Submitted by Inácio de Oliveira Lima Neto (inacio.neto@inpa.gov.br) on 2017-12-12T12:49:24Z No. of bitstreams: 2 Josiane Celerino de Carvalho.pdf: 6852491 bytes, checksum: dcc1b722406d959e630215ab94d59860 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-12T12:49:24Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Josiane Celerino de Carvalho.pdf: 6852491 bytes, checksum: dcc1b722406d959e630215ab94d59860 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-06-08 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Considering the advances of the studies with Hevea brasiliensis and the implementation of breeding programs, the propagation of this species has been recommended by the use of grafting. However, complete seed or parts there of (embryos) should not be neglected since, while maintaining the use of clones to improve production, genetics, biochemistry and functional characterization, in addition to the vigor and sanity of the propagated material may contribute to the complete formation of the plants by sexuada (seed germination) and asexual (embryo culture in vitro) for the selection of individuals more balanced in terms of rusticity and production. Thus, the objective of this work was to investigate the implications of the morphology and origin of the H. brasiliensis seeds on germination and seedling formation, from the morphological, histochemical, physiological and biochemical at view. The acquired seeds were categorized as coming from wild and clone matrices and were collected in Altamira-Pa and Belterra-Pa city’s, respectively. The seeds after asepsis were submitted to morphological, physiological and biochemical analyzes, beyond cultivation "in vitro". From the morphophysiological point of view, the seeds of wild and clone H. brasiliensis showed differences in size and color, being wild seeds larger and darker in color. There were no differences in germination morphology. Considering the viability of the seeds, they did not present differences in the moisture contents, and probably due to the high humidity the seeds showed proliferation of fungi, Aspergillus sp. and Penicillium sp., that cause deterioration in seeds. Regarding the germination physiology, the seeds showed a pattern of the three-phase model, but were different in relation to the soaking speed, and the wild seeds absorbed water more slowly than clone, but gain of fresh weight were no different between them. From the biochemical point of view, the constitution of the reserves were similar for both wild and clone seeds. Among the primary metabolites, the lipids correspond to the majority reserves stored in the endosperm of the seeds of the wild H. brasiliensis and clones individuals, being mobilized during germination and initial seedling growth. In the wild and clone seeds the proteins were also mobilized during germination and initial seedling growth and the soluble proteins were mobilized at the beginning of germination and exhibited protein bands in the bands of 7 to 30 kDa that may be associated with the main proteins of synthesis of the latex. Soluble sugar reserves were mobilized more intensely at the beginning of germination and starch at the beginning of seedling initial growth. In wild seeds and clone the nutrient phosphorus (P) and potassium (K) were mobilized at the beginning of germination and initial seedling growth, calcium (Ca) are mobilized at the beginning of germination, nitrogen (N) and magnesium (Mg) are mobilized in the initial growth of the seedlings. For micronutrients, the iron (Fe) was mobilized at the beginning of germination and initial growth of manganese (Mn) is poorly mobilized during germination and zinc (Zn) is mobilized at the beginning of initial seedling growth. The seeds and clone showed behavior and strategies mobilization of the primary metabolites and minerals during the germination and initial seedling growth. Morphological structures of the in vitro, hypocotyl, radicular (primary and secondary root) epicotyl and eophile present different sizes when compared to these same structures of seeds germinated in sand. The cultivation of zygotic embryos presented germination percentages closed to seeds germinated in sand, which may propagation of the species on a large scale. The disinfestation protocols were effective for the low contamination of the embryos. Highest mean of aerial part length was in culture medium with BAP growth and root part, with AIA growth regulator. The higher levels of protein in shoot and root observed in the culture media AIA and MS. The tissues of H. brasiliensis, aerial part and radicular showed protein bands in the bands from 7 to 30 kDa, which may be associated with the main proteins of the latex synthesis. Considering the results obtained in this work it is suggested that it is possible to produce healthy seedlings and perspectives to infer about the beginning of latex synthesis with a focus on future studies of these biomolecules. / Considerando os avanços dos estudos com Hevea brasiliensis e a implementação de programas de melhoramento, a propagação desta espécie tem sido recomendada pelo emprego da enxertia. Entretanto, os estudos com sementes completas ou partes delas (embriões) não devem ser negligenciados uma vez que, mantendo a utilização dos clones para aperfeiçoar a produção, pesquisas de caracterização genética, bioquímica e funcional, além do vigor e da sanidade do material propagado podem contribuir para verificar a formação completa das plantas por via sexuada (germinação das sementes) e assexuada (cultivo de embrião in vitro) visando a seleção de indivíduos mais equilibrados em termos de rusticidade e produção. Assim, o objetivo desse trabalho foi investigar as implicações da morfologia e origem das sementes de H. brasiliensis sobre a germinação e a formação das plântulas, do ponto de vista morfológico, histoquímico, fisiológico e bioquímico. As sementes utilizadas foram categorizadas como oriundas de matrizes selvagens e de clone e foram coletadas nos municípios de Altamira-Pa e Belterra-Pa, respectivamente. As sementes após assepsia foram submetidas às análises morfológicas, fisiológicas e bioquímicas, além do cultivo "in vitro". Do ponto de vista morfológico, as sementes de H. brasiliensis selvagens e de clone apresentaram diferenças quanto ao tamanho e coloração, sendo as sementes selvagens maiores e de coloração mais escuras. Quanto à morfologia da germinação, não apresentaram diferenças. Considerando a viabilidade das sementes, as mesmas não apresentaram diferenças nos teores de umidade, provavelmente, devido à alta umidade as sementes apresentaram proliferação de fungos, Aspergillus sp. e Penicillium sp., que causam deterioração em sementes. Em relação à fisiologia da germinação, as sementes apresentaram padrão trifásico, porém com diferenças em relação à velocidade de embebição, sendo que as sementes selvagens absorveram água de forma mais lenta do que o clone, quanto ao ganho de massa fresca das sementes não houve diferença. Do ponto de vista bioquímico, a constituição das reservas foi similar tanto para sementes selvagens, quanto para de clone. Dentre os metabólitos primários, os lipídeos, correspondem às reservas majoritárias estocadas no endosperma de sementes da espécie H. brasiliensis selvagem e clone e foram mobilizados durante a germinação e o crescimento inicial das plântulas. Nas sementes selvagens e clone as proteínas também foram mobilizadas durante a germinação e crescimento inicial de plântulas. As proteínas solúveis foram mobilizadas no início da germinação e exibiram bandas proteicas nas faixas de 7 a 30 kDa que podem estar associadas as principais proteínas de síntese do látex. As reservas de açúcares solúveis foram mobilizadas mais intensamente no início da germinação e o amido no início do crescimento inicial das plântulas. Nas sementes selvagens e clone os nutrientes fósforo (P) e o potássio (K) foram mobilizados no início da germinação e crescimento inicial de plântulas, cálcio (Ca) são mobilizados no início da germinação e, nitrogênio (N) e magnésio (Mg) durante o crescimento inicial das plântulas. Quanto aos micronutrientes, o ferro (Fe) foi mobilizado no início da germinação e crescimento inicial das plântulas, manganês (Mn) é pouco mobilizado durante a germinação e o zinco (Zn) é mobilizado no início do crescimento inicial das plântulas. As sementes selvagens e clone apresentaram comportamento e estratégias distintas de mobilização dos metabólitos primários e minerais durante a germinação e crescimento inicial das plântulas. As estruturas morfológicas das plântulas in vitro, hipocótilo, parte radicular (raiz primária e secundária), epicótilo e eofilos apresentam tamanhos diferentes quando comparadas a estas mesmas estruturas das sementes germinadas em areia. O cultivo de embriões zigóticos apresentaram porcentagens de germinação próximas às sementes germinadas em areia, fato que pode tornar vantajosa a propagação da espécie em larga escala. Os protocolos de desinfestação foram eficazes para a baixa contaminação dos embriões. Maior média de comprimento de parte aérea foi em meio de cultivo com reguladores de crescimento BAP e parte radicular, com regulador de crescimento AIA. Os maiores teores de proteínas na parte aérea e radicular foram observadas no meio de cultivo MS e com regulador AIA. Os tecidos de plântulas de H. brasiliensis, parte aérea e radicular exibiram bandas proteicas nas faixas de 7 a 30 kDa, que podem estar associadas as principais proteínas de síntese do látex. Considerando os resultados obtidos neste trabalho sugere-se que é possível se produzir plântulas saudáveis e com perspectivas de inferir sobre o início da síntese de látex com foco em futuros estudos destas biomoléculas.

