O objetivo deste estudo foi de tentar isolar e cultivar células da polpa de dentes decíduos humanos hígidos com diferentes graus de rizólise e avaliá-las após a expansão in vitro para parâmetros apresentados por células-tronco. Para tanto, o tecido pulpar foi obtido a partir de 30 dentes de crianças de 6 a 12 anos. A exodontia dos dentes foi indicada pelo cirurgião-dentista responsável pelo tratamento da criança. Os responsáveis pelos pacientes assinaram um termo de doação de material biológico aprovado pelo comitê de ética da UFRGS. Do total de dentes, 21 estavam em processo avançado de rizólise (grupo I), sendo que 17 possuíam raiz totalmente reabsorvida e 4 apresentavam cerca de de raiz residual. Os 9 dentes restantes não apresentavam reabsorção visível (grupo II). Todos os dentes extraídos foram imersos em meio de cultura para o transporte ao laboratório. Na capela de fluxo laminar, o tecido pulpar foi removido e incubado com colagenase tipo I e submetido a dissociação mecânica. A suspensão obtida foi semeada em placa de 12 poços e o meio de cultura trocado após 24 horas e após a cada 4 dias até a confluência de 90% ser atingida, quando eram realizadas as passagens. Na quinta e décima passagens, as células foram avaliadas pela citometria de fluxo quanto a seu fenótipo para CD29, CD34, CD44, CD45, CD90, CD117, CD133, CD146, CD184, STRO-1 e HLA-DR e para determinar a presença/ausência da expressão gênica de OCT4, por meio de RT-PCR. Nas mesmas passagens, as células foram submetidas a avaliação do seu crescimento in vitro e foram induzidas à diferenciação adipogênica, osteogênica e condrogênica. O isolamento das células foi considerado com sucesso em 25 amostras nas quais células aderidas foram verificadas após 24h. Apenas 17 destas atingiram confluência de 90%. Não foi possível estabelecer cultura do grupo II (n=9). O estabelecimento das culturas e a capacidade de proliferação foram independentes da quantidade de tecido pulpar remanescente coletado. As células nas quinta e décima passagens foram positivas para CD29, CD44 e CD90 (>95%) e para a expressão gênica de OCT-4. Positividade moderada foi vista para CD117 e CD133 e expressão inferior a 3% para CD34, CD45, HLA-DR, CD184 e STRO-1 em todas as análises. Foi pequena também, a marcação de CD146. O CD146 está relacionado com as células-tronco localizadas nos pericitos, sendo descrito como possível nicho das células-tronco pulpares. Todas as culturas foram capazes de diferenciação nas 3 linhagens celulares citadas. Portanto, as células isoladas eram células-tronco, pois foram aderentes ao plástico, positivas para marcadores característicos de células-tronco mesenquimais e pluripotentes. Considerando os baixos níveis de expressão de CD146, nós podemos sugerir que o nicho perivascular não é o único provedor das células-tronco pulpares. A facilidade de obtenção das células parece estar ligada ao processo de rizólise, visto que as células do tecido pulpar do grupo I apresentaram-se capazes de proliferação in vitro, enquanto que no grupo II esta não foi suficiente para permitir o estabelecimento das culturas. / The aim of this study was to isolate and grow cells from the pulp of human sound deciduous teeth with different levels of resorption, and evaluate stem cell parameters after growing them in vitro. Pulp tissue was removed from 30 different patients, aged from 6 to 12. A free informed term of consent was signed by the patient’s next of kin, approved by UFRGS’s Ethical Committee. From all the teeth, 21 were in advanced levels of resorption (group I): 17 had completely reabsorbed roots and 4 had ⅓ of residual roots. The 9 teeth left did not show any visible re-absorption (group II). The teeth were immersed in culture medium to be transported to the lab. In aseptic conditions, pulp tissue was removed, incubated with type I collagenase and mechanically dissociated. The suspension was seeded onto 12 well plates and the medium was changed every 4 days until the culture reached 90% confluence, when a passage was performed. The phenotype of the cells was analyzed on fifth and tenth passages, by flow cytometry for the following markers: CD29, CD34, CD44, CD45, CD90, CD117, CD133, CD146, CD184, STRO-1 and HLA-DR; and RT-PCR for OCT-4. On the same passages, cells were differentiated into adipocytes, osteoblasts and chondrocytes. Cell isolation was successful in 25 samples, where adherent cells were observed after 24h. Only 17 of these samples reached 90% confluence. It was not possible to establish cell culture from group II teeth (n=9). Cell growth and ability to proliferate in vitro were not dependent on the amount of pulp tissue that was collected. Cells on both fifth and tenth passages were positive for CD29, CD44 and CD90 (>95%) and also for the expression of OCT-4. Moderate labelling was observed for CD117 and CD133, while an expression lower than 3% for CD34, CD45, HLA-DR, CD 184 and STRO-1 was detected. Low amounts of CD146 were found in all analysis. CD146 is related to pericytes stem cells and therefore can be pulp stem cells niche. All cultures were able differentiate into all 3 cell types. According to these findings, the isolated pulp cells can be considered stem cells: they were adherent to plastic, positive for stem cell related markers and pluripotent. Considering the cells expressed low levels of CD146, we can infer that the perivascular niche isn’t the only source of pulpar stem cells. The easiness to obtain cells seems to be related to the root resorption process, because the cells from group I were able to proliferate in vitro, while group II cells were not.

