Tinidazol, 1-[2-(ethylsulphonyl)ethyl]-2-methyl-5-nitroimidazole, é um membro da classe dos nitroimidazóis que apresenta atividade amebicida, giardicida, tricomonicida e anaeróbica. O objetivo deste estudo foi avaliar a bioequivalência de duas marcas comerciais de comprimidos contendo 500 mg de tinidazol em voluntários sadios. O ensaio de bioequivalência entre o produto teste (Amplium® - FARMASA) e o produto referência (Pletil® - Pharmacia do Brasil Ltda) foi do tipo randomizado, cruzado e aberto. O medicamento foi administrado em dose única de 500 mg de tinidazol a 24 voluntários sadios. Amostras de sangue foram coletadas até 72 horas após a administração e analisadas através de método de cromatografia líquida de alta eficiência validado com detecção UV. As curvas médias de decaimento plasmatico obtidas para o produto teste (Amplium® - FARMASA) e para o produto referência (Pletil® - Pharmacia do Brasil Ltda) foram semelhantes, da mesma forma que os parâmetros farmacocinéticos Cmax (referência: 11,34 µg/mL; teste: 11,11 µg/mL), t<SUB.max (referência: 1,67 h; teste: 1,71 h), AUC0-t (referência: 201,92 µgxh/mL; teste: 198,15 µgxh/mL), AUC0-&#8734; (referência: 208,25 µg/mL; teste: 203,80 µgxh/mL) e t(½)el (referência = 14,05 h; teste = 13,91 h). A análise multivariada realizada através da análise de variância (ANOVA), para avaliação dos efeitos produto, grupo e período, revelou a ausência destes efeitos no estudo, indicando que o delineamento do estudo foi apropriado. Os valores do intervalo de confiança 90% para a razão de Cmax (93.9 % - 102.6 %), AUC0-t (94.9 % - 101.1 %) e AUC0-&#8734; (94.6 % -100.8 %) encontram-se entre 80 - 125 %, intervalo proposto pelo FDA e ANVISA. A comparação estatística dos parâmetros AUCo-t , AUC0-&#8734; e Cmax indicam claramente não haver diferença significativa entre os dois produtos contendo 500 mg de tinidazol. Baseado nos resultados farmacocinéticos e estatísticos deste, pode-se concluir que os dois produtos são bioequivalentes e podem ser considerados intercambiáveis na terapêutica. / Tinidazole, 1-[2-(ethylsulphonyl)ethyl]-2-methyl-5-nitroimidazole, is a member of the 5-nitroimidazole class of antimicrobial agents with amoebicidal, giardicidal, trichomonicidal and anaerobic activity. The purpose of this study was to evaluate the bioequivalence of two brands of tinidazole 500mg tablets in healthy human volunteers. The procedure of bioequivalence between the test product (Amplium® - FARMASA) and reference product (Pletil® - Pharmacia do Brasil Ltda) was a randomized, crossover and open study. The medication was administered in a single dose of 500 mg of tinidazole to 24 healthy volunteers. Blood samples were collected until 72 hours after administration and analised using a validated high-performance liquid chromatographic method with UV detection. The average plasmatic decay curves obtained for the test product (Amplium® - FARMASA) and reference product (Pletil® - Pharmacia do Brasil Ltda) were similar, in the same way as were the pharmacokinetic parameters Cmax (reference: 11.34 µg/mL; test: 11.11 µg/mL), tmax (reference: 1.67 h; test: 1.71 h), AUC0-t (reference: 201.92 µgxh/mL; test: 198.15 µgxh/mL), AUC0-&#8734; (reference: 208.25 µg/mL; test: 203.80 µgxh/mL) and t(½)el (reference = 14.05 hours, test = 13.91 hours). The multivariate analysis accomplished through analysis of variance (ANOVA), for assessment of product, group and period effects, revealed the absence of any of these effects in the present study, indicating that the crossover design was properly performed. j The 90% confidence intervals for the ratio of Cmax (93.9 % - 102.6 %), AUC0-t (94.9 % - 101.1 %) and AUC0-&#8734; (94.6 % - 100.8 %) values for the test and reference products are within the 80 - 125 % interval proposed by FDA and ANVISA. Statistical comparison of AUC0-t , AUC0-&#8734; and Cmax clearly indicated no significant difference between the two brands of tinidazole 500 mg tablets. Based on the pharmacokinetic and statistical results of this study, we can conclude that the two products are bioequivalent, and can be considered interchangeable in medical practice.