elementos considerados tóxicos para as plantas, como o alumínio, levando a baixo pH do solo e prejudicando a disponibilidade de outros nutrientes minerais. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito do alumínio na fisiologia e bioquímica de brotações de Eucalyptus grandis x E. urophylla, cultivadas in vitro, consistindo-se de parte aérea pouco desenvolvida e ausência de sistema radicular. O experimento foi delineado inteiramente casualizado, com quatro tratamentos e quatro repetições por tratamento. Cada tratamento correspondeu a 0; 0,25; 0,5 e 1,0 mM de Al Cl3.6H2O. As coletas foram realizadas aos 4, 8, 12, 16, 20, 24 e 28 dias de cultivo, avaliando-se a concentração dos nutrientes no material vegetal após o período de cultivo, a curva de crescimento do clone, atividade da enzima fosfatase ácida, o efeito do alumínio no metabolismo das poliaminas (putrescina, espermidina e espermina) e quantificação do teor de proteínas solúveis totais. Pela análise dos resultados, pode-se concluir que a adição de AlCl3.6H2O alterou o meio de cultura, indisponibilizando principalmente os nutrientes cálcio, fósforo e potássio, reduzindo a absorção dos mesmos pela planta e com isso, alterou o metabolismo celular, principalmente em processos altamente dependentes destes elementos, ocasionando perdas de estrutura, maior atividade de fosfatase ácida, acúmulo de poliaminas e redução do teor de proteínas solúveis totais. O estudo mostrou que usando a técnica de cultivo in vitro é possível estudar os mecanismos de adaptação das plantas a solos que contém problemas com toxidez de alumínio. / The forest activity is generally developed in low fertility soils, usualIy with mineral toxicity, mainly aluminum, low soil pH changes in the availability of other mineral nutrients. The aim of this work was to evaluate the effects of aluminum on the physiology and biochemistry of Eucalyptus grandis x E. urophylla epicormic shoots cultivated in vitro. The trial was established using a statistical design completely randomized, with four treatments, four replicates for alI evaluated variables. Each treatment corresponded to 0; 0.25; 0.5 and 1.0 mM of AlCl3.6H2O. The data were collected at 4, 8, 12, 16, 20, 24 and 28 days of culture, evaluating the mineral nutrient content, the clone relative growth rate, the acid phosphatase activity, the polyamines contents (putrescine, spermidine and spermine) and total soluble protein content. The analysis of the results showed that the addiction of the AlCl3.6H2O changed the culture medium, reduced calcium, phosphate and potassium availability and absorption. The cell metabolism was changed mainly in process highly dependent on these nutrients, leading to structural losses, higher acid phosphatase activity, increase in polyamines content and reduced total soluble protein content.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-03-29T13:15:32Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1146273 bytes, checksum: 4c59d7889b107c9a870070465d40075b (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-29T13:15:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1146273 bytes, checksum: 4c59d7889b107c9a870070465d40075b (MD5) Previous issue date: 2013-01-30 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Pfaffia glomerata (Amaranthaceae), conhecida como ginseng brasileiro, é uma importante espécie medicinal nativa do Brasil. O objetivo do presente estudo foi avaliar a influência da ploidia das plantas e das condições de cultivo in vitro e ex vitro no crescimento e produção de metabólitos secundários em P. glomerata. Nesse trabalho foram utilizados explantes diploides e tetraploides induzidos artificialmente por uso de colchicina. Nas condições in vitro foram avaliados os efeitos da poliploidização, da adição de sacarose ao meio de cultura e da concentração atmosférica de CO2 nos parâmetros de crescimento e acúmulo de 20E em P. glomerata. Enquanto nas condições ex vitro analisou- se o crescimento, acúmulo de pigmentos, densidade estomática, teores de 20E e saponinas triterpênicas em função da ploidia da planta, volume de vaso e tratamento com paclobutrazol (PBZ). Todos os parâmetros de crescimento avaliados e o acúmulo de metabólitos secundários foram reprimidos em plantas tetraploides comparadas às diploides em condições de cultivo in vitro e ex vitro. Foram observadas nos indivíduos tetraploides características específicas de poliploidia, como redução da densidade estomática e aumento da relação largura/comprimento foliar. Em condições in vitro, a presença de sacarose no meio de cultura promoveu melhor crescimento, porém inibiu o acúmulo de 20E. Assim, a fotoautotrofia mostra-se mais favorável por apresentar potencial na produção comercial massal de mudas dessa espécie com altos teores de 20E. O enriquecimento de CO2 (1.000 μmol/mol de CO2) também induziu a produção de plantas com maiores biomassa e acúmulo de 20E, favoráveis ao interesse comercial. Após aclimatização, plantas de P. glomerata apresentaram forte indução nos parâmetros de crescimento quando crescidas em vasos de maior volume, enquanto a aplicação de PBZ não interferiu na produção de biomassa e metabólitos secundários. Dessa forma, a utilização de vasos de maior volume é um importante fator na produção em escala comercial de ginseng brasileiro. / Pfaffia glomerata (Amaranthaceae), known as Brazilian ginseng, is an important medicinal species native to Brazil. The objective of this study was to evaluate the influence of the ploidy level and in vitro and ex vitro culture conditions on the growth and secondary metabolite production in P. glomerata. Explants of diploids and tetraploids artificially induced by colchicine explants were used. Under in vitro conditions, we evaluated the effects of polyploidization, supplementation of sucrose to the culture medium and atmospheric CO 2 concentration on growth parameters and 20-hydroxyecdysone (20E) accumulation of P. glomerata nodal explants. Following transfer to ex vitro conditions, growth, pigment content, stomatal density, levels of 20E and saponins were analyzed according to the plant ploidy, vessel volume and treatment with paclobutrazol (PBZ). All growth characteristics and accumulation of secondary metabolites were inhibited in tetraploid background compared with diploids, both under in vitro and ex vitro conditions. Specific characteristics of polyploidy, such as reduced stomatal density and increased width/length ratio of leaves were found in tetraploid individuals. Under in vitro conditions, the presence of sucrose in the culture medium promoted better growth, but inhibited 20E accumulation. Thus, the photoautotrophy seems to be more favorable because shows potencial commercial mass production of seedlings of this species with high levels of 20E. CO2 enrichment also induced plant production with higher biomass and 20E accumulation, favorable for commercial purposes. After acclimatization, P. glomerata showed significant increase in growth parameters when it was grown in higher-volume pots, while the PBZ application did not affect the biomass and secondary metabolite production. Thereby, the use of larger pots is an important factor in commercial-scale production of Brazilian ginseng. / Não foi localizado o cpf do autor. Tese enviada pela secretaria do curso por e-mail, em 28-03-17.

