Orientador: Vera Fernanda Martins Hossepian de Lima / Banca: Lia de Alencar Coelho / Banca: Claudia Lima Verde Leal / Banca: César Roberto Esper / Banca: Gilson Helio Toniollo / Resumo: Os objetivos deste trabalho foram de facilitar os procedimentos de formação de gradientes de- densidade de Percoll e OptiPrep para separação de espermatozóides X; avaliar a eficiência da sexagem de espermatozóides X, a viabilidade espermática e integridade do acrossoma e do DNA após a centrifugação nestes gradientes e avaliar taxa de clivagem e blastocisto durante a produção in vitro de embriões. Para isso, doses de sêmen de touros foram descongeladas e cerca de 40 milhões de espermatozóides foram colocados sobre cada gradiente de densidade compostos por Percoll ou OptiPrep com três camadas que variaram entre 1.11 Og/mL a 1.123g/mL em tubos de poliestireno de 15mL. Centrifugou-se o gradiente a 500xg por 15 min a 22°C. Os sobrenadantes foram aspirados e recuperados para verificação da viabilidade espermática e integridade do acrossoma, fragmentação do DNA, produção in vitro de embriões, avaliação da eficiência da sexagem pela reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real (qPCR) e sexagem dos embriões pela PCR. A porcentagem de espermatozóides vivos com acrossoma intacto diminuiu (P<0,05) após a centrifugação nos gradientes de densidade, mas não influenciou, de modo geral, a produção in vitro de embriões (taxa de clivagem e blastocistos) utilizando estes espermatozóides centrifugados. Não foi detectada fragmentação do DNA dos espermatozóides nas amostras centrifugadas. Os resultados demonstraram que o Percoll enriqueceu as amostras com espermatozóides X (62% de fêmeas, P<0,05). No OptiPrep e grupo Controle a porcentagem de fêmeas foi de 47,1 e 48,7%, respectivamente. Estes resultados foram confirmados pela qPCR do DNA dos espermatozóides, com uma subestimação apenas no Percoll. Foi possível realizar a sexagem, por uma metodologia mais simples, facilitando o procedimento de centrifugação em gradiente de densidade e sem provocar danos aos espermatozóides. / Abstract: The objectives of this work were to facilitate the procedures of formation of density gradients of Percoll and OptíPrep for separation of X-bearing bovine spermatozoa; to evaluate the efficiency of sexing and viability of acrosome integrity and DNA after centrifugation in these gradients and to assess the cleavage and blastocyst rate during in vitro production of embryos. For this, frozen-thawed spermatozoa (20 to 40 millions) were deposited on each density gradient composed of Percoll or OptiPrep with three layers that varied between 1.110g/mL to 1.123g/mL, in 15mL polystyrene tubes. The tubes were centrifuged at 500xg for 15 min at 22oC. Supernatants were carefully aspirated and sediments recovered for verification of sperm quality, DNA fragmentation, in vitro fertilization of embryos, evaluation of the efficiency of sexing by real time polymerase chain reaction (qPCR) and sexing of embryos by PCR. Percentage of live spermatozoa with intact acrosome decreased (P<0.05) after centrifugation in density gradients, however, it not influence, in general, the production of embryos in vitro (cleavage and blastocyst rates) using these centrifuged sperm. No sperm DNA fragmentation was detected in centrifuged samples. The results of embryo sexing by PCR showed deviation to female in the Percoll group (62%, P<0.05). In the OptiPrep and Control group the percentage of females was 47.1 and 48.7%, respectively. These results were confirmed by qPCR of DNA of spermatozoa, with an underestimation only in the Percoll group. It was possible the sexing, by a simple approach, facilitating the process of the centrifugation in density gradient and without damage to sperm. / Doutor

Orientador: Maria Salete Machado Cândido / Banca: José Roberto Cury Saad / Banca: Patricia dos Santos Jardim / Resumo: O objetivo deste trabalho foi o de avaliar comparativamente "in vitro", a resistência de união ao cisalhamento de uma resina composta à dentina bovina em função da combinação de três diferentes sistemas adesivos e de dois diferentes agentes dessensibilizantes. Foram utilizados os sistemas adesivos: Single Bond, Master Bond e Prime & Bond 2.1 e os seguintes agentes dessensibilizantes: o Oxagel e o G. H. F. Dessensibilizador. Para a confecção dos corpos de prova, 90 incisivos bovinos (n=10) foram utilizados, os quais tiveram suas superfícies vestibulares desgastadas, até a exposição dentinária, de tal forma que, a área de adesão padronizada, tivesse 4 mm de diâmetro. Após a realização dos tratamentos de superfície, onde os Grupos controle eram indicados apenas pela aplicação do sistema adesivo, e os Grupos experimentais, pela aplicação dos agentes dessensibilizantes testados após o condicionamento ácido, foram confeccionados cilindros de resina composta Z-100, com o auxílio de uma matriz bipartida. Os corpos-de-prova foram então armazenados em água destilada a 37°C por 24 horas, e