Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-04-18Bitstream added on 2014-06-13T20:14:20Z : No. of bitstreams: 1 feres_fc_me_araca.pdf: 219812 bytes, checksum: 1f1fed7d532991a23b940dd724388339 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Foram coletadas 460 amostras de fezes de cordeiros com até 30 dias de vida com o objetivo de determinar a ocorrência de Cryptosporidium na região de Araçatuba, assim como as espécies envolvidas nesta parasitose. Realizou-se análise microscópica pela técnica de coloração negativa com verde malaquita em todas as amostras de fezes. Para a identificação molecular de Cryptosporidium, nas amostras positivas à microscopia, utilizou-se a reação de nested PCR, com amplificação de fragmentos da subunidade 18S do gene do RNA ribossômico ou do gene da actina. Encontraram-se 6,73% dos animais eliminando oocistos de Cryptosporidium nas fezes. A espécie e genótipo envolvidos foram: Cryptosporidium parvum e genótipo cervídeo que representam potencial zoonótico e Cryptosporidium parvum tipo B. Foram coletadas também 191 amostras de sangue de cordeiros com até 30 dias de vida com o objetivo de determinar as concentrações séricas de imunoglobulina G, PT, γ globulina, GGT e FA, assim como determinar a associação entre estas variáveis. Foi avaliada se a atividade sérica das enzimas GGT e FA pode ser utilizada indiretamente como indicadora de transferência de imunidade passiva. Para tanto, foram realizados os testes de imunodifusão radial, espectrofotometria e eletroforese respectivamente. Para os valores de GGT e FA, foram utilizados kits comerciais. Houve correlação estatística significativa entre a FA e GGT; fato também observado com relação a PT, a IgG e a GGT. A γ globulina mostrou-se correlacionada com GGT, IgG e PT. A atividade de FA demonstrou-se ineficaz para uso como indicadora de transferência de imunidade passiva. / A total of 460 fecal samples were collected from lambs during the first 30 days of life with the aim to determine the occurrence of Cryptosporidium in Araçatuba region, as well as to identify species involved in this parasitism. Microscopic analysis of feces was carried out using malachite green negative stain. Cryptosporidium positive samples were subjective to a nested PCR, with amplification of fragments of the subunity 18S of the gene of the ribossomic RNA or the gene of the actin. In this study 6.73% of animals were eliminating oocists of Cryptosporidium in their feces. The involved species and genotype were: Cryptosporidium parvum and cervide genotype, which represent a zoonotic potential and Cryptosporidium parvum type B. Blood samples (191) were collected from lambs that were up to 30 days old to determine the serum concentrations of immunoglobulin G, TP, γ globulin, GGT and ALP, as well as to determine the association between these variables. This was done in order to explore the possibility of using changes in activities of GGT e ALP as indirect indicators of immune passive transfer in lambs The following tests were perfomed: radial immunodiffusion, spectrophotometry and electrophoresis respectively. GGT and ALP values were determinate using commercial kits. There was a statistically significant correlation between ALP and GGT. The same correlation was observed from TP, IgG and GGT. A positive γ globulin correlation was found between GGT, IgG and TP. ALP activity cannot be used as an indicator of immune passive transfer.

