Thesis (Ph. D.)--University of Wisconsin--Madison, 1940. / Typescript. Includes abstract and vita. eContent provider-neutral record in process. Description based on print version record. Includes bibliographical references (leaves 35-38).

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:05Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-12-16Bitstream added on 2014-06-13T20:42:38Z : No. of bitstreams: 1 viana_cltp_dr_jabo.pdf: 3925525 bytes, checksum: 481305986effd42e171c9be8a7117ddf (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O trabalho foi desenvolvido no Laboratório de Biologia e Criação de Insetos (LBCI) da FCAV - Unesp com objetivo geral de estudar influência de gerações de Plutella xylostella (L.) (Lepidoptera: Plutellidae) e de radiação no desempenho de isolados de Bacillus thuringiensis Berliner. A linhagem e os isolados foram provenientes do estoque do Laboratório de Biologia de Bactéria e Biotecnologia Aplicada da FCAV - Unesp. A concentração de esporo-cristal para iniciar a metodologia de pressão de seleção foi determinada pela análise de probit, sendo o valor de 6x106 esporos/mL. Esta população foi submetida a bioensaios com diferentes concentrações da linhagem HD-1, do isolado T08.024 e do produto comercial Agree® (Bacillus thuringiensis var. aizawai e proteína cristal de B. thuringiensis var. kurstaki) em várias gerações da seleção. Paralelamente, avaliou-se a suscetibilidade de lagartas de P. xylostella da criação mantida no LBCI a diferentes isolados patogênicos e com potencial de virulência. Também se realizou um estudo sobre ação da radiação ultravioleta na patogenicidade do isolado T08.024 por diferentes intervalos de exposição a radiação em laboratório e em campo. A metodologia de pressão de seleção foi estabelecida a partir da oitava geração onde se obteve mais que 50% de sobrevivência. Da geração 8 em diante passou-se a pulverizar concentrações mais altas desta linhagem, de acordo com o padrão de mortalidade apresentado em cada bioensaio na geração anterior. A viabilidade larval foi significativamente influenciada pelos tratamentos dentro das gerações. Entre gerações houve redução na mortalidade para o tratamento HD-1 na concentração de 3x108 esporos/mL. O padrão de suscetibilidade da criação estoque do LBCI foi alto (100% de mortalidade) para todas as concentrações testadas... / This work was conducted at the Laboratório de Biologia e Criação de Insetos (LBCI) of FCAV - Unesp (LBCI), with the general objective of studying the influence of generations of Plutella xylostella (L.) (Lepidoptera: Plutellidae) and the radiation performance of Bacillus thuringiensis Berliner. The strain and the isolates were from the Laboratório de Biologia de Bactéria e Biotecnologia Aplicada da FCAV-Unesp stock. The concentration of sporecrystal to the method of selection pressure was determined by probit analysis, and the value used was 6x106 spores / mL. This population was subjected to bioassays using different concentrations of HD-1 strain, Agree® and of T08.024 strain on several generations of selection. In parallel, it was evaluated the susceptibility of larvae of P. xylostella maintained in the LBCI different to pathogenic isolates and virulence potential. Also it was conducted a study in verify he action of ultraviolet radiation on the isolate T08.024 pathogenicity for different intervals of exposure to radiation in laboratory and field. The methodology of selection pressure was established from the eight generation where was obtained more than 50% of survival. From generation eight began the spray higher concentrations of HD-1 strain, according to the standard mortality presented in each test in the previous generation. The larval survival was significantly influenced by treatments within the generations. Between generations, mortality has been reduced to the HD-1 treatment at a concentration of 3x108 spores / mL. The susceptibility of LBCI standard population was high (100% mortality) for all concentrations tested to the eight strains. Ultraviolet radiation did not affect the pathogenicity of the T08.024 strain.

