiro de 2001 a dezembro de 2016, divulgados pelo Sistema Nacional de Transplantes (SNT), pela Associação Brasileira de Transplante de Órgãos (ABTO) e pela Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA). Para verificação de existência de tendência, comparação de médias entre as regiões e verificação da diferença de médias, foram utilizados o teste de Cochran-Armitage, a Análise de Variância e as comparações múltiplas de Duncan, respectivamente. Em todos os testes foi utilizado um nível de significância de 5%. Resultados: No Brasil, houve aumento: de 2,4 vezes no número de TCs (de 6.193 - 35,2 pmp para 14.641 - 71,0 pmp - p < 0,001); de 50,7% na eficácia do atendimento à demanda populacional por TCs (de 35,3% para 53,2% - p < 0,001); de 27,8% no número de globos e córneas in situ doados (de 24.608 - 127,1 pmp para 31.450 - 152,6 pmp - p < 0,001); de 31,7% nas córneas preservadas (de 21.012 para 27.674); de 2,4 vezes no gasto financeiro total com TCs (de R$ 9.179.688 para R$ 22.060.973); e de 2,2 vezes no gasto unitário com TC (de R$ 716 para R$ 1.603). A fila de espera para TC reduziu em 45,4% (de 23.549 - 123,0 pmp para 12.865 - 62,4 pmp - p < 0,001). As duas principais causas para a não doação foram as contraindicações médicas (média de 42,5%) e a recusa familiar (média de 36,6%). As principais causas de descarte de córneas foram a sorologia positiva para hepatite B (média de 33%), validade tecidual (média de 30,9%) e qualidade imprópria do tecido (16,8%). A Eficácia na Preservação de Córnea (EPC), o Coeficiente de Descarte de Córnea (CDC) e a Eficácia no Fornecimento de Córnea para Transplante (ECT) foram em média 88%, 37% e 63% ao longo dos anos, respectivamente. Os melhores índices foram apresentados nas regiões Sul, Centro-Oeste e Sudeste e os piores no Norte e Nordeste. Conclusão: No Brasil, o pequeno número de doações e a grande taxa de descarte de córneas são as principais dificuldades ao adequado atendimento à demanda populacional por TCs. Contudo, o país aumentou a capacidade de transplantar córneas e reduziu as filas de espera em 16 anos / Introduction: Corneal diseases account for about 5% of reversible blindness in the world and Corneal Transplantation (CT) is important for the treatment of these diseases. From official and public data sources, the progress and difficulties related to CT in Brazil in the last 16 years were analyzed, as well as regional inequalities, expenses for the Unified Health System (SUS) and quality indicators of ocular tissue banks (OTBs). Methods: A retrospective and analytical study with data on CT and OTB in Brazil, from January 2001 to December 2016, published by the National Transplantation System (SNT), the Brazilian Organ Transplantation Association (ABTO) and the National Surveillance Agency Sanitary (ANVISA). The Cochran-Armitage test, the Analysis of Variance and the Duncan\'s multiple comparisons were used to verify the existence of trend, comparison of means between regions and verification of the mean difference, respectively. A significance level of 5% was used in all tests. Results: In Brazil, there was an increase: of 2.4 times in the number of CTs (from 6,193 - 35.2 pmp to 14,641 - 71.0 pmp - p < 0.001); of 50.7% in the efficacy of meeting the population demand for CTs (from 35.3% to 53.2% - p < 0.001); of 27.8% in the number of donated globes and corneas in situ (from 24,608 - 127.1 pmp to 31,450 - 152.6 pmp - p < 0.001); of 31.7% in preserved corneas (from 21,012 to 27,674); of 2.4 times in the total finance expense with CTs (from R$ 9,179,688 to R$ 22,060,973); and 2.2 times the unit expense with CT (from R$ 716 to R$ 1,603). The waiting list for CT decreased by 45.4% (from 23,549 - 123.0 pmp to 12,865 - 62.4 pmp - p < 0.001). The two main causes for non-donation were medical contraindications (mean of 42.5%) and family refusal (mean of 36.6%). The main causes of corneal discard were positive serology for hepatitis B (mean of 33%), tissue validity (mean of 30.9%) and inadequate tissue quality (16.8%). Efficacy in Corneal Preservation (EPC), Corneal Discarding Coefficient (CDC) and Efficacy Supply of Corneas for Transplantation (ECT) averaged 88%, 37%, and 63% over the years, respectively. The best indexes were presented in the South, Midwest and Southeast regions and the worst in the North and Northeast. Conclusion: In Brazil, the small number of donations and the high rate of discard of corneas are the main difficulties to the adequate attendance to the population demand by CTs. However, the country increased the ability to transplant corneas and reduced waiting lists in 16 years

La dystrophie cornéenne endothéliale de Fuchs (FECD, pour l’abréviation du terme anglais « Fuchs endothelial corneal dystrophy ») est une maladie de l'endothélium cornéen. Sa pathogenèse est mal connue. Aucun traitement médical n’est efficace. Le seul traitement existant est chirurgical et consiste dans le remplacement de l’endothélium pathologique par un endothélium sain provenant de cornées de la Banque des yeux. Le traitement chirurgical, en revanche, comporte 10% de rejet immunologique. Des modèles expérimentaux sont donc nécessaires afin de mieux comprendre cette maladie ainsi que pour le développement de traitements alternatifs. Le but général de cette thèse est de développer un modèle expérimental de la FECD en utilisant le génie tissulaire. Ceci a été réalisé en trois étapes. 