Orientador: Francisco Leydson Formiga Feitosa / Banca: Luiz Cláudio Nogueira Martins / Banca: Maurício Garcia / Resumo: Foram coletadas 460 amostras de fezes de cordeiros com até 30 dias de vida com o objetivo de determinar a ocorrência de Cryptosporidium na região de Araçatuba, assim como as espécies envolvidas nesta parasitose. Realizou-se análise microscópica pela técnica de coloração negativa com verde malaquita em todas as amostras de fezes. Para a identificação molecular de Cryptosporidium, nas amostras positivas à microscopia, utilizou-se a reação de nested PCR, com amplificação de fragmentos da subunidade 18S do gene do RNA ribossômico ou do gene da actina. Encontraram-se 6,73% dos animais eliminando oocistos de Cryptosporidium nas fezes. A espécie e genótipo envolvidos foram: Cryptosporidium parvum e genótipo cervídeo que representam potencial zoonótico e Cryptosporidium parvum tipo B. Foram coletadas também 191 amostras de sangue de cordeiros com até 30 dias de vida com o objetivo de determinar as concentrações séricas de imunoglobulina G, PT, γ globulina, GGT e FA, assim como determinar a associação entre estas variáveis. Foi avaliada se a atividade sérica das enzimas GGT e FA pode ser utilizada indiretamente como indicadora de transferência de imunidade passiva. Para tanto, foram realizados os testes de imunodifusão radial, espectrofotometria e eletroforese respectivamente. Para os valores de GGT e FA, foram utilizados kits comerciais. Houve correlação estatística significativa entre a FA e GGT; fato também observado com relação a PT, a IgG e a GGT. A γ globulina mostrou-se correlacionada com GGT, IgG e PT. A atividade de FA demonstrou-se ineficaz para uso como indicadora de transferência de imunidade passiva. / Abstract: A total of 460 fecal samples were collected from lambs during the first 30 days of life with the aim to determine the occurrence of Cryptosporidium in Araçatuba region, as well as to identify species involved in this parasitism. Microscopic analysis of feces was carried out using malachite green negative stain. Cryptosporidium positive samples were subjective to a nested PCR, with amplification of fragments of the subunity 18S of the gene of the ribossomic RNA or the gene of the actin. In this study 6.73% of animals were eliminating oocists of Cryptosporidium in their feces. The involved species and genotype were: Cryptosporidium parvum and cervide genotype, which represent a zoonotic potential and Cryptosporidium parvum type B. Blood samples (191) were collected from lambs that were up to 30 days old to determine the serum concentrations of immunoglobulin G, TP, γ globulin, GGT and ALP, as well as to determine the association between these variables. This was done in order to explore the possibility of using changes in activities of GGT e ALP as indirect indicators of immune passive transfer in lambs The following tests were perfomed: radial immunodiffusion, spectrophotometry and electrophoresis respectively. GGT and ALP values were determinate using commercial kits. There was a statistically significant correlation between ALP and GGT. The same correlation was observed from TP, IgG and GGT. A positive γ globulin correlation was found between GGT, IgG and TP. ALP activity cannot be used as an indicator of immune passive transfer. / Mestre

The prevalence and molecular characterization of Cryptosporidium spp. in slaughtered cattle 6 months and older was performed. Three species of Cryptosporidium were identified. A subtype of C. parvum was obtained.

Made available in DSpace on 2014-06-12T23:01:24Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo8552_1.pdf: 533604 bytes, checksum: a260b9f76c8b82b2713fa5d4b3ad9d38 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2006 / A água doce é um recurso natural finito, cuja qualidade vem decaindo devido ao aumento da população e à deficiência de políticas públicas voltadas para a sua preservação. A rota de transmissão ambiental para protozoários e helmintos é particularmente significativa e envolve a água, o solo e o alimento. A partir da década de 1980, acrescentou-se a preocupação quanto à ocorrência de protozoários patogênicos tais como Cryptosporidium spp. e Giardia spp., em resposta ao crescente número de surtos envolvendo um grande número de pessoas, estando relacionados ao consumo de água e à ineficiência do tratamento aplicado na remoção de cistos e oocistos nas Estações de Tratamento de Água (ETA). No Brasil foi instituído a partir de 2003 o Sistema de Informação de Vigilância da Qualidade da Água de Consumo Humano (SISAGUA), instrumento de coleta de análises de dados a ser desenvolvido em âmbito nacional