SILVA, Anderson Weiny Barbalho. Localização de proteínas, quantificação de RNAm e papel das citocinas TNF-α e IL-1β no desenvolvimento folicular in vivo e in vitro em bovinos. 2016. 202 f. Tese (Doutorado em Biotecnologia)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2016-08-30T20:32:25Z No. of bitstreams: 1 2016_tese_awbsilva.pdf: 11114380 bytes, checksum: 03441619657fa0d30e6b11bd187ddab7 (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2016-08-30T20:35:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_tese_awbsilva.pdf: 11114380 bytes, checksum: 03441619657fa0d30e6b11bd187ddab7 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-30T20:35:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_tese_awbsilva.pdf: 11114380 bytes, checksum: 03441619657fa0d30e6b11bd187ddab7 (MD5) Previous issue date: 2016 / The aims of this study were: 1) to investigate the expression and distribution of messengers RNAs and proteins of TNF-α and interleukin 1 systems members in the ovaries of cyclic cows; 2) to evaluate the effects of TNF-α, Dexamethasone and IL-1β, on the survival and activation of bovine primordial follicles in vitro; 3) to characterize the expression profile of TNF-α and IL-1β systems in bovine granulosa cells of preovulatory follicles during ovulation induced by GnRH/LH in vivo; 4) to evaluate the influence of gonadotropins (FSH/LH) in the expression of mRNA for TNF-α system and IL-1β system in cumulus cells cultured in vitro; and 5) to analyze the effect of TNF-α and IL-1β on cumulus cells expansion, ultrastructure integrity of cultured COCs; mRNA expression of HAS-2, CASP3, CASP6 and iNOS of cumulus cells after in vitro culture. Bovine ovaries were processed for immunohistochemistry and Western Blot analyzes for the location of proteins for TNF-α system and interleukin system 1 in preantral and antral follicles. To evaluate the in vitro follicular survival and activation, ovarian tissues were cultured for 6 days in the presence of IL-1β, TNF-α or Dexamethasone at different concentrations. To evaluate the profile of expression of TNF-α and IL-β systems after GnRH treatments in vivo, granulosa cells from bovine preovulatory follicles were collected at different time points. COCs were cultured for 12 and 24h in the presence of gonadotropins, TNF-α and IL-1β. TNF-α system (TNF-α, TNFR1 and TNFR2) and interleukin I system (IL-1β, IL-1RA, IL-1RI and IL-1RII) were detected in preantral and antral follicles by immunohistochemistry. Variable levels of mRNA for the interleukin 1 system members were observed at different stages of development. Concerning to in vitro culture of bovine ovarian tissue, the presence of TNF-α (10 ng/mL) reduced the follicular survival and increased the number of apoptotic cells, whereas the addition of dexamethasone (10 ng/mL) maintained the follicular ultrastructure. On the other hand, the presence of IL-1β (10 or 50 ng/mL) was able to maintain the percentage of normal follicles and promote the primordial follicles activation. In vivo, an increased expression of mRNA for TNF-α and TNFR1 was observed 12 h after GnRH treatment. Higher levels of mRNA for TNFR2 were observed at 3, 6 and 12 h after GnRH administration. However, it was seen an increase in mRNA levels for IL-1RA 24h after GnRH induction. In vitro, TNF-α and IL-1β did not shown additive effect of cumulus cells expansion. The levels of mRNA for TNF-α, TNFR1 and TNFR2 were increased in COCs cultured for 12 h in the presence of gonadotropins. The presence of gonadotropins increased the mRNA levels for IL-1R1 and IL-1RA in cumulus cells after 24h of culture. The presence of TNF-α reduced levels of HAS-2, CASP3 and CASP6, whereas IL-1β increased levels of mRNA for IL-β, IL-1RA and HAS-2 in cultured cumulus cells. Furthermore, IL-1β increased iNOS expression after 24h of culture. Ultrastructural analysis confirmed the integrity of COCs cultured in presence of TNF-α or IL-1β. In conclusion, TNF-α system members and interleukin-1 system members are differentially expressed in ovarian cells. TNF-α reduces the follicular survival in vitro, while dexamethasone enhances the ultrastructure of cultured follicles. On the other hand, IL-1β promotes the development of primordial follicles in vitro. The expression of TNF-α system and the IL-1 system is regulated by gonadotropins in vivo and in vitro. The presence of TNF-α and IL-1β maintain the normal ultrastructure of cultured COCs. These results indicate an important role of TNF-α and interleukin 1 systems in the regulation of bovine folliculogenesis and ovulation. / Os objetivos deste estudo foram: 1) investigar a expressão e a distribuição de RNAs mensageiros e proteínas dos sistemas TNF-α e interleucina 1 em ovários de vacas cíclicas, 2) avaliar os efeitos do TNF-α, Dexametasona e da IL-1β, na sobrevivência e ativação de folículos primordiais bovinos cultivados in situ; 3) caracterizar o perfil de expressão do sistema TNF-α e do sistema IL-1β em células da granulosa de folículos pré-ovulatórios bovinos, durante a ovulação induzida por GnRH/LH in vivo; 4) avaliar a influência das gonadotrofinas (FSH/LH) na expressão de RNAm para o sistema TNF-α e sistema IL-1β em células do cumulus cultivadas in vitro; e 5) analisar o efeito do TNF-α e da IL-1β na expansão de células do cumulus, na manutenção da integridade ultraestrutural de CCOs; na expressão de RNAm para HAS-2, CASP3, CASP6 e iNOS em células do cumulus após cultivo in vitro. Ovários bovinos foram processados para análises de imunohistoquímica e Western Blot para a localização das proteínas para o sistema TNF-α e do sistema interleucina 1 em folículos pré-antrais e antrais. Para avaliação da sobrevivência e ativação folicular in vitro, fragmentos ovarianos foram