A análise de fármacos e outras moléculas relacionadas em fluidos biológicos é essencial no âmbito farmacêutico. Atualmente, a demanda por análises rápidas e mais complexas impulsiona a química analítica para o desenvolvimento de soluções inovadoras. A cromatografia líquida multidimensional com acoplamento de colunas para injeção direta de fluidos biológicos tem ganhado atenção nos últimos anos. Ao mesmo tempo, o acoplamento entre cromatografia líquida e espectrometria de massas proporcionou marcante desenvolvimento científico na área biomédica e bioquímica. Esta tese apresenta os diversos estágios na redução da escala em sistemas de column switching utilizando colunas RAM, para a análise de fármacos em fluidos biológicos. Na escala convencional, com colunas de 4,6 mm de diâmetro interno, desenvolveu-se um sistema para a análise de fluoxetina em plasma. A metodologia desenvolvida foi adequadamente validada para aplicação na monitorização terapêutica, com tempo de análise de 20 minutos (incluído o preparo de amostras) e consumo de apenas 100 µL de amostra. Avaliou-se a escala microbore (2,1 mm), a qual apresentou excelente potencialidade para o acoplamento com a espectrometria de massas utilizando ionização por electrospray. Na primeira etapa em escala capilar, com colunas de 520 µm de diâmetro interno, desenvolveu-se um sistema para análise de fluoxetina em plasma. Esse sistema proporcionou análises em 25 minutos, também aplicáveis à monitorização terapêutica, consumindo poucos microlitros de amostra. Finalmente, foi desenvolvido um sistema de column switching capilar com colunas na ordem de 200 µm. Esse sistema foi acoplado à espectrometria de massas em tandem proporcionando, inovadoramente, análises altamente sensíveis e simultâneas, com baixo consumo de amostras. Um grupo de cinco antidepressivos e o albendazol, com seus produtos de biotransformação, tiveram suas análises validadas em menos de 8 minutos, consumindo menos de um microlitro de amostra. Esse sistema capilar contrasta com os sistemas convencionais comumente utilizados, os quais consomem entre centenas e milhares de vezes mais amostra para atingir a mesma detectabilidade. / Analysis of drugs and other related molecules in biofluids is essential in the pharmaceutical field. Nowadays, the development of innovative solutions in analytical chemistry has been pushed by the needs for speed and more complex analysis. Lately, multidimensional liquid chromatography using column switching for direct injection of biofluids has gained attention. At the same time, liquid chromatography hyphenated with mass spectrometry provided remarkable scientific development in biomedical and biochemical area. This thesis presents the scale reduction steps in RAM column switching, for drug analysis in biofluids. In the conventional scale, using 4.6 mm i.d. columns, a system was developed, providing fluoxetine analysis in plasma. The developed method resulted in a 20 min long run, including the sample preparation step, which consumed 100 µL of sample. The method was adequately validated, being applicable to therapeutic drug monitoring. The microbore scale (2.1 mm) was evaluated, presenting great potentiality for coupling with electrospray-mass spectrometry. In the first capillary scale step, using 520 µm columns, a system was developed for fluoxetine analysis. Fluoxetine analysis was achieved in 25 min, within the application range for therapeutic drug monitoring, and consuming few microliters of sample. Finally, a RAM capillary column switching system employing columns on the order of 200 µm was developed, in an innovative way. This system was coupled with a tandem mass spectrometer, rendering sensitive and simultaneous analysis with reduced sample volume. The analysis of one group containing five antidepressants, as well as the analysis of albendazol and its metabolites was validated. These analyses took only 8 minutes and consumed less than one microliter of sample. In contrast with conventional systems, this system consumes about hundreds or thousands times less sample, with the same detectability.

A elevada introdu&ccedil;&atilde;o de antibi&oacute;ticos no ambiente aqu&aacute;tico tem aumentado a preocupa&ccedil;&atilde;o em rela&ccedil;&atilde;o ao desenvolvimento de microrganismos resistentes aos agentes antimicrobianos e seu potencial impacto na biota aqu&aacute;tica. Com o objetivo de monitorar a presen&ccedil;a, persist&ecirc;ncia e destina&ccedil;&atilde;o desses f&aacute;rmacos no meio ambiente, h&aacute; a necessidade de se desenvolver m&eacute;todos anal&iacute;ticos altamente sens&iacute;veis a baixas concentra&ccedil;&otilde;es desses antibi&oacute;ticos, na ordem de ng L-1 a &#956;g L-1. Nesse contexto o trabalho tem como objetivo a s&iacute;ntese de sorventes seletivos como pol&iacute;meros molecularmente impressos (MIP) e pol&iacute;meros molecularmente impressos com acesso restrito (RAMIP) para a an&aacute;lise de amostras aquosas complexas contendo fluoroquinolonas, empregando extra&ccedil;&atilde;o em fase s&oacute;lida (SPE) online acoplada por column-switching (CS) &agrave; LC-MS/MS. Dois MIPs (MIP1 e MIP2) foram sintetizados utilizando ofloxacino como mol&eacute;cula molde, &aacute;cido metacr&iacute;lico como mon&ocirc;mero e, etileno glicol dimetacrilato (MIP1) ou trimetilpropano trimetacrilato (MIP2) como agente de liga&ccedil;&atilde;o cruzada. O glicerol dimetacrilato e hidroximetil dimetacrilato foram utilizados para promover a forma&ccedil;&atilde;o de uma superf&iacute;cie hidrof&iacute;lica sobre