Avaliaram-se 36 linhagens diaplóides de trigo, obtidas via cultura de anteras in vitro oriundas de plantas híbridas, em geração F1, divididas em dois ensaios com dezoito linhagens e dois cultivares controles (IAC-24 e IAC-289), nos anos de 1999 e 2000. Cada ensaio foi instalado em dois locais do Estado de São Paulo: Ensaio I - Estações Experimentais de Agronomia de Capão Bonito (solo ácido, sem aplicação de calcário e em condição de sequeiro) e Tatuí (solo ácido, com aplicação de calcário e em condição de irrigação por aspersão) e Ensaio II - Estações Experimentais de Agronomia de Tatuí e Monte Alegre do Sul (ambos em solo ácido com aplicação de calcário e condição de irrigação por aspersão). Em cada ensaio, avaliaram-se os seguintes parâmetros: acamamento, altura da planta, ciclos da emergência ao florescimento e da emergência à maturação, produção de grãos, resistência às moléstias, comprimento da espiga e componentes de produção. Todos os genótipos foram, também, avaliados quanto à tolerância à toxicidade de alumínio, em solução nutritiva, em condição de laboratório. No Ensaio I, destacaram-se, pela produção de grãos, as linhagens 4 (2.309 kg ha -1 ) e 5 (2.319 kg ha -1 ), provenientes do cruzamento PF70402/ALD'S'//PAT72160/ALD'S'/3/PEW'S'/4/OPATA/5/IAC-60; 9 (2.150 kg ha -1 ), provinda do cruzamento MLR'S'/BUC'S'//BUC'S'/3/IAC-24, 11 (2.102 kg ha -1 ) e 12 (2.056 kg ha -1 ), oriundas do cruzamento TEPOCA/IAC-24. A 13 (JUN/GEN//IAC-24) apresentou as plantas mais baixas (53 cm). As linhagens 2, 4 e 18, originárias dos cruzamentos JUN/GEN//IAC-24,PF70402/ALD'S'//PAT72160/ALD'S'/3/PEW'S'/4/OPATA/5/IAC-60 e TEPOCA/IAC-24, revelaram, ao mesmo tempo, moderada resistência aos agentes causais da ferrugem-da-folha e da mancha-da-folha. Todos os genótipos, com exceção do cultivar IAC-289 e da linhagem 13 (JUN/GEN//IAC-24), foram considerados tolerantes a 10 mg L -1 de Al 3+ , quando avaliados em solução nutritiva. No Ensaio II, a linhagem 8 (ANA/IAC-24) e o cultivar IAC-289 apresentaram elevadas produções de grão (3.311 e 3.341 kg ha -1 respectivamente). A linhagem 13 exibiu o porte mais baixo (61 cm) entre os genótipos estudados e a 3 (ANA/IAC-24//IAC-24), mostruo, ao mesmo tempo, resistência ao agente causal da ferrugem-da-folha, moderada resistência ao agente da mancha-da-folha e imunidade ao agente causal do oídio. As linhagens 8 (ANA/IAC-24) e 14 (PF70402/ALD"S"//PAT72160/ ALD"S"/3/PEW"S"/4/OPATA/5/ IAC-60) mostraram elevada tolerância à toxicidade de alumínio, associada a alta produção de grãos. / Thirty six dihaploid wheat lines, originated via anther culture from F1 hybrid plants were evaluated in two trials with eighteen lines plus two control cultivars (IAC-24 and IAC-289), in 1999 and 2000. Each trial was carried out in two locations of the State of São Paulo: trial I - Capão Bonito Agronomy Experiment Station (acid soil without lime application and upland condition) and Tatuí Agronomy Experiment Station (acid soil with lime application and sprinkler irrigation condition) and trial II - Monte Alegre do Sul and Tatuí Agronomy Experiment Station (both with acid soil with lime application and sprinkler irrigation condition). In each the genotypes were evaluated for lodging, plant height, cycle from emergence to flowering and from emergence to maturation, grain yield, resistance to disease, head length and yield components. All genotypes were also evaluated for aluminum toxicity tolerance, in nutrient solution, under laboratory condition. Considering trail I, the lines 4 (2.309 kg ha -1 ) and 5 (2.319 kg ha -1 ) originated from the cross PF70402/ALD'S'//PAT72160/ALD'S'/3/PEW'S'/4/OPATA/5/IAC-60, 9 (2.150 kg ha -1 ) from the cross MLR'S'/BUC'S'//BUC'S'/3/IAC-24, and the lines 11 (2.102 kg ha -1 ) e 12 (2.056 kg ha -1 ) from the cross TEPOCA/IAC-24, presented high grain yield. The line 13 (JUN/GEN//IAC-24) showed the shortest plants (53 cm). The lines 2, 4 and 18 originated from crosses JUN/GEN//IAC-24,PF70402/ALD'S'//PAT72160/ALD'S'/3/PEW'S'/4/OPATA/5/IAC-60 and TEPOCA/IAC-24, showed at the same time moderate resistance to the causal agents of leaf rust and leaf spot. All genotypes, with exception of the cultivar IAC-289 and the line 13 (JUN/GEN//IAC-24) , were considered tolerant to 10 mg L -1 Al 3+ , when evaluated in nutrient solutions. Considering trial II, the line 8 (ANA/IAC-24) and the cultivar IAC-289 presented high grain yield (3.311 e 3.341 kg ha -1 respectively). The line 3 (ANA/IAC-24//IAC-24) exhibited at the same time resistance to the causal agent of leaf rust, moderate resistance to the causal agent of leaf spot and immunity to the causal agent of powdery mildew. The lines 8 (ANA/IAC-24) and 14 (PF70402/ALD"S"//PAT72160/ALD"S"/3/PEW"S"/4/OPATA/5/IAC-60), also showed high tolerance to aluminum toxicity being associated to high grain yield, and so could be used in breeding programs with the objective to get cultivars for acid soils.

