Resumo: Testou-se a hipótese de influência da sazonalidade sobre a produção embrionária in vitro de gato doméstico (Felis catus), na cidade de Botucatu, localizada sob latitude de 22º53'09" S, no estado de São Paulo, Brasil, em associação a três condições ovarianas - inativa, luteal e folicular em dois momentos: período I, que compreendeu os meses de janeiro, fevereiro e março e período II constituído pelos meses de agosto, setembro e outubro. Realizaram-se dois experimentos: I) Aspectos relacionados à maturação in vitro e análise ultra-estrutural de complexos cumulus-oophorus (COC) de felinos domésticos e II) Produção in vitro e análise ultra-estrutural de embriões de gato doméstico. O objetivo do experimento I foi avaliar as taxas de recuperação e maturação in vitro de COC e a descrição de suas características ultra-estruturais. O experimento II visou à avaliação das taxas de clivagem, de formação de mórulas, de produção de blastocistos; à avaliação da qualidade dos embriões felinos em fase inicial de desenvolvimento e à descrição das características ultra-estruturais dos embriões obtidos. No experimento I, para verificação das taxas de recuperação oocitária e de maturação in vitro foram avaliados 473 oócitos grau I no período I e 482 oócitos grau I no período II, provenientes de 20 e de 10 pares de ovário, respectivamente. O número médio de oócitos obtidos por gata foi de 23,65 e 48,2 nos períodos I e II, respectivamente. Esses COC foram maturados in vitro e classificados quanto à configuração nuclear em vesícula germinativa (VG), quebra de vesícula germinativa (QVG), metáfase I (MI), metáfase II (MII) e degenerados/não identificados (D/NI). No experimento II, 386 e 568 COC durante o período I e II respectivamente, foram fertilizados com sêmen fresco e após três e oito dias de cultivo verificou-se... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The hypothesis of season effect at Botucatu, 22º53'09" S, Sao Paulo State, Brazil, on in vitro embryo production of domestic cat (Felis catus), was tested in association with three ovarian conditions - inactive, luteal and follicular during two seasons: season I, which comprehended the months of January, February and March and season II, constituted by the months of August, September and October. This study was divided in two experiments: I) In vitro oocyte maturation and ultrastructural analysis of cumulus-oocyte complexes (COC) of domestic cats and II) In vitro embryo production and ultrastructural analysis of embryo of domestic cats. The aim of the experiment I was to analyze the COC recovery rate and in vitro nuclear maturation (IVM) rate and the description of its ultrastructural characteristics. The experiment II aimed to evaluate cleavage and morulae rates and blastocyst formation; to evaluate the quality of domestic cat embryos and to describe ultrastructural characteristics of these embryos. In experiment I, to evaluate COC recovery rate and in vitro maturation rate; 473 Grade I COC recovered from 20 ovarian pairs and 482 Grade I COC recovered from 10 ovarian pairs were evaluated during season I and season II, respectively. These COC were in vitro matured and classified according to nuclear configuration as germinal vesicle (GV), germinal vesicle breakdown (GVBD), metaphase I (MI), metaphase II (MII) and degenerated/non-identified (D/NI). In experiment II, 368 and 568 COC recovered from ovaries during season I and II, respectively, were in vitro fertilized with fresh semen and after three and eight days of culture the development stage and embryo viability were analyzed. In experiment I, no significant difference was verified in the percentage of oocytes in MII in both seasons and considering the three conditions. These results indicate that in vitro maturatiom... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Maria Denise Lopes / Coorientador: Fernanda da Cruz Landim Alvarenga / Banca: Marcelo Alcindo de Barros Vaz Guimarães / Banca: Nei Moreira / Banca: Sony Dimas Bicudo / Doutor