pelas áreas de vigilância ambiental em saúde, visando à garantia da qualidade da água distribuída à população. O presente estudo teve como objetivo detectar a presença de enteroparasitas, com ênfase em Cryptosporidium spp. em amostras de água consumida por parte da população do Distrito Sanitário VI, na cidade do Recife. As amostras foram coletadas em pontos considerados como início, meio e fim da rede de distribuição. A metodologia de sedimentação espontânea foi utilizada para pesquisa de enteroparasitas e outros organismos. Para a detecção de Cryptosporidium spp., utilizouse o método de concentração de oocistos através de membrana filtrante, seguido da identificação e contagem de estruturas álcool-ácido resistentes através da coloração histoquímica de Kinyoun. Como ensaios confirmatórios para Cryptosporidium spp., foram utilizadas as metodologias de Ensaio Imunoenzimático e Imunofluorescência Direta. Os parâmetros físico-químicos e microbiológicos foram avaliados de acordo com os padrões da Portaria nº 518/04/MS. Em 95,56% (86/90) das amostras de água, analisadas neste estudo foram encontrados organismos como: oocistos Cryptosporidium spp. (15,55%), cistos de Giardia spp. (3,85%), além de ovos de helmintos (47,78%), larvas de nematóides (28,78%) e organismos do zooplâncton (84,44%). Conclui-se que existe vulnerabilidade nos processos de tratamento da água para consumo humano, principalmente na etapa da filtração, que deveria ser eficiente na remoção física de partículas, com especial atenção aos organismos patogênicos e que a qualidade da água está comprometida desde a saída da ETA até o ponto de consumo. Torna-se necessário intensificar a vigilância em saúde ambiental relacionada à qualidade da água para consumo humano, garantindo que a água não ofereça riscos a saúde da população

A crescente urbanização associada à multiplicação do número de cidades e o aumento populacional, especialmente nos países em desenvolvimento, têm favorecido o surgimento e o crescimento desordenado das comunidades com consequente dificuldade de acesso aos serviços básicos, inadequadas condições de moradia e exposição a diversos contaminantes ambientais que contribuem para a baixa qualidade de vida e saúde. As parasitoses intestinais apresentam íntima relação com as condições sanitárias, constituindo um relevante problema de saúde pública com maior prevalência entre indivíduos de baixo nível socioeconômico. A ocorrência e manifestação da sintomatologia decorrente de uma infecção parasitária também se associa, principalmente, com a imaturidade do sistema imunológico em crianças com idade ntre 0 e 6 anos, que têm no ambiente de creches e pré-escolas outro importante fator que pode contribuir para a contaminação. Embora sejam crescentes os relatos de parasitismo intestinal em crianças que frequentam creches, ainda são escassas as pesquisas direcionadas aos pré- escolares da região Sul da Bahia, Brasil. Por essa razão, o objetivo deste estudo foi identificar a prevalência de Cryptosporidium spp. e Giardia lamblia em crianças de 0 a 6 anos que frequentam creches municipais de Itabuna, cidade localizada na região Sul do estado da Bahia. Para atender aos objetivos propostos foram aplicados dois questionários, um as diretoras das creches/pré-escolas, visando realizar o levantamento das condições de saneamento e práticas de higiene alimentar no ambiente escolar e outro aos responsáveis legais das crianças, com o intuito de conhecer as condições individuais e familiares dos participantes. Para pesquisa de Cryptosporidium spp. e Giardia lamblia foram coletadas três amostras fecais por sujeito da pesquisa, processadas e analisadas pelos métodos de Ziehl- Neelsen adaptado e Mariano & Carvalho, respectivamente. A prevalência de Cryptosporidium spp. e Giardia lamblia foi de 39,10% e 29,49%, respectivamente. A grande maioria das crianças é de famílias de baixa condição social e baixo nível de escolaridade, possuem alta quantidade de moradores por residência (transmissão interpessoal). Estes aspectos constituem fatores facilitadores para a disseminação desses parasitas na população estudada. O hábito de não lavar as mãos com água e sabão também se mostrou um fator facilitador a infecção por Giardia lamblia e Cryptosporidium spp., manter as unhas cortadas e limpas diminui a exposição dos indivíduos a infecção por Giardia lamblia. Diante dos resultados, a investigação das enteroparasitoses, em especial da criptosporidíase e giardíase em pré- escolares de Itabuna, Bahia, Brasil é fundamental, devido o alto índice de positividade dos exames coproparasitológicos. Tal aspecto, aliado à escassez de estudos sobre o tema nessa região, mostra