Orientador: José Buratini Júnior / Banca: Mayra Elena Ortiz D'Avila Assumpção / Banca: Guilherme de Paula Nogueira / Resumo: Fatores de crescimento fibroblástico têm sido descritos como importantes reguladores locais do desenvolvimento folicular. Recentemente, foi relatada a expressão do FGF-8 e seus receptores, FGFR-3c e -4, em folículos antrais bovinos. O FGF-17 e o FGF-18 pertencem à subfamília do FGF-8 e ativam eficientemente o FGFR-3c e FGFR-4. Objetivando identificar outros FGFs capazes de ativar estes receptores, investigou-se (a) os padrões de expressão do FGF-17 e FGF-18 em folículos antrais bovinos; (b) a regulação da expressão do RNAm do FGF-17 pelo FSH e IGF-1 em células da granulosa; (c) a expressão do RNAm do FGF-17 em oócitos imaturos e maturados in vivo e in vitro, e (d) a expressão das proteínas FGF-17 e FGF-18 em folículos antrais bovinos. Amostras de células da teca e células da granulosa foram obtidas de ovários de vacas de abatedouro e o RNA total destas células foi extraído. As concentrações de estradiol (E2) e progesterona (P4) no fluido folicular foram mensuradas por Radioimunoensaio (RIA) e os folículos agrupados de acordo com a razão E2:P4 intrafoliculares (atrésicos; <0,01, transicionais; 1-0,01 e saudáveis; >1). "Pools" contendo 20 oócitos foram obtidos pela remoção das células do cumulus de complexos cumulus-oócito (CCOs) e o RNA total extraído. A expressão do FGF-17 e do FGF-18 foi investigada por RT-PCR em tempo real e normalizada pela expressão dos controles endógenos GAPDH, CYC-A ou Histona (H2a). Células da granulosa de folículos de 4 a 8 mm foram cultivadas em meio livre de soro fetal e tratadas com FSH (0; 0,1; 1; 10 ou 100 ng/mL) ou IGF-1 (0; 5; 10; 50; 100 ng/mL) para avaliar os efeitos dos tratamentos na expressão do RNAm do FGF-17. A presença das respectivas proteínas foi investigada por imunohistoquímica. Os dados foram analisados por ANOVA ou testes não-paramétricos quando a distribuição não foi normal.A expressão do RNAm... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Fibroblast growth factors have been described as important local regulators of follicle development. FGF-8 and its receptors, FGFR-3c and FGFR-4, have already been reported in bovine antral follicle. Aiming to identify other FGFs capable to activate this receptors, we assessed (a) the spatial and temporal patterns of FGF-17 and FGF-18 gene expression in bovine antral follicles; (b) FGF-17 mRNA regulation by FSH and IGF-1 in cultured granulosa cells ; (c) FGF-17 mRNA expression in immature oocytes and in vivo and in vitro matured oocytes; and (d) FGF-17 and FGF-18 protein expression in bovine antral follicles. Theca and granulosa cells samples were obtained from abattoir ovaries for total RNA extraction. Estradiol (E2) and progesterone (P4) concentrations were measured by RIA in the follicular fluid. Follicles were grouped according to health status based on the E2:P4 ratio (atretic: <0.01; transitional: 0.01-1; healthy: >1). Pools containing 20 oocytes were obtained by removing cumulus cells of cumulus-oocyte complexes (COCs) and total RNA was extracted. FGF-17 and FGF-18 mRNA expression was examined by semiquantitative real time RT-PCR using GAPDH, CYC-A or histone H2a as controls. Granulosa cells from follicles (4-8 mm) were cultured in serum-free medium supplemented with FSH (0, 0.1, 1, 10, 100 ng/mL) or IGF-1 (0, 5, 10, 50, 100 ng/mL) to assess effects of treatments on FGF-17 mRNA expression. The presence of FGF-17 and FGF-18 proteins was investigated by immunohistochemistry. Data were analized by ANOVA or non-parametric analysis when not normally distributed. FGF-17 mRNA expression was detected predominantly in granulosa cells but also in theca cells, and was higher in atretic follicles. FGF-17 mRNA was also detected in immature oocytes, was reduced in in vivo matured oocytes and absent in in vitro matured oocytes. FSH and IGF-1 inhibited FGF-17 mRNA expression in cultured granulosa... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Simon Biagio Chiacchio / Banca: Roberto Calderon Gonçalves / Banca: Rogério Martins Amorim / Banca: José Giometti / Banca: Laurenil Gaste / Resumo: O objetivo do experimento foi avaliar o efeito de diferentes suplementações com selênio (Se) sobre a resposta imune humoral anti-rábica, na concentração sérica de selênio e cortisol em bovinos. Utilizou-se sessenta bovinos machos não castrados da raça Nelore, com 10 a 12 meses de idade, alimentados com pastagem de Brachiaria decumbens. Os animais foram divididos em 4 grupos (N=15) sendo que o primeiro deles não receberam suplementação (Gc) e os outros três suplementados diariamente e individualmente com concentrações de Se de 3,6 mg (G3,6), 5,4 mg (G5,4) ou 6,4 mg (G6,4). Os animais foram imunizados no dia zero com uma dose de vacina anti-rábica comercial, líquida e inativada. Nos dias zero, 15, 30, 60, 90 e 120 durante os quais submetidos ao estresse de manejo no curral e colheita de sangue. As amostras de sangue foram colhidas depois da vacinação e depois de serem submetidos ao estresse para determinação da concentração sérica de selênio, títulos de anticorpos anti-rábicos e cortisol sérico. A concentração de selênio também foi determinada nas amostras das forrageiras colhidas dos piquetes utilizados pelos bovinos. A concentração de Se na B. decumbens foi de 0,04 mg de Se/Kg de matéria seca. A concentração sérica de Se obtida no dia zero no grupo Gc era mais elevada que nos grupos G5,4 e G6,4 (P= 0,005). A concentração sérica de Se diminuiu ao longo do experimento no Gc (P<0,004), aumentou no G3,6 (P<0,000) e no grupo G5,4 (P<0,000), entretanto, no grupo G6,4 aumentou no dia 60 (P<0,002). Os títulos de anticorpos anti-rábicos não diferiram entre os grupos tratados ou não com selênio. Entretanto, 120 dias após a vacinação os títulos de anticorpos no grupo G3,6 permaneceram acima do mínimo considerado protetor (=0,5 UI/mL) (P<0,000), enquanto que nos outros grupos permaneceram baixos (P<0,05). A concentração sérica de cortisol dos bovinos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This study evaluated the effect of different concentrations of selenium (Se) supplementation on cattle antirabies humoral immune response, serum Se concentrations and cortisol levels. Sixty uncastrated male Nelore calves from 10 to 12 months grazing on Brachiaria decumbens forage were studied. The animals were assigned to one of four groups (N=15 each), which received nonsupplemented diets (Gc) or supplemented with daily and individual Se concentrations of 3.6 mg (G3.6), 5.4 mg (G5.4) or 6.4 mg (G6.4). The animals were immunized on day 0 with one dose of commercial liquid inactivated rabies vaccination. On days 15, 30, 60, 90 and 120, the cattle underwent the same stressing procedures used for vaccination in the corral. Cattle blood samples were collected after vaccination and stressing procedures to determine serum Se levels, rabies antibody titers and serum cortisol. Se levels were also determined in forage samples collected from the paddocks in which the cattle were held. Se concentration in B. decumbens was 0.04 mg of Se/Kg dry matter. Baseline Se levels obtained on day 0 were higher in Gc than in G5.4 and G6.4 (P= 0.005). Serum Se levels decreased in Gc throughout the experiment (P<0.004), increased in G3.6 (P<0.000) and G5.4 (P<0.000) and were kept high from day 60 on in group G6.4 (P<0.002). Rabies antibody titers did not differ between control and supplemented groups. However, 120 post-vaccination rabies antibody titers were kept above the protecti ve levels (=0.5 UI/mL) only in group G3.6 (P<0.00002), whereas they dropped in the other groups (P<0.05). Serum cortisol levels did not differ among the experimental groups (P=0.79), reached peak levels on day 90 and returned close to baseline levels on day 120. Se and cortisol levels were not markedly correlated. Serum cortisol and rabies antibody titers were correlated only in group G6.4, on day 60 (R=0.513; P=0.05)... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Nereu Carlos Prestes / Banca: Eunice Oba / Banca: Regina Kiomi Takahira / Banca: Daniel Bartceli de Souza / Banca: Gilson Hélio Toniollo / Resumo: O presente trabalho teve por objetivo comparar a composição bioquímica e as concentrações de testosterona e progesterona no líquido amniótico de fetos bovino da raça Nelore produzidos por fecundação in vivo, fecundação in vivo com transferência de embrião (TE) e produção in vitro (PIV). Os problemas fetais observados ao momento do parto e pós-parto imediato em animais oriundos de PIV e a escassez de pesquisas que determinem a composição do líquido amniótico associada aos três sistemas de produção embrionária permitiram o desenvolvimento deste trabalho. Utilizaram-se 60 animais divididos em: grupo 01 - vacas Nelore gestando bezerros oriundos de inseminação artificial (IA) (n=20); grupo 02 - receptoras gestando bezerros Nelore provenientes de inovulações de embriões oriundos de doadoras superovuladas pelo método convencional (n=20); grupo 03 - receptoras de embriões gestando bezerros Nelore originados de inovulações de embriões oriundos de doadoras pelo método de aspiração folicular (n=20). No momento do parto, após a