Orientador: Joaquim Mansano Garcia / Banca: César Roberto Esper / Banca: Karina Beloti Avelino / Resumo: Dentre as biotecnologias aplicadas à reprodução animal, atualmente um dos maiores desafios é a criopreservação de embriões PIV. Esses embriões apresentam alta criosensibilidade, devido principalmente a excessiva deposição lipídica no citoplasma, e que por sua vez está relacionada com a utilização de SFB nos meios. Neste trabalho foram avaliados os efeitos da suplementação protéica com BSA, SFB e FE e suas associações na PIV de embriões bovinos durante as etapas de MIV e CIV, visando melhorar sua criotolerância. Na MIV foram utilizadas sete diferentes combinações (SFB, BSA, FE, BSA+SFB, BSA+FE, SFB+FE e BSA+SFB+FE), e no CIV quatro tratamentos (BSA, BSA+SFB, BSA+FE e BSA+SFB+FE). Os embriões em estádios de Bl e Bx foram vitrificados e após seu reaquecimento foram avaliadas as taxas de eclosão embrionária em 24 e 48 horas. Dos oócitos colocados em maturação, obteve-se um total de 85,4% de clivagem e 35,52% de produção embrionária. Ao analisar os efeitos da fonte protéica na MIV notou-se que o grupo tratado com BSA apresentou as piores taxas de clivagem (80,96%) (p<0,05) em relação aos demais grupos, o melhor resultado de produção embrionária foi obtido com BSA+SFB (46,69%) e os melhores índices de eclosão embrionária pós reaquecimento foram nos tratamentos BSA+FE (44,35%), SFB+FE (44,90%) e BSA+SFB+FE (42,48%). Quando se avaliou os efeitos de fonte protéica na CIV, não houve diferença significativa entre os tratamentos quanto a clivagem, o BSA apresentou o pior desempenho na produção de embriões (31,88%) (p<0,05) em relação aos demais grupos que não diferiram entre si, e os melhores índices de eclosão embrionária 24 e 48h pós reaquecimento foram obtidos com o tratamento BSA+FE (37,64% e 51,34%, respectivamente) / Abstract: Among the biotechnology applied to animal reproduction, nowadays one of the biggest challenges is the cryopreservation of embryos produced in vitro. These embryos have a high cryosensitivity, mainly due to excessive fat deposition in the cytoplasm, which in turn is related with the FCS used in the mediums for embryo production in vitro. The aim of this study was to evaluate the effects of protein supplementation with BSA, FBS and FE, and their associations in IVP bovine embryos during the stages of IVM and IVC, to improve their cryotolerance. For IVM were used seven different combinations (FCS, BSA, FE, BSA + FCS, BSA + FE, FE and FBS + BSA + FCS + FS), and four treatments during IVC (BSA, BSA + FCS, BSA + FE, BSA+ FE+ FCS). Embryos in stage of Bl and Bx were vitrified and after their reheating the rates of hatched blastocysts at 24 and 48 hours were evaluated. Of the oocytes placed into maturation, we obtained 85.4% of cleavage and 35.52% of embryo produced. When were evaluated the effects of protein source in IVM was noted that the BSA-treated group showed the worst rates of cleavage (80.96%) (p <0.05) compared to other groups, the best result of embryo production was obtained with FCS + BSA (46.69%) and the highest rates of hatched blastocysts after rewarming were obtained with FE + BSA (44.90%), FE + FCS (44.35%) and FS + FCS + BSA ( 42.48%). When we assessed the effects of protein source in the IVC, there was no significant difference between treatments for the cleavage, the BSA group had the worst performance in the production of embryos (31.88%) (p <0.05) compared to other groups that not differ, and the highest hatched blastocysts in 24 and 48 hours after rewarming were obtained by treating BSA + FE (37.64% and 51.34%, respectively) / Mestre

Orientador: Roberto Sartori Filho / Banca: José Luiz Moraes Vasconcelos / Banca: Guilherme de Paula Nogueira / Resumo: O objetivo do presente trabalho foi avaliar a resposta superovulatória, a produção embrionária e a resistência à criopreservação através de congelação ou vitrificação de embriões de novilhas Nelore suplementadas com gordura protegida ruminal (Megalac-E®). Foram utilizadas 40 novilhas da raça Nelore mantidas a pasto, divididas em dois grupos experimentais de acordo com o tipo de suplementação fornecido (G = concentrado com gordura protegida ruminal e C = suplementação controle, sem adição de gordura). Os suplementos foram formulados para serem isoenergéticos e isoprotéicos. O delineamento foi do tipo cross-over com 67 (primeira repetição) e 70 d (segunda repetição) de duração. Após 50 d de suplementação dietética, foi realizada a sincronização da emergência da onda para iniciar o protocolo de superovulação. Os embriões colhidos foram congelados ou vitrificados e avaliação de desenvolvimento embrionário in vitro foi realizada posteriormente. Não houve diferença (P > 0,10) entre os Grupos G e C em relação à resposta