Resumo: Um total de 196 amostras fecais de bezerros leiteiros mestiços, de 7 a 30 dias de idade de ambos o sexos foram colhidas em 31 propriedades com o objetivo de determinar a ocorrência de Cryptosporidium na região Noroeste do Estado de São Paulo, assim como caracterizar molecularmente as espécies envolvidas nesta parasitose. Realizou-se a análise microscópica pela técnica de coloração negativa com verde malaquita em todas as amostras de fezes. Para identificação molecular de Cryptosporidium, utilizou-se a reação de nested PCR, utilizando primers específicos para amplificação de fragmentos do gene codificador da subunidade 18S do RNA ribossômico e do gene da glicoproteína GP 60, submetendo o produto da PCR a sequenciamento e análise filogenética. Por meio de exame de fezes, foi observada positividade de 2% (4/196), por meio de microscopia, e de 10,7% (21/196) pela nested PCR. Como resultado do sequenciamento, foram identificadas quatro espécies de Cryptosporidium: C. parvum (subtipo IIa15G2R1) C. ryanae, C. bovis e C. andersoni. Esta descoberta de C. parvum subtipo IIaA15G2R1 na região estudada ilustra a utilidade da subtipagem. Embora estes resultados iniciais baseados em subtipos com GP60 sejam úteis para compreender a dinâmica de transmissão das espécies de Cryptosporidium, o número de amostras analisadas é relativamente pequeno e muito mais ainda pode ser pesquisado. É interessante notar que as informações de tipagem molecular com o gene 18S rRNA e a subtipagem com o gene GP60, permitem que os epidemiologistas possam rastrear as fontes de surtos das diferentes espécies de Cryptosporidium. / Abstract: A total of 196 fecal samples from crossbred calves, 7-30 days old of both sexes were collected in 31 properties with the objective of determining the prevalence of Cryptosporidium in the northwestern region of São Paulo, as well as characterizing the molecular species involved in this parasite. We performed microscopic analysis by the technique of negative staining with malachite green in all stool samples. For molecular identification of Cryptosporidium, we used the reaction of nested PCR using specific primers for amplification of gene fragments coding for the 18S subunit ribosomal RNA gene and the glycoprotein GP 60 by subjecting the PCR product sequencing and phylogenetic analysis. By stool examination, positivity was observed 2% (4 / 196) by means of microscopy, and 10.7% (21/196) by nested PCR. As a result of sequencing, we identified four species of Cryptosporidium: C. parvum (subtype IIa15G2R1) C. Ryanair, C. bovis and C. andersoni. This discovery of C. IIaA15G2R1 parvum subtype in the studied region illustrates the usefulness of subtyping. Although based on these initial results with GP60 subtypes are useful for understanding the transmission dynamics of the species of Cryptosporidium, the number of samples is relatively small and much more can still be searched. It is interesting to note that the information of molecular typing with 18S rRNA gene and subtyping with the GP60 gene, allow epidemiologists can track sources of outbreaks of different species of Cryptosporidium. / Orientador: Luiz Claudio Nogueira Mendes / Coorientador: Marcelo Vasconcelos Meireles / Banca: Ricardo Velludo Gomes de Soutello / Banca: Katia Denise Saraiva Bresciani / Mestre

Resumo: O presente trabalho teve como objetivo investigar a ocorrência dos protozoários Cryptosporidium spp. e Giardia spp. em leitões com 45 dias de idade. Amostras fecais de 107 leitões foram colhidas, em três dias alternados, em suinoculturas do Município de Araçatuba, São Paulo, Brasil. A ocorrência de oocistos de Cryptosporidium spp., foi observada em 4,7% (5/107) dos animais usando a técnica de Kinyoun, e a detecção de oocistos de Giardia spp. foi concomitantemente observada em 1,9% (2/107) dos animais pelo método de Faust.. Animais com a presença concomitante de ambos os parasitos apresentaram fezes com aspecto