os MIP1 e MIP2 (RAMIP1 e RAMIP2). Os pol&iacute;meros sintetizados (MIP1, MIP2, RAMIP1 e RAMIP2) foram acondicionados em colunas de 21,7 x 2,0 mm e empregados para an&aacute;lise direta das matrizes em um sistema de CS-LC-MS/MS online, para avalia&ccedil;&atilde;o da seletividade, exclus&atilde;o de macromol&eacute;culas e recupera&ccedil;&atilde;o relativa do processo. As fases sintetizadas foram recobertas com &aacute;cidos h&uacute;micos (MIP1-AH, MIP2-AH, RAMIP1-AH, RAMIP2-AH) e foram comparadas a fase extratora HLB-AH quanto a seletividade e capacidade de exclus&atilde;o de prote&iacute;nas e &aacute;cidos h&uacute;micos. Os pol&iacute;meros sintetizados mostraram-se seletivos para a an&aacute;lise de fluoroquinolonas quando comparados com poss&iacute;veis interferentes, em especial o MIP1 e MIP-AH, com seletividade maior em rela&ccedil;&atilde;o &agrave; apresentada pelas fases comerciais HLB Oasis&reg; e StrataX&reg;. Al&eacute;m disso, foi poss&iacute;vel eliminar cerca de 92-100% de prote&iacute;na quando percolada uma solu&ccedil;&atilde;o aquosa de 44 mg mL-1 de albumina s&eacute;rica bovina (BSA) e de 94-96% quando percolada uma solu&ccedil;&atilde;o aquosa de 6 mg mL-1 de &aacute;cido h&uacute;mico. A efici&ecirc;ncia relativa do processo de preparo de amostra apresentada pelos pol&iacute;meros sintetizados foi compar&aacute;vel &agrave; da fase comercial, no entanto o desvio padr&atilde;o relativo (DPR) apresentado pela fase HLB foi maior. O pol&iacute;mero MIP1-AH apresentou melhor efici&ecirc;ncia no processo de extra&ccedil;&atilde;o para a maioria dos analitos quando analisado em matriz de esgoto preparado em laborat&oacute;rio e esgoto sanit&aacute;rio enquanto que as fases MIP2 e RAMIP1 apresentaram um melhor desempenho na extra&ccedil;&atilde;o dos analitos em matriz de efluente de ETE. Em suma, o efeito matriz mostrou-se ainda persistente devido &agrave; complexidade das matrizes avaliadas, o que foge &agrave; idealidade para que se tenha detec&ccedil;&atilde;o de fluoroquinolonas em baix&iacute;ssimas concentra&ccedil;&otilde;es, como objetivo desse trabalho. Dessa forma, para que o m&eacute;todo possa ser utilizado para an&aacute;lise de amostras reais &eacute; necess&aacute;ria a compatibiliza&ccedil;&atilde;o das matrizes durante a valida&ccedil;&atilde;o do m&eacute;todo. / The increased use of antibiotics has led to a higher presence of these molecules into environment. Therefore, there is a raising concern on this matter, since antibiotics may yield microorganisms resistant to their effects. Aiming to monitoring the presence, persistence and destination of these drugs on the environment, there is an urge for the development of highly sensitive analytical methods, capable of detecting at the &#956;g L-1 to the ng L-1 concentration levels. In this fashion, this thesis focuses on the synthesis of selective sorbents such as molecular imprinted polymers (MIP) and restricted access molecular imprinted polymers (RAMIP) for the analysis of complex water samples containing fluoroquinolones. Additionally, it includes the use of these sorbents by online solid phase extraction (SPE) coupled to LC-MS/MS, using a column-switching (CS) setup. Two MIPs (MIP1 and MIP2) were synthesized using ofloxacin as template, methacrylic acid as monomer and ethylene glycol dimethacrylate (MIP1) or trimethylpropane trimethacrylate (MIP2) as cross-linking agent. The glycerol dimethacrylate and hydroximethyl dimethacrylate were employed to promote the formation of a hydrophilic surface layer on MIP1 and MIP2 (RAMIP1 and RAMIP2). The synthesized polymers (MIP1, MIP2, RAMIP1, RAMIP2) were packed into 21,7 x 2,0 mm columns and used for the direct analysis of complex water matrices using an online CS-LC-MS/MS system, for the evaluation of the selectivity, macromolecules exclusion and relative process efficiency. The synthesized phases were coated with humic acids (MIP1-AH, MIP2-AH, RAMIP1-AH, RAMIP2-AH) and were compared to the extraction phase HLB-AH regarding its selectivity and capability of proteins and humic acid exclusion. The synthesized polymers displayed selectivity for the analysis of fluoroquionolones when compared to the possible interferents, specially the MIP1 and MIP1-AH, with a higher selectivity when compared with the commercial phases Oasis&reg; HLB and Strata X&reg;. Additionally, when percolating an aqueous solution containing 44 mg mL-1 of bovine seric albumin (BSA) it was possible to eliminate ca. 92-100% of the proteins and 94-96% of exclusion was obtained when percolating an aqueous solution containing 6 mg mL-1 of humic acid. The relative process efficiency of sample preparation resulted from the synthesized polymers was comparable to that of the commercial phase, however the relative standard deviation (RSD) for the HLB phase was higher. The polymer MIP1-AH displayed better efficiency for the extraction process for most of the analytes on both sewage matrices, the one prepared on the laboratory and the sanitary one. The phases MIP2 and RAMIP1 presented a better performance for the extraction of analytes in effluents of a wastewater treatment plant. In conclusion, the matrix effect showed to be a persistent effect, given the complexity of the matrices analyzed. This fact is far from an ideal condition of detecting fluoroquinolones in real-life application where they are present at very low concentrations. In this sense, for the application of this method for real samples, a strategy of matrix matching would be needed during the validation of the method.