visualização das bolsas, colheram-se 15mL de líquido amniótico por punção da bolsa com agulha e seringa adequadas. As amostras foram processadas e analisadas no serviço de laboratório clínico do Departamento de Clínica Veterinária da FMVZ/UNESP de Botucatu-SP e no Laboratório de Endocrinologia do departamento de Reprodução Animal e Radiologia Veterinária. Para análise bioquímica foram utilizados Kits comerciais seguindo a técnica recomendada pelo fabricante. A dosagem hormonal de progesterona (P4) e testosterona (T) foi determinada por meio de radioimunoensaio em fase sólida com a leitura realizada em contador Gama Count Cobra II. Os dados obtidos na avaliação bioquímica e no perfil hormonal foram submetidos à análise de variância (ANOVA) e, uma vez demonstrada diferença estatística por 22 esse teste aplicou-se o Método de Tukey, com 5% de nível de significância. / Abstract: The present work had for objective to compare the biochemical composition and the concentrations of testosterone and progesterone in the amniotic fluid of fetuses of the Nelore cows produced by in vivo fecundation, in vivo fecundation at embryo transfer (ET) and in vitro production (IVP). The fetal problems observed at the delivery moment and at the immediate post-partum in animals originating from IVP and the shortage of researches that determine the composition of the amniotic fluid associated to the three systems of embryonic production allowed the development of this work, adding results to the studies that are being done by other researchers with the placenta of IVP animals. Sixty animals were used divided into 3 groups: Group 1 - Nelore cows pregnant with calves conceived by artificial insemination (AI) (n=20); Group 2 - receptor cows pregnant with Nelore calves provement from superovulation of embryo donors (n=20); Group 3 - receptor cows pregnant with Nelore calves obtained by in vitro production after follicular aspiration (n=20). At the delivery moment, after the visualization of the sacs, 15mL of amniotic liquid were collected by puncture. The samples were processed and analyzed in the service of clinical laboratory of the Department of Veterinary Clinic of FMVZ/UNESP of Botucatu-SP and in the Laboratory of Endocrinology of the department of Animal Reproduction and Veterinary Radiology. For biochemical analysis commercial kits were used following the technique recommended by the manufacturer. The hormonal determinaton of progesterone (P4) and testosterone (T) was performed through radioimmunossay (RIA) in solid phase with the reading accomplished in accountant Gama Count Collects II. The data obtained in the biochemical evaluation and in the hormonal profile were submitted to the variance analysis (ANOVA) and, once demonstrated a statistic difference by that method the Tukey test was applied, with a 24 5% of level significancy. / Doutor

Resumo: A claudicação em bovinos é uma importante causa de diminuição da produção e abate precoce, sendo predominantemente de origem digital. A base para avaliação de alterações ortopédicas em bovinos reside no conhecimento anatômico e nos aspectos radiográficos e ultrassonográficos da área acometida. Este trabalho foi conduzido com o objetivo de caracterizar, por meio da ultrassonografia, as estruturas flexoras da porção distal dos membros de bovinos. Para este estudo foram utilizadas peças anatômicas da porção distal dos membros torácicos e pélvicos provenientes de 20 novilhas mestiças da raça Nelore, com idades entre 24 e 36 meses. Para análise ultrassonográfica foram estabelecidas cinco zonas de avaliação no plano transversal, denominadas, respectivamente, de zonas A, B, C, D e E, e duas em plano sagital, F-III e F-IV. Na face flexora foram avaliados os tendões flexores digitais superficial e profundo, o músculo interósseo,o ligamento acessório do tendão flexor digital profundo e a manica flexoria, quanto à forma, limites, posição, ecogenicidade e mensurações das áreas transversais em cm2, sendo os resultados apresentados na forma descritiva e em tabelas. Com este trabalho foi possível a caracterização das estruturas flexoras, identificando e determinando planos ultrassonográficos apropriados para a observação de imagens adequadas destes tecidos, além da obtenção de valores e parâmetros que possam ser utilizados como referência para esta espécie, ampliando conhecimentos já descritos na literatura / Abstract: Lameness in cattle is a major cause of reduced production and premature culling, predominantly digital home. The basis for evaluation of orthopedic changes in cattle lies in the anatomic and radiographic and