Uma alta prevalência de traumatismo dentário (TD) tem sido relatado nas últimas décadas em um panorama global. Os estudos apontam diferentes fatores associados ao TD em dentes decíduos, entretanto as varíaveis psicológicas maternas e seu papel no contexto do TD de crianças em idade pré-escolar devem ser melhor elucidadas. Objetivo: O objetivo desta dissertação foi descrever a prevalência e identificar fatores associados ao TD de pré-escolares de uma área adscrita no município de Porto Alegre, RS. Métodos: Estudo transversal analítico. Participaram deste estudo 163 crianças em idade pré-escolar, moradoras de áreas adstritas de unidades básicas de saúde de um hospital público de referência no município de Porto Alegre, RS. A amostragem foi aleatória por conglomerado, mantendo a proporção de nascidos vivos em 2008 em cada unidade. A coleta de dados foi domiciliar e ocorreu entre dezembro de 2011 a fevereiro de 2013. Três examinadoras previamente treinadas e calibradas (kappa ≥ 0,8) realizaram exames clínicos em todas as crianças da amostra para coletar dados sobre TD e maloclusão.Um questionário foi aplicado junto às mães, a fim de coletar dados socioeconômicos bem como questões relativas a hábitos bucais deletérios e à etiologia e local de ocorrência do TD. O índice utilizado para TD foi o Children’s Dental Health Survey criteria. Os sintomas de ansiedade e depressão materna foram avaliados através dos inventários Beck de ansiedade e inventário Beck de depressão; o Parental Bonding Index foi utilizado para aferir vínculo parental. A associação de TD e seus possíveis indicadores de risco foram avaliados através de regressão logística multinominal utilizando o software SPSS 16.0. A pesquisa foi aprovada pelo Comitê de Ética do Grupo Hospitalar Conceição. Resultados: Uma alta prevalência de TD foi encontrada na população em estudo (49,8%), sendo 28,4% trauma somente em esmalte. Não foi encontrada associação de TD a nenhuma variável psicológica materna. Entretanto, nível educacional e número de filhos, bem como número de moradores na residência, idade e atividade laboral materna nos primeiros dois anos de vida da criança estiveram associados ao TD de dentes decíduos na amostra selecionada. Características clínicas das crianças como overjet e mordida cruzada também mostraram associação com TD. Conclusões: O presente estudo aponta que o traumatismo dentário em dentes decíduos é um agravo bastante prevalente, tendo associação com características oclusais e fatores socioeconômicos maternos. / An increased prevalence of traumatic dental injury (TDI) has been reported in the last few decades in worldwide. Studies indicate different factors associated with TDI in primary teeth, however maternal psychological variables and their role in the context of TDI children in preschool children should be better elucidated. Objective: The aim of this study was to identify associated factors with dental trauma in preschool children in the city of Porto Alegre, RS, Brazil. Methods: Cross sectional study. The study included 163 preschool children living in areas attached to basic health units in of a public referral hospital in Porto Alegre, RS, Brazil. The sampling was randomized, keeping the proportion of live births in 2008 in each unit. Data collection was done from December 2011 to February 2013 in the residence of the sampled households. Three previously trained and calibrated examiners (kappa ≥ 0.8) realized clinical examinations on all children in the sample to collect data on TDI and malocclusion. The mothers answered a questionnaire to collect sociodemographic data, and questions about oral habits, etiology and place of occurrence TDI. The index TDI was recorded according to the Children’s Dental Health Survey criteria. Symptoms of maternal anxiety and depression were assessed using the Beck Anxiety Inventory and Beck Depression Inventory; the Parental Bonding Index was used to evaluate parental bonding. The association of dental injuries and their possible risk factors was estimated using multinomial logistic regression using the SPSS 16.0 software. The study was approved by the ethics committee of the Hospital Group Conceição. Results: A high prevalence of dental trauma was found in the study population (49.8%), with 28.4% at the enamel level. There was no association of dental trauma to any maternal psychological variable. However, educational level and number of siblings as well as number of residents living in the same house, age and maternal work activity during the first two years of life of the children was associated with dental trauma in deciduous teeth in the selected sample. Clinical characteristics of children as overjet and crossbite also were associated to the presence of trauma. Conclusions: This study indicates that dental trauma in primary teeth is a fairly prevalent grievance, having association with occlusal characteristics and maternal socioeconomic factors.