cultivados por 6 dias na presença de IL-1β, TNF-α ou Dexametasona em diferentes concentrações. Células da granulosa de folículos pré-ovulatórios bovinos foram coletadas em diferentes momentos após a administração intramuscular de GnRH para avaliação do perfil de expressão dos sistemas TNF-α e IL-β in vivo. CCOs foram cultivados in vitro por 12 e 24 h na presença de gonadotrofinas, TNF-α e IL-1β. Os resultados da imunohistoquímica mostraram que as proteínas para os membros do sistema TNF-α (TNF-α, TNFR1 e TNFR2) e do sistema interleucina I (IL-1β, IL-1RA, IL-1RI e IL-1RII) foram detectados em folículos pré-antrais e antrais. Foram observados níveis variáveis de RNAm para o sistema interleucina 1 nas diferentes categorias foliculares analisadas. Em relação ao cultivo in vitro de fragmentos ovarianos, a presença de TNF-α (10 ng/mL) reduziu a sobrevivência folicular e aumentou o número de células apoptóticas, enquanto que a adição de Dexametasona (10 ng/mL) ao meio de cultivo manteve a ultraestrutura folicular. Por outro lado, a presença de IL-1β (10 ou 50 ng/mL) foi capaz de manter a percentagem de folículos normais e de promover a ativação dos folículos primordiais. In vivo, um aumento na expressão de RNAm para TNF-α e TNFR1 foi observado 12 h após tratamento com GnRH. Níveis mais elevados de RNAm para TNFR2 foram observados em 3, 6 e 12 h após administração de GnRH. No entanto, foi observado um aumento nos níveis de RNAm para IL-1RA após 24h da indução por GnRH. In vitro, o TNF-α e a IL-1β não apresentaram efeito aditivo à expansão das células do cumulus. Os níveis de RNAm para TNF-α, TNFR1 e TNFR2 foram aumentados em CCOs cultivados por 12 h na presença de gonadotrofinas. A presença de gonadotrofinas aumentou os níveis de RNAm para IL-1R1 e IL-1RA em células do cumulus após cultivo por 24h. O TNF-α reduziu os níveis de RNAm para HAS-2, CASP3 e CASP6, enquanto que a IL-1β elevou os níveis de expressão de IL-β, IL-1RA e HAS-2 em células do cumulus cultivadas. Além disso, a IL-1β aumentou a expressão de iNOS após 24h de cultivo. A análise ultraestrutural confirmou a integridade dos CCOs cultivados na presença de TNF-α ou IL-1β. Em conclusão, os componentes do sistema TNF-α e do sistema interleucina 1 são expressos diferencialmente em células ovarianas. O TNF-α reduz a sobrevivência folicular in vitro, enquanto a Dexametasona mantém a ultraestrutura de folículos cultivados. Por outro lado, a IL-1β promove o desenvolvimento de folículos primordiais in vitro. A expressão do sistema TNF-α e do sistema IL-1 é regulada por gonadotrofinas in vivo e in vitro. A presença de TNF-α e IL-1β mantém a ultraestrutura normal de CCOs cultivados. Estes resultados sugerem um importante papel do sistema TNF-α e do sistema interleucina 1 na regulação da foliculogênese e ovulação em bovinos.

COSTA, José Jackson do Nascimento. Expressão de marcadores de células germinativas e de oócitos em fibroblastos bovinos tratados com 5-aza-citidina e em células-tronco adultas cultivadas in vitro na presença de BMP-2, BMP-4 ou fluido folicular. 2016. 207 f. Tese (Doutorado em Biotecnologia)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2016-08-31T20:28:44Z No. of bitstreams: 1 2016_tese_jjncosta.pdf: 2424368 bytes, checksum: 8fb10f9a05f8f2bc642ce3964eb960d3 (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2016-08-31T20:29:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_tese_jjncosta.pdf: 2424368 bytes, checksum: 8fb10f9a05f8f2bc642ce3964eb960d3 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-31T20:29:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_tese_jjncosta.pdf: 2424368 bytes, checksum: 8fb10f9a05f8f2bc642ce3964eb960d3 (MD5) Previous issue date: 2016 / This study aimed to investigate the effect of 5-Aza-cytidine during induction of pluripotency, and evaluate the effects of culture in medium containing BMP-2, BMP-4 or follicular fluid in the differentiation of fibroblasts in primordias germ cells (CGP) and oocytes (stage 1). Furthermore, isolation of stem cells from the bovine ovarian epithelium and evaluate the effects of BMP-2, BMP-4 or follicular fluid on the differentiation of these stem cells into structures similar to oocytes (stage 2). In phase 1, fibroblasts were treated with 0.5, 1.0 or 2.0 μM of 5-Aza for 18, 36 or 72 h. Morphology cell viability and gene expression (OCT-4, NANOG, SOX2 and REX), were assessed, for the selection of the concentration/time more efficient. The fibroblasts were then cultured in medium supplemented with 10 ng/mL BMP-2 or 10 ng/mL BMP-4 or 5% bovine follicular fluid by 7 or 14 days. Subsequently, evaluation of the morphology and cell viability was taken, and gene expression (VASA, DAZL, c-Kit, SCP3, ZPA and GDF-9). For phase 2, the stem cells of ovarian surface were isolated, expanded, grown in differentiation medium containing 50 ng/mL BMP-2 or 50 ng/mL BMP-4, or BMP-2+BMP-4 or 5% bovine follicular fluid for 14 days. Morphological characteristics, cell viability and expression of alkaline phosphatase and gene expression (VASA, DAZL, C-KIT, SCP3, ZPA and GDF-9), were evaluated. The gene expression results were analyzed using ANOVA followed by Kruskal-Wallis test (P <0.05). In stage 1, the culture with 2.0 μM of 5-Aza for 72 h caused changes in morphology and cell proliferation rate, and significantly increased the expression of pluripotency factors. The culture in medium containing BMP-2, BMP-4 or follicular fluid for 7 or 14 days, altered cellular morphology, and expression of specific genes for stem cells and oocytes. In stage 2, the ovarian stem cells expressed pluripotent genes, and after culture, this cells showed morphologic characteristics similar to PGC and oocytes, including the expression of alkaline phosphatase, and