Made available in DSpace on 2014-12-02T11:16:52Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-05-25Bitstream added on 2014-12-02T11:21:18Z : No. of bitstreams: 1 000792203.pdf: 666866 bytes, checksum: 2777008a28025b2358c1aa9fc11307d9 (MD5) / Plutella xylostella (Linnaeus, 1758) (Lepidoptera: Plutellidae), a traça-das-crucíferas, é um dos principais insetos-praga de crucíferas (Brassicaceae) no Brasil e em todo o mundo. Embora possa ser controlada tanto com inseticidas sintéticos como biológicos, populações de P. xylostella podem ser selecionadas rapidamente para a resistência a vários inseticidas químicos ou biológicos. Além disso, diferentes populações de P. xylostella podem surgir devido ao isolamento geográfico, resultando em isolamento reprodutivo e em populações fisiologicamente distintas, com diferentes sensibilidades a várias táticas de controle. Tal variação requer sistemas de gestão adaptados às populações em particular. Os bioinseticidas mais comuns utilizados para controlar P. xylostella baseiam-se na bactéria entomopatogênica Bacillus thuringiensis (Bacillaceae) (Bt). Apesar de muitos estudos focarem a ação do Bt em diversas pragas agrícolas, como P. xylostella, por exemplo, muitas dúvidas ainda persistem particularmente quanto aos seus efeitos subletais, mecanismo de ação e toxicidade das proteínas Bt. Assim, o objetivo desta pesquisa foi analisar a virulência e os efeitos subletais de proteínas Cry, bem como investigar fatores que afetam a suscetibilidade de insetos ao Bt (níveis de proteína, bactérias do intestino médio e mutações no gene ABCC2) em cinco populações brasileiras e uma da Inglaterra de P. xylostella. Foram realizados bioensaios de suscetibilidade com 5 populações brasileiras (PC, PA, Px, SBT e Bt) e uma da Inglaterra (UK) de P.xylostella e as proteínas Cry1Ac, Cry2Aa e Cry1IE de B. thuringiensis, estimando-se a virulência e avaliando os efeitos subletais das toxinas. Como as toxinas Cry2Aa e Cry1IE não causaram mortalidade nas lagartas de todas as populações, os testes foram realizados apenas com Cry1AC. Também foram conduzidos experimentos enzimáticos e ... / Plutella xylostella (Linnaeus , 1758) (Lepidoptera: Plutellidae), diamonback moth, is a major insect pest of crucifers (Brassicaceae) in Brazil and worldwide. Although it can be controlled with synthetic insecticides such as biological products, populations of P. xylostella can be quickly selected for resistance to several chemical or biological insecticides. In addition, different populations of P. xylostella may arise due to geographic isolation, resulting in reproductive isolation and physiologically distinct populations with different sensitivities to various control tactics. This variation requires management systems tailored to particular populations. The most common insecticides used to control P. xylostella based on entomopathogenic bacterium Bacillus thuringiensis (Bacillaceae) (Bt). Although many studies focus on the action way of Bt to several agricultural pests such as P. xylostella, for example, many doubts still persist particularly regarding their sublethal effects, mechanism of action and toxicity of Bt proteins. The objective of this research was to analyze the virulence and sublethal effects of Cry proteins, as well investigate factors affecting the susceptibility of Diamondback to Bt (protein level, the midgut bacteria and mutations in the ABCC2 gene) in five Brazilian populations and one population from England. Susceptibility bioassays with 5 Brazilian populations (PC, PA, PX, SBT and Bt) and one from England (UK) of P. xylostella and Cry1Ac, Cry2Aa, and Cry1IE Bt toxins were performed by estimating its virulence and sublethal effects. How Cry2Aa Cry1IE toxins did not cause larvae mortality for all populations, tests were performed just with Cry1Ac. Enzymatic and molecular experiments with the larvae guts were also performed to investigate the factors that affecting the susceptibility of insects to toxins produced by Bt. In those bioassays were analyzed total protein, the ...