As perdas ósseas representam um desafio à cirurgia reparadora, onde a utilização de diferentes fontes de enxertos ósseos com limitações físicas, químicas e biológicas é frequente. Atualmente, a bioengenharia alia os conhecimentos de diferentes áreas para o estudo de novas formas de produção de tecidos, inclusive para uso em cirurgias reparadoras. O objetivo deste estudo foi associar a nanotecnologia e as células-tronco, para estudar a neoformação óssea na região de defeitos ósseos criados em calota craniana de ratos. Dois estudos foram conduzidos. No primeiro, confeccionaram-se matrizes de nanofibras (scaffolds) a partir do ácido poli (lático-co-glicólico) (PLGA) pela técnica de electrospinning, as quais apresentaram propriedades morfológicas adequadas para seu emprego no estudo. Após, cinco amostras de Stem Cell from Deciduos Tooth (SCDT) de humanos, em processo de rizólise, foram obtidas e cultivadas até atingirem entre 5ª e 7ª passagem, momento no qual foram empregadas no estudo. As SCDT foram semeadas em placas de cultura (grupo controle) e nos scaffolds (grupo teste) para os ensaios de adesão, viabilidade e proliferação celular. Observou-se que a capacidade das SCDT em realizar adesão no grupo teste foi semelhante à sua capacidade de adesão no grupo controle, sem diferença estatística entre os grupos. Verificou-se que as células mantiveram-se viáveis durante todos os dias do experimento (21 dias) nos grupos teste e controle, não apresentando diferença estatística entre os grupos. Em ambos os grupos ocorreu o aumento gradativo da viabilidade celular a partir do inicio do experimento até o 14º dia de cultura, seguido pela sua diminuição quando analisada no 21º dia. O segundo trabalho objetivou avaliar a capacidade da associação scaffolds/SCDT em promover neoformação óssea em ratos. Para isso utilizou-se 15 ratos Wistar, nos quais foram confeccionados defeitos críticos de 8,0 mm de diâmetro nas calotas cranianas. Os animais foram divididos em três grupos experimentais com 5 animais cada: grupo 1 – implante no defeito ósseo de scaffolds; grupo 2 – implante no defeito ósseo de scaffolds semeados com SCDT; grupo 3 – implante no defeito ósseo de scaffolds semeados com SCDT que foram mantidas durante 13 dias em meio de diferenciação osteogênica prévio a sua implantação. Decorrido 60 dias pós operatório, foi realizada a análise 10 histométrica, a qual avaliou a quantidade de tecido ósseo formado no interior do defeito produzido Observou-se que a associação scaffold/SCDT mantida em meio osteogênico previamente à implantação apresentou uma maior neoformação óssea em relação aos demais grupos, sendo esta diferença estatisticamente significante. Em vista dos resultados obtidos, conclui-se que, obedecidos os parâmetros utilizados, os scaffolds de PLGA apresentam resultados favoráveis em relação à interação com as SCDT. Ainda, a utilização de meio de diferenciação osteogênico associado ao scafolld/SCDT, prévio a implantação, mostrou que essa associação possui a capacidade de promover neoformação óssea, sendo a sua utilização adequada para o uso na bioengenharia. / Bone loss is a challenge to reconstructive surgery, where the use of different sources of bone grafts with physical, chemical and biological limitations is common. Currently, bioengineering combines knowledge from different fields to study new forms of tissue production, including for use in reconstructive surgery. The aim of this study was to associate nanotechnology and stem cells in relation to the study of bone formation in the area of bone defects created in rat calvaria. Two studies were conducted. Firstly, nanofiber matrices (scaffolds) were made from acid poly (lactic-co-glycolic acid) (PLGA) by the electrospinning technique, which showed morphological properties suitable for use in the study. Following this, five samples from Deciduous Tooth Stem Cells (SCDT) from human, in the process of rhizolysis, were obtained and grown until they reached between the 5th and 7th passage, at which point they were used in the study. The SCDT were seeded onto culture plates (control group) and scaffolds (test group) for adhesion assays, cell viability and proliferation. It was observed that the ability of SCDT to adhere in the test group was similar to their ability to adhere in the control group. There was no statistical difference between the groups. It was found that the cells remained viable for every day of the experiment (21 days) in the test and control groups. There was no statistical difference between the groups. In both groups there was a gradual increase in cell viability from the start of the experiment until the 14th day