the expression of specific genes for PCG and oocytes. In conclusion, the present study describes the possibility of conversion of the skin fibroblasts and stem cells from ovarian surface of the bovine, in oocyte-like cells, similar oocyte cells, through the cell reprogramming process associated with the supplementation of BMP-2, BMP- 4 and follicular fluid. / Este estudo teve como objetivo investigar o efeito da 5-Aza-citidina durante a indução da pluripotência, e avaliar os efeitos do cultivo em meio contendo BMP-2, BMP-4 ou fluido folicular na diferenciação de fibroblastos em células germinativas primordias (CGP) e oócitos (fase 1). Além disso, isolar células-tronco do epitélio ovariano de bovinos e avaliar os efeitos da BMP-2, BMP-4 ou fluido folicular sobre a diferenciação destas células-tronco em estruturas semelhantes a oócitos (fase 2). Na fase 1, os fibroblastos foram tratados com 0.5, 1,0 ou 2.0 μM de 5-Aza por 18, 36 ou 72 h. Foi avaliada a morfologia, viabilidade celular e a expressão gênica (OCT-4, NANOG, REX e SOX2), para a seleção da concentração/tempo mais eficientes. Os fibroblastos foram então cultivados em meio suplementado com 10 ng/mL de BMP-2, ou 10 ng/mL de BMP-4 ou 5% de fluido folicular bovino, por 7 ou 14 dias. Posteriormente, foi feita a avaliação da morfologia e viabilidade celular, e expressão gênica (VASA, DAZL, C-KIT, SCP3, ZPA e GDF-9). Para a fase 2, as células-tronco da superfície ovariana foram isoladas, expandidas, cultivadas em meio de diferenciação contendo as 50 ng/mL de BMP-2, ou 50 ng/mL de BMP-4, ou BMP-2+BMP-4 ou 5% de fluido folicular bovino por 14 dias. Foram avaliadas as características morfológicas, viabilidade celular, e expressão da fosfatase alcalina e expressão gênica (VASA, DAZL, C-KIT, SCP3, ZPA e GDF-9). Os resultados de expressão gênica foram analisados usando ANOVA seguido pelo Teste de Kruskal Wallis (P<0,05). Na fase 1, o cultivo com 2.0 μM de 5-Aza por 72 h provocou mudanças na morfologia e na taxa de proliferação celular, e aumentou significativamente a expressão de fatores de pluripotência. Já o cultivo em meio contendo BMP-2, BMP-4 ou fluido folicular, durante 7 ou 14 dias, alterou a morfologia celular, e a expressão de genes específicos para células germinativas e oócitos. Na fase 2, as células-tronco do ovário expressaram genes de pluripotência e após o cultivo, as células apresentaram características morfológicas que se assemelhavam a CGP e a células semelhantes a oócitos, incluindo a expressão da fosfatase alcalina e a expressão de genes específicos de células germinativas e oócitos. Em conclusão, o presente estudo descreve a possibilidade de converter os fibroblastos da pele de bovinos e células-tronco da superfície ovariana, em células semelhantes a oócitos, através do processo de reprogramação celular, associado à suplementação do meio com BMP-2, BMP-4 e fluido folicular.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / The aim of this study were to evaluate the effect of different concentrations of Concanavalin A (Con A) and FSH on activation, and survival in vitro growth of goat primordial follicles, as well as investigating the effects of Con A and FSH on the expression of mRNA for PCNA, KL, c-Kit, BMP-15 and GDF-9. For this, ovarian cortex fragments were in vitro cultured for 1 to 6 days in &#945;-MEM+ supplemented with 0, 5, 10, 20 or 40 &#956;g/mL of Con A lectin (experiment 1). At the end of the growing period, the fragments of ovarian cortex were fixed for histology. Next, we evaluated the percentage of primordial follicles or under development. After determination of the concentration of Con A more efficient (10 &#956;g/mL), fragments of ovarian cortex were cultured in situ for 6 days in &#945;-MEM+ alone or supplemented with 50 ng/mL of FSH, 10 &#956;g/mL of Con A or both (experiment 2). Tissues from the control uncultured or after culture in different treatments were fixed for histology or stored at -80ÂC to assess the expression profile of mRNA for PCNA, KL, c-Kit, BMP-15 and GDF-9. The results of Experiment 1 demonstrated that after 6 days of culture, the percentage of developing follicles was significantly higher in samples cultured with &#945;-MEM+ supplemented with 10 and 40 &#956;g/mL Con A, when compared to the other treatments (P <0.05). In experiment 2, the presence of FSH, or both Con A promoted a reduction in the percentage of primordial follicles and increase developing follicles compared to control medium (&#945;-MEM+). After 6 days of culture, the presence of FSH promoted an increase in mRNA levels for PCNA, but this effect was blocked by Con A. Moreover, the Con A increased mRNA levels for c-KIT compared to the control not grown, but Con A or Con A and FSH both reduced the levels of mRNA for KL. Furthermore, a reduction of BMP-15 mRNA was observed in follicles cultured in control medium, but the presence of FSH inhibited this reduction. Furthermore, Con A promoted an increase in levels of GDF-9 mRNA after in vitro culture. In conclusion, the Con A alone or in combination with FSH promote activation of primordial follicles goat after 6 days of in vitro culture and regulate the expression of mRNA for PCNA, KL, c-Kit, BMP-15 and GDF-9 / Os objetivos deste estudo foram avaliar o efeito de diferentes concentraÃÃes de Concanavalina A (Con A) e do FSH sobre a ativaÃÃo, sobrevivÃncia e crescimento in vitro de folÃculos primordiais caprinos, bem como investigar os efeitos da Con A e do FSH sobre a expressÃo de RNAm para PCNA, KL, c-Kit, BMP-15 e GDF-9. Para isto, fragmentos de cÃrtex ovariano foram cultivados in vitro por 1 ou 6 dias em &#945;-MEM+ suplementado com 0, 5, 10, 20 ou 40 &#956;g/mL da lectina Con A (experimento 1). No final do perÃodo de cultivo, os