claramente que se trata de um problema de saúde pública e que se tornam necessárias melhorias no planejamento estratégico da aplicação dos recursos financeiros em prol do controle das parasitoses no município / Increasing urbanization linked to the multiplication of the number of cities and population growth, especially in developing countries, have favored the emergence and the uncontrolled growth of communities resulting in poor access to basic services, inadequate housing conditions and exposure to several environmental contaminants that contribute to poor quality of life and health. The Intestinal parasitosis shows a close relationship with sanitary conditions representing an important public health problem with higher prevalence among individuals of low socioeconomic status. The occurrence and presenting of symptoms resulting from a parasitic infection are also mainly associated with the immune system immaturity in children aged between 0 and 6 years, who have in their daycare and kindergarten environment another important determinant that could contribute to contamination. Although the reports about intestinal parasitism in children attending day care centers are increasing, there is still scarse research addressing kindergarten children in Southern Bahia, Brazil. Therefore, the aim of this study was to identify the prevalence of Cryptosporidium spp. and Giardia lamblia in children aged fron 0 to 6 years old who are attended in some of Itabuna\'s daycare centers. Itabuna city is located in the southern area of Bahia state. To meet the objectives proposed two questionnaires were applied , one to the daycare / kindergarten directors, in order to survey the conditions of sanitation and food hygiene practices in the school environment and other to the legal guardians, in order to find out the individual and family conditions of the participants. For the detection of Cryptosporidium spp. and Giardia lamblia three fecal samples were collected for each research subject, processed and analyzed by the Ziehl-Neelsen adapted, and Mariano & Carvalho methods, respectively. The prevalence of Cryptosporidium spp. Giardia lamblia were 39,10% and 29,49%, respectively. The large majority of children come from families of low social status, and educational level, live in enviroment with a high number of residents per household (person transmission). These aspects are factors that facilitate the spreading of these parasites in the studied group. The habit of not washing hands with soap and water was also a facilitating factor to infection by Giardia lamblia and Cryptosporidium spp., keep nails clean and cut decreases the exposure of individuals to infection by Giardia lamblia. Given the results, the investigation of intestinal parasites, especially giardiasis and cryptosporidiosis in the kindergarten schools Itabuna, Bahia, Brazil is critical, because of the high rate of positive results of fecal examinations. This aspect, together with the scarcity of studies on the subject in this region, clearly shows that it is a public health problem and that improvements are required in the strategic planning of the financial resources uses to the control of parasitic diseases in the city

We investigated the species and genotypes of Cryptosporidium infecting wild rodents from the genus Apodemus in ten areas in the year 2012 in the Czech Republic. A total of 207 faecal samples, 182 samples of Apodemus flavicollis and 25 of Apodemus sylvaticus, were screened for presence of Cryptosporidium spp. using both the aniline-carbol-methyl violet staining method and molecular tools. Microscopy examination revealed the presence of Cryptosporidium spp. oocyst in 24 samples of Apodemus flavicollis and 1 sample of Apodemus sylvaticus. Genomic DNA was isolated from both microscopy positive and negative samples. Using the nested PCR amplifying gene encoding the small ribosomal subunit (SSU rRNA) 25 samples were detected positive for the presence of Cryptosporidium-specific DNA. The same results were obtained also in the nested PCR amplifying gene encoding actin. All microscopy positive samples were also PCR positive. Only 19 samples were successfully sequenced, following phylogeny analyses showed presence of two new genotypes. First genotype is phylogenetically related to Cryptosporidium ubiquitum (1 sample) and the second genotype (consisting of several subgroups) related to C. canis (18 samples). The new genotypes seem to be host specific, however this hypothesis needs to be verified using experimental infection in the future. This is the first report of these Cryptosporidium genotypes in Apodemus spp. and for the first time ever.