Orientador: Vanderlan da Silva Bolzani / Banca: Eduardo Maffud Cilli / Banca: Luis Octávio Regasini / Resumo: Peptídeos cíclicos compreendem uma classe de substâncias que ocorrem em algumas plantas superiores e que exibem uma ampla quantidade de atividades biológicas. Estes compostos bioativos vem despertando o interesse de setores estratégicos no desenvolvimento de fármacos e cosméticos devido sua característica cíclica, o que gera maior afinidade e seletividade para determinado alvo, isso ocorre pela restrição de rotação de suas ligações químicas. O estudo de orbitídeos presentes em Jatropha ribifolia e Croton sphaerogynus (Euphorbiaceae) foi dividido nas seguintes etapas: identificação e caracterização química dos compostos, síntese dos orbitídeos e atividade antitumoral. Neste estudo foi isolado e caracterizado o peptídeo ribifolina oriunda de J. ribifolia. Visando avaliar a polaridade e a carga da extremidade amino-terminal foi planejada a síntese de três peptídeos análogos, visto que substâncias com maior hidrofobicidade possuem maior atividade antitumoral de acordo com a literatura. Para tanto, o aminoácido serina foi substituído por alanina (não possui grupo hidroxila), treonina (possui um grupo metila adicional) e lisina (possui uma carga positiva na sua cadeia lateral). Os peptídeos foram sintetizados, purificados e avaliados em função anticâncer. Contudo, apenas o análogo da lisina cíclica gerou uma boa inibição de crescimento para as linhagens celulares de HCT-116 e MCF-7. Paralelamente, foi realizada a coleta da espécie C. sphaerogynus (caule e folhas) na cidade do Rio d... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Cyclic peptides comprise a class of naturally occurring compoundsin some higher plants and exhibit a wide range of biological activities. These bioactive compounds have aroused the interest from strategic sectors fordrugs and cosmetics development due to their cyclic characteristic, which generates greater affinity and selectivity used todetermine target,due the restriction of rotation of their chemical bonds. The study onorbitides present in Jatropha ribifoliaand Croton sphaerogynus(Euphorbiaceae) wasdivided into the following stages:identification and chemical characterization of compounds, synthesis of orbitidesand antitumor activity.In this study, ribifoline peptidefrom J. ribifoliawas isolated and characterized. In order to evaluate the polarity and the charged at the aminoterminus, the synthesis of three analogous peptides was planned, since substances with higher hydrophobicity have higher antitumor activity according to the literature. Therefore, the serine amino acid has been replaced by alanine (no hydroxyl group), threonine (has an additional methyl group) and lysine (has a positive charge on its side chain). The peptides were synthesized, purified and evaluated in anticancer activity. However, only the cyclic lysine analog generated good growth inhibition for the HCT-116 and MCF-7 cell lines. At the same time, the specie C. sphaerogynus(stem and leaves) was collected in the city Rio de Janeiro-RJ, the vegetal material was extracted in ethanol and fractionated in p... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Nelson Ramos Stradiotto / Resumo: O comportamento cíclico voltamétrico do acetaldeído e seu derivado foi estudado em eletrodo de gota pendente de mercúrio e carbono vítreo. Este estudo foi utilizado na otimização das condições para a detecção eletroquímica desses compostos por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (C.L.A.E.). O acetaldeído foi derivado com 2,4-dinitrofenilhidrazina (DNPHi) e o produto, a 2,4-dinitrofenilhidrazona do acetaldeído (AcH-DNPHo) foi eluida e separada por coluna de fase reversa C18 em condições isocráticas com fase móvel contendo uma mistura binária de metanol-solução aquosa de cloreto de lítio (LiCl) com concentração de 1,0 ' 10-3 M (80:20% v/v) e vazão de 1,0 mL min-1. A detecção eletroquímica (D.E.) do AcH-DNPHo foi realizada por C.L.A.E. com potencial fixado em + 1,0 V vs eletrodo de referência Ag/AgCl. O método proposto foi simples, rápido (tempo de análise 7 min.), com limite de detecção 3,80 mg L-1, altamente seletivo, e reprodutível [desvio padrão relativo 8,2% (n=12)]. A curva analítica do AcH-DNPHo foi linear na faixa compreendida de 0 - 300 mg L-1, com índice de correlação linear 0,9998. A concentração de acetaldeído determinada em amostras de álcool combustível foi de 83 - 341 mg L-1 com desvio padrão de 1 - 6 %, na variação da área de pico e recuperação superior a 99%. A quantidade do teor de acetaldeído encontrado nestas amostras foi significativamente alta e os resultados obtidos foram comparados com o método de detecção espectrofotométrica (UV/Vis) / Abstract: The cyclic voltammetric behaviour of acetaldehyde and their derivatives has been studied at a hanging drop mercury and glassy carbon electrode. This study was used to optimise the conditions for the electrochemical detection of these compounds following high-performance liquid chromatographic (H.P.L.C.) separation. The acetaldehyde was derivatized with 2,4-dinitrophenylhydrazine (DNPHi) and the product 2,4-dinitrophenylhydrazone (AcH-DNPHo) was eluted and separated by reversed-phase column C18 in isocratic conditions with mobile phase containing binary mixture of methanol-chloride littium aqueous solution with concentration 1,0 ' 10-3 M (80:20% v/v) and flow rate of 1.0 mL min-1. The electrochemical detection (E.D.) of AcH-DNPHo was performed by H.P.L.C. set at +1.0 V vs Ag/AgCl as reference electrode. The proposed method was simple, rapid (analysis time 7 min), with detection limit 3.80 mg L-1, highly selective, and reproducible [relative standard deviation 8.2 % (n=12)]. The calibration graph for AcH-DNPHo was linear in the range of 0 - 300 mg L-1 with correlation coefficient 0,9998. The concentrations of acetaldehyde determined in fuel alcohol samples was in the range of 83 - 341 mg L-1 with standard deviation of 1 - 6 %, in peak area variation and analytical recovery was >99%. The amount of acetaldehyde content found in these samples was significantly higher and the results obtained were compared to the spectrofotometric detection method (UV/Vis) / Mestre