Submitted by Ricardo Cedraz Duque Moliterno (ricardo.moliterno@uefs.br) on 2018-09-17T22:21:01Z No. of bitstreams: 1 SUZIVANY-Disserta??o final_P?s defesa pronta.pdf: 1092823 bytes, checksum: d04950266649fc7c286bacbc00d0e7ed (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-17T22:21:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 SUZIVANY-Disserta??o final_P?s defesa pronta.pdf: 1092823 bytes, checksum: d04950266649fc7c286bacbc00d0e7ed (MD5) Previous issue date: 2017-09-29 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / The genus Hyptis is composed of about 400 species distributed throughout several countries, the majority being in a native and non-domesticated state. The genus has great importance for the pharmaceutical industry because of the high diversity found in its species. It has excellent pharmacological potential and is of great economic interest. Biological properties like it?s antimicrobial, anti - inflammatory, anesthetic, and insecticidal potential have already been demonstrated. However, in addition to the endemism present in many species, there are few works related to conservation of the genus and more research is needed to elucidate potential methods for its preservation. The objective of this research was the in vitro conservation of the species Hyptis ramosa. In addition to adjusting the protocols of cryopreservation of axillary guides and shoots, we aimed to contribute to the conservation of germplasm of this species. The microplants used came from the germination of seeds in MS1/2 medium. For the in vitro conservation, 10 treatments were evaluated, with different combinations between sucrose, mannitol, and sorbitol. After inoculation, the plants were maintained in a growth room for 240 days and evaluated at 60, 120, 180, and 240 days. Each evaluation quantified the number of shoots, shoot length, root number, and root length. For cryopreservation, the techniques of vitrification for axillary calluses and buds and for encapsulation of axillary shoots were evaluated. The tests were carried out in the Laboratory of Germination (LAGER) and Vegetable Tissue Culture (LCTV) of the Horto Florestal Experimental Unit da Universidade Estadual de Feira de Santana. With the results obtained, we concluded that in vitro conservation of microplants of this species is possible using the combination of 87.64 mM sucrose combined with 87.64 mM mannitol in MS medium (MURASHIGE; SKOOG, 1969). With the methodology used, cryopreservation of calluses and shoots of the species was not possible. Cell death occurred in the first stages of the callus vitrification process and in the cryogenic stage for the shoots. / O g?nero Hyptis abrange cerca de 400 esp?cies distribu?das em v?rios pa?ses, sendo a grande maioria ainda encontrada em estado nativo e n?o domesticado. O g?nero apresenta grande import?ncia para a ind?stria farmac?utica por apresentar uma grande diversidade de esp?cies com grande potencial farmacol?gico e de interesse econ?mico, com diversas atividades biol?gicas j? comprovadas, como antimicrobiana, anti-inflamat?ria, anest?sica e inseticida. Contudo, al?m do endemismo presente em muitas esp?cies existem poucos trabalhos relacionados com a sua conserva??o, havendo a necessidade de mais pesquisas. No presente trabalho objetivou-se a conserva??o in vitro de plantas de Hyptis ramosa, al?m de ajustar protocolos para crioconserva??o de calos e gemas axilares, visando contribuir para a conserva??o de germoplasma desta esp?cie. As microplantas utilizadas foram provenientes da germina??o de sementes em meio MS1/2. Para conserva??o in vitro foram avaliados 10 tratamentos, com diferentes combina??es entre sacarose, manitol e sorbitol. Ap?s a inocula??o as plantas foram mantidas em sala de crescimento por 240 dias, com avalia??es aos 60, 120, 180 e 240 dias, quantificando-se o n?mero de brotos, comprimento da parte a?rea, n?mero de raiz e comprimento da raiz. Para a crioconserva??o foram avaliadas as t?cnicas de vitrifica??o para calos e gemas axilares e de encapsulamento de gemas axilares. Os ensaios foram realizados nos Laborat?rios de Germina??o (LAGER) e de Cultura de Tecidos Vegetais (LCTV) da Unidade Experimental Horto Florestal da Universidade Estadual de Feira de Santana. Com os resultados obtidos p?de-se concluir que ? poss?vel a conserva??o in vitro de microplantas dessa esp?cie, utilizando-se a combina??o de 87,64mM de sacarose combinado com 87,64mM de manitol, em meio MS (MURASHIGE; SKOOG, 1969). Com a metodologia utilizada n?o foi poss?vel a crioconserva??o de calos e gemas da esp?cie, havendo a morte celular nas primeiras etapas do processo de vitrifica??o dos calos e na etapa criog?nica para as gemas.