A crescente urbanização associada à multiplicação do número de cidades e o aumento populacional, especialmente nos países em desenvolvimento, têm favorecido o surgimento e o crescimento desordenado das comunidades com consequente dificuldade de acesso aos serviços básicos, inadequadas condições de moradia e exposição a diversos contaminantes ambientais que contribuem para a baixa qualidade de vida e saúde. As parasitoses intestinais apresentam íntima relação com as condições sanitárias, constituindo um relevante problema de saúde pública com maior prevalência entre indivíduos de baixo nível socioeconômico. A ocorrência e manifestação da sintomatologia decorrente de uma infecção parasitária também se associa, principalmente, com a imaturidade do sistema imunológico em crianças com idade ntre 0 e 6 anos, que têm no ambiente de creches e pré-escolas outro importante fator que pode contribuir para a contaminação. Embora sejam crescentes os relatos de parasitismo intestinal em crianças que frequentam creches, ainda são escassas as pesquisas direcionadas aos pré- escolares da região Sul da Bahia, Brasil. Por essa razão, o objetivo deste estudo foi identificar a prevalência de Cryptosporidium spp. e Giardia lamblia em crianças de 0 a 6 anos que frequentam creches municipais de Itabuna, cidade localizada na região Sul do estado da Bahia. Para atender aos objetivos propostos foram aplicados dois questionários, um as diretoras das creches/pré-escolas, visando realizar o levantamento das condições de saneamento e práticas de higiene alimentar no ambiente escolar e outro aos responsáveis legais das crianças, com o intuito de conhecer as condições individuais e familiares dos participantes. Para pesquisa de Cryptosporidium spp. e Giardia lamblia foram coletadas três amostras fecais por sujeito da pesquisa, processadas e analisadas pelos métodos de Ziehl- Neelsen adaptado e Mariano & Carvalho, respectivamente. A prevalência de Cryptosporidium spp. e Giardia lamblia foi de 39,10% e 29,49%, respectivamente. A grande maioria das crianças é de famílias de baixa condição social e baixo nível de escolaridade, possuem alta quantidade de moradores por residência (transmissão interpessoal). Estes aspectos constituem fatores facilitadores para a disseminação desses parasitas na população estudada. O hábito de não lavar as mãos com água e sabão também se mostrou um fator facilitador a infecção por Giardia lamblia e Cryptosporidium spp., manter as unhas cortadas e limpas diminui a exposição dos indivíduos a infecção por Giardia lamblia. Diante dos resultados, a investigação das enteroparasitoses, em especial da criptosporidíase e giardíase em pré- escolares de Itabuna, Bahia, Brasil é fundamental, devido o alto índice de positividade dos exames coproparasitológicos. Tal aspecto, aliado à escassez de estudos sobre o tema nessa região, mostra claramente que se trata de um problema de saúde pública e que se tornam necessárias melhorias no planejamento estratégico da aplicação dos recursos financeiros em prol do controle das parasitoses no município / Increasing urbanization linked to the multiplication of the number of cities and population growth, especially in developing countries, have favored the emergence and the uncontrolled growth of communities resulting in poor access to basic services, inadequate housing conditions and exposure to several environmental contaminants that contribute to poor quality of life and health. The Intestinal parasitosis shows a close relationship with sanitary conditions representing an important public health problem with higher prevalence among individuals of low socioeconomic status. The occurrence and presenting of symptoms resulting from a parasitic infection are also mainly associated with the immune system immaturity in children aged between 0 and 6 years, who have in their daycare and kindergarten environment another important determinant that could contribute to contamination. Although the reports about intestinal parasitism in children attending day care centers are increasing, there is still scarse research addressing kindergarten children in Southern Bahia, Brazil. Therefore, the aim of this study was to identify the prevalence of Cryptosporidium spp. and Giardia lamblia in children aged fron 0 to 6 years old who are attended in some of Itabuna\'s daycare centers. Itabuna city is located in the southern area of Bahia state. To meet the objectives proposed two questionnaires were applied , one to the daycare / kindergarten directors, in order to survey the conditions of sanitation and food hygiene practices in the school environment and other to the legal guardians, in order to find out the individual and family conditions of the participants. For the detection of Cryptosporidium spp. and Giardia lamblia three fecal samples were collected for each research subject, processed and analyzed by the Ziehl-Neelsen adapted, and Mariano & Carvalho methods, respectively. The prevalence of Cryptosporidium spp. Giardia lamblia were 39,10% and 29,49%, respectively. The large majority of children come from families