of culture, followed by their decrease when analyzed on day 21. The second study evaluated the ability of the association scaffolds / SCDT to promote new bone formation in rats. For this, 15 Wistar rats were used, in which were induced critical defects of 8.0 mm diameter in the skulls. The animals were divided into three groups of five: group 1 - bone defect of the implant scaffolds, group 2 - implant in the bone defect of scaffolds seeded with SCDT, group 3 - implant in the bone defect of scaffolds that were seeded with SCDT and kept for 13 days in osteogenic differentiation medium prior to implantation. After 60 days postoperatively, histometric analysis was performed, which assessed the amount of bone formed within the imposed defect. It was observed that the scaffold association/SCDT maintained in osteogenic medium prior to implantation showed greater bone formation than the other groups. This 12 difference was statistically significant. In the light of these results, it can be concluded that, in compliance with the parameters used, the PLGA scaffolds have favorable results in relation to the interaction with the SCDT. Furthermore the use of osteogenic differentiation associated with scafolld / SCDT, prior to implantation showed that this association has the ability to promote bone formation and its use is therefore appropriate for use in bioengineering.

As células-tronco mesenquimais (CTMs) tornaram-se um grande interesse para a ciência por serem capazes de estimular a regeneração tecidual, apresentarem habilidade de se expandir e diferenciar em cultura e, consequentemente, apresentarem diversas possibilidades terapêuticas, bem como para a engenharia de tecidos. Muitos dos tecidos dentários também apresentam nichos de CTMs. O fácil acesso à polpa dos dentes decíduos, em virtude da esfoliação dental, a torna uma fonte muito atraente para a terapêutica e a engenharia de tecidos. Todos os avanços advindos das terapias baseadas em células-tronco tornam a preservação das fontes celulares, por longos períodos de tempo, um assunto de suma importância. Para que isso possa ocorrer, métodos de armazenamento devem ser adotados, tanto para as culturas celulares já estabelecidas, quanto para os tecidos inteiros. Uma das formas mais comuns de manutenção de culturas e de tecidos é a criopreservação em nitrogênio líquido. Contudo, existem poucas evidências no sentido de estabelecer um protocolo eficaz para o congelamento do dente decíduo intacto. Dessa forma, esse trabalho objetivou isolar, cultivar e caracterizar, para parâmetros apresentados para CTMs, as células pulpares após a criopreservação de dentes decíduos intactos por 7 dias. Para isso, vinte e seis dentes decíduos foram alocados em 2 grupos experimentais, sendo: grupo 1, células pulpares de dentes decíduos criopreservados intactos (grupo Crio) e grupo 2, células pulpares de dentes decíduos isoladas imediatamente após a exodontia (grupo fresco - controle). As células pulpares de ambos os grupos foram isoladas, cultivadas, analisadas por citometria de fluxo (CD14, CD29, CD34, CD45, CD73, CD90 e HLA-DR), submetidas aos protocolos de diferenciação osteogênica, adipogênica e condrogênica, e aos ensaios de proliferação celular (WST-8). A morfologia celular de ambos os grupos foi avaliada por microscopia confocal. Os resultados demonstraram uma taxa de cultivo de 30% para o grupo Crio e 61% para o grupo Fresco. Não houve diferença estatística entre os grupos para os marcadores de superfície analisados. As células de ambos os grupos foram capazes de se diferenciar em células das 3 linhagens testadas. Para o ensaio de proliferação, não houve diferença estatística entre os grupos ao longo dos tempos testados (p>0,05), embora a média de dias entre o isolamento e a quinta passagem foi menor para o grupo controle (p=0,035). As células do grupo Crio mostraram morfologia alterada. Assim, conclui-se ser possível obter células-tronco da polpa de dentes decíduos congelados pelo protocolo sugerido, sem alterações imunofenotípicas. No entanto, esse protocolo demonstrou baixas taxas de sucesso de isolamento, menor capacidade de diferenciação e de proliferação, além de alteração da morfologia celular. / Mesenchymal stem cells (MSC) became of great value for science for being capable of stimulating tissue regeneration and showing ability to proliferate and differentiate when cultured properly. Dental tissues also present MSC niches as well. Mesenchymal stem cells from the pulp of deciduous teeth are considered an easy access source during a specific period of time in the patients life, when teeth are undergoing exfoliation; therefore, very attractive