ultrasonographic aspects of the affected area. This work was carried out to characterize, by means of ultrasound, the structures of the distal flexor members of cattle. For this study we used anatomical specimens of the distal portion of the thoracic and pelvic limbs from 20 crossbred Nelore, aged between 24 and 36 months. For ultrasound examination were established five areas of assessment in the transverse plane, called, respectively, in zones A, B, C, D and E, and two in the sagittal plane, F-III and F-IV. On the face of the flexor tendons were assessed superficial and deep digital flexor, interosseous muscle, ligament tendon and deep digital flexor of shape, manica flexoria, boundaries, location, echogenicity and crosscutting areas in cm2, and the results were presented as descriptive and tables. This work was possible to characterize the structures flexor, identifying and determining appropriate plans for the sonographic observation of appropriate images of these tissues, in addition to obtaining values and parameters that can be used as reference for this species, increasing knowledge described in the literature / Orientador: José Wanderley Cattelan / Coorientador: Julio Carlos Canola / Banca: Paola Castro Moraes / Banca: Wanderson Adriano Biscola Pereira / Mestre

Orientador: José Buratini Junior / Banca: Sony D. Bicudo / Banca: Roberto Sartori / Banca: Marcelo Nogueira / Banca: Valério Portela / Resumo: Vários membros da família dos fatores de crescimento fibroblásticos (FGFs) estão envolvidos na regulação da função ovariana. No entanto, uma pequena subfamília dos FGFs conhecida como Fatores Homólogos aos Fatores de Crescimento Fibroblásticos (FHFs) as quais são proteínas não secretadas, estão altamente expressas no desenvolvimento e maturação do sistema nervoso. Sabe-se que nos neurônios os FHFs se ligam a proteínas mediadoras da cascata MAP quinase e a canais de sódio voltagem-dependentes, mas suas funções fisiológicas precisam ser melhor elucidadas. Ainda não foi investigada a expressão dos FHFs em tecidos reprodutivos bovinos. O objetivo deste estudo foi avaliar a expressão do RNAm dos FHFs (FHF-1 a 4) e da proteína do FHF-2, em células da granulosa (CG), células da teca (CT) e corpos lúteos (CL) bovinos, e ainda determinar se a expressão do RNAm dos FHFs em CG cultivadas é regulada na presença de FSH e IGF-1. Para tanto, CG, CT e CL foram obtidos de ovários de abatedouro para a extração do RNA total. Dez CL de cada estágio (estágio 1: corpo hemorrágico; estágio 2: CL em desenvolvimento; estágio 3: CL maduro; estágio 4: CL em regressão) foram selecionados para a extração do RNA total. CG e CT foram dissecadas individualmente de folículos antrais >5mm e submetidas ao protocolo de extração de RNA total. Os folículos foram agrupados de acordo com o diâmetro (pequeno: 5-7mm; médio: 8-10mm; grande: >10mm) e estágio de desenvolvimento (saudáveis: >1; transicional: 0,01-1; atrésicos: <0,01). As concentrações de estradiol e progesterona foram mensuradas no fluido folicular por RIA. Para investigar a regulação da expressão do RNAm dos FHFs pelo FSH e IGF-1, CG de folículos de 2 a 5mm foram cultivadas em meio suplementado com FSH (0, 0,1, 1, 10 ou 100ng/ml) ou IGF-1 (0, 5, 10, 50 ou 100 ng/ml). A expressão do RNAm dos FHFs foi examinada... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Several members of the fibroblast growth factor (FGF) family are involved in the regulation of ovarian function. However, the small FGF subfamily encodes non-secreted proteins otherwise known as FGF homologous factors (FHF) that are mostly expressed in the developing and mature nervous system. It is known that within neurons, FHFs bind to MAPK scaffold proteins and to voltage-gated sodium channels, but their physiological functions need to be elucidated. FHFs have not been investigated in bovine reproductive tissues. The small FGF subfamily that encodes non-secreted proteins otherwise known as FGF homologous factors (FHFs) has not been investigated in bovine reproductive tissues. The aims of this study were to assess FHFs (1-4) mRNA and protein (FHF-2) expression in granulosa (GC), theca cells (TC) and corpora lutea (CL) from bovine ovaries and to determine if expression in GC is regulated by FSH and IGF-1. Antral follicles and corpora lutea were dissected from bovine ovaries obtained at a local abattoir for total RNA extraction. Ten CL from each of four developmental stages (stage 1, corpus hemorragicum; 2, developing CL; 3, mature CL; and 4, regressing CL) were selected for RNA extraction. TC and GC cells were dissected from individual antral follicles larger than 5mm and submitted to total RNA extraction. Follicles were grouped according to size (small: 5-7mm; medium: 8-10mm; large: bigger than 10mm) and health status based on the ratio between concentrations of estradiol and progesterone measured by RIA in the follicular fluid (healthy: higher than 1; transitional: 0.01-1; atretic: lower than 0.01). To investigate regulation of FHFs mRNA by FSH and IGF-1, GC from small follicles (2-5 mm) were placed into serum-free medium supplemented with insulin and bovine FSH (0, 0.1, 1, 10 or 100 ng/ml) or IGF-1 (0, 5, 10, 50 or 100 ng/ml). FHFs gene expression was... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Resumo: Com o objetivo de verificar possíveis alterações hematológicas e bioquímicas que ocorrem no sangue bovino obtido de animal hígido e parasitado com Babesia bigemina, quando conservado em bolsas plásticas contendo Citrato-fostato-dextrose-adenina (CPDA-1) e os efeitos da Riboflavina e radiação ultravioleta na inativação de Babesia bigemina. Na primeira etapa o grupo I foi formado por bolsas plásticas contendo sangue proveniente de bovinos saudáveis e o grupo II foi formado por bolsas plásticas contendo sangue de bovinos parasitados com Babesia bigemina. Foi determinado Contagem total de hemácias e leucócitos, Concentração da Hemoglobina, Volume Globular, Proteína Plasmática Total, Fibrinogênio, Sódio, Potássio e Lactato a cada três dias durante 21 dias. Na segunda etapa foi realizado Esfregaço Sanguíneo Corado, Reação de Imunofluorescência Indireta e Reação em Cadeia da Polimerase quantitativa antes e após aplicação da Riboflavina e radiação ultravioleta, em seguida, o sangue foi inoculado em bezerros esplenectomizados. Esses exames foram repetidos nos dias sete, 14 e 21 pós-inoculação. O sangue conservado apresentou redução da contagem de hemácias e leucócitos, da Concentração da Hemoglobina, Volume Globular, Proteína Plasmática Total, Fibrinogênio e Sódio e ocorreu um aumento na concentração de Potássio e Lactato no decorrer de 21 dias. Observou-se que o sangue armazenado em bolsas plásticas sofre alterações hematológicas e bioquímicas após 21 dias de conservação. A Babesia bigemina não foi eliminada pela adição da Riboflavina e exposição à luz ultravioleta. Novos estudos devem ser realizados para verificar a eficácia desta técnica na inativação de patógenos que podem ser transmitidos por meio da transfusão sanguínea / Abstract: The aim of this study was to verify the possible hematological and biochemical alterations that occur in bovine blood obtained from healthy animals and from the ones infected with Babesia bigemina when kept in plastic bags with CPDA-1, and to verify the effectiveness of the treatment with Riboflavin in the inactivation of the Babesia sp. In the first part of the experiment, group I was formed by plastic bags with blood obtained from healthy bovines and group II by plastic bags with blood obtained from bovines infected with Babesia bigemina. In both groups the Red Blood Cells Count, Hemoglobin Concentration, Packed Cell Volume, Total Plasma Protein, Fibrinogen, White Blood Cells, Sodium, Potassium and Lactate was determined every three days, during 21 days. In a second phase the stained blood smear, indirect immunofluorescence reaction and quantitative Polimerase Chain Reaction to diagnose before and after the treatment with Riboflavin and ultraviolet radiation. The blood was inoculated in esplenectomized bovine. These exams were repeated on the days 7, 14 and 21 after the inoculation. In both groups the preserved blood presented reduction in the number of Erythrocytes, Leukocytes, Hemoglobin Concentration, Packed Cell Volume, Total Plasma Protein, Fibrinogen and Sodium and an increase of the Potassium and Lactate concentration occurred in the period of 21 days. The results were considered statistically significant (p<0,01). This way it was observed that the blood preserved in plastic bags suffers hematological and biochemical alterations after 21 days of conservation. Babesia bigemina was not eliminated by the treatment with Riboflavin and ultraviolet radiation / Orientador: Raimundo Souza Lopes / Coorientador: Pedro Paulo Pires / Banca: Regina Kiomi Takahira / Banca: Elizabeth Moreira dos Santos Schmidt / Banca: Advaldo Henrique da Fonseca / Banca: Cecília Braga Laposy / Doutor