superestimulatória, ao número total de estruturas, embriões congeláveis, degenerados e ovócitos não fecundados colhidos. Apesar do grupo C ter mostrado maior reposta superovulatória que o G (15,7 ± 1,2 vs 18,0 ± 1,3 CL; P = 0,06), os embriões do Grupo C apresentaram maior taxa de eclosão, independentemente do método de criopreservação, às 48 h (33,1 ± 4,0%; n = 148 vs 17,3 ± 3,3%; n = 137; P = 0,009) e às 72 h (44,3 ± 4,2%; n = 148 vs 30,9 ± 4,0%; n = 137; P = 0,04) de cultivo do que os do grupo G. Além disso, os embriões vitrificados e congelados apresentaram taxas similares de eclosão (P > 0,10). Nas condições do presente estudo, o suplemento composto com gordura protegida não afetou a resposta superestimulatória e a produção de embriões, e os embriões do Grupo Controle foram mais tolerantes à criopreservação. / Abstract: The aim of the current study was to evaluate the superovulatory response and embryo production, as well as embryo resistance to cryopreservation through freezing or vitrification of embryos from Nellore heifers supplemented with rumen-protected fat, Megalac-E®. Forty heifers kept in pasture were randomly divided into two experimental groups according to supplement source (G = supplement with rumen-protected fat and C = Control, without fat supplementation). The supplements were formulated to be isocaloric and isoproteic. Each female underwent both treatments in a cross-over design with approximately 67 d (first replicate) and 70 d (second replicate). After 50 d of feeding, the emergence of the wave was synchronized with the aid of hormones to iniciate the superovulation protocol. The embryos recovered were frozen or vitrified and subsequently in vitro embryo development evaluation was accomplished. There was no difference between G and C groups (P > 0.10) regarding superstimulatory response, number of total embryos/ova, viable embryos, degenerate embryos, or unfertilized oocytes recovered. However, group C had a greater superovulatory response than G (15.7 ± 1.2 vs 18.0 ± 1.3 CL; P = 0.06). Group C embryos presented greater hatching rate, independently of the cryopreservation method, at 48 h (33.1 ± 4.0%; n = 148 vs 17.3 ± 3.3%; n = 137; P = 0.009) and at 72 h (44.3 ± 4.2%; n = 148 vs 30.9 ± 4.0%; n = 137; P = 0.04) of in vitro culture. Moreover, vitrified and frozen embryos had similar hatching rate (P > 0.10). Under the conditions of the present study, supplementation with protected fat did not affect superstimulatory response, quantity or quality of embryos. However embryos from the Control group were more tolerant to cryopreservation. / Mestre

Orientador: Eunice Oba / Banca: Roberto Sartori Filho / Banca: Carlos Antonio de Carvalho Fernandes / Resumo: O objetivo do presente estudo foi de avaliar o efeito da aplicação do flunixin meglumine (FM) no momento da inovulação de embriões bovinos sobre a taxa de prenhez de receptoras e identificar o possível mecanismo pelo qual o FM interfere positivamente na taxa de prenhez desses animais. Para tanto, foram realizados dois experimentos, sendo que no experimento 1 foram utilizadas 184 fêmeas cruzadas inovuladas com embriões produzidos in vitro e divididas aleatoriamente em dois grupos experimentais: controle (G1) e grupo FM (G2) onde as receptoras receberam uma aplicação de 1,1 mg/Kg de FM no momento da inovulação. No experimento 2, 22 fêmeas nelore foram divididas aleatoriamente em três grupos: controle (G1); manipulação (G2) onde os 8 animais foram submetidos a manipulação do trato reprodutivo similar a inovulação de embrião no dia 7 do ciclo estral; e grupo manipulação + FM (G3), onde sete fêmeas foram submetidas a manipulação do trato reprodutivo e uma aplicação de FM (1,1 mg/Kg). Os animais dos três grupos foram submetidos a exames ultrassonográficos e colheitas de sangue diárias durante o restante do ciclo estral para determinação da duração da fase luteal e avaliação das concentrações plasmáticas de progesterona. No experimento 1 não foi observada diferença na taxa de prenhez dos animais no grupo controle e grupo FM (40,2% e 44,6%, respectivamente) (p = 0,55). No experimento 2 não foi observada diferença significativa na duração da fase luteal do ciclo estral entre os grupos experimentais, porém foi observado que os animais do grupo manipulação apresentaram valores médios para as concentrações plasmáticas de progesterona inferiores quando comparados aos valores observados nos grupo controle e manipulação + FM. Dessa forma, foi observado efeito positivo da aplicação do FM no momento da inovulação sobre a concentração plasmática... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this study was to evaluate the effects of an administration of flunixin meglumine (FM) at the moment of bovine embryo transfer on pregnancy rates of recipients and also to determine the possible mechanisms by which FM improves the pregnancy rates of these animals. Therefore two experiments had been carried out in a way that in experiment 1 184 crossbreed females were transferred with an in vitro produced embryo and randomly divided into two experimental groups: control group (G1) and FM group (G2) in which recipients received one administration of 1.1 mg/Kg of FM at the moment of embryo transfer. In experiment 2, 22 nelore females were randomly divided into three groups: control (G1), manipulation (G2) in which animals were submitted to a reproductive tract manipulation (similar to an embryo transfer) at day 7 of the estrous cycle, and manipulation + FM group (G3) in which females were submitted to a reproductive tract manipulation and an administration of FM. To determine the length of luteal phase and evaluate the progesterone release profile of the corpus luteum, animals of the three groups were submitted to successive ultrasound examinations and blood sample collections during the rest of the estrous cycle. In experiment 1 no significant difference was observed on the pregnancy rates of animals of control group and FM group (40.2% and 44.6%, respectively). In experiment 2 no significant difference was observed on the length of the luteal phase of the estrous cycle between experimental groups, however animals of manipulation group presented lower average values of plasma progesterone concentrations when compared to average values observed on control group and manipulation + FM group. Thus a beneficial effect of the administration of FM at the time of embryo transfer over the plasma progesterone concentration was observed, however, no significant difference was observed on the pregnancy rates of treated animals. / Mestre

Orientador: Denise Maria Trombert Oliveira / Banca: Ismar Sebastião Mosqueta / Banca: Sílvia Rodrigues Machado / Resumo: As Fabaceae são a família mais rica do cerrado, contando com 101 gêneros e 777 espécies e o gênero Chamaecrista é o mais numeroso, listando-se 100 espécies. Ainda assim, o gênero é muito pouco conhecido; não são encontrados trabalhos relativos à estrutura do pericarpo e, no que tange às sementes, o levantamento recuperou apenas um trabalho. O presente estudo visa a realizar um estudo estrutural com espécies de Chamaecrista (Fabaceae, Caesalpinioideae), ocorrentes nos cerrados do Estado de São Paulo; mais especificamente, objetiva analisar a morfologia, anatomia e ontogênese de frutos e sementes de Chamaecrista desvauxii (Collad.) Killip var. latistipula (Benth.) G.P. Lewis, Chamaecrista flexuosa (L.) Greene e Chamaecrista nictitans L. var. patellaria (Collad.) H.S. Irwin & Barneby, buscando verificar a ocorrência de padrões estruturais relacionados ao cerrado. Para isto, foram utilizadas técnicas usuais de processamento em microscopia de luz e microscopia eletrônica de varredura. As três espécies apresentam estrutura bastante uniforme, tanto no pericarpo quanto na semente. Os frutos são legumes típicos e, no pericarpo, foram observados aspectos comuns às leguminosas, sendo destacadas características ancestrais (como a folha carpelar fendida), xeromórficas (cutícula espessa, presença de tricomas na epiderme ovariana e no exocarpo, células comuns com paredes anticlinais retas, hipoderme, presença de cristais de oxalato de cálcio e calotas de fibras gelatinosas externas aos feixes dorsal e ventrais) e antiherbivoria (acúmulo de compostos fenólicos e segmentação pericárpica). Na semente, também foram observadas características comuns à família, como o caráter unitegumentado e a testa de estrutura padrão, com paliçada bem diferenciada. São sementes albuminosas e o endosperma é mucilaginoso. As reservas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Fabaceae is the richest family, with 101 genera and 777 species, Chamaecrista is the most numerous genus of cerrado, with 100 species. However, the genus is very little known; works about pericarp structure