1) Tout d'abord, l'endothélium cornéen a été reconstruit par génie tissulaire en utilisant des cellules endothéliales en culture, provenant de patients atteints de FECD. Ce modèle a ensuite été caractérisé in vitro. Brièvement, les cellules endothéliales cornéennes FECD ont été isolées à partir de membranes de Descemet prélevées lors de greffes de cornée. Les cellules au deuxième ou troisième passages ont ensuite été ensemencées sur une cornée humaine préalablement décellularisée. Suivant 2 semaines de culture, les endothélia cornéens reconstruits FECD (n = 6) ont été évalués à l'aide d'histologie, de microscopie électronique à transmission et d’immunomarquages de différentes protéines. Les endothélia cornéens reconstruits FECD ont formé une monocouche de cellules polygonales bien adhérées à la membrane de Descemet. Les immunomarquages ont démontré la présence des protéines importantes pour la fonctionnalité de l’endothélium cornéen telles que Na+-K+/ATPase α1 et Na+/HCO3-, ainsi qu’une expression faible et uniforme de la protéine clusterine. 2) Deux techniques chirurgicales (DSAEK ; pour « Descemet stripping automated endothelial keratoplasty » et la kératoplastie pénétrante) ont été comparées pour la transplantation cornéenne dans le modèle animal félin. Les paramètres comparés incluaient les défis chirurgicaux et les résultats cliniques. La technique « DSAEK » a été difficile à effectuer dans le modèle félin. Une formation rapide de fibrine a été observée dans tous les cas DSAEK (n = 5). 3) Finalement, la fonctionnalité in vivo des endothélia cornéens reconstruits FECD a été évaluée (n = 7). Les évaluations in vivo comprenaient la transparence, la pachymétrie et la tomographie par cohérence optique. Les évaluations post-mortem incluaient la morphométrie des cellules endothéliales, la microscopie électronique à transmission et des immunomarquage de protéines liées à la fonctionnalité. Après la transplantation, la pachymétrie a progressivement diminué et la transparence a progressivement augmenté. Sept jours après la transplantation, 6 des 7 greffes étaient claires. La microscopie électronique à transmission a montré la présence de matériel fibrillaire sous-endothélial dans toutes les greffes d’endothelia reconstruits FECD. Les endothélia reconstruits exprimaient aussi des protéines Na+-K+/ATPase et Na+/HCO3-. En résumé, cette thèse démontre que les cellules endothéliales de la cornée à un stade avancé FECD peuvent être utilisées pour reconstruire un endothélium cornéen par génie tissulaire. La kératoplastie pénétrante a été démontrée comme étant la procédure la plus appropriée pour transplanter ces tissus reconstruits dans l’œil du modèle animal félin. La restauration de l'épaisseur cornéenne et de la transparence démontrent que les greffons reconstruits FECD sont fonctionnels in vivo. Ces nouveaux modèles FECD démontrent une réhabilitation des cellules FECD, permettant d’utiliser le génie tissulaire pour reconstruire des endothelia fonctionnels à partir de cellules dystrophiques. Les applications potentielles sont nombreuses, y compris des études physiopathologiques et pharmacologiques. / Fuchs endothelial corneal dystrophy (FECD) is a primary disease of the corneal endothelium. Its pathogenesis is poorly understood. No medical treatment is effective. Surgical treatment (the only available treatment) carries 10% of immunogenic rejection. Experimental models are needed in order to better understand the disease and to investigate potential autologous treatments (to prevent immunogenic rejection). The overall goal of this thesis is to develop an experimental model for FECD using tissue engineering. This was achieved in three steps. 1) An in vitro tissue-engineered FECD model was created and characterized. Briefly, Descemet’s membranes from patients with late-stage FECD undergoing Descemet’s Stripping Automated Endothelial Keratoplasty (DSAEK) were used to isolate and culture FECD endothelial cells. Second or third-passaged FECD endothelial cells were seeded on a previously decellularized human cornea. After 2 weeks in culture, TE-FECD corneas (n=6) were assessed using histology, transmission electron microscopy (TEM) and immunofluorescence labeling of various proteins. TE-FECD endothelium yielded a monolayer of polygonal cells well adhered to Descemet’s membrane. The TE-FECD corneal endothelium expressed the function-related proteins Na+-K+/ATPase α1 and Na+/HCO3-. Clusterin expression was faint and uniform. 2) In order to determine the best surgical procedure to transplant the TE-FECD corneas in the feline model, a DSAEK procedure was evaluated and compared to penetrating keratoplasty technique. DSAEK assessments included surgical challenges and clinical outcomes. DSAEK technique was challenging to perform in the feline model. Rapid fibrin formation was observed in all DSAEK cases (n=5). 3) The in vivo functionality of the TE-FECD corneas was assessed. TE-FECD corneas were grafted in the feline model (n=7) using penetrating keratoplasty procedure and observed for seven days. In vivo assessments included transparency, pachymetry, optical coherence tomography, endothelial cell morphometry, TEM and immunostaining of function-related proteins. After transplantation, pachymetry gradually decreased and transparency gradually increased. Seven days after transplantation, 6 out of 7 grafts were clear. Post-mortem TEM showed subendothelial loose fibrillar material deposition in all TE-FECD grafts. The TE grafted endothelium expressed Na+-K+/ATPase and Na+/HCO3-. This thesis demonstrates that endothelial cells from late-stage FECD corneas can be used to engineer a corneal endothelium. Compared to DSEAK, penetrating keratoplasty is a more appropriate procedure for corneal transplantation in the feline model, since the DSAEK procedure in the feline model presently yields inconsistent clinical results. Restoration of corneal thickness and transparency demonstrates that the TE-FECD grafts are functional in vivo. This novel FECD living model suggests a potential role of tissue engineering for FECD cell rehabilitation. Potential applications are numerous, including pathophysiological and pharmacological studies.