A melatonina é um antioxidante muito eficaz e protege as células contra o estresse oxidativo causado pelas espécies reativas, e indiretamente, modula a expressão de genes associados ao ciclo celular, metabolismo oxidativo e apoptose celular. Deste modo, a suplementação da melatonina ao meio de maturação in vitro, a torna uma alternativa para promover melhorias na viabilidade das células germinativas e embrionárias. O estudo 1 avaliou o efeito da adição de melatonina ao meio de maturação por meio da maturação nuclear (progressão meiótica) e citoplasmática (migração de grânulos corticais) e dos níveis de ROS em oócitos suínos maturados in vitro. A suplementação do meio de maturação com melatonina estimulou a progressão da meiose, a migração de grânulos corticais e reduziu os níveis intracelulares de ROS nos oócitos. O estudo 2 avaliou o efeito da melatonina na expressão de genes antioxidantes (Catalase, SOD1, SOD2 e GPX) envolvidos na proteção celular de oócitos e células do cumulus. A adição da melatonina ao meio de maturação influenciou positivamente a expressão dos genes antioxidantes nos oócitos e células do cumulus. O estudo 3 avaliou o efeito da melatonina nos processos biológicos por meio do perfil de trascriptomas, via RNA-Seq, em células do cumulus oriundas de oócitos suínos maturados in vitro. A partir da análise de expressão diferencial foi possível identificar que a adição da melatonina ao meio de maturação influenciou 80 genes associados a nove processos biológicos (ciclo celular; proteólise; organização de citoesqueleto; via energética; adesão e transporte celular; via de sinalização; fator de transcrição; metabolismo oxidativo e apoptose; e componente celular). A suplementação do meio de maturação com melatonina potencialmente influencia a viabilidade e o funcionamento celular, uma vez que modulou a expressão de genes associados à processos fisiológicos essenciais, tais como: divisão celular, metabolismo energético e oxidativo, vias de sinalização e apoptose. O estudo 4, avaliou o efeito da melatonina sobre os genes associados à viabilidade oocitária e o subsequente desenvolvimento embrionário por meio do perfil de trascriptomas, via RNA-Seq, de células do cumulus oriundas de oócitos suínos. A adição da melatonina ao meio de maturação influenciou 59 genes associados a nove funções biológicas (expansão do cumulus, comunicação em COCs, maturação nuclear, maturação citoplasmática, reparo e integridade do DNA, viabilidade oocitária, esteroidogênese, fertilização e embriogênese). Em conclusão, a suplementação do meio de maturação com melatonina influencia positivamente a maturação oócitária, reduz os níveis intracelulares de ROS, aumenta a expressão de genes antioxidantes, em adição, interfere no transcriptoma de um número expressivo de genes associados à aquisição da competência oócitária, da viabilidade embrionária e desenvolvimento subsequente. / Melatonin is a very effective antioxidant and protects cells against oxidative stress caused by reactive species, and indirectly modulates expression of genes associated with cell cycle, oxidative metabolism, and apoptosis. Thus, melatonin supplementation to in vitro maturation media becomes an alternative to improve the viability of germ and embryonic cells. The first study assessed the effects of adding melatonin to the maturation medium on nuclear (meiotic progression) and cytoplasmic (cortical granules migration) maturation and ROS levels in in vitro matured porcine cumulus-oocyte complexes (COCs). Melatonin supplementation stimulated meiosis progression and cortical granules migration, and reduced intracellular ROS levels in oocytes. The second study evaluated the effects of melatonin on the expression of antioxidant genes (Catalase, SOD1, SOD2, and GPX) involved in cellular protection in oocytes and cumulus cells. The addition of melatonin to the maturation medium positivity influence the expression of antioxidant genes in oocytes and cumulus cells. The third study evaluated the effect of melatonin on genes associated with biological processes through transcriptomic profile via RNA-Seq in cumulus cells derived from porcine COCs in vitro matured. Melatonin addition to maturation medium differentially affected expression of 80 genes associated with nine biological processes (cell cycle, proteolysis, cytoskeletal organization, energy pathaway, cell adhesion and transport, signalling pathway, transcription factor, oxidative metabolism and apoptosis, and cell components). The fourth study assessed the effect of melatonin on genes associated with oocyte viability and subsequent embryo development through transcriptomic profile via RNA-Seq in cumulus cells derived from porcine COCs. Melatonin in the maturation medium affected 59 genes associated with nine biological functions related with oocyte viability and embryo development (cumulus expansion, communication between cumulus cells and oocytes, nuclear maturation, cytoplasmic maturation, DNA repair and integrity, oocyte viability, steroidogenesis, fertilization and embryogenesis). In conclusion, supplementation of melatonin to maturation environment influences oocyte nuclear and cytoplasmic maturation, reduces intracellular ROS levels, positivity influence the expression of antioxidant and also interferes in the transcriptome of a significant number of genes associated with oocyte competence acquisition, embryo viability and subsequent development.