for cell based therapeutics and tissue engineering. All advances seen in cell based therapies for the last years depend on cell or tissue preservation for long periods of time. Thus, storage methods must be adopted for cultures of cells and whole tissues. The most common technique to preserve cell cultures and tissues is cryopreservation with liquid nitrogen. However, fragile evidence concerns the cryopreservation of intact deciduous teeth. This research aimed to isolate, cultivate and characterize the dental pulp cells of intact cryopreserved deciduous teeth and compare to the dental pulp cells of non-cryopreserved deciduous teeth. Thirteen pairs of deciduous teeth were donated from patients in orthodontic treatment and were randomly allocated in two different groups. The first group was made of cryopreserved intact deciduous teeth (Cryo group), and in second group pulp cells were isolated from fresh teeth (Fresh group). The cells of both groups were isolated, cultivated and characterized for mesenchymal stem cell parameters, and then compared for isolation and proliferation rates, surface markers expression (CD14, CD29, CD34, CD45, CD73, CD90 and HLA-DR), differentiation ability and morphology. The culture rate was 30% for the cryopreserved group and 61% for the fresh. There were no statistical differences between the groups for the surface markers tested. Cells in both groups were capable of differentiating in the 3 mesenchymal lineages. For the proliferation assay, there was no statistical difference between groups throughout the time tested although the mean time between isolation and the fifth passage was lower for the control group (p=0,035). Cells from Cryo group showed altered morphology. The present study showed that Dental Pulp Stem Cells can be obtained from cryopreserved intact deciduous teeth without changes in the immunophenotypical profile, however low success rates for isolation, differentiation ability and morphological alterations were observed.

Uma variedade de biomateriais são estudados para aplicação na engenharia de tecidos, entre os quais os scaffolds de ácido poli (láctico-co-glicólico) (PLGA), produzidos pela técnica de electrospinning. Por meio dessa técnica é possível adicionar diferentes moléculas bioativas durante o processo de produção do biomaterial, tais como a dexametasona (DEX). A DEX é caracterizada por o seu potencial anti-inflamatório e imunossupressor e pela sua capacidade de promover a diferenciação de células-tronco mesenquimais (MSCs) em linhagem osteogênica. Este estudo teve o objetivo de produzir e caracterizar scaffolds de PLGA com diferentes quantidades de DEX (100% puro) e verificar suas propriedades mecânicas, bem como a sua influência sobre MSCs de polpa de dentes decíduos. Sete grupos de scaffolds foram produzidos nas seguintes proporções: 1 parte de DEX para 20 partes de PLGA, identificado como 1:20. Seguindo este, 1:10, 1: 4, 1: 2, 3: 4 e 1: 1, partes de DEX:PLGA foram usadas. Assim, os seguintes grupos foram estudados: A: scaffolds de PLGA sem DEX (grupo controle); B: 1:20; C: 1:10; D: 1:4; E: 1:2; F: 3:4 e G: 1:1. A presença de DEX nos scaffolds e a sua taxa de libertação foi avaliada no decorrer de 21 dias por análise de luz UV (λ = 254 nm). Todos os scaffolds foram avaliados quanto às suas características físico-químicas por microscopia eletrônica de varredura (MEV) e por análise mecânica dinâmica (DMA). A interação dos scaffolds com as MSCs foi avaliada durante 21 dias por meio do ensaio de WST-8 e lactato desidrogenase (LDH). O potencial osteogênico dos scaffolds com DEX foi avaliada pela expressão de fosfatase alcalina, coloração com Alizarin Red e análise por RT-PCR. A análise por luz UV mostrou que após 21 dias de cultura, todos os grupos liberaram entre 73 a 79 % da DEX total presente nos scaffolds presente no início do experimento. As fotomicrografias de MEV mostraram fibras distribuídas de maneira aleatória em todos os grupos, com um grande número de poros interconectados. A análise de DMA mostrou que com o aumento da incorporação de DEX, o diâmetro das fibras e a espessura dos scaffolds também aumentou, enquanto o módulo de elasticidade não se alterou. O ensaio de WST-8 e LDH mostraram que ao longo de 21 dias a viabilidade celular aumentou nos grupos A, B, C e D, enquanto que diminuiu nos grupos E, F e G. Com base nos ensaios de avaliação osteogénica, pode-se observar que scaffolds com DEX não apresentaram tal potencial. A partir dos dados do presente estudo, pode ser concluído que os scaffolds com DEX surgem como uma ferramenta promissora para aplicação em engenharia de tecidos, no entanto, esta associação não