diarréico. A partir dos resultados obtidos é possível inferir que a ocorrência de Cryptosporidium e Giardia foi baixa, o que se atribuiu ao manejo e que a presença destes protozoários não estava associada a todos animais com sintomas diarréicos envolvidos no estudo. / Abstract: The goal of this research was to investigate the occurrence of Cryptosporidium spp. and Giardia spp. in 45-days-old pigs. Fecal samples of 107 pigs were collected at three alternate days in piggeries in Araçatuba, São Paulo, Brazil. Cryptosporidium spp. oocysts were observed in 4.7% (5/107) of animals by means of Kinyoun acid-fast stain and cysts of Giardia spp. were simultaneously observed in 1.9% (2/107) of the animals by the method of Faust. Animals with positivity for the both parasites presented feces with diarrheal aspect. From these results it is possible to infer that the occurrence of Cryptosporidium and of Giardia was low because of the good management practices and both protozoa were not associated the presence of clinical symptoms. / Orientador: Katia Denise Saraiva Bresciani / Coorientador: Marcelo Vasconcelos Meireles / Banca: Fernanda Paiva / Banca: Carlos Noriyuki Kaneto / Mestre

Orientador: Cáris Maroni Nunes / Banca: Marcelo Vasconcelos Meireles / Banca: Eliana Reiko Matushima / Resumo: A manutenção de animais silvestres em cativeiro domiciliar como animais de estimação é bastante comum no Brasil e os papagaios tem sido preferidos por serem considerados curiosos, inteligentes e divertidos, além de serem excelentes imitadores e faladores. Entretanto, os papagaios-verdadeiros (Amazona aestiva) podem ser fontes de infecção de algumas zoonoses. Neste trabalho foram estudados 50 papagaios-verdadeiros mantidos em cativeiro domiciliar no município de Araçatuba, São Paulo. As condições sócio-econômicas e os manejos sanitário e nutricional das aves, bem como o contato com os residentes foram avaliados por meio de visitas às casas. Os resultados revelaram manejos sanitário e nutricional inadequados na maioria dos casos, estreito contato com os papagaios e falta de conhecimento sobre enfermidades dos mesmos. Não foi isolada Salmonella sp. nas amostras de fezes, enquanto Escherichia coli estava presente em três animais e estruturas leveduriformes foram encontradas na maioria deles. Cryptosporidium sp. foi encontrado em uma das amostras. Pode-se concluir que o estreito contato dos residentes com as aves e as condições sanitárias inadequadas podem favorecer a ocorrência de zoonoses nas residências avaliadas. A presença de Cryptosporidium sp., caso se trate de uma espécie zoonótica, indica a possibilidade da transmissão de criptosporidiose de papagaios para o homem em condições de cativeiro domiciliar. / Abstract: The maintenance of wild animals in domiciliary captivity as pets has been common in Brazil and parrots are preferred because they are considered curious, intelligents, amusing, excellent talkative and mimics. However, the blue- fronted amazon parrot (Amazona aestiva) can be source of some zoonosis infections. In the present study the sanitary and nutritional management of 50 blue-fronted amazon parrots kept in domiciliary captivity in Araçatuba city, SP, as well as the occurrence of zoonosis agents in stools samples, social-economic conditions and residents-birds contact were evaluated. Results showed inadequate sanitary and nutritional management in the majority of the cases, strait contact with the parrots and lack of knowledge about parrots diseases. Salmonella was not found in stool samples while Escherichia coli was present in three samples and levedures-like structures were found in the majority them. Cryptosporidium was found in one sample. We can conclude that the close contact with the birds and the uncorrect management can favour occurrence of zoonosis in evaluated residences. The presence of Cryptosporidium sp. Indicates transmition possibility of cryptosporidiosis, in case of zoonotic specie, from parrots to humans in domiciliary captivity conditions. / Mestre