Orientador: Joaquim Mansano Garcia / Resumo: As biotecnologias mais avançadas utilizam a produção in vitro (PIV) de embriões como suporte, a qual é dividida em três etapas igualmente importantes: maturação (MIV), fecundação (FIV) e cultivo in vitro (CIV). O objetivo deste trabalho foi avaliar a MIV de oócitos bovinos na presença de estimuladores da síntese de glutationa (GSH) e sua influência no número e na qualidade dos embriões CIV em dois sistemas de cultivo. O meio TCM-199 adicionado de bicarbonato de sódio (26mM), piruvato (0,25mM), sulfato de amicacina (75mg/mL), FSH (0,5mg/mL), hCG (100UI/mL) e estradiol 17b (1mg/ml) foi utilizado como meio base (TCM-199b) para os seis meios de maturação avaliados (Experimento I): controle do laboratório (S) (TCM-199b+10% SFB), controle BSA (B) (TCM-199b+0,5% BSA) e aditivos, cisteína (BC) (meio B+825mM de L-cisteína), cisteína-cisteamina (BCC) (meio BC+100mM de cisteamina), cisteína-cisteamina- mistura de insulina, transferrina e selênio (BCCI) (meio BCC+ITS 8:8:8) e cisteína-ITS (BCI) (meio BC+ITS). Para se verificar a maturação nuclear, pelo estádio da meiose, e a citoplasmática, pelos parâmetros da migração dos grânulos corticais (GCs) para a periferia da membrana citoplasmática (n=1084) e da concentração intracelular de GSH ([GSHi]) (n=1020) foram utilizados oócitos (n=2104) de abatedouro MIV por 24h em estufa úmida a 38,5oC e 5% de CO2 em ar. Após esta avaliação, oócitos (n=3403) foram maturados no meio S, BC ou BCC, FIV em meio TALP-FIV e CIV, por sete dias, em dois sistemas (SOFaa+2,5% de SFB+0,5% de BSA e atmosfera com 5% de CO2 em ar, aproximadamente 20% de O2, ou SOFaa+0,5% de BSA e atmosfera com 5% de CO2 e 5% de O2) para a avaliação das taxas de clivagem e produção de blastocisto (Bl) e, da qualidade proporcional do número de células da massa celular interna e do trofoblasto (MCI:TF), pela coloração diferencial, e do número de... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo). / Abstract: Advanced biotechnology uses in vitro production (IVP) embryos as support, that is performed in three stages of similar importance: in vitro maturation (IVM), fertilization (IVF) and culture (IVC). The main goal of this experiment was to assess the IVM of bovine oocytes in presence of glutathione (GSH) synthesis stimulates and its influence on quantify and quality of IVC embryos in two culture systems. TCM-199 medium plus sodium bicarbonate (26mM), piruvate (0.25mM), amicacine sulphate (75mg/mL), FSH (0.5mg/mL), hCG (100UI/mL) and estradiol 17b (1mg/ml) was used as basis medium (TCM-199b) to evaluate six maturation media (Experiment I): laboratory control (S) (TCM-199b+10% SFB), BSA control (B) (TCM-199b+0.5% BSA) and supplementation with cysteine (BC) (B medium+825mM of Lcysteine), cysteine-cysteamine (BCC) (BC medium+100mM of cysteamine), cysteinecysteamine- insuline, transferrin and selenium mix (BCCI) (BCC medium+ITS 8:8:8) and cysteine-ITS (BCI) (BC medium+ITS). Bovine oocytes (n=2104) obtained from slaughterhouse ovaries were used to verify nuclear maturation, by meiosis stage, and cytoplasmatic maturation, by migration of cortical granules (CG) to cytoplasmatic membrane periphery (n=1084) and by GSH intracellular concentration ([GSHi]) (n=1020), the IVM was during 24h in a humid incubator at 38.5°C and under 5% CO2 atmosphere. Next, oocytes (n=3404) were maturated in S, BC or BCC medium, IVF was in TALP-IVF medium and IVC was in two different systems (SOFaa+2.5% SFB+0.5% BSA and under 5% CO2 atmosphere, and approximate 20% O2, or SOFaa+0.5% BSA and under 5% CO2 and 5% O2 atmosphere) for a seven day period to evaluate cleavage and blastocyst (Bl) rates, inner cell mass and trophoblast ratio quality (ICM:TE), by differential staining, and apoptotic cell quantify, by TUNEL technique... (Complete abstract, click electronic address below). / Mestre