Orientador: Nereu Carlos Prestes / Resumo: A proposta do presente estudo foi descrever as diferenças no padrão morfológico das células do fluido amniótico, no momento do parto. Comparando os resultados obtidos de bezerros nelores oriundos de produção in vitro, transferência de embriões e inseminação artificial. Utilizaram-se 60 animais, divididos em Grupo 01: vinte vacas inovuladas com embriões Nelore produzidos in vitro (PIV) a partir de colheita de oócitos por aspiração folicular de doadoras, Grupo 02: vinte vacas gestando bezerros nelores originados de inovulações de embriões oriundos de doadoras superovuladas pelo método convencional, e Grupo 03: vinte vacas nelores PO gestando bezerros oriundos de inseminação artificial (controle). Próximo ao parto as vacas foram transferidas para piquete maternidade com acompanhamento dos partos. Durante a fase de expulsão e após a ruptura do alantocórion realizou-se a punção do âmnion para colheita de 20mL de liquido, que foi depositado em tubo plástico e congelado em freezer. Para a classificação celular as amostras, pós-descongelação, foram centrifugadas na Citocentrifuga (Revan Centrifuga Ciclo Cito) a 4000rpm durante seis minutos e empregou-se a técnica de coloração Hematoxilina-Shorr. Ao final deste procedimento, as lâminas citológicas foram montadas com lamínulas empregando Bálsamo do Canadá e posteriormente (após o período de secagem) observadas em microscópio óptico com aumentos de 200x e 400x para visualização das características morfológicas e tintoriais das células epiteliais do feto. Para avaliação da maturidade epidérmica utilizou-se a técnica de coloração de Sulfato Azul do Nilo bem como a porcentagem de células queratinizadas (coloração Hematoxilina-Shorr). As células basais e parabasais não foram encontradas nas lâminas citológicas das amostras de líquido amniótico analisadas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of the present study was to describe the differences in the cytological pattern of the amniotic fluid, at the moment of delivery, comparing the data from Nelore calves obtained by in vitro production, embryo transfer and artificial insemination. Sixty (n=60) Nelore cows were divided in group 01: Twenty cows (n=20) pregnant with Nelore calves obtained by in vitro production (IVP) after follicular aspiration; group 02: Twenty cows (n=20) pregnant with Nelore calves obtained by superovulation of embryo donors (ET); group 03: Twenty Nelore cows (n=20) pregnant of calves obtained by artificial insemination (AI; control). Near to the labor, the cows were transferred to a maternal paddock, permitting delivery observation. During the expulsion phase, after the rupture of the alantochorion the amnion was punctured and 20ml of fluid were collected in a plastic device and frozen. The samples, after being thawed, were centrifuged at 4000 rpm, during 06 minutes the Hematoxilin-Shorr stain was applied, after this, the glass slides were covered with Canadian balsame and analyzed in optical microscopy. To the evaluation of the epidermal maturity were used the Blue Nile Sulfate stain, as well the percent of keratinizaded cells observed in the Hematoxilin-Shorr stain. The basal and parabasal cells were not found on the slides of the amniotic fluid samples analyzed. The small intermediate cells (CIP) had its shape as an oval or polygonal form with large cytoplasm and central nucleus. The large intermediate cell (CIG) showed a central nucleus and a bigger nucleus-cytoplasm relation compared to the superficial cells. These were the largest cells found. They showed keratinization with angular edges, having both a picnotic nucleus (CSN) and no nucleus at all. (CSA). The technique of Blue Nile Sulfate stain did not showed satisfactory for the evaluation of the fetal maturity, in spite of some records... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Iveraldo dos Santos Dutra / Banca: Samir Issa Samara / Banca: Silvio Arruda Vasconcellos / Resumo: O Clostridium chauvoei é o agente causador do carbúnculo sintomático, doença que acomete bovinos e ovinos. É um dos principais problemas sanitários que ocorre nos rebanhos pecuários em todo o mundo. A vacinação dos animais jovens é a medida profilática indicada, visto que esta medida preventiva nos sistemas de produção é de extrema importância econômica e reconhecida pelos produtores, mesmo sendo de aplicação voluntária. Três grupos de bovinos, contendo 20 animais em cada grupo, foram vacinados com três vacinas comerciais contra o carbúnculo sintomático para a avaliação sorológica dos mesmos por meio do teste de aglutinação rápida em placa. Os animais foram vacinados no dia 0, e o reforço vacinal foi realizado 30 dias após a primeira dose. Após 21 dias do reforço, o sangue foi coletado da veia jugular, e o soro foi obtido a temperatura ambiente quando ocorreu a coagulação sanguínea e separação