Orientador: Manoel Lima de Menezes / Banca: Célia Maria de Sylos / Banca: Myrna Sabino / Banca: Maria Lucia Ribeiro / Banca: Helena Teixeira Godoy / Resumo: As investigações sobre a incidência de micotoxinas em alimentos são de suma importância para que esforços possam ser concentrados na prevenção, controle e na destoxificação dos produtos susceptíveis a esse tipo de contaminação. Dentre as micotoxinas existentes, a ocratoxina A, produzida por Aspergillus ochraceus, e Penicillium verrucosum é nefrotóxica, e o seu alvo secundário é o fígado. Esta micotoxina, que também apresenta atividade fortemente teratogênica em animais de laboratórios, tem sido encontrada em baixas concentrações em amostras de milho, soja, trigo, cevada, arroz, sorgo e amendoim. O brasileiro consome em média 46,8 litros de cerveja por ano, e esta tem como matéria-prima principal cevada, além de coadjuvantes como o milho e o arroz. Considerando-se que vários métodos analíticos, relatados na literatura, para a determinação das ocratoxinas A e B em diferentes tipos de amostras, sobretudo em bebidas, requerem o pré-tratamento da amostra (clean up) ou o emprego de colunas de imunoafinidade, foi desenvolvido um novo método analítico, por injeção direta da amostra de cerveja, empregando cromatografia líquida de alta eficiência, com uma coluna cromatográfica aniônica-ISRP (Internal Surface Reverse Phase). Assim foi possível efetuar a extração e pré-concentração on line da ocratoxina A (OTA) e ocratoxina B (OTB) presentes em amostras reais de cervejas. Os resultados obtidos indicaram que o método proposto é eficiente para a detecção e quantificação de OTA e OTB em cervejas. A avaliação da ocorrência destas ocratoxinas em cervejas comercializadas em Bauru e região mostraram que 7,1 % das amostras de cervejas nacionais, num total de 42 amostras, e 11,0 % das cervejas importadas num total de 09 amostras, estavam contaminadas com OTA. A OTB não foi detectada nas amostras de cervejas importadas. / Abstract: The investigations on the incidence of mycotoxins in food are crucial in order that the effords can be concentrated on prevention, control, and on the de-toxication of the products susceptible to this kind of contamination. Among the existent mycotoxins, the ochratoxins A, produced by Aspergillus ochraceus, Penicillium verrucosum and Peniciliumnomis, is nephrotoxic, and its secundary target is the liver. This mycotoxin, which also presents an activity strongly teratogenic in laboratory animals, has been found, in low concentrations, in corn, soy, wheat, barley, rice, sorghum, and peanuts samples. Brasilian people have an average ingestion of 4.8 litters of beer yearly, and beer, has as the main raw material, barley, besides corn and rice. Considering that various analytical methods reported in the literature for determining the ochratoxins A and B, in different types of samples, particularly in alcoholic beverages, require the pretreatment [clean-up] of the sample or the immunoaffinity columns,this present study proposed the development of a new analytic method, by direct injection of the beer sample, employing the high efficiency liquid chromatography, with an anionic chromatographic column ISRP(Internal Surface Reverse Phase), which possibilitate to carry out the extraction and pre-concentration on line of the Ochratoxin A (OTA) and Ochratoxin B (OTB) present in real beer samples, without the presence of interferent peaks. This study results indicated that the proposed method is effective for detection and quantitification OTA and OTB in beers. The survey of these ochratoxins occurrence in beers marketed in Bauru, and region (Sao Paulo State, Brazil), showed that 7.1% of the ochratoxins of national beers and 11.0% of the imported beers were contaminated by OTA. OTB was not detected in imported beers samples. / Doutor

Resumo: As culturas com maior potencial de contaminação do ambiente por pesticidas, são as que, ou são cultivadas em grandes áreas como a soja, o milho e a cana-deaçúcar, ou as que utilizam grandes quantidades de pesticidas por área cultivada, como é o caso do tomate e da batata. O diuron é um dos herbicidas mais utilizados no Brasil, principalmente na cultura de cana-de-açúcar que cobre mais de 70% do estado de São Paulo, sendo também utilizado na cultura de tomate e frutas. Estudos constataram que o diuron é rapidamente absorvido pelo trato gastrointestinal em ratos, sendo excretado na forma original ou metabolizado principalmente pela urina. O metabolito predominante do diuron em urina é a 3,4-diclorofenil-uréia (DCPU), que posteriormente é degradado a 3,4-dicloroanilina (DCA), mais estável. Ocorrem ainda mais dois metabólitos minoritários, a 3,4- diclorofenil-metil uréia (DCPMU) e o N,N'- Bis(p-clorofenil)uréia (4,4'-diclorocarbanilida). Este trabalho teve como finalidade otimizar e validar um método para determinação de diuron, DCA, DCPU, DCPMU e 4,4'-diclorocarbanilida em urina de ratos, aplicando o método validado à analise de amostras de urina de animais incluídos no estudo temático que investiga o mecanismo de carcinogenicidade do diuron (sub-projeto: "Estudo do modo de ação (MOA) cancerígeno do Diuron sobre o urotélio de ratos Wistar machos"). O método otimizado e validado neste trabalho permite a análise de diuron e metabólitos em 1 ml de urina, utilizando SPE no preparo da amostra para análise e HPLC/UV ( l = 250 nm) na separação e quantificação dos analitos. A seletividade do método permite a análise de diuron, DCA, DCPU e 4-4 diclorocarbanilida em urina de ratos Wistar. Para o DCPMU existem há co-eluição de outros constituintes da amostra com este pico, por isso a análise para esta molécula demanda a confirmação pela pureza do pico... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The crops with the greatest potential for environmental contamination by pesticides, are cultivated in large areas such as soybean, corn and sugar cane, or those that use large quantities of pesticides by cultivated area, as tomatoes and potatoes. The herbicide diuron is one of the most used in Brazil, mainly for sugar cane which, that covers more than 70% of the São Paulo State and is also used in the cultivation of tomatoes and other fruits. Studies found that diuron is rapidly absorbed from the gastrointestinal tract in rats and is excreted in its original form or metabolized mainly by the urine. The predominant metabolite of diuron in urine is 3.4- dichlorophenyl-urea (DCPU), which is subsequently degraded to 3,4-dichloroaniline (DCA), more stable. Occur further two minor metabolites, the 3,4 - dichlorophenylmethyl urea (DCPMU) and N,N'-Bis (p-chlorophenyl) urea (4,4-dichlorocarbanilide). This work aimed to optimize and validate a method for analysis of diuron, DCA, DCPU, DCPMU and 4,4-dichlorocarbanilide in urine of rats, using the validated method to application to urine samples from animals included in a thematic study that investigates the diuron mechanism of carcinogenicity (sub-project: " Estudo do modo de ação (MOA) cancerígeno do Diuron sobre o urotélio de ratos Wistar machos"). The method optimized and validated in this study allows the analysis of diuron and metabolites in 1 ml of urine using SPE for sample preparation and HPLC/UV analysis ( l = 250 nm). The selectivity of the method allows the analysis of diuron, DCA, DCPU and 4-4 dichlorocarbanilide in urine of Wistar rats. DCPMU co-elutes with some other sample constituents, so the analysis for this molecule demand confirmation by the purity of the peak. Method quantification limit was 20 μg mL-1 for diuron and DCA. The accuracy of the method, evaluated by analytes recoveries from spiked samples, were between... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Mary Rosa Rodrigues de Marchi / Coorientador: Wagner Vilegas / Banca: Rosangela Gonçalves Peccinini / Banca: Valdemar Luiz Tornisielo / Mestre

Orientador: Mary Rosa Rodrigues de Marchi / Coorientador: Marisa Veiga Capela / Banca: Eduardo Bessa Azevedo / Banca: Sandro José de Andrade / Resumo: A análise da literatura aponta para um crescente número de trabalhos em matrizes ambientais que buscam identificar e quantificar diversas substâncias poluentes. O estudo destas substâncias resulta em grandes conjuntos de dados, que necessitam ser devidamente analisados para a interpretação mais confiável possível. Por outro lado, os métodos analiticos utilizados nestas determinações envolvem diversas etapas e parâmetros que podem influenciar na confiabilidade analítica. Resultados analíticos sem confiabilidade identificada podem levar a tomada de decisões totalmente equivocadas na área ambiental. Neste contexto, é fundamental que os laboratórios disponham de meios e critérios objetivos para demonstrar que os métodos de ensaio que executam conduzem a resultados confiáveis e adequados à qualidade pretendida. Este trabalho teve como objetivo o estudo de procedimentos estatisticos e quimiométricos na determinação dos hidrocarbonetos policíclicos aromáticos (HPAs) empregando a cromatografia líquida de alta performance com detecção por fluorescência (HPLC-FLU), enfocando a otimização estatística de procedimentos para validação do método para obtenção e tratamento de sinais analíticos dos HPAs, bem como o estudo do comportamento dos analitos em diferentes matrizes ambientais. Neste sentido foram utilizadas ferramentas quimiométricas, como análise de componentes principais, analise hierárquica de agrupamentos e técnicas de planejamento experimental para analise exploratória dos dados e indicação das similaridades cromatográficas entre os HPAs e do perfil destes em matrizes ambientais. Também foram realizados testes estatísticos inferenciais e descritivos cujas ferramentas foram implementadas em planilhas de cálculo para utilização em procedimentos necessários a parâmetros de validação, como estabilidade de soluções, linearidade, limites de detecção e quantificação, recuperação e efeito matriz / Abstract: The literature review points to a growing number of studies in environmental matrices which identify and quantify various pollutants. The study of these substances results in large data sets that need to be properly considered for the interpretation to be as more reliable as possible. On the other hand, the analytical methods used in these determinations involve several steps and parameters that can influence the analytical reliability. Analytical results that do not identify reliability can lead to completely flawed decision-making in the environmental area. In this context, it is essential laboratories to have adequate and objective criteria to demonstrate that the test methods performed lead to reliable results and appropriate to the desired quality. This work aimed to study the statistical and chemometric procedures for the determination of polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs) by liquid chromatography high performance with fluorescence