Resumo: O objetivo deste estudo foi padronizar a reação de Imunofluorescência direta (IFD) para detecção de oocistos de Cryptosporidium parvum em amostras fecais de bezerros. Os anticorpos policlonais anti-C. parvum foram produzidos em dois coelhos adultos da raça Nova Zelândia, e titulados por meio do ensaio imuno-enzimático indireto (ELISA). A fração de imunoglobulina G (IgG) foi purificada a partir do soro do coelho imunizado, utilizando-se diálise em sulfato de amônio seguida de cromatografia em coluna de DEAE celulose e conjugação com isotiocianato de fluoresceína. Por meio da IFD padronizada, foi testada a reatividade cruzada do conjugado produzido contra outras espécies de Cryptosporidium (C. andersoni e C. serpentis) e com outros agentes etiológicos presentes em fezes de bovinos (Escherichia coli, Eimeria sp. e Candida sp.). A IFD foi comparada à microscopia com contraste de fase em solução de Sheather (MCF), avaliando a capacidade de detecção de oocistos de Cryptosporidium sp. em alíquotas de fezes de bezerro inoculadas com oocistos de C. parvum, e em amostras fecais de bezerros naturalmente infectados provenientes de 37 propriedades leiteiras da região de Araçatuba, SP. Nas amostras comprovadas como positivas, foi ainda feita uma análise semi-quantitativa de oocistos de Cryptosporidium sp., visualizados por campo de microscopia em ambas as técnicas. O conjugado anti-C. parvum apresentou reatividade com C. andersoni e C. serpentis. A IFD foi utilizada com sucesso para detecção de oocistos de C. parvum em fezes de bezerros, apresentando sensibilidade para detecção de até 104 oocistos em 3 g de fezes. Entre as 300 amostras fecais de bezerros naturalmente infectados, 19,67% (59/300) foram positivas para a presença de oocistos de Cryptosporidium sp. pela IFD, apresentando diferença estatisticamente significante (p<0.05) em relação às amostras positivas pela MCF / Abstract: The objective of this experiment was to standardize the direct immunofluorescence assay (DIF) for detection of Cryptosporidium parvum oocysts in fecal samples of calves. The anti-C. parvum polyclonal antibodies were produced in two adult rabbits of New Zealand breed, and titrated by an indirect enzyme-linked immunosorbent (ELISA). The immunoglobulin G (IgG) was purified from the serum of immunized rabbits by dialysis in ammonium sulfate followed by column chromatography on DEAE cellulose, and conjugated with fluorescein isothiocyanate. Using DIF the anti-C. parvum conjugate was tested for the presence of cross-reactivity against other species of Cryptosporidium (C. andersoni and C. serpentis), and other infectious agents present in cattle fecal samples (Escherichia coli, Eimeria sp. and Candida sp.). A comparison between the DIF and phase contrast microscopy in Sheather solution (MCF) was accomplished for evaluation of the efficiency of both techniques for detection of Cryptosporidium sp. oocysts in fecal samples of calves seeded with C. parvum oocysts, and in fecal samples from naturally infected calves from 37 dairy farms in the region of Araçatuba, SP. A semi-quantitative analysis of Cryptosporidium sp. oocysts per microscopic field was accomplished for both techniques. The anti-C. parvum conjugate showed cross-reactivity with C. andersoni and C. serpentis oocysts. The DIF has been used successfully in the detection of C. parvum oocysts in fecal samples of calves, with sensitivity for detecting 104 oocysts in 3 g of fecal samples. Among the 300 fecal samples from naturally infected calves, 19.67% (59/300) were positive for Cryptosporidium oocysts by DIF, with significant statistical difference (p <0.05) when compared to the number of positive samples by MCF / Orientador: Marcelo Vasconcelos Meireles / Coorientador: Cáris Maroni Nunes / Banca: Ricardo Velludo Gomes de Soutello / Banca: Luzia Helena Queiroz / Mestre