Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-12-09Bitstream added on 2014-06-13T18:46:36Z : No. of bitstreams: 1 martins_lr_dr_botfmvz.pdf: 1331957 bytes, checksum: 49bb483ccab8a8fb76bb4bcfe96d230a (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Testou-se a hipótese de influência da sazonalidade sobre a produção embrionária in vitro de gato doméstico (Felis catus), na cidade de Botucatu, localizada sob latitude de 22º53’09” S, no estado de São Paulo, Brasil, em associação a três condições ovarianas – inativa, luteal e folicular em dois momentos: período I, que compreendeu os meses de janeiro, fevereiro e março e período II constituído pelos meses de agosto, setembro e outubro. Realizaram-se dois experimentos: I) Aspectos relacionados à maturação in vitro e análise ultra-estrutural de complexos cumulus-oophorus (COC) de felinos domésticos e II) Produção in vitro e análise ultra-estrutural de embriões de gato doméstico. O objetivo do experimento I foi avaliar as taxas de recuperação e maturação in vitro de COC e a descrição de suas características ultra-estruturais. O experimento II visou à avaliação das taxas de clivagem, de formação de mórulas, de produção de blastocistos; à avaliação da qualidade dos embriões felinos em fase inicial de desenvolvimento e à descrição das características ultra-estruturais dos embriões obtidos. No experimento I, para verificação das taxas de recuperação oocitária e de maturação in vitro foram avaliados 473 oócitos grau I no período I e 482 oócitos grau I no período II, provenientes de 20 e de 10 pares de ovário, respectivamente. O número médio de oócitos obtidos por gata foi de 23,65 e 48,2 nos períodos I e II, respectivamente. Esses COC foram maturados in vitro e classificados quanto à configuração nuclear em vesícula germinativa (VG), quebra de vesícula germinativa (QVG), metáfase I (MI), metáfase II (MII) e degenerados/não identificados (D/NI). No experimento II, 386 e 568 COC durante o período I e II respectivamente, foram fertilizados com sêmen fresco e após três e oito dias de cultivo verificou-se... / The hypothesis of season effect at Botucatu, 22º53’09” S, Sao Paulo State, Brazil, on in vitro embryo production of domestic cat (Felis catus), was tested in association with three ovarian conditions – inactive, luteal and follicular during two seasons: season I, which comprehended the months of January, February and March and season II, constituted by the months of August, September and October. This study was divided in two experiments: I) In vitro oocyte maturation and ultrastructural analysis of cumulus-oocyte complexes (COC) of domestic cats and II) In vitro embryo production and ultrastructural analysis of embryo of domestic cats. The aim of the experiment I was to analyze the COC recovery rate and in vitro nuclear maturation (IVM) rate and the description of its ultrastructural characteristics. The experiment II aimed to evaluate cleavage and morulae rates and blastocyst formation; to evaluate the quality of domestic cat embryos and to describe ultrastructural characteristics of these embryos. In experiment I, to evaluate COC recovery rate and in vitro maturation rate; 473 Grade I COC recovered from 20 ovarian pairs and 482 Grade I COC recovered from 10 ovarian pairs were evaluated during season I and season II, respectively. These COC were in vitro matured and classified according to nuclear configuration as germinal vesicle (GV), germinal vesicle breakdown (GVBD), metaphase I (MI), metaphase II (MII) and degenerated/non-identified (D/NI). In experiment II, 368 and 568 COC recovered from ovaries during season I and II, respectively, were in vitro fertilized with fresh semen and after three and eight days of culture the development stage and embryo viability were analyzed. In experiment I, no significant difference was verified in the percentage of oocytes in MII in both seasons and considering the three conditions. These results indicate that in vitro maturatiom... (Complete abstract click electronic access below)