Avaliaram-se 36 linhagens diaplóides de trigo, obtidas via cultura de anteras in vitro oriundas de plantas híbridas, em geração F1, divididas em dois ensaios com dezoito linhagens e dois cultivares controles (IAC-24 e IAC-289), nos anos de 1999 e 2000. Cada ensaio foi instalado em dois locais do Estado de São Paulo: Ensaio I - Estações Experimentais de Agronomia de Capão Bonito (solo ácido, sem aplicação de calcário e em condição de sequeiro) e Tatuí (solo ácido, com aplicação de calcário e em condição de irrigação por aspersão) e Ensaio II - Estações Experimentais de Agronomia de Tatuí e Monte Alegre do Sul (ambos em solo ácido com aplicação de calcário e condição de irrigação por aspersão). Em cada ensaio, avaliaram-se os seguintes parâmetros: acamamento, altura da planta, ciclos da emergência ao florescimento e da emergência à maturação, produção de grãos, resistência às moléstias, comprimento da espiga e componentes de produção. Todos os genótipos foram, também, avaliados quanto à tolerância à toxicidade de alumínio, em solução nutritiva, em condição de laboratório. No Ensaio I, destacaram-se, pela produção de grãos, as linhagens 4 (2.309 kg ha -1 ) e 5 (2.319 kg ha -1 ), provenientes do cruzamento PF70402/ALD'S'//PAT72160/ALD'S'/3/PEW'S'/4/OPATA/5/IAC-60; 9 (2.150 kg ha -1 ), provinda do cruzamento MLR'S'/BUC'S'//BUC'S'/3/IAC-24, 11 (2.102 kg ha -1 ) e 12 (2.056 kg ha -1 ), oriundas do cruzamento TEPOCA/IAC-24. A 13 (JUN/GEN//IAC-24) apresentou as plantas mais baixas (53 cm). As linhagens 2, 4 e 18, originárias dos cruzamentos JUN/GEN//IAC-24,PF70402/ALD'S'//PAT72160/ALD'S'/3/PEW'S'/4/OPATA/5/IAC-60 e TEPOCA/IAC-24, revelaram, ao mesmo tempo, moderada resistência aos agentes causais da ferrugem-da-folha e da mancha-da-folha. Todos os genótipos, com exceção do cultivar IAC-289 e da linhagem 13 (JUN/GEN//IAC-24), foram considerados tolerantes a 10 mg L -1 de Al 3+ , quando avaliados em solução nutritiva. No Ensaio II, a linhagem 8 (ANA/IAC-24) e o cultivar IAC-289 apresentaram elevadas produções de grão (3.311 e 3.341 kg ha -1 respectivamente). A linhagem 13 exibiu o porte mais baixo (61 cm) entre os genótipos estudados e a 3 (ANA/IAC-24//IAC-24), mostruo, ao mesmo tempo, resistência ao agente causal da ferrugem-da-folha, moderada resistência ao agente da mancha-da-folha e imunidade ao agente causal do oídio. As linhagens 8 (ANA/IAC-24) e 14 (PF70402/ALD”S”//PAT72160/ ALD”S”/3/PEW”S”/4/OPATA/5/ IAC-60) mostraram elevada tolerância à toxicidade de alumínio, associada a alta produção de grãos. / Thirty six dihaploid wheat lines, originated via anther culture from F1 hybrid plants were evaluated in two trials with eighteen lines plus two control cultivars (IAC-24 and IAC-289), in 1999 and 2000. Each trial was carried out in two locations of the State of São Paulo: trial I - Capão Bonito Agronomy Experiment Station (acid soil without lime application and upland condition) and Tatuí Agronomy Experiment Station (acid soil with lime application and sprinkler irrigation condition) and trial II - Monte Alegre do Sul and Tatuí Agronomy Experiment Station (both with acid soil with lime application and sprinkler irrigation condition). In each the genotypes were evaluated for lodging, plant height, cycle from emergence to flowering and from emergence to maturation, grain yield, resistance to disease, head length and yield components. All genotypes were also evaluated for aluminum toxicity tolerance, in nutrient solution, under laboratory condition. Considering trail I, the lines 4 (2.309 kg ha -1 ) and 5 (2.319 kg ha -1 ) originated from the cross PF70402/ALD'S'//PAT72160/ALD'S'/3/PEW'S'/4/OPATA/5/IAC-60, 9 (2.150 kg ha -1 ) from the cross MLR'S'/BUC'S'//BUC'S'/3/IAC-24, and the lines 11 (2.102 kg ha -1 ) e 12 (2.056 kg ha -1 ) from the cross TEPOCA/IAC-24, presented high grain yield. The line 13 (JUN/GEN//IAC-24) showed the shortest plants (53 cm). The lines 2, 4 and 18 originated from crosses JUN/GEN//IAC-24,PF70402/ALD'S'//PAT72160/ALD'S'/3/PEW'S'/4/OPATA/5/IAC-60 and TEPOCA/IAC-24, showed at the same time moderate resistance to the causal agents of leaf rust and leaf spot. All genotypes, with exception of the cultivar IAC-289 and the line 13 (JUN/GEN//IAC-24) , were considered tolerant to 10 mg L -1 Al 3+ , when evaluated in nutrient solutions. Considering trial II, the line 8 (ANA/IAC-24) and the cultivar IAC-289 presented high grain yield (3.311 e 3.341 kg ha -1 respectively). The line 3 (ANA/IAC-24//IAC-24) exhibited at the same time resistance to the causal agent of leaf rust, moderate resistance to the causal agent of leaf spot and immunity to the causal agent of powdery mildew. The lines 8 (ANA/IAC-24) and 14 (PF70402/ALD“S”//PAT72160/ALD“S”/3/PEW“S”/4/OPATA/5/IAC-60), also showed high tolerance to aluminum toxicity being associated to high grain yield, and so could be used in breeding programs with the objective to get cultivars for acid soils.