of low social status, and educational level, live in enviroment with a high number of residents per household (person transmission). These aspects are factors that facilitate the spreading of these parasites in the studied group. The habit of not washing hands with soap and water was also a facilitating factor to infection by Giardia lamblia and Cryptosporidium spp., keep nails clean and cut decreases the exposure of individuals to infection by Giardia lamblia. Given the results, the investigation of intestinal parasites, especially giardiasis and cryptosporidiosis in the kindergarten schools Itabuna, Bahia, Brazil is critical, because of the high rate of positive results of fecal examinations. This aspect, together with the scarcity of studies on the subject in this region, clearly shows that it is a public health problem and that improvements are required in the strategic planning of the financial resources uses to the control of parasitic diseases in the city

La cryptosporidiose est une infection du tube digestif, causée par un protozoaire du genre Cryptosporidium, à l'origine de diarrhées néonatales chez les jeunes ruminants. Cette affection revêt une importance en santé publique et en santé animale, ces deux aspects étant liés par l’existence d'espèces zoonotiques, la principale étant C. parvum. Les données sur l'épidémiologie moléculaire de Cryptosporidium spp chez les ruminants abondent au niveau international mais sont limitées pour la France. Ce travail a confirmé la forte prévalence et les forts niveaux d'excrétion en oocystes de Cryptosporidium chez les jeunes ruminants. L'espèce C. parvum a été identifiée aussi bien chez les veaux, les chevreaux que chez les agneaux. A l'inverse, les espèces C. xiaoi (chez le jeune) et C. ubiquitum (adultes en gestation) n'ont été retrouvées que chez les caprins et les espèces C. bovis et C. ryanae uniquement chez les veaux.Deux espèces zoonotiques ont été identifiées, C. ubiquitum et C. parvum. Tous les sous-types de C. parvum identifiés appartiennent à la famille zoonotique IIa. Le sous-type IIaA15G2R1 a été majoritairement retrouvé quelle que soit l'espèce hôte. Cette observation confirme ce qui a été observé dans d'autres pays à savoir le rôle de réservoir des jeunes ruminants dans la transmission d'isolats de C. parvum à l'homme. Enfin, ce travail a mis en évidence la complexité de l'épidémiologie de l'infection par Cryptosporidium spp avec une évolution de la prévalence et du niveau d'excrétion ainsi que de la distribution des espèces et sous-types de C. parvum d'une année sur l'autre au sein d'un même élevage. / Cryptosporidiosis is an infection of the digestive tract due to protozoa of the genus Cryptosporidium, which cause neonatal diarrhoea in young ruminants. This infection has a real significance in public and animal health; in fact, both of these aspects are bound by the existence of zoonotic species including C. parvum, the predominant species. Molecular epidemiology data on Cryptosporidium spp are very numerous over the world; however, little information has been published in France.This work confirmed the high prevalence and high level of excretion of Cryptosporidium oocysts in young ruminants. C. parvum species was identified in calves, goat kids and also in lambs. By contrast, the two species, C. xiaoi (goat kids) and C. ubiquitum (pregnant goats) were only found in goats whereas C. bovis and C. ryanae were observed only in calves.Two zoonotic species have been identified: C. ubiquitum and C. parvum. All C. parvum subtypes belongs to the IIa zoonotic family. IIaA15G2R1 subtype was mainly found in all ruminants' species. This observation confirms the potential role of young ruminants in transmission of zoonotic isolates of C. parvum to humans which has already been observed in previous studies over the world. Finally, this work highlighted the complexity of the epidemiology of Cryptosporidium spp infection, in particular the evolution in the prevalence and level of excretion and in the distribution of Cryptosporidium spp species or C. parvum subtypes according to the year of sampling in the same livestock.

Orientador: Marcelo Vasconcelos Meireles / Banca: Fernando de Almeida Borges / Banca: Caris Maroni Nunes / Resumo: A infecção por Cryptosporidium parvum em bovinos se manifesta como enfermidade subclínica ou com presença de morbidade e mortalidade, particularmente quando há associação com outros agentes infecciosos. Cryptosporidium parvum apresenta ainda grande importância em saúde pública. Este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento da reação em cadeia da polimerase em tempo real (qPCR) para detecção de C. parvum em amostras fecais de bezerros e sua comparação com a reação em cadeia da polimerase (nested PCR), rotineiramente utilizada para diagnóstico de Cryptosporidium spp.. Duzentas e nove amostras fecais de bezerros entre um dia e seis meses de idade foram examinadas pela qPCR para amplificação de fragmentos do gene da actina e pela nested PCR para o gene da subunidade 18S do rRNA. A qPCR apresentou positividade para C. parvum