Resumo: Testou-se a hipótese de influência da sazonalidade sobre a produção embrionária in vitro de gato doméstico (Felis catus), na cidade de Botucatu, localizada sob latitude de 22º53'09" S, no estado de São Paulo, Brasil, em associação a três condições ovarianas - inativa, luteal e folicular em dois momentos: período I, que compreendeu os meses de janeiro, fevereiro e março e período II constituído pelos meses de agosto, setembro e outubro. Realizaram-se dois experimentos: I) Aspectos relacionados à maturação in vitro e análise ultra-estrutural de complexos cumulus-oophorus (COC) de felinos domésticos e II) Produção in vitro e análise ultra-estrutural de embriões de gato doméstico. O objetivo do experimento I foi avaliar as taxas de recuperação e maturação in vitro de COC e a descrição de suas características ultra-estruturais. O experimento II visou à avaliação das taxas de clivagem, de formação de mórulas, de produção de blastocistos; à avaliação da qualidade dos embriões felinos em fase inicial de desenvolvimento e à descrição das características ultra-estruturais dos embriões obtidos. No experimento I, para verificação das taxas de recuperação oocitária e de maturação in vitro foram avaliados 473 oócitos grau I no período I e 482 oócitos grau I no período II, provenientes de 20 e de 10 pares de ovário, respectivamente. O número médio de oócitos obtidos por gata foi de 23,65 e 48,2 nos períodos I e II, respectivamente. Esses COC foram maturados in vitro e classificados quanto à configuração nuclear em vesícula germinativa (VG), quebra de vesícula germinativa (QVG), metáfase I (MI), metáfase II (MII) e degenerados/não identificados (D/NI). No experimento II, 386 e 568 COC durante o período I e II respectivamente, foram fertilizados com sêmen fresco e após três e oito dias de cultivo verificou-se... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The hypothesis of season effect at Botucatu, 22º53'09" S, Sao Paulo State, Brazil, on in vitro embryo production of domestic cat (Felis catus), was tested in association with three ovarian conditions - inactive, luteal and follicular during two seasons: season I, which comprehended the months of January, February and March and season II, constituted by the months of August, September and October. This study was divided in two experiments: I) In vitro oocyte maturation and ultrastructural analysis of cumulus-oocyte complexes (COC) of domestic cats and II) In vitro embryo production and ultrastructural analysis of embryo of domestic cats. The aim of the experiment I was to analyze the COC recovery rate and in vitro nuclear maturation (IVM) rate and the description of its ultrastructural characteristics. The experiment II aimed to evaluate cleavage and morulae rates and blastocyst formation; to evaluate the quality of domestic cat embryos and to describe ultrastructural characteristics of these embryos. In experiment I, to evaluate COC recovery rate and in vitro maturation rate; 473 Grade I COC recovered from 20 ovarian pairs and 482 Grade I COC recovered from 10 ovarian pairs were evaluated during season I and season II, respectively. These COC were in vitro matured and classified according to nuclear configuration as germinal vesicle (GV), germinal vesicle breakdown (GVBD), metaphase I (MI), metaphase II (MII) and degenerated/non-identified (D/NI). In experiment II, 368 and 568 COC recovered from ovaries during season I and II, respectively, were in vitro fertilized with fresh semen and after three and eight days of culture the development stage and embryo viability were analyzed. In experiment I, no significant difference was verified in the percentage of oocytes in MII in both seasons and considering the three conditions. These results indicate that in vitro maturatiom... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Maria Denise Lopes / Coorientador: Fernanda da Cruz Landim Alvarenga / Banca: Marcelo Alcindo de Barros Vaz Guimarães / Banca: Nei Moreira / Banca: Sony Dimas Bicudo / Doutor

Orientador: Fernanda C. Landim Alvarenga / Banca: Maria Denise Lopes / Banca: Mayra Elena Ortiz D'Avila Assumpção / Resumo: O objetivo deste estudo foi aprimorar os protocolos de produção in vitro de embriões e de ativação partenogenética visando o isolamento e o cultivo de células tronco embrionárias felinas. Os CCOs-I foram obtidos a partir de ovários de gatas adultas e maturados in vitro. No experimento I, os CCOS foram fecundados e os embriões cultivados nos meios SOFaa e FOC. Foram comparadas as taxas de clivagem e a produção de blastocistos. A análise estatística foi realizada por meio da análise de variância e a viabilidade embrionária foi avaliada por sondas fluorescentes (Hoechst e iodeto de propídio). Não houve