CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / As serpentes do gÃnero Crotalus estÃo representadas no Brasil por apenas uma espÃcie, a Crotalus durissus, o envenenamento pela sub-espÃcie Crotalus durissus cascavella conduz à alteraÃÃo sistÃmica, sendo responsÃvel pela causa preliminar de morte apÃs o acidente ofÃdico. Este trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos farmacolÃgicos do veneno da serpente Crotalus durissus cascavella â Ce (Cdcasca). Neste trabalho estudou-se as aÃÃes do Cdcasca no sistema vascular, avaliando os parÃmetros fisiolÃgicos da pressÃo arterial e analisando as alteraÃÃes histolÃgicas no coraÃÃo, pulmÃo, rim, cÃrebro e fÃgado retirados apÃs os experimentos de pressÃo arterial. A atividade citotÃxica do Cdcasca foi avaliada em quatro linhas humanas de cÃlulas tumorais: leucemia, tumor de mama, tumor de cÃlon e tumor do sistema nervoso. Realizou-se uma investigaÃÃo do provÃvel mecanismo de aÃÃo do Cdcasca utilizando-se as metodologias de viabilidade celular por exclusÃo de Azul de Tripan, inibiÃÃo na sÃntese de DNA, atividade antiproliferativa de cÃlulas mononucleares (Alamar Blue). A integridade da membrana celular, fragmentaÃÃo do DNA e a alteraÃÃo do potencial transmembrÃnico mitocondrial foram analisados por citometria de fluxo. Investigou-se a aÃÃo do PeptÃdeo NatriurÃtico (NPcasca) isolado do veneno da Cdcasca nos sistemas de pressÃo arterial, anel de aorta e perfusÃo renal. ApÃs a perfusÃo renal, os rins foram submetidos à anÃlise histolÃgica e ao estudo da biologia molecular. Todos os parÃmetros estudados foram analisados pelo ANOVA e Student t-test, com p<0,05. Observou-se que o Cdcasca no sistema vascular causou uma diminuiÃÃo significativa nas freqÃÃncias cardÃaca e respiratÃria, bem como na pressÃo arterial mÃdia, havendo um aumento na produÃÃo de Ãxido nÃtrico no sangue dos animais tratados. Realizou-se o bloqueio farmacolÃgico com L-Name e os efeitos nas freqÃÃncias cardÃaca e respiratÃria e na pressÃo arterial mÃdia foram abolidos. O veneno bruto Cdcasca nÃo apresentou efeitos no leito vascular arteriolar mesentÃrico. O veneno bruto da Cdcasca foi fortemente citotÃxico na linhagem tumoral de leucemia, onde ocorreu uma diminuiÃÃo na viabilidade celular, bem como um aumento na fragmentaÃÃo do DNA. O NPcasca diminuiu as freqÃÃncias cardÃaca e respiratÃria e pressÃo arterial mÃdia. Ocorreu um aumento na produÃÃo de nitrito no sangue dos animais tratados. Nos experimentos de anel de aorta onde utilizou-se o NPcasca, observou-se um relaxamento dependente de endotÃlio. O NPcasca promoveu aumento significativo na pressÃo de e na resistÃncia vascular renal. O fluxo urinÃrio e o ritmo de filtraÃÃo glomerular tambÃm aumentaram significativamente. As alteraÃÃes histolÃgicas dos rins perfundidos foram discretas, comparando-as com as alteraÃÃes observadas com o veneno total. Nos experimentos com rim isolado nÃo houve alteraÃÃo de expressÃo gÃnica de mediadores inflamatÃrios. AtravÃs destes resultados concluÃmos que algum componente do veneno Cdcasca seja responsÃvel pelo efeito hipotensor e citotoxicidade em cÃlulas tumorais. O NPcasca apresentou um efeito hipotensor e aumentou a diurese e natriurese. NÃo houve alteraÃÃo de expressÃo gÃnica de mediadores inflamatÃrios no tecido renal / The snakes from the genus Crotalus in Brazil are represented by only one specie, Crotalus durissus. The poisoning by a sub-specie Crotalus durissus cascavella leads to systemic alterations, and is responsible for preliminary cause of death after the ophidic accident. This study aimed to evaluate the pharmacological effects of the snake venom Crotalus durissus cascavella - Ce (Cdcasca). This work looked at the actions of Cdcasca on the vascular system, assessing the physiological parameters of blood pressure and analyzing the histological changes in the heart, kidney, lung, brain and liver removed after the trials of blood pressure. The cytotoxic activity of Cdcasca was examined in four lines of human tumor cells: leukemia, breast tumor, colon tumor and nervous system tumor. There was an investigation of the likely mechanism of action of Cdcasca using the methods of viability cell by the exclusion of Trypan Blue, inhibition in the synthesis of