em 73,21% (153/209) das amostras, enquanto a nested PCR apresentou amplificação positiva para Cryptosporidium spp. em 56,5% (118/209) das amostras. A sensibilidade analítica da qPCR foi de aproximadamente um oocisto de C. parvum. Não se observou amplificação inespecífica de DNA Cryptosporidium bovis, Cryptosporidium andersoni, Cryptosporidium ryanae, Cryptosporidium canis, Cryptosporidium serpentis, Cryptosporidium galli, Cryptosporidium baileyi e Cryptosporidium genótipo II de aves. Desta forma, conclui-se que a qPCR para o gene da actina é uma técnica sensível e específica para detecção de C. parvum em amostras fecais de bezerros / Abstract: The infection with Cryptosporidium parvum in cattle results in subclinical disease or in the presence of morbidity and mortality, particularly when associated with other infectious agents. This species is also an important public health problem. The aim of this research was to develop a real time polymerase chain reaction (qPCR) for detection of C. parvum DNA in fecal samples of calves, in comparison to a nested PCR routinely used for Cryptosporidium spp. diagnosis. Two hundred and nine fecal samples from calves aged between one day and six weeks were screened by qPCR specific for the actin gene of C. parvum and using nested PCR targeting the 18S rRNA gene of Cryptosporidium spp.. The qPCR showed positivity for C. parvum in 73,21% (153/209) of the samples, and nested PCR was positive for Cryptosporidium spp. in 56.5% (118/209) of the samples. The analytical sensitivity of qPCR foi de aproximadamente one oocyst C. parvum per reaction tube. Evaluation of analytical specificity did not reveal inespecific amplification for DNA of the following Cryptosporidium species and genotypes: C. bovis, C. andersoni, C. ryanae, C. canis, C. serpentis, C. galli, C. baileyi and avian genotype II. These results allowed the conclusion that qPCR for actin gene is a sensitive and specific technique for detection of C. parvum in fecal samples from calves / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-06-08Bitstream added on 2014-06-13T20:55:59Z : No. of bitstreams: 1 homem_cg_me_araca.pdf: 468363 bytes, checksum: b293bfbeab84c1a641ead5f90bd65ab2 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A infecção por Cryptosporidium parvum em bovinos se manifesta como enfermidade subclínica ou com presença de morbidade e mortalidade, particularmente quando há associação com outros agentes infecciosos. Cryptosporidium parvum apresenta ainda grande importância em saúde pública. Este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento da reação em cadeia da polimerase em tempo real (qPCR) para detecção de C. parvum em amostras fecais de bezerros e sua comparação com a reação em cadeia da polimerase (nested PCR), rotineiramente utilizada para diagnóstico de Cryptosporidium spp.. Duzentas e nove amostras fecais de bezerros entre um dia e seis meses de idade foram examinadas pela qPCR para amplificação de fragmentos do gene da actina e pela nested PCR para o gene da subunidade 18S do rRNA. A qPCR apresentou positividade para C. parvum em 73,21% (153/209) das amostras, enquanto a nested PCR apresentou amplificação positiva para Cryptosporidium spp. em 56,5% (118/209) das amostras. A sensibilidade analítica da qPCR foi de aproximadamente um oocisto de C. parvum. Não se observou amplificação inespecífica de DNA Cryptosporidium bovis, Cryptosporidium andersoni, Cryptosporidium ryanae, Cryptosporidium canis, Cryptosporidium serpentis, Cryptosporidium galli, Cryptosporidium baileyi e Cryptosporidium genótipo II de aves. Desta forma, conclui-se que a qPCR para o gene da actina é uma técnica sensível e específica para detecção de C. parvum em amostras fecais de bezerros / The infection with Cryptosporidium parvum in cattle results in subclinical disease or in the presence of morbidity and mortality, particularly when associated with other infectious agents. This species is also an important public health problem. The aim of this research was to develop a real time polymerase chain reaction (qPCR) for detection of C. parvum DNA in fecal samples of calves, in comparison to a nested PCR routinely used for Cryptosporidium spp. diagnosis. Two hundred and nine fecal samples from calves aged between one day and six weeks were screened by qPCR specific for the actin gene of C. parvum and using nested PCR targeting the 18S rRNA gene of Cryptosporidium spp.. The qPCR showed positivity for C. parvum in 73,21% (153/209) of the samples, and nested PCR was positive for Cryptosporidium spp. in 56.5% (118/209) of the samples. The analytical sensitivity of qPCR foi de aproximadamente one oocyst C. parvum per reaction tube. Evaluation of analytical specificity did not reveal inespecific amplification for DNA of the following Cryptosporidium species and genotypes: C. bovis, C. andersoni, C. ryanae, C. canis, C. serpentis, C. galli, C. baileyi and avian genotype II. These results allowed the conclusion that qPCR for actin gene is a sensitive and specific technique for detection of C. parvum in fecal samples from calves