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The establishment and germination in vitro can supply a high amount of explants to develop morphogenesis protocols necessary for flowering induction in vitro, haploid and double-haploid plant production, clonal propagation, somatic embryogenesis among other applications. The objective was to develop protocols for the establishment and germination in vitro of bottle gourd (Lagenaria siceraria (Mol.) Standl.) and squash (Cucurbita pepo L.) species to effort morphogenesis studies. Seed disinfection treatments were done with ethanol 70% and NaOCl. Seed germination in vitro was evaluated changing medium-osmotic pressure, light availability, tegument and auxin presence, imbibition s time and scarification methods. Cotyledonary explants were used to induce direct organogenesis. Apical and nodal segments were grown in MS medium without growth regulators. Bottle gourd seeds did not germinate in culture medium, but it occurred on four layers of germitest paper and distilled water in the proportion of 1:7.5 (w/w). Light is not necessary for bottle gourd seed germination. Osmotic pressure reduction did not increase bottle gourd and squash germination. Bottle gourd apical and nodal segments regenerate in culture medium without growth regulators. Cotyledonary explants of bottle gourd and squash induce aerial growth, but in a low proliferation rate / O estabelecimento e a germinação in vitro suprem explantes em grande quantidade para a organização de experimentos em morfogênese, a qual apresenta muitas aplicações, tais como a indução de flores in vitro, a obtenção de plantas haplóides e duplo-haplóides, a propagação clonal em massa, a embriogênese somática, entre tantas outras. O objetivo deste trabalho foi desenvolver protocolos que permitam o estabelecimento e a germinação in vitro das espécies de porongo (Lagenaria siceraria (Mol.) Standl.) e mogango (Cucurbita pepo L.) para subsidiar pesquisas em morfogênese. Foram realizados testes com álcool 70% e NaOCl (Hipoclorito de sódio) para a desinfestação de sementes e investigados vários fatores envolvidos na germinação in vitro, tais como pressão osmótica, fotoblastismo, presença do tegumento, adição de auxinas, tempo de embebição e escarificação. Explantes cotiledonares foram utilizados para a indução de organogênese direta. Ápices caulinares e segmentos nodais foram cultivados em meio MS sem a adição de reguladores de crescimento. Nenhum dos tratamentos utilizados foi eficiente para permitir a germinação de sementes inteiras de porongo em meio de cultura, porém houve germinação em papel germitest umidecido com 7,5 vezes a massa do papel. Não foi verificado fotoblastismo para o porongo. A redução da pressão osmótica não aumentou o percentual de germinação de porongo e mogango. Ápices caulinares e segmentos nodais de porongo regeneram sem a adição de reguladores de crescimento. Explantes cotiledonares podem ser utilizados para a indução de brotações adventícias, em porongo e mogango, porém a taxa de proliferação é baixa

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:53:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 505430 bytes, checksum: abc94f889f785712de8e0cd84490edc4 (MD5) Previous issue date: 2009-07-28 / The orchid family has about 30,000 species spread throughout most of the globe. Among the orchids, the group of Cattleya has great importance in the world flower market. One of the main forms of production of these plants is the in vitro assymbiotic seeding. Many have been the culture media used for sowing and growing orchids, however, these methods do not seem to fully supply the nutritional requirements of plants. There is, therefore, great interest in developing new culture media with nutritional composition that supplies properly the demand of the culture during the growing period promoting the production of tissues and the morphogenic response wanted. That was the aim of this work. To adjust the nutrient concentrations in the culture medium suitable for the growth of cattleya seedlings were considered the reference content in their tissues, the dry matter yield production, the volume of culture medium per vial and recovery rates of the nutrients by this culture. This medium was called the medium Supply (S). To compare this medium with others, Cattleya walkeriana protocorms were cultured for 51, 94, 139 and 190 d in MS medium, B5, B & G ( 3 g L-1 of fertilizer Orchidées B&G®), Peters (3 g L-1 of fertilizer Peters® 10-30-20) and S, and tested different concentrations of salts of the latter (0.55, 0.73, 1.00 and 1.45 as the concentration of salts). The medium S, proposed in this work, offered the optimum nutrient supply for the production of seedlings of Cattleya walkeriana when compared with other media. The concentration that provided maximum production of complete seedling was 1.125 time the original concentration of salts of the medium S. The media containing higher concentrations of N and lower P led to the rise in the levels of N and P (TN/TP) in tissue culture, which correlated positively with the ratio of dry matter yield of corn and total. High ratio TN/TP induced reduction in the production of roots. The relationship between the production of roots and leaves increased when the concentration of nutrients in the medium was reduced, because of the consumption of the culture or by reducing the concentration of salt in the medium S. / A família orquidácea possui cerca de 30.000 espécies espalhadas por quase todo o globo terrestre. Dentre as orquídeas, o grupo das catléias tem grande importância no mercado mundial de flores. Uma das principais formas de produção dessas plantas é o semeio assimbiótico in vitro. Muitos têm sido os meios de cultura utilizados para o semeio e crescimento de orquídeas; no entanto, esses meios parecem não suprir totalmente