ADN, antiproliferative activity of mononuclear cells (Alamar Blue). The integrity of the cell membrane, the ADN fragmentation and alteration of the mitochondrial transmembranic potential were analyzed by flow cytometry. It was Investigated the action of a Natriuretic Peptide (NPcasca) isolated from the venom of Cdcasca on a blood pressure system, on aortic rings assay and renal perfusion. After renal perfusion, the kidneys were subjected to histological analysis and study of its molecular biology. All parameters studied were analyzed by ANOVA and Student t-test, p <0.05. It was observed that the Cdcasca on the vascular system caused a significant decrease in heart and respiratory rates, and in the mean arterial pressure, with an increase in the production of nitric oxide in the blood of treated animals. There was made a pharmacological blockade with L-Name and the effects on heart and respiratory rates and mean arterial pressure were abolished. The total venom Cdcasca did not produced effects on the arteriolar mesenteric vascular bed. The whole venom Cdcasca was strongly cytotoxic on tumor line for leukemia, where there was a decrease in cell viability, as well as an increase in fragmentation of ADN. The NPcasca produced a decreased in heart and respiratory rates, and in the mean arterial pressure, with an increase in the production of nitric oxide in the blood of treated animals. In the experiments using NPcasca on aortic rings, there was a vasorelaxation dependent on endothelium. The NPcasca promoted a significant increase in perfusion pressure, and in renal vascular resistance. The urinary flow and the glomerular filtration rate also increased significantly. The perfused kidneys histological alterations were discrete, compared to the changes observed by the total venom Cdcasca. In experiments with isolated kidneys there was no change in gene expression of inflammatory mediators. Through these results we conclude that any component of poison Cdcasca is responsible for lowering effect and cytotoxicity in tumor cells. The NPcasca presented a hypotensive effects and increased the diuresis and natriurese. There was no change in gene expression of inflammatory mediators in kidney tissue

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:02:40Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo1195_1.pdf: 502946 bytes, checksum: 05de27e9cfcaa96d9a0be29bebb8ff1d (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Cascavéis mantidas em cativeiro sob estresse térmico apresentam redução na velocidade da digestão, alterações quantitativa e qualitativa da peçonha, o que sugere a modulação de genes relacionados à aclimatação a baixas temperaturas. O presente trabalho visou clonar uma fosfolipase e avaliar a expressão de genes relacionados a estresse em glândulas de peçonha de cascavéis da espécie Crotalus durissus cascavella (Cdcasca) submetidas a estresse térmico. Para tanto, a clonagem do cDNA de uma nova PLA2 foi realizada a partir da biblioteca de cDNA da glândula de peçonha de Cdcasca. A seqüência de aminoácidos deduzida dessa PLA2 indica que essa se enquadra no grupo das PLA2s ácidas, da classe II, cujos membros apresentam atividade enzimática. A fim de verificar o padrão de expressão após estresse térmico, os cDNA de glândulas de três cascavéis, provenientes da mesma ninhada, submetidas a extração da peçonha e, posteriormente, a temperaturas de 18°C (frio), 28 °C (controle) e 40° C (calor), por três dias, foram preparados e os transcritos de PLA2 e de proteínas de choque térmico (HSP70, HSP90, e HSF1) quantificados por PCR em tempo real. Os resultados mostraram que os níveis de transcritos de PLA2 foram 5,24 vezes mais altos nas glândulas de peçonha da serpente mantida no frio em relação ao controle, enquanto os transcritos de PLA2 das glândulas da serpente mantida no calor não apresentaram diferenças significativas. Os níveis de transcritos das HSPs e seu fator de transcrição (HSF1) não variaram de maneira apreciável na amostras. Os resultados provaram, pela primeira vez, influência da baixa temperatura na expressão de uma toxina na glândula de peçonha de C. d. cascavella, sugerindo que essas serpentes podem adaptar a composição da peçonha à condição de estresse térmico