apresentou potencial de promover a diferenciação osteogénica de MSCs. / A variety of biomaterials are undergoing studies for application in tissue engineering, among which are poly (lactic-co-glycolic) acid (PLGA) scaffolds, produced by the electrospinning technique. Through this technique, it is possible to add different bioactive molecules during the biomaterial production process, such as dexamethasone (DEX). DEX is characterized by its anti-inflammatory and immunosuppressive potential and by its ability to promote the differentiation of mesenchymal stem cells (MSCs) to osteogenic lineages. This study has aimed to produce and characterize PLGA scaffolds with different quantities of DEX (100% pure) and verifies the mechanical properties of the scaffolds, as well as the role of the scaffolds on the outcome of the MSCs from deciduous teeth. Seven groups of scaffolds were produced in the following proportions: 1 part DEX to 20 parts PLGA, identified as 1:20. Following this, 1:10, 1:4, 1:2, 3:4 and 1:1, DEX:PLGA parts were used. The following groups were studied: A: PLGA scaffold without DEX (control group); B: 1:20; C: 1:10; D: 1:4; E: 1:2; F: 3:4 and G: 1:1. The DEX presence in the scaffolds and its release rate from the scaffolds over 21 days were determined by UV light analysis (λ = 254 nm). All the scaffolds were evaluated for their physicochemical characteristics by scanning electron microscope (SEM) and by dynamic mechanical analysis (DMA). The interaction of the scaffolds with MSCs was assessed over 21 days by WST-8 and lactate dehydrogenase (LDH) assay. The osteogenic potential of the scaffold with DEX was assessed by alkaline phosphatase assay, Alizarin red staining and RT-PCR analysis. The UV light analysis showed that after 21 days of culture all the groups released between 73 to 79% of the total DEX present in the scaffolds at the beginning of the experiment. The SEM micrographs showed fibers distributed in a random manner in all groups, with a large number of interconnected pores. DMA analysis showed that with the increase of DEX incorporation, the fiber diameter and scaffolds thickness also increased while their elastic modulus did not change. The WST-8 and LDH assay showed that, over 21 days of culture, the cell viability increased in groups A, B, C and D, while decreased in groups E, F and G. Based on the osteogenic assays, it could be observed that the scaffolds with DEX did not have the osteogenic potential. From the data of this study, it can be concluded that the scaffolds with DEX appear to be a promising tool for application in tissue engineering, however, this association did not show the potential for promote the osteogenic differentiation.

Proposição: o objetivo deste trabalho foi avaliar, após doze meses, qualitativamente o desempenho clínico e o tempo gasto na execução de 86 restaurações atraumáticas realizadas em pré-escolares de creches comunitárias do município de Porto Alegre, utilizando o cimento de ionômero de vidro de alta viscosidade (Vitro- Molar/DFL). Metodologia: foram selecionadas 42 crianças com necessidades restauradoras, inseridas em um programa educativo-preventivo. As respectivas restaurações foram avaliadas seguindo os critérios USPHS modificado e analisadas estatisticamente pelo teste não paramétrico Mann- Whitney (p<0,05). Resultados: encontrou-se 94,2% de retenção das restaurações envolvendo uma ou mais superfícies em dentes decíduos. O tempo médio despendido para execução da restauração foi de 4,47 minutos segundo análise de variância. Conclusão: concluí-se que as restaurações atraumáticas são indicadas para serem utilizadas em pré-escolares, por apresentarem um bom desempenho clínico e agilidade no atendimento. / Objective: the aim of the present study was to qualitatively assess the clinical performance, after 12 months, of 86 atraumatic restorations bonded with highviscosity glass ionomer cement (Vitro-Molar/DFL), in preschoolers from Porto Alegre-based day care centers, in southern Brazil, and also to assess the length of the treatment. Methods: a total of 42 children who required restorative treatment were selected from a preventive educational program. The restorations were assessed using the modified USPHS criteria and statistically analyzed by the nonparametric Mann-Whitney test (p<0.05). Results: the restorations on one or more surfaces of deciduous teeth had a retention rate of 94.2%. According to the analysis of variance, the length of restorative treatment averaged 4.47 minutes. Conclusion: atraumatic restorations are recommended in preschoolers, since they have a good clinical performance and allow prompt treatment.