fragmentos de cÃrtex ovariano foram fixados para histologia clÃssica. Em seguida, avaliou-se a percentagem de folÃculos primordiais ou em desenvolvimento. ApÃs a determinaÃÃo da concentraÃÃo de Con A mais eficiente (10 &#956;g/mL), os fragmentos do cÃrtex ovariano foram cultivados in situ por 6 dias em &#945;-MEM+ sozinho ou suplementado com 50 ng/mL de FSH, 10 &#956;g/mL de Con A ou ambos (experimento 2). Os tecidos provenientes do controle nÃo cultivado ou apÃs cultivo nos diferentes tratamentos foram fixados para histologia clÃssica ou armazenados a -800C para avaliar o perfil de expressÃo de RNAs mensageiros para PCNA, KL, c-Kit, BMP-15 e GDF-9. Os resultados do experimento 1 demonstraram que apÃs 6 dias de cultivo, a percentagem de folÃculos em desenvolvimento foi significativamente maior nos fragmentos cultivados com &#945;-MEM+ suplementado com 10 e 40 &#956;g/mL de Con A, quando comparado aos demais tratamentos (P <0,05). No experimento 2, a presenÃa de FSH, Con A ou ambos promoveram uma reduÃÃo na percentagem de folÃculos primordiais e aumento de folÃculos em desenvolvimento em relaÃÃo ao meio controle (&#945;-MEM+). ApÃs 6 dias de cultivo, a presenÃa de FSH promoveu um aumento nos nÃveis de RNAm para PCNA, mas este efeito foi bloqueado pela Con A. Por outro lado, a Con A aumentou os nÃveis de RNAm para c-kit em comparaÃÃo ao controle nÃo cultivado, mas Con-A ou ambos Con A e FSH reduziram os nÃveis de RNAm para KL. AlÃm disso, uma reduÃÃo dos RNAm para BMP-15 foi observado em folÃculos cultivados no meio controle, mas a presenÃa de FSH inibiu esta reduÃÃo. AlÃm disso, a Con A promoveu um aumento nos nÃveis de RNAm para GDF-9 apÃs cultivo in vitro. Em conclusÃo, a Con A sozinha ou em combinaÃÃo com FSH promovem a ativaÃÃo de folÃculos primordiais caprinos apÃs 6 dias de cultivo in vitro e regulam a expressÃo de RNAm para PCNA, KL, c-Kit, BMP-15 e GDF-9.

Made available in DSpace on 2018-08-01T22:35:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_9511_MÁRCIA CRISTINA PAULUCIO 201620160621-105209.pdf: 1542200 bytes, checksum: 5221742660b6ed4073562adf52aa0b61 (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 / PAULUCIO, Márcia Cristina. Germinação ex vitro e potencial organogênico e embriogênico in vitro de Lecythis pisonis cambess. 2016. Dissertação (Mestrado em Ciências Florestais) Universidade Federal do Espírito Santo, Jerônimo Monteiro, ES. Orientadora: Profa. Dra. Elzimar de Oliveira Gonçalves. Coorientador: Prof. Dr. Rodrigo Sobreira Alexandre. A espécie Lecythis pisonis cambess pertencente à família Lecythidaceae, possui potencial ornamental, frutífera, madeireira, podendo ser utilizada no reflorestamento, além de produzir saborosas castanhas ricas em proteínas e minerais. Os estudos das técnicas de propagação sexuada e assexuada de espécies florestais assumem um papel relevante nas pesquisas científicas, objetivando a preservação e a utilização dessas espécies com interesses diversificados. Objetivou-se com este trabalho, avaliar a germinação ex vitro das sementes submetidas a diferentes métodos de superação de dormência e avaliar o estabelecimento in vitro e o potencial organogênico e embriogênico da espécie L. pisonis. Inicialmente para o estudo da germinação ex vitro, foram avaliados o comprimento, largura e espessura das sementes. Em seguida as sementes foram submetidas aos seguintes tratamentos pré-germinativos: sementes intactas (testemunha); escarificação mecânica; escarificação química com ácido sulfúrico (98%) por 30, 60 e 90 minutos e total remoção do tegumento. Foram avaliados, a porcentagem de emergência (E%); índice de velocidade de emergência (IVE) e frequência relativa da emergência (Fr). As sementes intactas e imersas ao H2SO4 por 30, 60 e 90 minutos foram radiografadas pelo equipamento de raios X (X QDP-01X) e foi analisado o desgaste químico provocado pelo H2SO4 no tegumento da semente e se este tratamento causou algum dano a semente. Ao final do experimento foi realizada a caracterização morfológica das plântulas e calculado a porcentagem de poliembrionia das sementes escarificadas mecanicamente. Observou-se que as sementes de L. pisonis apresentam dormência tegumentar e o tratamento mais eficiente para superar esta dormência foi a escarificação mecânica, com maior porcentagem de emergência e maior vigor das plântulas formadas. O teste de raios x mostrou que a escarificação química não causou danos ao endosperma e ao embrião da semente, além disso, o desgate químico do tegumento foi proporcional ao tempo de imersão das sementes no ácido sulfúrico. As sementes de L. pisonis apresentaram 25% de poliembrionia. Ainda avaliou-se o estabelecimento in vitro e o potêncial organogênico e embriogênico da espécie em estudo. Os explantes utilizados para o estabelecimento in vitro foram sementes sem tegumento de L. pisonis, no qual foram inoculados no meio WPM sem regulador de crescimento e mantidos em sala de crescimento por 150 dias. Neste experimento foram observadas diferentes respostas morfogênicas: esverdeamento (63%), calogênese (84%), germinação (8%), rizogênese direta (4%) e organogênese indireta (2%). Para a indução da embriogênese somática foram utilizados os segmentos de sapucaia, inoculados em meio MS, com a adição dos reguladores de crescimento em diferentes concentrações (0; 1,5 e 3,0 mg L-1 de 2,4-D) e citocinina (0, 0,5 e 1,0 m L-1 de KI). Observou-se que as concentrações utilizadas não foram eficientes para a indução de embriões somáticos. Na indução do enraizamento in vitro de segmentos caulinares de plântulas germinadas in vitro foram testadas diferentes concentrações de AIB (0,0; 1,0; 2,0 e 3,0 mg L-1). Observou-se a formação de raízes em todas as concentrações utilizadas, exceto na ausência da auxina.