as exigências nutricionais das plantas. Há, portanto, grande interesse em se desenvolverem novos meios de cultura com composição nutricional que supra adequadamente, durante o período de cultivo, a demanda da cultura, promovendo produção de tecidos e resposta morfogênica deseja. O que constituiu o objetivo deste trabalho. Para ajustar as concentrações dos nutrientes do meio de cultura adequado para o crescimento de plântulas de catléia foram considerados os teores de referência em seus tecidos, a produção de matéria seca, o volume de meio de cultura por frasco e as taxas de recuperação dos nutrientes por essa cultura. Este meio foi denominado de meio Suprimento (S). Para a comparação desse meio de cultura com outros, protocormos de Cattleya walkeriana foram cultivados, durante 51, 94, 139 e 190 d, nos meios MS, B5, B&G (3 g L-1 do fertilizante B&G Orchidées®), Peters (3 g L-1 do fertilizante Peters® 10-30-20) e S, sendo testadas diferentes concentrações dos sais deste último (0,55; 0,73; 1,00 e 1,45 vez a concentração dos sais). O meio S, proposto neste trabalho, ofereceu a melhor condição de suprimento nutricional para a produção de plântulas de Cattleya walkeriana quando comparado com os demais meios. A concentração que proporcionou a máxima produção de plântulas completas foi de 1,125 vez a concentração original de sais do meio S. Os meios contendo maiores concentrações de N e menores de P levaram ao aumento na relação entre os teores de N e P (TN/TP) nos tecidos da cultura, a qual apresentou elevada correlação positiva com a relação entre a produção de matéria seca de calo e total. Alta relação TN/TP induziu a redução na produção de raízes. A relação entre a produção de raízes e folhas aumentou quando a concentração dos nutrientes no meio foi reduzida, seja pelo consumo da cultura ou pela redução na concentração dos sais no meio S.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005Bitstream added on 2014-06-13T19:38:32Z : No. of bitstreams: 1 wolf_a_dr_botfmvz.pdf: 571392 bytes, checksum: e18af27c7a60706bb1e4ac693ababc79 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / As biotecnologias mais avançadas utilizam a produção in vitro (PIV) de embriões como suporte, a qual é dividida em três etapas igualmente importantes: maturação (MIV), fecundação (FIV) e cultivo in vitro (CIV). O objetivo deste trabalho foi avaliar a MIV de oócitos bovinos na presença de estimuladores da síntese de glutationa (GSH) e sua influência no número e na qualidade dos embriões CIV em dois sistemas de cultivo. O meio TCM-199 adicionado de bicarbonato de sódio (26mM), piruvato (0,25mM), sulfato de amicacina (75mg/mL), FSH (0,5mg/mL), hCG (100UI/mL) e estradiol 17b (1mg/ml) foi utilizado como meio base (TCM-199b) para os seis meios de maturação avaliados (Experimento I): controle do laboratório (S) (TCM-199b+10% SFB), controle BSA (B) (TCM-199b+0,5% BSA) e aditivos, cisteína (BC) (meio B+825mM de L-cisteína), cisteína-cisteamina (BCC) (meio BC+100mM de cisteamina), cisteína-cisteamina- mistura de insulina, transferrina e selênio (BCCI) (meio BCC+ITS 8:8:8) e cisteína-ITS (BCI) (meio BC+ITS). Para se verificar a maturação nuclear, pelo estádio da meiose, e a citoplasmática, pelos parâmetros da migração dos grânulos corticais (GCs) para a periferia da membrana citoplasmática (n=1084) e da concentração intracelular de GSH ([GSHi]) (n=1020) foram utilizados oócitos (n=2104) de abatedouro MIV por 24h em estufa úmida a 38,5oC e 5% de CO2 em ar. Após esta avaliação, oócitos (n=3403) foram maturados no meio S, BC ou BCC, FIV em meio TALP-FIV e CIV, por sete dias, em dois sistemas (SOFaa+2,5% de SFB+0,5% de BSA e atmosfera com 5% de CO2 em ar, aproximadamente 20% de O2, ou SOFaa+0,5% de BSA e atmosfera com 5% de CO2 e 5% de O2) para a avaliação das taxas de clivagem e produção de blastocisto (Bl) e, da qualidade proporcional do número de células da massa celular interna e do trofoblasto (MCI:TF), pela coloração diferencial, e do número de... . / Advanced biotechnology uses in vitro production (IVP) embryos as support, that is performed in three stages of similar importance: in vitro maturation (IVM), fertilization (IVF) and culture (IVC). The main goal of this experiment was to assess the IVM of bovine oocytes in presence of glutathione (GSH) synthesis stimulates and its influence on quantify and quality of IVC embryos in two culture systems. TCM-199 medium plus sodium bicarbonate (26mM), piruvate (0.25mM), amicacine sulphate (75mg/mL), FSH (0.5mg/mL), hCG (100UI/mL) and estradiol 17b (1mg/ml) was used as basis medium (TCM-199b) to evaluate six maturation media (Experiment I): laboratory control (S) (TCM-199b+10% SFB), BSA control (B) (TCM-199b+0.5% BSA) and supplementation with cysteine (BC) (B medium+825mM of Lcysteine), cysteine-cysteamine (BCC) (BC medium+100mM of cysteamine), cysteinecysteamine- insuline, transferrin and selenium mix (BCCI) (BCC medium+ITS 8:8:8) and cysteine-ITS (BCI) (BC medium+ITS). Bovine oocytes (n=2104) obtained from slaughterhouse ovaries were used to verify nuclear maturation, by meiosis stage, and cytoplasmatic maturation, by migration of cortical granules (CG) to cytoplasmatic membrane periphery (n=1084) and by GSH intracellular concentration ([GSHi]) (n=1020), the IVM was during 24h in a humid incubator at 38.5°C and under 5% CO2 atmosphere. Next, oocytes (n=3404) were maturated in S, BC or BCC medium, IVF was in TALP-IVF medium and IVC was in two different systems (SOFaa+2.5% SFB+0.5% BSA and under 5% CO2 atmosphere, and approximate 20% O2, or SOFaa+0.5% BSA and under 5% CO2 and 5% O2 atmosphere) for a seven day period to evaluate cleavage and blastocyst (Bl) rates, inner cell mass and trophoblast ratio quality (ICM:TE), by differential staining, and apoptotic cell quantify, by TUNEL technique... (Complete abstract, click electronic address below).