Proposição: o objetivo deste trabalho foi avaliar, após doze meses, qualitativamente o desempenho clínico e o tempo gasto na execução de 86 restaurações atraumáticas realizadas em pré-escolares de creches comunitárias do município de Porto Alegre, utilizando o cimento de ionômero de vidro de alta viscosidade (Vitro- Molar/DFL). Metodologia: foram selecionadas 42 crianças com necessidades restauradoras, inseridas em um programa educativo-preventivo. As respectivas restaurações foram avaliadas seguindo os critérios USPHS modificado e analisadas estatisticamente pelo teste não paramétrico Mann- Whitney (p<0,05). Resultados: encontrou-se 94,2% de retenção das restaurações envolvendo uma ou mais superfícies em dentes decíduos. O tempo médio despendido para execução da restauração foi de 4,47 minutos segundo análise de variância. Conclusão: concluí-se que as restaurações atraumáticas são indicadas para serem utilizadas em pré-escolares, por apresentarem um bom desempenho clínico e agilidade no atendimento. / Objective: the aim of the present study was to qualitatively assess the clinical performance, after 12 months, of 86 atraumatic restorations bonded with highviscosity glass ionomer cement (Vitro-Molar/DFL), in preschoolers from Porto Alegre-based day care centers, in southern Brazil, and also to assess the length of the treatment. Methods: a total of 42 children who required restorative treatment were selected from a preventive educational program. The restorations were assessed using the modified USPHS criteria and statistically analyzed by the nonparametric Mann-Whitney test (p<0.05). Results: the restorations on one or more surfaces of deciduous teeth had a retention rate of 94.2%. According to the analysis of variance, the length of restorative treatment averaged 4.47 minutes. Conclusion: atraumatic restorations are recommended in preschoolers, since they have a good clinical performance and allow prompt treatment.

O objetivo deste estudo foi de tentar isolar e cultivar células da polpa de dentes decíduos humanos hígidos com diferentes graus de rizólise e avaliá-las após a expansão in vitro para parâmetros apresentados por células-tronco. Para tanto, o tecido pulpar foi obtido a partir de 30 dentes de crianças de 6 a 12 anos. A exodontia dos dentes foi indicada pelo cirurgião-dentista responsável pelo tratamento da criança. Os responsáveis pelos pacientes assinaram um termo de doação de material biológico aprovado pelo comitê de ética da UFRGS. Do total de dentes, 21 estavam em processo avançado de rizólise (grupo I), sendo que 17 possuíam raiz totalmente reabsorvida e 4 apresentavam cerca de de raiz residual. Os 9 dentes restantes não apresentavam reabsorção visível (grupo II). Todos os dentes extraídos foram imersos em meio de cultura para o transporte ao laboratório. Na capela de fluxo laminar, o tecido pulpar foi removido e incubado com colagenase tipo I e submetido a dissociação mecânica. A suspensão obtida foi semeada em placa de 12 poços e o meio de cultura trocado após 24 horas e após a cada 4 dias até a confluência de 90% ser atingida, quando eram realizadas as passagens. Na quinta e décima passagens, as células foram avaliadas pela citometria de fluxo quanto a seu fenótipo para CD29, CD34, CD44, CD45, CD90, CD117, CD133, CD146, CD184, STRO-1 e HLA-DR e para determinar a presença/ausência da expressão gênica de OCT4, por meio de RT-PCR. Nas mesmas passagens, as células foram submetidas a avaliação do seu crescimento in vitro e foram induzidas à diferenciação adipogênica, osteogênica e condrogênica. O isolamento das células foi considerado com sucesso em 25 amostras nas quais células aderidas foram verificadas após 24h. Apenas 17 destas atingiram confluência de 90%. Não foi possível estabelecer cultura do grupo II (n=9). O estabelecimento das culturas e a capacidade de proliferação foram independentes da quantidade de tecido pulpar remanescente coletado. As células nas quinta e décima passagens foram positivas para CD29, CD44 e CD90 (>95%) e para a expressão gênica de OCT-4. Positividade moderada foi vista para CD117 e CD133 e expressão inferior a 3% para CD34, CD45, HLA-DR, CD184 e STRO-1 em todas as análises. Foi pequena também, a marcação de CD146. O CD146 está relacionado com as células-tronco localizadas nos pericitos, sendo descrito como possível nicho das células-tronco pulpares. Todas as culturas foram capazes de diferenciação nas 3 linhagens celulares citadas. Portanto, as células isoladas eram células-tronco, pois foram aderentes ao plástico, positivas para marcadores característicos de células-tronco mesenquimais e pluripotentes. Considerando os baixos níveis de expressão de CD146, nós podemos sugerir que o nicho perivascular não é o único provedor das células-tronco pulpares. A facilidade de obtenção das células parece estar ligada ao processo de rizólise, visto que as células do tecido pulpar do grupo