Submitted by Gabriela Lopes (gmachadolopesufpel@gmail.com) on 2018-05-24T17:10:25Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Jéssica Gonsalez Cruz.pdf: 883466 bytes, checksum: 03fabc4f6604fb6a6426eea8b53dde3a (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2018-05-30T12:52:59Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Jéssica Gonsalez Cruz.pdf: 883466 bytes, checksum: 03fabc4f6604fb6a6426eea8b53dde3a (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-30T12:52:59Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Jéssica Gonsalez Cruz.pdf: 883466 bytes, checksum: 03fabc4f6604fb6a6426eea8b53dde3a (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-12-01 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Objetivou-se com o presente estudo verificar a influência dos fitorreguladores 2-Isopenteniladenina (2ip) e ácido indolbutírico (AIB), aliados à qualidade de luz, na multiplicação e enraizamento in vitro, de mirtileiro ‘Woodard’. Os experimentos foram realizados de maio a novembro de 2016. No Laboratório de Micropropagação de Plantas Frutíferas, do Departamento de Fitotecnia da Faculdade de Agronomia Eliseu Maciel (FAEM), e algumas avaliações foram realizadas no Laboratório de Metabolismo Vegetal, do departamento de botânica do Instituto de biologia, da Universidade Federal de Pelotas (UFPel), no município Capão do Leão, RS. Foram avaliadas variáveis referentes à porcentagem de sobrevivência, número de brotações, comprimento da maior brotação (cm) comprimento de parte aérea (cm), número de folhas (gemas), taxa de multiplicação (números absolutos), área foliar (AF), número de raízes, porcentagem de enraizamento (%) e comprimento da maior raiz (cm). Os resultados obtidos demonstram que a presença de 2ip associado a luz branca fluorescente proporciona melhores resultados ao comprimento da parte aérea dos explantes, além de proporcionar maior número de folhas e de brotações. Com relação as clorofilas e carotenoides, nota-se que os maiores valores ocorreram na ausência do fitorregulador. Os maiores índices de área foliar puderam ser verificados na presença de luz fluorescente branca. Na presença de AIB foi observado maior número de brotações quando utilizado o filtro de luz azul e a lâmpada fluorescente. Entretanto, para o número de folhas e de raízes, porcentagem de enraizamento e área foliar foram obtidas maiores médias na condição de luz fluorescente branca. Os carotenoides tiveram resultados superiores nos filtros azul e vermelho. As variáveis comprimento da maior brotação (cm), comprimento da maior raiz (cm), número de raízes e taxa de crescimento (%) apresentaram maiores médias na presença de AIB. A presença de 2-Isopenteniladenina (2ip), bem como a presença de Ácido Indolbutírico (AIB) associado a luz branca fluorescente proporciona melhores resultados a multiplicação e ao enraizamento in vitro de mirtileiro ‘Woodard’ respectivamente. / The objective of this study was to verify the influence of the 2-Isopentenyladenine (2ip) and indolbutyric acid (IBA) phytorregulators, allied to the light quality, in the in vitro multiplication and rooting of the Woodard myrtle. The experiments were carried out from May to November of 2016. In the Laboratory of Micropropagation of Fruit Plants, from the Department of Phytotechnology of the Faculty of Agronomy Eliseu Maciel (FAEM), and some evaluations were carried out in the Laboratory of Plant Metabolism, botanical department of the Institute of Biology, Federal University of Pelotas (UFPel), in Capão do Leão, RS. Variables related to survival percentage, shoot number, shoot length (cm), shoot length (cm), number of leaves (gems), multiplication rate (absolute numbers), leaf area of roots, rooting percentage (%) and length of the largest root (cm). The results obtained demonstrate that the presence of 2ip associated with white fluorescent light gives better results to shoot length of the explants, besides providing a greater number of leaves and shoots. With regard to chlorophyll and carotenoids, it is observed that the highest values occurred in the absence of the phytoregulator. The highest indexes of leaf area could be verified in the presence of white fluorescent light. In the presence of IBA a greater number of shoots were observed when using the blue light filter and the fluorescent lamp. However, for the number of leaves and roots, percentage of rooting and leaf area were obtained higher averages in the condition of white fluorescent light. Carotenoids had superior results on the blue and red filters. The variables length of the highest sprouting (cm), length of the largest root (cm), number of roots and growth rate (%) presented higher averages in the presence of IBA. The presence of 2-Isopentenyladenine (2ip) as well as the presence of Indolbutyric Acid (IBA) associated with fluorescent white light results in better multiplication and in vitro rooting of Woody Goldfish, respectively.

Leontopodium alpinum (Edelweiss, Flor de las nieves, Estrella alpina) es una planta herbácea perenne de la familia de las Asteráceas. Se trata de una especie protegida que en España se localiza en áreas del sistema pirenaico de Aragón y Cataluña, en altitudes entre 1.500 y 2.800 m. La planta de edelweiss tiene un gran atractivo ornamental gracias a su característica flor en forma de estrella. Su carácter emblemático hace que sea una flor muy apreciada, por lo que sus poblaciones se han visto amenazadas por recolecciones indiscriminadas. En la tradición alpina, además se ha venido utilizando como planta medicinal como remedio frente a diversas enfermedades. Los extractos de la planta son, de hecho, una importante fuente de principios activos tales como antioxidantes y otras sustancias con propiedades anti-inflamatorias y citoprotectoras que confieren a edelweiss un gran interés farmacológico y biotecnológico. Las principales limitaciones para poder comercializar las plantas de edelweiss con un propósito ornamental se encuentran en las necesidades de localización de cultivo en altitudes elevadas de montaña para asegurar la calidad de la flor y en la estacionalidad de la producción. Asimismo, su condición de planta protegida limita la disponibilidad de materiales para la extracción de compuestos fitoquímicos de interés. En el presente trabajo se han desarrollado dos protocolos de micropropagación de plantas de L. alpinum pertenecientes a la población española de esta especie. En el primero de ellos, se partió de flores maduras aisladas de plantas silvestres recolectadas en campo. Estas flores se implantaron en cultivo in vitro y se indujo, mediante regeneración organogénica indirecta, la formación de brotes adventicios que se incorporaron posteriormente a un proceso de multiplicación y enraizamiento de gran eficiencia. Mediante este protocolo se garantiza la producción de un gran número de plantas clonales que pueden utilizarse con un fin comercial o como material de partida para la extracción y purificación de metabolitos de interés, sin amenazar a las poblaciones naturales. Asimismo, puede plantearse como herramienta complementaria para los proyectos de conservación de esta especie. En el segundo de los protocolos establecidos, se utilizó como material de partida hojas de plantas micropropagadas cultivadas in vitro. Este tipo de explante, cuya utilización no ha sido descrita con anterioridad en edelweiss, mostró una elevada capacidad organogénica en medios de cultivo con tidiazurón (TDZ). A la vista de los resultados, este protocolo proporciona un método de regeneración de plantas in vitro eficaz y reproducible que puede suponer un primer paso para el abordaje de la transformación genética de plantas de L. alpinum Por otro lado, se ha estudiado la floración de las plantas micropropagadas y cultivadas en condiciones de invernadero a nivel del mar, mediante la aplicación de distintas condiciones de inducción basadas en la temperatura de cultivo, el fotoperíodo y la aplicación exógena de giberelinas. Como resultado de estos estudios se plantea un sistema alternativo de obtención de flores de edelweiss basado en el tratamiento de plantas micropropagadas con giberelinas, que permite la obtención de inflorescencias en invernadero de manera sincronizada y sin restricciones estacionales. / Mondéjar Canet, RJ. (2014). Micropropagación de Leontopodium alpinum Cass (Edelweiss) e inducción de la floración en condiciones de invernadero [Tesis doctoral]. Editorial Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/36958