detection (HPLC-FLU). It focuses on the optimization of statistical procedures for validating the method for obtaining and processing signals from analytical PAH as well as the study of the behavior of different analytes in environmental matrices. In this sense were used chemometric tools, such as principal component analysis, hierarchical cluster analysis and experimental design techniques for exploratory data analysis, indicating the similarities between PAH and chromatographic profile in environmental matrices. Tests were made descriptively and use of inferential statistical tools which have been implemented in spreadsheets for use in procedures required for validation parameters, such as stability of solutions, linearity, limits of detection and quantification, recovery and matrix effect. For studies on PAHs was determined as the optimal use of 5 replicates, the use of labor standards for a maximum period of 30 days and the development of analytical curves in the matrix / Mestre

Orientador: Mary Rosa Rodrigues de Marchi / Banca: Raquel Fernandes Pupo Nogueira / Banca: Maria Aparecida Marin Morales / Banca: Marco Tadeu Grassi / Banca: Sandro Navickiene / Resumo: Estrógenos naturais e sintéticos são microcontaminantes emergentes continuamente lançados no ambiente, incluídos na classe de substâncias capazes de afetar a saúde, crescimento e reprodução de organismos aquáticos e humanos, os alteradores endócrinos. A ocorrência de estrógenos foi investigada em água e material particulado em suspensão (SPM) de dois importantes mananciais inseridos na Unidade de Gerenciamento de Recursos Hídricos do Estado de São Paulo (UGRHI 13 - Tietê/Jacaré), receptores de efluente in natura (Rio Bauru) ou tratado (Ribeirão das Cruzes), utilizando métodos de extração em fase sólida (SPE) para água, extração sólido-líquido para SPM e QuEChERS para sedimentos, desenvolvidos com critérios de confiabilidade analítica (exatidão, precisão, seletividade, robustez e avaliação de efeito matriz) seguido de análise simultânea por HPLC-FLD-UV em modo de eluição isocrático (60:40, MeCN:H2O ambos à 0,1% H3CCOOH) e coluna C18. Os limites de detecção e quantificação dos métodos foram determinados para ambos os detectores e variaram, respectivamente, de 0,009- 1200 ng mL-1 e 0,03-1700 ng mL-1 (FLD) e 0,4-1,8 μg mL-1 e 0,6-2,6 μg mL-1 (UV) para as amostras de água, de 1,0-28,5 ng g-1 e 1,6-42,7 ng g-1 (FLD) para as amostras de sedimento e, de 290-430 ng g-1 e 450-630 ng g-1 (FLD) e 90-160 ng g-1 e 130-230 ng g-1 (UV) para as amostras de MPS. Os métodos apresentaram valores de recuperação média e coeficiente de variação entre 60 - 139% e 0,5 - 20%, nesta ordem. A distribuição dos estrógenos nos compartimentos aquáticos foi distinta para os mananciais e as maiores concentrações desses compostos foram encontradas na fase aquosa (0,02-17 ng mL-1) e material em suspensão (791,8-14403,8 ng g-1) do Rio Bauru. As amostras foram submetidas a ensaios in vivo (enzimas de biotransformação e defesa antioxidantes) e in vitro (RYA) para avaliar a toxicidade e possível impacto ambiental... / Abstract: Natural and synthetic estrogens are emerging microcontaminants daily released to the environment, included in class of substances that may affect health, growth and reproduction of aquatic organisms and humans, the endocrine disrupters. Occurrence of estrogens has been researched in surface water and suspended particulate matter (SPM) in two important aquifers inserted into the Comitê da Bacia Hidrográfica Tietê-Jacaré (UGRHI 13 - Tietê/Jacaré) , effluent untrated (Bauru River) or treated (Ribeirão das Cruzes) receivers, employing solid phase extraction (SPE) for water , solid-liquid extraction for MPS and QuEChERS for sediments developed reliable analytical criteria (accuracy, precision, selectivity, robustness and evaluation of matrix effect) followed by simultaneous analysis HPLC-FLD-UV in isocratic elution (60:40 MeCN:H2O both 0.1% H3CCOOH) and C18 analytical column. Methods detection and quantification limits were established for FLD and UV detectors. It ranged from 0.009 - 1200 ng mL-1 and 0.03 - 1700 ng mL-1 (FLD) and 0.4 - 1.8 mg mL-1 and 0.6 - 2.6 mg mL-1 (UV) to surface waters; from 1.0 - 28.5 ng g-1 and 1.6 - 42.7 ng g-1 (FLD) for sediment and 290 - 430 ng g-1 and 450 - 630 ng g-1 (FLD) and 90 - 160 ng g-1 and 130 - 230 ng g-1 (UV) for MPS. Recoveries of every method ranged from 60 - 139 % with relative standard deviations 0.5 - 20%. The estrogens partition in aquatic compartments was otherwise for rivers and highest compounds concentrations were found in Bauru River aqueous phase (0.02 - 17 ng mL-1) and suspended solids (791.8 - 14403.8 ng g-1). The samples were submitted to in vivo (biotransformation enzymes and antioxidants defenses) and in vitro (RYA) assays in order evaluate toxicity and environmental impact. All samples showed estrogenic activity with EEQ ranged from 1.0 - 880.0 nM in the RYA for surface water and 0.4 - 56.7 nM for MPS. Additionally, changes has been observed in phase Ι and ΙΙ besides... / Doutor