diferenças significativas entre os meios de cultivo, os quais apresentaram taxas de clivagem de 50,5±9,47 e 63,75±5,9 (P>0,05) e de produção de blastocistos em relação ao total de oócitos fecundados de 18±5,07 e 33,2±3,71 (P>0,05) para FOC e SOF respectivamente. No experimento II, os CCOs maturos foram submetidos a três diferentes protocolos de ativação partenogenética: 1-ionomicina associada ao cicloheximide; 2-ionomicina associada ao roscovitine e 3-ionomicina associada ao estrôncio, os quais foram comparados entre si e ao controle quanto às taxas de ativação, clivagem e desenvolvimento embrionário, sendo cultivados em SOFaa por 72 horas após a ativação. Para tais avaliações, oócitos e embriões foram corados com Hoechst 33342 e examinados em microscópio invertido. Como análise estatística foi utilizado o teste qui-quadrado. Não houve diferença significativa entre os tratamentos quanto à taxa de oócitos ativados (69,9%, 76,6% e 64,6%, para tratamento 1, 2 e 3 respectivamente) (P>0,05) nem quanto às taxas de clivagem (46,6%, 46,73% e 32,32%, para tratamento 1, 2 e 3 respectivamente) (P>0,05), mas sim entre estes e o controle (36% e 12%, respectivamente, para taxa de oócitos ativados e taxas de clivagem) (P<0,05). Quanto ao desenvolvimento... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objective of this study was to improve the existent protocols for in vitro embryos production and parthenogenetic activation in cats, aiming the isolation and culture of feline embryonic stem cells. COCs-I were collected from adult queens's ovaries and matured in vitro. In the experiment I, COCs were fertilized and embryos cultured in two culture media, SOFaa and FOC. In both media the cleavage rate and blastocysts production were compared. Fluorescents probes (Hoechst and propidium iodide) were utilized to estimate embryo viability. The statistical analysis was realized through the ANOVA. No statistical difference was observed between culture media. The cleavage rates considering the total number of fertilized oocytes were 50.5±9.47 and 63.75±5.9 (P>0.05) for FOC and SOF medium respectively. Similarly, the blastocysts production rates were 18±5.07 and 33.2±3.71 (P>0.05) for FOC and SOF, respectively. In experiment II matured COCs were submitted to three parthenogenetic activation protocols: 1- ionomycin associated to cycloheximide; 2 - ionomycin associated to roscovitine; 3 - ionomycin associated to strontium. The treatments were compared among themselves and among them and the control concerning chromatin decondensation, cleavage and embryo development rates. The parthenogenetic embryos were then cultured in SOFaa during 72 hours. To estimate chromatin status and number of nuclei, oocytes and embryos were stained with Hoechst 33342 and examined under an inverted fluorescent microscope. As statistical analyses chi-square test was utilized. No statistical difference was observed among treatments concerning activated oocytes rates (69.9%, 76.6% e 64.6%, respectively, for treatment 1, 2 and 3) (P>0.05) neither cleavage rates (46.6%, 46.73% e 32.32%, respectively, for treatment 1, treatment 1, 2, 3) (P>0.05). However, statistical difference was observed among treatments and... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-07-03Bitstream added on 2014-06-13T20:16:19Z : No. of bitstreams: 1 rascado_ts_me_botfmvz.pdf: 550386 bytes, checksum: 2b1967d2846b363e04547e6d5a1ff2fb (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo deste estudo foi aprimorar os protocolos de produção in vitro de embriões e de ativação partenogenética visando o isolamento e o cultivo de células tronco embrionárias felinas. Os CCOs-I foram obtidos a partir de ovários de gatas adultas e maturados in vitro. No experimento I, os CCOS foram fecundados e os embriões cultivados nos meios SOFaa e FOC. Foram comparadas as taxas de clivagem e a produção de blastocistos. A análise estatística foi realizada por meio da análise de variância e a viabilidade embrionária foi avaliada por sondas fluorescentes (Hoechst e iodeto de propídio). Não houve diferenças significativas entre os meios de cultivo, os quais apresentaram taxas de clivagem de 50,5±9,47 e 63,75±5,9 (P>0,05) e de produção de blastocistos em relação ao total de oócitos fecundados de 18±5,07 e 33,2±3,71 (P>0,05) para FOC e SOF respectivamente. No experimento II, os CCOs maturos foram submetidos a