are not found, and only one work refers to the seed anatomy. We aim to accomplish a structural analysis of species of Chamaecrista (Fabaceae, Caesalpinioideae), occurring in the cerrado of the São Paulo State; more specifically, we intend to analyze the morphology, anatomy and ontogeny of fruits and seeds of Chamaecrista desvauxii (Collad.) Killip var. latistipula (Benth.) G.P. Lewis, Chamaecrista flexuosa (L.) Greene and Chamaecrista nictitans L. var. patellaria (Collad.) H.S. Irwin & Barneby, searching to verify the occurrence of ordinary structural standards in these plants and to indicate similarities with other species of Fabaceae and of the cerrado. For this, usual techniques of light microscopy and scanning electronic microscopy had been used. The three species present uniform structure in the pericarp and in the seed. The fruits are typical legumes and common aspects of the leguminous species have been observed in the pericarp. We detached ancestral characteristics (as the opened carpel), xeromorphic (thick cuticle, presence of trichomes in ovarian epidermis and exocarp, common cells with straight anticlinal walls, hypodermis, presence of calcium oxalate crystals and groups of gelatinous fibres external to dorsal and ventral bundles) and antiherbivory (phenolic compounds accumulation and pericarpic segmentation). In the seed, we have also observed typical Fabaceae traits, as the unitegmic condition and the standard structure of the testa, with well differentiated palisade. The seeds are albuminous and the endosperm is mucilaginous. The seminal reserves (endospermic and cotyledonal) have lipids and proteins, increasing the possibilities of success... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Resumo: Uma das etapas mais críticas do procedimento de transferência nuclear (TN) é a remoção da cromatina do oócito para a produção de citoplastos. O objetivo deste trabalho foi estudar o efeito de diferentes ambientes citoplasmáticos obtidos a partir de três técnicas de enucleação (convencional, assistida quimicamente e induzida quimicamente) sobre o remodelamento nuclear e desenvolvimento embrionário, avaliando-se o perfil de expressão dos genes XIST, G6PD e HSPA1A em embriões bovinos. Para isso, quatro experimentos foram delineados. No primeiro experimento, verificou-se que o processo de enucleação pode ser iniciado a partir de 1,0 h de tratamento com demecolcina nas duas técnicas de enucleação química. A dinâmica nuclear e de microtúbulos de oócitos ativados tratados com demecolcina foi avaliada em um segundo experimento, e oócitos tratados apresentaram redução da densidade dos microtúbulos, porém, essas estruturas não desapareceram completamente na maioria dos oócitos. No experimento III, a demecolcina não apresentou efeitos significativos na atividade do fator promotor de maturação (MPF) e da proteína cinase ativada por mitógeno (MAPK) quando utilizada na concentração 0,05μg/mL. No último experimento, a demecolcina não prejudicou o desenvolvimento embrionário e também não alterou o perfil de expressão dos genes XIST, G6PD e HSPA1A em embriões reconstituídos com células embrionárias; porém, quando foram avaliados os níveis de transcritos desses genes em embriões reconstituídos com células somáticas, observou-se maior expressão relativa do XIST e do G6PD em embriões oriundos da técnica de enucleação assistida quimicamente em comparação aos embriões produzidos pela técnica convencional. Portanto, conclui-se que a enucleação química não altera a reprogramação nuclear nem... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Removal of the oocyte chromatin for production of cytoplasts is one of the most critical steps of the standard nuclear transfer (NT) procedure. The aim of this work was to study the effect of different cytoplasmic environments from three enucleation techniques (conventional, chemical-assisted, and chemical-induced enucleation) on nuclear reprogramming and embryonic development, evaluating the expression patterns of XIST, G6PD and HSPA1A genes in bovine embryos. Therefore, four experiments were designed. In the first experiment, it was verified that the enucleation procedure can be initiated 1.0 h after starting demecolcine treatment on both chemical enucleation techniques. The nuclear and microtubular dynamics of activated oocytes treated with demecolcine were evaluated in a second experiment, and