A crescente demanda por água doce de boa qualidade, associada ao aumento na frequência de florações tóxicas de cianobactérias em reservatórios utilizados para consumo humano, levou à publicação da Portaria nº. 518/04 pelo Ministério da Saúde. Entre outros parâmetros de potabilidade, as empresas fornecedoras de água tratada devem realizar o monitoramento de cianotoxinas. Para tanto, métodos analíticos rápidos e precisos para a determinação destes compostos são imprescindíveis. Neste contexto, o presente trabalho teve como objetivo empregar a cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas para o estudo das principais cianotoxinas em território nacional: microcistinas, anatoxina-a(s), cilindrospermopsina e saxitoxinas. Os resultados obtidos estão distribuídos em capítulos específicos dedicados a cada grupo de toxinas. Dessa forma, o primeiro capítulo apresenta um estudo de fragmentação na fase gasosa de ânions de microcistinas em um equipamento do tipo orbitrap. É demonstrado que o modo negativo de ionização por electrospray fornece informações estruturais importantes e complementares ao modo positivo de ionização. Uma abertura seletiva do peptídeo cíclico é proposta e mecanismos discutidos, o que facilita a interpretação de resultados durante a caracterização de variantes desconhecidas. O modelo de fragmentação desenvolvido foi utilizado para identificar a variante [Leu1]MC-LR em um extrato de Microcystis spp. O segundo capítulo descreve metodologias qualitativas de LC/MS para o monitoramento e identificação do organofosforado natural anatoxina-a(s), cuja análise é prejudicada pela ausência de padrões comerciais. A cromatografia de interação hidrofílica foi empregada e mecanismos de fragmentação na fase gasosa propostos, discutindo-se os íons característicos desta estrutura química. Tal modelo permitiu a identificação desta toxina nas cepas de Anabaena oumiana ITEP-25 e ITEP-26 pela primeira vez. O terceiro capítulo disserta sobre os mecanismos de fragmentação na fase gasosa da toxina cilindrospermopsina quando ionizada por electrospray na forma de aduto com metais alcalinos. Diferenças nas vias de fragmentação são demonstradas de acordo com o raio atômico do metal formador do aduto, com implicações práticas na sua determinação cromatográfica. Já o quarto capítulo discute os mecanismos de fragmentação de variantes sulfatadas de saxitoxinas (GTX1e4, GTX2e3, dcGTX2e3, GTX5) após ionização por electrospray no modo positivo e negativo. É demonstrado pela primeira vez que uma conformação estrutural específica do grupamento sulfato explica a intensa eliminação de SO3 observada para as variantes GTX1, GTX2 e dcGTX2 no modo positivo de ionização. Por outro lado, o modo negativo de ionização apresenta vantagens uma vez que a dissociação na fonte é insignificante se comparada à dissociação observada no modo positivo. Como resultado, métodos quantitativos no modo negativo podem apresentar maior sensibilidade, permitindo a detecção destas toxinas em amostras ambientais em quantidades mais baixas. De maneira geral, conclui-se que a cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas é ferramenta poderosa para a análise quali e quantitativa das principais cianotoxinas, podendo ser amplamente empregada para o monitoramento de água para consumo humano. / The increasing occurrence of toxic cyanobacterial blooms in reservoirs used to supply drinking water for human consumption has prompted the publication of resolution 518/04 by the Brazilian Ministry of Health. Among other quality requirements, the monitoring of cyanotoxins in treated water is mandatory for companies responsible for potable water distribution. Therefore, precise and rapid analytical methods are essential. In this context, the aim of this work is to employ liquid chromatography coupled to mass spectrometry to study the most important cyanotoxins in our country: microcystins, anatoxin-a(s), cylindrospermopsis and saxitoxins. The obtained results are distributed in four chapters, each one dedicated to a single group of toxins. In this way, chapter one presents the gas-phase fragmentation behavior of deprotonated microcystins in an Orbitrap instrument. It is demonstrated that electrospray negative ionization can provide significant structural information about microcystins. These results are complementary to the positive ionization mode. A selective ring opening process is proposed and possible mechanisms are discussed, which may facilitate data interpretation when unknown variants are considered. The general fragmentation model was further applied to the characterization of [Leu1]MC-LR in a Microcystis spp. cell extract. The second chapter describes qualitative analytical methods for the identification of anatoxin-a(s), a natural organophosphate whose determination is hampered by the lack of commercial standards. Hydrophilic interaction liquid chromatography was employed and fragmentation mechanisms proposed, identifying the characteristic product ions of this toxin. The developed methods were further used to identify anatoxin-a(s) for the first time in Anabaena oumiana strains ITEP-25 and ITEP-26. The third chapter presents data related to the gas-phase fragmentation behavior of cylindrospermospin when this toxin is ionized as metal adducts. Different fragmentation pathways are accessed depending on the atomic radius of the metal cation involved. Practical implications for the chromatographic analysis of this toxin are presented. The last chapter describes the fragmentation behavior of sulphate-containing saxitoxin variants (GTX1&4, GTX2&3, dcGTX2&3, GTX5) after electrospray ionization in both the positive and negative modes. A mechanism for the intense SO3 elimination from [M+H]+ ions from GTX1, GTX2 and dcGTX2 is proposed for the first time and relies on a specific structure conformation. On the other hand, the negative ionization mode shows much less in-source dissociation when compared to the positive mode. As a consequence, methods based on negative ionization might be more sensitive for sulfate-containing variants, allowing the detection of lower amounts of these toxins in environmental samples. At the end, it can be concluded that liquid chromatography is a well-suited and powerful technique for the qualitative and quantitative analysis of cyanotoxins, being an invaluable contribution to water safety evaluation.