três diferentes protocolos de ativação partenogenética: 1-ionomicina associada ao cicloheximide; 2-ionomicina associada ao roscovitine e 3-ionomicina associada ao estrôncio, os quais foram comparados entre si e ao controle quanto às taxas de ativação, clivagem e desenvolvimento embrionário, sendo cultivados em SOFaa por 72 horas após a ativação. Para tais avaliações, oócitos e embriões foram corados com Hoechst 33342 e examinados em microscópio invertido. Como análise estatística foi utilizado o teste qui-quadrado. Não houve diferença significativa entre os tratamentos quanto à taxa de oócitos ativados (69,9%, 76,6% e 64,6%, para tratamento 1, 2 e 3 respectivamente) (P>0,05) nem quanto às taxas de clivagem (46,6%, 46,73% e 32,32%, para tratamento 1, 2 e 3 respectivamente) (P>0,05), mas sim entre estes e o controle (36% e 12%, respectivamente, para taxa de oócitos ativados e taxas de clivagem) (P<0,05). Quanto ao desenvolvimento... / The objective of this study was to improve the existent protocols for in vitro embryos production and parthenogenetic activation in cats, aiming the isolation and culture of feline embryonic stem cells. COCs-I were collected from adult queens´s ovaries and matured in vitro. In the experiment I, COCs were fertilized and embryos cultured in two culture media, SOFaa and FOC. In both media the cleavage rate and blastocysts production were compared. Fluorescents probes (Hoechst and propidium iodide) were utilized to estimate embryo viability. The statistical analysis was realized through the ANOVA. No statistical difference was observed between culture media. The cleavage rates considering the total number of fertilized oocytes were 50.5±9.47 and 63.75±5.9 (P>0.05) for FOC and SOF medium respectively. Similarly, the blastocysts production rates were 18±5.07 and 33.2±3.71 (P>0.05) for FOC and SOF, respectively. In experiment II matured COCs were submitted to three parthenogenetic activation protocols: 1- ionomycin associated to cycloheximide; 2 – ionomycin associated to roscovitine; 3 – ionomycin associated to strontium. The treatments were compared among themselves and among them and the control concerning chromatin decondensation, cleavage and embryo development rates. The parthenogenetic embryos were then cultured in SOFaa during 72 hours. To estimate chromatin status and number of nuclei, oocytes and embryos were stained with Hoechst 33342 and examined under an inverted fluorescent microscope. As statistical analyses chi-square test was utilized. No statistical difference was observed among treatments concerning activated oocytes rates (69.9%, 76.6% e 64.6%, respectively, for treatment 1, 2 and 3) (P>0.05) neither cleavage rates (46.6%, 46.73% e 32.32%, respectively, for treatment 1, treatment 1, 2, 3) (P>0.05). However, statistical difference was observed among treatments and... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Maria Denise Lopes / Banca: Fernanda da Cruz Landim / Banca: Fabiana Souza Ferreira / Banca: Ronaldo Gonçalves Morato / Banca: Nei Moreira / Resumo: Não disponível / Abstract: Not available / Doutor

Orientador: Maria Denise Lopes / Banca: Frederico Ozanan Papa / Banca: Jussara Tebet / Resumo: A análise dos efeitos da refrigeração sobre a congelabilidade da célula espermática da cauda do epidídimo de gatos domésticos foram avaliados nesse experimento. Após prévia refrigeração a 5O C por 24 horas alíquotas de sêmen foram submetidas a criopreservação e posteriormente descongeladas para análise morfofuncional. 15 animais foram submetidos a orquiectomia de conveniência e seus epidídimos foram manipulados para obtenção de amostras que foram suspensas em meio TE (TRIS/Equex/Gema de Ovo), analisadas, refrigeradas e congeladas. Amostras referentes ao grupo controle foram congeladas imediatamente após a colheita. A analise morfofuncional consistiu em motilidade, vigor, morfologia espermática e Integridade de membrana. Após a descongelação os resultados dos grupos controle e trabalho foram analisados estatisticamente e observou-se que não existe diferença estatística para nenhuma das variáveis analisadas. Embora tenha sido observada diferença estatística entre os momentos pós-colheita e pós-refrigeração por 24 horas para as variáveis motilidade, vigor, integridade de membrana e defeitos primários, nenhuma variável diferiu entre as amostras congeladas pós-colheita e as amostras