submetidos em seguida ao ensaio de cisalhamento, a uma velocidade do atuador de 0,5 mm/min. Os resultados obtidos foram submetidos à análise de variância, e ao teste de Tukey, ao nível de 5% de significância. Observou-se que houve influência dos agentes dessensibilizantes, quando estes eram aplicados na dentina bovina e interagiam com os sistemas adesivos, sendo que o G. H. F. Dessensibilizador aumentou estatisticamente os valores de resistência de união do Single Bond, e do Prime & Bond 2.1, e o Oxagel não influenciou nos valores de resistência de união dos sistemas adesivos testados. / Abstract: The objective of this work was it of evaluating "in vitro" comparatively , the shear bond strength of a resin composed to the bovine dentin in function of the combination of three different adhesive systems and of two different agents dessensitizers. The adhesive systems were used, to know: Single Bond, Master Bond and Prime & Bond 2.1 and the following agents dessensitizers: Oxagel and G. H. F. Desensitizer. For the making of the test bodies, 90 incisive bovine (n=10) they were used, which had its worn away vestibular surfaces, until the exhibition dentin, in such a way that, the area of standardized adhesion, had 4 diameter mm. After the accomplishment of the surface treatments, where the Groups control was just suitable for the application of the adhesive system, and the experimental Groups, for the application of the agents dessensitizers tested after the acid conditioning, cylinders of composed resin were made Z-100, with the aid of a bipartite matrix. The test bodies, they were stored then in water distilled for 37°C by 24 hours, and submitted soon after to the shear bond strength rehearsal, to a crosshead speed of 0,5 mm/min. The obtained results were submitted to the variance analysis, and to the test of Tukey, at the level of 5% of significance. It was observed that there was influence of the agents dessensitizers, when these were applied in the bovine dentin and interagiam with the adhesive systems, and G. H. F. Dessensitizer increased statistically the values of resistance of union of Single Bond, and of the it Prime & Bond 2.1, and Oxagel didn't influence in the values of resistance of union of the tested adhesive systems. / Mestre

Orientador: Marlene Cristina Alves / Banca: Salatiér Buzetti / Banca: Edson Lazarini / Banca: Cláudio Roberto Marciano / Banca: Marlene Estevão Marchetti / Resumo: O presente trabalho teve por objetivo estudar as modificações de propriedades químicas e agregação de um Latossolo Vermelho de Cerrado, sob manejo com adubação orgânica e/ou mineral e com diferentes sistemas de cultivo. O experimento foi realizado na área experimental da Universidade Estadual Paulista - UNESP, localizada no município de Selvíria, MS, nos anos agrícolas 2003/04 e 2004/05. Os tratamentos constaram de três sistemas de cultivo do solo (convencional; cultivo mínimo e semeadura direta) e seis adubações (testemunha - sem adubação; adubação mineral-70 kg ha-1 de P2O5 e 80 kg ha-1 de K2O; adubação orgânica - esterco bovino-20 Mg ha-1; u adubação orgânica (esterco bovino)+ u da adubação mineral recomendada; 20 e 30 Mg ha-1 de lodo de esgoto). A agregação do solo foi modificada após 2 anos, sendo que os manejos com semeadura direta e cultivo mínimo apresentaram os melhores resultados, quanto aos adubos mineral e orgânicos, estes se destacaram em relação a testemunha. Para a massa de 100 grãos a utilização de adubos minerais e orgânicos proporcionou melhores resultados em comparação a testemunha, no entanto, para a produtividade foram semelhantes. Para produção de massa seca de sorgo o cultivo convencional foi melhor do que a semeadura direta e, o cultivo mínimo foi semelhante a ambos. / Abstract: The present work had for objective to study the modifications of chemical properties and of the aggregation of a soil after two years of management with organic manuring and/or mineral under different preparation systems. The experiment was carried out in Selvíria, state of the Mato Grosso do Sul, Brazil, during the agricultural years of 2003/04 and 2004/05. The treatments were: Conventional-tillage, chisel tillage and no-tillage besides six manurings: control (no manuring), manuring mineral, organic manure, organic+mineral, 20 and 30 Mg ha-1 of sewage sludge. After two years of the application of the fertilizers, organic and/or mineral, an improvement was observed in the chemical properties of the soil in comparison with initial analysis. Regarding the aggregate stability of the soil, organic fertilizers and/or minerals and no-till and the minimum cultivation provided a better aggregation of the soil. To weight of 100 soybean grains there was significant difference try use of organic and mineral fertilization; however it was not observed for the production. To dry matter of sorghum the conventional preparation presented the largest values compared to the no-till and, the minimum preparation was similar the both. / Doutor