do soro. Foi comparada a resposta de indução de anticorpos nos grupos de animais reagentes a esse teste com antígenos obtidos de duas cepas, uma de referência (MT) do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA) e outra cepa de campo. Os resultados demonstraram que a resposta dos animais imunizados frente à cepa de referência foi satisfatória, não existindo diferença entre as três vacinas testadas. No entanto, quando este mesmo teste foi realizado com antígenos produzidos com a cepa de campo identificada por PCR, verificou-se a ausência de anticorpos aglutinantes na maioria dos bovinos avaliados. Na análise estatística ficou comprovado que existem diferenças significativas nos resultados dos testes de aglutinação rápida em placa quando se utilizam cepas distintas de Clostridium chauvoei, provavelmente em decorrência de diferenças antigênicas existentes entre as cepas. / Abstract: The Clostridium chauvoei is the agent which causes black leg, a disease that attacks the bovine and ovine. It is one of the main sanitary problems that occur with cattle-raising flocks in the world. The vaccination of young animals is the best prevention measure in production systems and is of extreme economic importance and is recognized by producers even if the application is voluntary. Three bovine groups, containing 20 animals each group, were vaccinated using three commercial vaccines against the black leg, for evaluation of bovine serological by tests of plate agglutination. The cattle were treated on day 0 and another dose was given on day 30. After 21 days, the blood was colleted of jugular vein and serum was obtained at 25°C, by blood coagulation. The comparison was made by detection of antibodies response between the animals that react to the test with antigens obtained from two strains which were used, one referred (MT) as Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA) and another strain isolated from the field cases. The results determined that the response of the immunized animals faced by the referred strain was satisfactory with non-existing differences between the three tested vaccines. However, when the same test was conducted with antigens obtained from the field strain identified by PCR, it was verified the absence of agglutinating antibodies agglutinants in the majority of the bovines evaluated. In the statistics analysis were confirmed that significant differences were obtained in the agglutination plate test when different strains of Clostridium chauvoei were used, maybe because of the occurrence of antigenic difference, between the two strains tested. / Mestre

Orientador: Raul José Silva Girio / Banca: Iveraldo dos Santos Dutra / Banca: Luís Antonio Mathias / Banca: Humberto Eustáquio Coelho / Banca: Sonia Regina Pinheiro / Resumo: No presente estudo, 100 fêmeas bovinas foram divididas em cinco tratamentos de 20 animais cada. Os grupos experimentais receberam quatro diferentes vacinas comerciais (B, C, D e E), e um grupo permaneceu como controle. Amostras foram colhidas no dia da aplicação da primeira dose e nos dias 3, 7, 14, 21, 28, 35, 42, 49, 56, 63, 70, 77, 84, 91, 120, 150 e 180 pós-vacinação (pv). A triagem dos animais foi feita pela análise sorológica com 24 antígenos de leptospiras, escolhendo-se os animais não reagentes. Os títulos de anticorpos foram monitorados pela soroaglutinação microscópica (SAM) com os sorovares Canicola, Grippotyphosa, Hardjo, Icterohaemorrhagiae, Pomona e Wolffi. Todas as vacinas induziram, aos 3 dias pv, títulos de anticorpos aglutinantes para os sorovares Hardjo e Wolffi, que persistiram até o 150o dia pv. Os sorovares Hardjo e Wolffi induziram os maiores títulos de anticorpos aglutinantes. A vacina D, apesar de não possuir o sorovar Wolffi em sua composição, foi capaz de induzir anticorpos aglutinantes contra este sorovar. Somente foram detectados anticorpos contra o sorovar Canicola nos animais vacinados com a bacterina D. A vacina que induziu os maiores títulos médios de anticorpos, considerando todos os sorovares testados, foi a D. Há a necessidade de melhoria no poder imunogênico e na concentração dos sorovares utilizados como antígenos nas vacinas comerciais. / Abstract: In this research 100 heifers were used, divided in 5 groups of 20 animals each. The four experimental groups were vaccinated using distinct commercial polyvalent bacterines: A, B, C and D, and a group was the control. Samples were collected at the days 0, 3, 7, 14, 21, 28, 35, 42, 42, 56, 63, 70, 77, 84, 91, 120, 150 and 180 from the first injection of the vaccine. The selection of the animals for the