congeladas pós-refrigeração prolongada. Tais resultados demonstram que um transporte refrigerado a 5O C por 24 horas não interfere sobre a congelabilidade de sêmen do epidídimo de gatos domésticos. Do ponto de vista da conservação tais resultados abrem portas para um melhor fluxo de gametas de espécies selvagens para centrais de biotecnologia permitindo um melhor aproveitamento e conservação deste material. / Abstract: The present study analyzed the effect of cooling on sperm cells obtained from the epididymis tail from domestic cats in respect to their capability for freezing. The treatment group had their samples submitted to freezing after being cooled at 5° C during 24 hours, and th~ control group samples were frozen immediately after collection, Samples from both groups were then thawed and submitted to mo rphofunctiona I analysis. Fifteen animais were submitted to a convenient routine orchiectomy and their epididymis were processed to obtain a semen samples which were suspended in TE medium (TRIS/Equexl egg yolk). The samples were then analyzed, coo,led and frozen. The morphofunctional analysis consisted of sperm motility, vigor, morphology and membrane integrity. After thawing, the semen samples from treatment and control groups were analyzed and no statistic difference was found among ali variables described above. / Mestre

Made available in DSpace on 2016-09-27T13:40:20Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-06-26. Added 1 bitstream(s) on 2016-09-27T13:45:49Z : No. of bitstreams: 1 000868770.pdf: 910059 bytes, checksum: 43da44965c923449607f30f46cbebcf6 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-07-29Bitstream added on 2014-06-13T19:17:43Z : No. of bitstreams: 1 martins_jla_me_botfmvz.pdf: 366556 bytes, checksum: 5564f8a57d5ae434024a1843feeb124b (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A análise dos efeitos da refrigeração sobre a congelabilidade da célula espermática da cauda do epidídimo de gatos domésticos foram avaliados nesse experimento. Após prévia refrigeração a 5O C por 24 horas alíquotas de sêmen foram submetidas a criopreservação e posteriormente descongeladas para análise morfofuncional. 15 animais foram submetidos a orquiectomia de conveniência e seus epidídimos foram manipulados para obtenção de amostras que foram suspensas em meio TE (TRIS/Equex/Gema de Ovo), analisadas, refrigeradas e congeladas. Amostras referentes ao grupo controle foram congeladas imediatamente após a colheita. A analise morfofuncional consistiu em motilidade, vigor, morfologia espermática e Integridade de membrana. Após a descongelação os resultados dos grupos controle e trabalho foram analisados estatisticamente e observou-se que não existe diferença estatística para nenhuma das variáveis analisadas. Embora tenha sido observada diferença estatística entre os momentos pós-colheita e pós-refrigeração por 24 horas para as variáveis motilidade, vigor, integridade de membrana e defeitos primários, nenhuma variável diferiu entre as amostras congeladas pós-colheita e as amostras congeladas pós-refrigeração prolongada. Tais resultados demonstram que um transporte refrigerado a 5O C por 24 horas não interfere sobre a congelabilidade de sêmen do epidídimo de gatos domésticos. Do ponto de vista da conservação tais resultados abrem portas para um melhor fluxo de gametas de espécies selvagens para centrais de biotecnologia permitindo um melhor aproveitamento e conservação deste material. / The present study analyzed the effect of cooling on sperm cells obtained from the epididymis tail from domestic cats in respect to their capability for freezing. The treatment group had their samples submitted to freezing after being cooled at 5° C during 24 hours, and th~ control group samples were frozen immediately after collection, Samples from both groups were then thawed and submitted to mo rphofunctiona I analysis. Fifteen animais were submitted to a convenient routine orchiectomy and their epididymis were processed to obtain a semen samples which were suspended in TE medium (TRIS/Equexl egg yolk). The samples were then analyzed, coo,led and frozen. The morphofunctional analysis consisted of sperm motility, vigor, morphology and membrane integrity. After thawing, the semen samples from treatment and control groups were analyzed and no statistic difference was found among ali variables described above.