Made available in DSpace on 2015-01-26T13:21:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-07-25Bitstream added on 2015-01-26T13:30:39Z : No. of bitstreams: 1 000795967.pdf: 970728 bytes, checksum: 1a9dc450a114117aa840a96d9f584e0e (MD5) / Nos últimos anos, tem crescido o interesse pela identificação de compostos naturais com potencial medicinal. O isotiocianato de alila (AITC), encontrado em plantas da família Cruciferae e composto majoritário da semente de mostarda, vem sendo avaliado quanto a sua atividade antineoplásica em bexiga devido à sua alta biodisponibilidade na urina a após ingestão. Neste estudo foram investigadas as atividades toxicogenética e toxicogenômica do AITC em linhagens celulares de carcinoma de bexiga com diferentes status do gene TP53 (RT4 – TP53 selvagem / T24 – TP53 mutado). As concentrações de AITC testadas nos ensaios de citotoxicidade, sobrevivência celular e clonogênica foram 0,005, 0,0625, 0,0725, 0,0825, 0,0925, 0,125 e 0,25 μM; nos testes do cometa, micronúcleo, ciclo celular, apoptose, morfologia e expressão gênica (ANLN, BAX, BCL-2, CDK-1, SMAD4, S100P e TP53) foram utilizadas as concentrações de 0,005, 0,0625, 0,0725, 0,0825 e 0,0925 μM. Os resultados mostraram aumento de danos primários no DNA (teste do cometa) para todas as concentrações testadas do AITC na linhagem T24 e para as concentrações mais altas (0,0725, 0,0825 e 0,0925 μM) na linhagem RT4; não foram observados aumentos nas frequências de células micronucleadas em ambas as linhagens. Nas análises de ciclo celular e apoptose foram observadas a parada do ciclo na fase G2/M para a linhagem T24 e altas taxas de apoptose precoce e necrose na linhagem RT4. Com relação à expressão gênica, houve aumento da expressão de S100P e BAX e diminuição da expressão de BCL-2 na linhagem RT4 e aumento da expressão de BCL-2, BAX e ANLN e diminuição da expressão de S100P na T24. Nenhuma alteração foi identificada para os genes SMAD4 e CDK1 nas duas linhagens tratadas com o AITC. Concluindo, o AITC foi capaz de induzir lesões primárias no DNA de células de ambas as linhagens de carcinoma de bexiga, mas que não se refletiram ... / Compounds obtained from fruits, vegetables and essential oils have been widely used to treat many diseases. The allyl isothiocyanate (AITC), also known as mustard essential oil, is found in plants of the cruciferous family and is abundant in the mustard seeds. Due to its high bioavailability in urine, AITC has been considered as a promising antineoplastic agent against bladder cancer. Therefore, the aims of this study were to investigate the toxicogenetic and toxicogenomic effects of AITC in the wild-type (RT4) and in a mutant (T24) TP53 bladder transitional carcinoma cell lines. AITC was tested at concentrations of 0.005, 0.0625, 0.0725, 0.0825, 0.0925, 0.125 and 0.25 μM in the cytotoxicity and cell and clonogenic survival assays; in the comet and micronucleus assays, flow cytometry, apoptosis and gene expression (ANLN, BAX, BCL-2, CDK-1, SMAD4, S100P e TP53) evaluations the concentrations of 0.005; 0.0625; 0.0725; 0.0825 e 0.0925 μM were used. The results showed increased primary DNA damage in T24 (0.005, 0.0625, 0.0725, 0.0825 and 0.0925 μM) and RT4 (0.0725, 0.0825 and 0.0925 μM) cells. However, no significant difference was detected in the frequency of micronucleated cells. A significant increase of cells at sub-G1 phase (0.0625, 0.0725 and 0.0825 μM) and significant decrease at S phase (0.005, 0.0625, 0.0725 and 0.0825 μM) were observed in RT4 cells after AITC treatments. In T24 cells, an increased sub-G1 rate (0.0725 and 0.0825 μM) and cell cycle arrest at G2 phase (0.0625, 0.0725 and 0.0825 μM) were detected. Furthermore, it was observed increased apoptosis and necrosis rates and increase of S100P and BAX and decrease of BCL-2 expression in the wild type TP53 cells. For the mutated TP53 cell line, increased expression of BCL-2, BAX and ANLN and decreased expression S100P were observed. No change was detected for the SMAD4 and CDK-1 genes. In conclusion, AITC was able to reach DNA and induce primary damage in both bladder ...