treated oocytes showed decreased microtubule density, but these structures did not completely disappear in most oocytes. In experiment III, demecolcine at a concentration of 0.05μg/mL had no significant effect on maturation promoting factor (MPF) and mitogen activated protein kinase (MAPK) activity. In the last experiment, demecolcine had no detrimental effects on embryonic development. Also, the expression patterns of XIST, G6PD and HSPA1A were not altered in reconstituted embryos derived from embryonic donor cells; however, evaluation of transcript levels of these genes in embryos reconstituted using somatic donor cells revealed higher relative expression of XIST and G6PD in embryos derived from chemicalassisted enucleation in comparison to embryos those produced by the conventional technique. In conclusion, chemical enucleation has no effect on nuclear reprogramming and embryonic development after nuclear transfer using embryonic donor cells. Also, chemical-assisted enucleation increases XIST and G6PD expression in nuclear transfer embryos... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Joaquim Mansano Garcia / Coorientadora: Simone Cristina Méo Niciura / Banca: Cláudia Lima Verde Leal / Banca: César Roberto Esper / Banca: Fernanda da Cruz Landim Alvarenga / Banca: Paulo Henrique Franceschini / Doutor

Resumo: Não disponível / Abstract: Not available / Orientador: Joaquim Mansano Garcia / Coorientador: Christina Ramires Ferreira / Banca: César Roberto Esper / Banca: Felipe Perecin / Banca: Karina Belotti Avelino / Banca: Paulo Henrique Franceschini / Doutor

Resumo: Foram investigados os efeitos da irradiação com diodos lasers operando em 780 nm (infravermelho) e 660 nm (visível) na maturação, fertilização e cultivo in vitro de embriões bovinos. Verificou-se que a irradiação de oócitos com ambos os lasers, durante 30, 60, 120 e 180 segundos (L30, L60, L120, L180) não afetou (p>0,05) as taxas de maturação nuclear (Infravermelho: L30 - 88,92% vs. C30 - 81,84%; L60 - 83,56% vs. C60 - 87,40%; L120 - 76,06% vs. C120 - 85,30%; L180 - 77,42% vs. C180 - 80,16%; e Visível: L30 - 65,81% vs. C30 - 71,59%; L60 - 62,75% vs. C60 - 69,62%; L120 - 70,38% vs. C120 - 64,04%; L180 - 56,72% vs. C180 - 67,41%), e de maturação citoplasmática, avaliada por meio da distribuição dos grânulos corticais (Infravermelho: L30 - 86,18% vs. C30 - 61,04%; L60 - 66,03% vs. C60 - 56,16%; L120 - 53,75% vs. C120 - 79,81%; L180 - 57,70% vs. C180 - 82,04% e Visível: L30 - 81,08% vs. C30 - 74,42%; L60 - 68,11% vs. C60 - 61,63%; L120 - 75,95% vs. C120 - 48,33%; L180 - 77,77% vs. C180 - 59,52%). As porcentagens de produção embrionária ao sétimo dia de cultivo in vitro não foram alteradas (p>0,05) após a irradiação de oócitos com laser infravermelho (L30 - 29,20% vs. C30 - 42,60%; L60 - 32,0% vs. C60 - 31,0%; L120 - 38,0% vs. C120 - 35,0%; L180 - 37,0% vs. C180 - 32,0%), mas foram reduzidas após a irradiação com laser visível durante 180 seg. (L180 - 36,0% vs. C180 - 56,0 %). A irradiação em espermatozóides com ambos os lasers não afetou (p>0,05) as taxas de clivagem ao terceiro dia de cultivo in vitro (Infravermelho: L30 - 90,0% vs. C30 - 95,83%; L60 - 85,56% vs. C60 - 98,33%; L120 - 90,83% vs. C120 - 90,83%; L180 - 89,72% vs. C180 - 97,50%; e Visível: L30 - 82,96% vs. C30 - 85,61%; L60 - 82,10% vs. C60 - 82,53%; L120 - 80,48% vs. C120 - 82,44%; ...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The diodo lasers irradiation effects, operating in 780nm (infrared light) and 660 nm (visible light), were evaluated on in vitro maturation, fertilization and culture rates of bovine embryos. Both infrared and visible laser irradiation on oocytes, during 30, 60, 120 and 180 seconds (30, 60, 120, 180) did not change (p>0,05) the rates of nuclear maturation (Infrared: L30 - 88.92% vs. C30 - 81.84%; L60 - 83.56% vs. C60 - 87.40%; L120 - 76.06% vs. C120 - 85.30%; L180 - 77.42% vs. C180 - 80.16%; and Visible: L30 - 65.81% vs. C30 - 71.59%; L60 - 62.75% vs. C60 - 69.62%; L120 - 70.38% vs. C120 - 64.04%; L180 - 56.72% vs. C180 - 67.41%), and the cytoplasmic cortical granule distribution (Infrared: L30 - 86.18% vs. C30 - 61.04%; L60 - 66.03% vs. C60 - 56.16%; L120 - 53.75% vs. C120 - 79.81%; L180 - 57.70% vs. C180 - 82.04% and Visible: L30 - 81.08% vs. C30 - 74.42%; L60 - 68.11% vs. C60 - 61.63%; L120 - 75.95% vs. C120 - 48.33%; L180 - 77.77% vs. C180 - 