INTRODUÇÃO: Os programas de preservação de fertilidade baseados na criopreservação de gametas e tecido ovariano têm sido amplamente empregados para salvaguardar o potencial reprodutivo de mulheres em idade reprodutiva. Entretanto,o risco de reintrodução de células malignas após o reimplante do tecido e a dificuldade de aplicação dos protocolos de estimulação ovariana em pacientes estrogênio dependentes, dificultam o acesso destas pacientes aos programas de preservação de fertilidade já estabelecidos. O cultivo de folículos isolados vem se mostrando uma técnica promissora capaz de atender a essas pacientes, com resultados bastante satisfatórios. A recuperação de oócitos fertilizáveis tem se mostrado bem sucedida em camundongos resultando em nascidos vivos; já em outros mamíferos de grande porte,como primatas não humanos e humanos,há escassos relatos da obtenção de oócitos em estagio MII . OBJETIVO: Este estudo teve como objetivo analisar a eficiência do cultivo tridimensional in vitro no desenvolvimento de folículos ovarianos bovinos e a sua influência sobre o metabolismo oxidativo, a geração de estresse oxidativo celular e os níveis de transcritos de genes ligados atividade mitocondrial, apoptose e crescimento e desenvolvimento oocitário. MATERIAL E MÉTODOS: Foi realizado o cultivo in vitro tridimensional de folículos secundários bovinos por 16 dias em meio ?- MEM suplementado, em atmosfera de 5% de CO2 e 20% de O2 (Grupo in vitro - Gvt). Como controles foram incluídos dois grupos: um de folículos secundários isolados frescos não submetidos a cultivo (Grupo imaturos- GI) e outro de folículos extraídos já em estágios pré-antrais mais avançados do desenvolvimentos (Grupo in vivo- Gvv). Para a avaliação do desenvolvimento folicular, foram realizadas análises morfológica e testes de viabilidade, além da expressão por RT- qPCR de genes alvos para a atividade mitocondrial e estresse oxidativo. RESULTADOS: As análises do desenvolvimento dos folículos in vitro mostraram que 81,1% dos folículos secundários apresentaram crescimento, com uma taxa de viabilidade em torno de 84%. Cerca de 50% de oócitos recuperados após o cultivo estavam viáveis pela avaliação morfológica, embora nenhum deles tenha atingido o estágio final de maturação (MII). Além disso, o cultivo não promoveu aumento da expressão de genes ligados a apoptose o que também sugere uma boa viabilidade dos folículos cultivados. O mesmo não ocorreu com o sistema Kit Ligand e c-Kit, considerados como marcadores da capacidade global de crescimento e desenvolvimento folicular, verificou-se uma menor expressão de KL nas células somáticas da parede folicular. Com relação ao metabolismo oxidativo, embora o estado redox, marcado pela produção de NAD e FAD, estivesse bastante aumentado nos folículos produzidos in vitro quando comparado com o controle imaturo fresco e maturado in vivo, não se observou aumento das espécies reativas de oxigênio em oócitos obtidos destes mesmos folículos, podendo sugerir a manutenção da capacidade de controlar o balanço oxidativo por parte destas células. ,Também não houve alteração na expressão de genes ligados à biogênese mitocondrial entre os grupos estudos. CONCLUSÃO: O método de cultivo proposto neste estudo, utilizando o sistema 3D em matriz de gel de alginato, permitiu a maturação parcial de folículos secundários isolados, mantendo a viabilidade e características do metabolismo oxidativo semelhantes a folículos maturados in vivo de mesmo tamanho. Entretanto, há algum grau de comprometimento na saúde global do folículo, especialmente em relação às células somáticas da parede folicular. / The fertility preservation programs based on oocyte and ovarian tissue cryopreservation has been widely employed to safeguard the reproductive potential of these patients. However, the risk of reintroducting malignant cells after ovarian tissue transplantation and the difficulty of applying ovarian stimulation protocols in patients with estrogen dependent diseases hinder the access of these patients to already established fertility preservation programs. Isolated follicle culture appears as a promising technique for these cases, with satisfactory results. The recovery of fertilizable oocytes has been shown to be successful in mice resulting in live births; in other large mammals, such as non-human primates and humans, there are a few reports of the obtention of oocytes in the MII stage. OBJECTIVE: This study aimed to analyze the efficiency of in vitro three-dimensional culture in the development of bovine ovarian follicles and their influence on oxidative metabolism, on cellular oxidative stress generation and on the transcript levels of genes linked to mitochondrial activity, apoptosis and oocyte growth and development. MATERIAL AND METHODS: Three-dimensional in vitro culture of bovine secondary follicles was carried out for 16 days in supplemented ?-MEM medium, in an atmosphere of 5% CO2 and 20% O2 (In vitro Group - Gvt). As controls, two groups were included: one of the fresh none cultured isolated secondary follicles (GI-immature group) and one of follicles isolated in a more advanced preantral stage (in vivo Group-Gvv). For the evaluation of the follicular development, morphological analysis and viability tests were performed, besides the expression by RT-qPCR of target gene for mitochondrial activity and oxidative stress were also evaluated. RESULTS: Analysis of the in vitro follicle development showed that 81.1% of the secondary follicles have grown, with a viability rate of 84%. About 50% of oocytes recovered after culture were viable by morphological evaluation, although none of them had reached the final maturation stage (MII). In addition, the culture did not promote increased on the expression of apoptosis-linked genes which also suggests good viability of the cultured follicles. The same was not observed with the Kit Ligand and c-Kit, considered as markers of the global capacity of follicular growth and development; there was a lower expression of KL in the somatic cells from the follicular wall. In relation to the oxidative metabolism, although the redox state, marked by the production of NAD and FAD, was greatly increased in follicles produced in vitro when compared to the immature controls and the in vivo matured group, there was no increase on the production of reactive oxygen species in the oocytes obtained from these follicles, suggesting that these cells were able to control their oxidative imbalance. Also, there was no alteration in the expression of genes linked to mitochondrial biogenesis between the studied groups. CONCLUSION: The culture method proposed in this study, using the 3D system in an alginate gel matrix, allowed the partial maturation of isolated secondary follicles, maintaining the viability and oxidative metabolism characteristics similar to follicles of the same size matured in vivo. However, there is some degree of impairment in overall health, especially in relation to the somatic cells from the follicular wall.