experimental groups was done based on a serological screening with 24 antigens of Leptospira sp., constituted by non-reagent animals. The vaccine titres were monitored using the microscopic agglutination test (MAT) for Canicola, Grippotyphosa, Hardjo, Icterohaemorrhagiae, Pomona and Wolffi serovars. All vaccines used were capable to product agglutinins for the Hardjo and Wolffi serovars observed at 3 days after vaccination, remaining until the 150th day; these serovars induced the highest titres of agglutinins. The vaccine D, in spite of not containing the Wolffi serovar, was able to induce the production of agglutinins to this serovar. Agglutinins to the Canicola serovar were only observed in the animals vaccinated with the D bacterine. The vaccine D induced the highest average titres of antibodies to all serovars tested. The improvement of the immunogenic power and serovars concentration utilized as antigens of the commercial vaccines are necessary. / Doutor

Orientador: Joaquim Mansano Garcia / Banca: César Roberto Esper / Banca: Simone Cristina Méo Niciura / Resumo: O presente trabalho objetivou avaliar os efeitos da substituição do SFB e do BSA pela OVA na PIV, por estudos nas etapas de maturação, fecundação e cultivo in vitro. Observamos que durante a etapa de maturação, a concentração 4mg/mL de OVA não afetou a maturação nuclear (82,66%) e a migração de grânulos corticais (GC) para a periferia dos oócitos (54,21%), sendo, portanto, utilizada nos experimentos subseqüentes. Foi observado que as fontes protéicas SFB, BSA, OVA, e BSA com OVA (BO) não afetaram (p>0,05) as taxas de maturação nuclear e migração de GC. Para a sigla dos tratamentos, as fontes protéicas foram identificadas pelas iniciais (SFB=S, BSA=B e OVA=O). Cada tratamento foi abreviado com a primeira letra referente à etapa de maturação, a segunda à fecundação, e a terceira ao cultivo. Quanto às taxas de formação de pronúcleo (PN) observamos que o grupo SO (76,67% de 2 PN) foi semelhante (p>0,05) ao grupo controle (82,95% de 2 PN). A etapa de CIV permitiu avaliar que os diferentes tratamentos foram semelhantes (p>0,05) quanto à taxa de clivagem. Entretanto, quanto à taxa de produção de blastocistos, o grupo OOO (26,0%) foi semelhante (p>0.05) aos grupos SOS (33,8%), BBB (35,8%), BOB (32%), e OBO (33%), mas foi inferior (p<0,05) aos grupos CONT (45%) e SBS (42,8%). Quanto à taxa de eclosão, o grupo OOO (20,4%), foi inferior (p<0,05) aos grupos CONT (46,2%), SBS (43,4%), SOS (38,4%), BBB (41,6%), e semelhante aos grupos BOB (28,2%) e OBO (25,4%). Concluímos que é possível produzir embriões bovinos na ausência de SFB e/ou BSA, com a fonte protéica OVA, embora tanto a quantidade como a qualidade dos blastocistos tenham se apresentado inferiores em relação àqueles produzidos na presença de SFB e/ou BSA. / Abstract: The present work aimed to evaluate the effects of FCS and BSA substitution for OVA on in vitro production of bovine embryos, studying in vitro maturation, fertilization, and development. For maturation, we observed that the concentration 4mg/mL of OVA didn't affect nuclear maturation (82.66%), and cortical granule (CG) migration (54.21%), which indicated its use in the subsequent experiments. It was observed that the protein sources FBS, BSA, OVA and BO didn't significantly affect (p>0.05) the rates of nuclear maturation and CG migration. For evaluation of pronucleus (PN) formation rates, we observed that the SO group (the first letter means the protein source for the maturation stage, the second for the fertilization, and the third for the development), (76.67% of 2 PN) was similar (p>0.05) to the control group (82.95% of 2 PN). However, two pronucleus formation rates in BB (56.98%), BO (39.02%), OB (37.36%) and OO (39.24%) were different (p<0.05) from the control group (82.95% of 2 PN). Different treatments (CONT, SBS, SOS, BBB, BOB, OOO, OBO) were similar (p>0.05) in cleavage rates. However, regarding to blastocyst production rates, the OOO group (26.0%) was similar (p>0.05) to the SOS group (33.8%), BBB (35.8%), BOB (32%), and OBO (33%) groups, but it was inferior (p <0.05) compared to the CONT (45%) and SBS (42.8%) groups. In relation to blastocyst hatching rate, the OOO group (20.4%) was inferior (p<0.05) when compared to the CONT (46.2%), SBS (43.4%), SOS (38.4%), BBB (41.6%) groups, and it was to BOB (28.2%) and OBO (25.4%) groups. We concluded that it’s possible to produce bovine embryos in the absence of FBS and/or BSA using ovalbumin (OVA) as the protein source, even though decreased quantity and quality rates of bovine blastocysts were observed. / Mestre