59.52%). The in vitro embryo production rates measured on seventh day of culture were not changed (p.0,05) after the infrared laser irradiation (L30 - 29.20% vs. C30 - 42.60%; L60 - 32.0% vs. C60 - 31.0%; L120 - 38.0% vs. C120 - 35.0%; L180 - 37.0% vs. C180 - 32.0%), but they were reduced (p<0,05) after the visible laser irradiation during 180 seconds (L180 - 36.0% vs. C180 - 56.0 %). When spermatozoa were irradiated, both lasers did not change the rates of cleavage (p>0,05) on third day of in vitro culture (Infrared: L30 - 90.0% vs. C30 - 95.83%; L60 - 85.56% vs. C60 - 98.33%; L120 - 90.83% vs. C120 - 90.83%; L180 - 89.72% vs. C180 - 97.50%; and Visible: L30 - 82.96% vs. C30 - 85.61%; L60 - 82.10% vs. C60 - 82.53%; L120 - 80.48% vs. C120 - 82.44%; L180 - 83.53% vs. C180 - 87.15%), the embryo production percentages on seventh day ...(Complete abstract, click electronic access below) / Orientador: Joaquim Mansano Garcia / Coorientador: César Roberto Esper / Banca: Gisele Zoccal Mingoti / Banca: Nivaldo Antonio Parizotto / Mestre

Orientador: Ciro Moraes Barros / Banca: Fabíola Freitas de Paula Lopes / Banca: Gisele Zoccal Mingoti / Resumo: Existem evidências de que os efeitos deletérios do estresse térmico calórico (ETC) sobre a fertilidade são menos pronunciados em raças tolerantes ao calor devido primariamente às diferenças na capacidade de termorregulação. Experimentos in vitro têm demonstrado que embriões zebuínos (Bos indicus) são mais resistentes ao ETC quando comparados a taurinos (Bos taurus). A fim de melhor compreender as diferenças entre zebuínos e taurinos em relação à resistência ao choque térmico, objetivou-se com o presente trabalho verificar se a resistência ao ETC é resultado da contribuição genética do oócito, do espermatozóide ou de ambos e se o intervalo de tempo entre o abate dos animais e a aspiração do oócito influencia o desenvolvimento do embrião. No experimento 1 oócitos de vacas das raças Nelore e mestiças com fenótipo predominante da raça Holandesa preto e branco (mHPB) foram coletados em frigorífico, maturados e fertilizados com espermatozóide de touros das raças Nelore (N), Angus (An), Brahman (Bra) e Gir (Gir). No experimento 2 oócitos de vacas das raças Nelore e HPB puras foram coletados em frigorífico, aspirados 4 e 6:30 horas após o abate dos animais, maturados e fertilizados com espermatozóide de touros das raças N, Gir e HPB. Em ambos os experimentos, noventa e seis horas pós-inseminação (hpi), os embriões com mais de 16 células foram separados ao acaso em dois grupos: controle e ETC. Os embriões do grupo controle foram cultivados a 39 oC continuamente e do grupo ETC expostos a 41 oC por 12 horas, retornando a seguir para 39 oC. No experimento 1 não foi observado efeito do ETC nas várias raças estudadas, não havendo portanto, redução nas taxas de blastocisto e blastocisto eclodido. As taxas de clivagem e mórula dos embriões mHPB x Gir foram inferiores (p<0,05) as das demais raças. As raças mHPB x N apresentaram taxas de blastocisto ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: There are evidences that deleterious effects of heat stress (HS) on fertility are less pronounced in breeds tolerant to high temperatures, due mainly to differences on their thermoregulatory capacity. In vitro experiments have shown that Bos indicus embryos are more resistant to HS when compared to Bos taurus. In order to better understand the differences related to heat shock resistance between Bos indicus and Bos taurus, the main objective of this study was to determine if tolerance to HS is cause by genetic contribution from the oocyte, spermatozoa or both. Additionaly, the influence of the time, between collection of ovaries in the abattoir and oocyte aspiration in the laboratory, on early embryo development was ascertained. In experiment 1, oocytes from Nellore and crossbreed Holstein cows (cHST), were collected in a local abattoir, matured and fertilized using semen from Nellore (N), Angus (An), Brahman (Bra) and Gir (Gir) bulls. In experiment 2, oocytes from Nelore and Holstein (HST) cows were collected in an abattoir and the oocytes were aspired in the laboratory 4 or 6:30 h afterwards, matured and fertilized using semen from N, Gir and HST. In both experiments, 96 h post insemination (hpi), embryos with 16 cells were separated in two groups: control and HS. In the control group the embryos were cultured