A melatonina é um antioxidante muito eficaz e protege as células contra o estresse oxidativo causado pelas espécies reativas, e indiretamente, modula a expressão de genes associados ao ciclo celular, metabolismo oxidativo e apoptose celular. Deste modo, a suplementação da melatonina ao meio de maturação in vitro, a torna uma alternativa para promover melhorias na viabilidade das células germinativas e embrionárias. O estudo 1 avaliou o efeito da adição de melatonina ao meio de maturação por meio da maturação nuclear (progressão meiótica) e citoplasmática (migração de grânulos corticais) e dos níveis de ROS em oócitos suínos maturados in vitro. A suplementação do meio de maturação com melatonina estimulou a progressão da meiose, a migração de grânulos corticais e reduziu os níveis intracelulares de ROS nos oócitos. O estudo 2 avaliou o efeito da melatonina na expressão de genes antioxidantes (Catalase, SOD1, SOD2 e GPX) envolvidos na proteção celular de oócitos e células do cumulus. A adição da melatonina ao meio de maturação influenciou positivamente a expressão dos genes antioxidantes nos oócitos e células do cumulus. O estudo 3 avaliou o efeito da melatonina nos processos biológicos por meio do perfil de trascriptomas, via RNA-Seq, em células do cumulus oriundas de oócitos suínos maturados in vitro. A partir da análise de expressão diferencial foi possível identificar que a adição da melatonina ao meio de maturação influenciou 80 genes associados a nove processos biológicos (ciclo celular; proteólise; organização de citoesqueleto; via energética; adesão e transporte celular; via de sinalização; fator de transcrição; metabolismo oxidativo e apoptose; e componente celular). A suplementação do meio de maturação com melatonina potencialmente influencia a viabilidade e o funcionamento celular, uma vez que modulou a expressão de genes associados à processos fisiológicos essenciais, tais como: divisão celular, metabolismo energético e oxidativo, vias de sinalização e apoptose. O estudo 4, avaliou o efeito da melatonina sobre os genes associados à viabilidade oocitária e o subsequente desenvolvimento embrionário por meio do perfil de trascriptomas, via RNA-Seq, de células do cumulus oriundas de oócitos suínos. A adição da melatonina ao meio de maturação influenciou 59 genes associados a nove funções biológicas (expansão do cumulus, comunicação em COCs, maturação nuclear, maturação citoplasmática, reparo e integridade do DNA, viabilidade oocitária, esteroidogênese, fertilização e embriogênese). Em conclusão, a suplementação do meio de maturação com melatonina influencia positivamente a maturação oócitária, reduz os níveis intracelulares de ROS, aumenta a expressão de genes antioxidantes, em adição, interfere no transcriptoma de um número expressivo de genes associados à aquisição da competência oócitária, da viabilidade embrionária e desenvolvimento subsequente. / Melatonin is a very effective antioxidant and protects cells against oxidative stress caused by reactive species, and indirectly modulates expression of genes associated with cell cycle, oxidative metabolism, and apoptosis. Thus, melatonin supplementation to in vitro maturation media becomes an alternative to improve the viability of germ and embryonic cells. The first study assessed the effects of adding melatonin to the maturation medium on nuclear (meiotic progression) and cytoplasmic (cortical granules migration) maturation and ROS levels in in vitro matured porcine cumulus-oocyte complexes (COCs). Melatonin supplementation stimulated meiosis progression and cortical granules migration, and reduced intracellular ROS levels in oocytes. The second study evaluated the effects of melatonin on the expression of antioxidant genes (Catalase, SOD1, SOD2, and GPX) involved in cellular protection in oocytes and cumulus cells. The addition of melatonin to the maturation medium positivity influence the expression of antioxidant genes in oocytes and cumulus cells. The third study evaluated the effect of melatonin on genes associated with biological processes through transcriptomic profile via RNA-Seq in cumulus cells derived from porcine COCs in vitro matured. Melatonin addition to maturation medium differentially affected expression of 80 genes associated with nine biological processes (cell cycle, proteolysis, cytoskeletal organization, energy pathaway, cell adhesion and transport, signalling pathway, transcription factor, oxidative metabolism and apoptosis, and cell components). The fourth study assessed the effect of melatonin on genes associated with oocyte viability and subsequent embryo development through transcriptomic profile via RNA-Seq in cumulus cells derived from porcine COCs. Melatonin in the maturation medium affected 59 genes associated with nine biological functions related with oocyte viability and embryo development (cumulus expansion, communication between cumulus cells and oocytes, nuclear maturation, cytoplasmic maturation, DNA repair and integrity, oocyte viability, steroidogenesis, fertilization and embryogenesis). In conclusion, supplementation of melatonin to maturation environment influences oocyte nuclear and cytoplasmic maturation, reduces intracellular ROS levels, positivity influence the expression of antioxidant and also interferes in the transcriptome of a significant number of genes associated with oocyte competence acquisition, embryo viability and subsequent development.