at 39 oC, whereas in the HS group the embryos were submitted to 41 oC during for 12 h, and then returned to 39 oC. In experiment 1, there was no effect of HS on blastocyst and hatched blastocyst rates in all breeds studied.. The percentage of oocytes that cleaved and reached the morula stage was significantly lower (p<0.05) in cHST x Gir as compared to the other breeds. Additionaly, blastocyst rate was higher in cHST x N than in cHST x An and cHST x Gir (P<0.05). In experiment 2, cleavage, morula and blastocyst rates of Group 4 h were higher (P<0.05) as compared to Group ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Vera Fernanda Martins Hossepian de Lima / Banca: Lia de Alencar Coelho / Banca: Claudia Lima Verde Leal / Banca: César Roberto Esper / Banca: Gilson Helio Toniollo / Resumo: Os objetivos deste trabalho foram de facilitar os procedimentos de formação de gradientes de- densidade de Percoll e OptiPrep para separação de espermatozóides X; avaliar a eficiência da sexagem de espermatozóides X, a viabilidade espermática e integridade do acrossoma e do DNA após a centrifugação nestes gradientes e avaliar taxa de clivagem e blastocisto durante a produção in vitro de embriões. Para isso, doses de sêmen de touros foram descongeladas e cerca de 40 milhões de espermatozóides foram colocados sobre cada gradiente de densidade compostos por Percoll ou OptiPrep com três camadas que variaram entre 1.11 Og/mL a 1.123g/mL em tubos de poliestireno de 15mL. Centrifugou-se o gradiente a 500xg por 15 min a 22°C. Os sobrenadantes foram aspirados e recuperados para verificação da viabilidade espermática e integridade do acrossoma, fragmentação do DNA, produção in vitro de embriões, avaliação da eficiência da sexagem pela reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real (qPCR) e sexagem dos embriões pela PCR. A porcentagem de espermatozóides vivos com acrossoma intacto diminuiu (P<0,05) após a centrifugação nos gradientes de densidade, mas não influenciou, de modo geral, a produção in vitro de embriões (taxa de clivagem e blastocistos) utilizando estes espermatozóides centrifugados. Não foi detectada fragmentação do DNA dos espermatozóides nas amostras centrifugadas. Os resultados demonstraram que o Percoll enriqueceu as amostras com espermatozóides X (62% de fêmeas, P<0,05). No OptiPrep e grupo Controle a porcentagem de fêmeas foi de 47,1 e 48,7%, respectivamente. Estes resultados foram confirmados pela qPCR do DNA dos espermatozóides, com uma subestimação apenas no Percoll. Foi possível realizar a sexagem, por uma metodologia mais simples, facilitando o procedimento de centrifugação em gradiente de densidade e sem provocar danos aos espermatozóides. / Abstract: The objectives of this work were to facilitate the procedures of formation of density gradients of Percoll and OptíPrep for separation of X-bearing bovine spermatozoa; to evaluate the efficiency of sexing and viability of acrosome integrity and DNA after centrifugation in these gradients and to assess the cleavage and blastocyst rate during in vitro production of embryos. For this, frozen-thawed spermatozoa (20 to 40 millions) were deposited on each density gradient composed of Percoll or OptiPrep with three layers that varied between 1.110g/mL to 1.123g/mL, in 15mL polystyrene tubes. The tubes were centrifuged at 500xg for 15 min at 22oC. Supernatants were carefully aspirated and sediments recovered for verification of sperm quality, DNA fragmentation, in vitro fertilization of embryos, evaluation of the efficiency of sexing by real time polymerase chain reaction (qPCR) and sexing of embryos by PCR. Percentage of live spermatozoa with intact acrosome decreased (P<0.05) after centrifugation in density gradients, however, it not influence, in general, the production of embryos in vitro (cleavage and blastocyst rates) using these centrifuged sperm. No sperm DNA fragmentation was detected in centrifuged samples. The results of embryo sexing by PCR showed deviation to female in the Percoll group (62%, P<0.05). In the OptiPrep and Control group the percentage of females was 47.1 and 48.7%, respectively. These results were confirmed by qPCR of DNA of spermatozoa, with an underestimation only in the Percoll group. It was possible the sexing, by a simple approach, facilitating the process of the centrifugation in density gradient and without damage to sperm. / Doutor