I apresentaram-se capazes de proliferação in vitro, enquanto que no grupo II esta não foi suficiente para permitir o estabelecimento das culturas. / The aim of this study was to isolate and grow cells from the pulp of human sound deciduous teeth with different levels of resorption, and evaluate stem cell parameters after growing them in vitro. Pulp tissue was removed from 30 different patients, aged from 6 to 12. A free informed term of consent was signed by the patient’s next of kin, approved by UFRGS’s Ethical Committee. From all the teeth, 21 were in advanced levels of resorption (group I): 17 had completely reabsorbed roots and 4 had ⅓ of residual roots. The 9 teeth left did not show any visible re-absorption (group II). The teeth were immersed in culture medium to be transported to the lab. In aseptic conditions, pulp tissue was removed, incubated with type I collagenase and mechanically dissociated. The suspension was seeded onto 12 well plates and the medium was changed every 4 days until the culture reached 90% confluence, when a passage was performed. The phenotype of the cells was analyzed on fifth and tenth passages, by flow cytometry for the following markers: CD29, CD34, CD44, CD45, CD90, CD117, CD133, CD146, CD184, STRO-1 and HLA-DR; and RT-PCR for OCT-4. On the same passages, cells were differentiated into adipocytes, osteoblasts and chondrocytes. Cell isolation was successful in 25 samples, where adherent cells were observed after 24h. Only 17 of these samples reached 90% confluence. It was not possible to establish cell culture from group II teeth (n=9). Cell growth and ability to proliferate in vitro were not dependent on the amount of pulp tissue that was collected. Cells on both fifth and tenth passages were positive for CD29, CD44 and CD90 (>95%) and also for the expression of OCT-4. Moderate labelling was observed for CD117 and CD133, while an expression lower than 3% for CD34, CD45, HLA-DR, CD 184 and STRO-1 was detected. Low amounts of CD146 were found in all analysis. CD146 is related to pericytes stem cells and therefore can be pulp stem cells niche. All cultures were able differentiate into all 3 cell types. According to these findings, the isolated pulp cells can be considered stem cells: they were adherent to plastic, positive for stem cell related markers and pluripotent. Considering the cells expressed low levels of CD146, we can infer that the perivascular niche isn’t the only source of pulpar stem cells. The easiness to obtain cells seems to be related to the root resorption process, because the cells from group I were able to proliferate in vitro, while group II cells were not.

Uma alta prevalência de traumatismo dentário (TD) tem sido relatado nas últimas décadas em um panorama global. Os estudos apontam diferentes fatores associados ao TD em dentes decíduos, entretanto as varíaveis psicológicas maternas e seu papel no contexto do TD de crianças em idade pré-escolar devem ser melhor elucidadas. Objetivo: O objetivo desta dissertação foi descrever a prevalência e identificar fatores associados ao TD de pré-escolares de uma área adscrita no município de Porto Alegre, RS. Métodos: Estudo transversal analítico. Participaram deste estudo 163 crianças em idade pré-escolar, moradoras de áreas adstritas de unidades básicas de saúde de um hospital público de referência no município de Porto Alegre, RS. A amostragem foi aleatória por conglomerado, mantendo a proporção de nascidos vivos em 2008 em cada unidade. A coleta de dados foi domiciliar e ocorreu entre dezembro de 2011 a fevereiro de 2013. Três examinadoras previamente treinadas e calibradas (kappa ≥ 0,8) realizaram exames clínicos em todas as crianças da amostra para coletar dados sobre TD e maloclusão.Um questionário foi aplicado junto às mães, a fim de coletar dados socioeconômicos bem como questões relativas a hábitos bucais deletérios e à etiologia e local de ocorrência do TD. O índice utilizado para TD foi o Children’s Dental Health Survey criteria. Os sintomas de ansiedade e depressão materna foram avaliados através dos inventários Beck de ansiedade e inventário Beck de depressão; o Parental Bonding Index foi utilizado para aferir vínculo parental. A associação de TD e seus possíveis indicadores de risco foram avaliados através de regressão logística multinominal utilizando o software SPSS 16.0. A pesquisa foi aprovada pelo Comitê de Ética do Grupo Hospitalar Conceição. Resultados: Uma alta prevalência de TD foi encontrada na população em estudo (49,8%), sendo 28,4% trauma somente em esmalte. Não foi encontrada associação de TD a nenhuma variável psicológica materna. Entretanto, nível educacional e número de filhos, bem como número de moradores na residência, idade e atividade laboral materna nos primeiros dois anos de vida da criança estiveram associados ao TD de dentes decíduos na amostra selecionada. Características clínicas das crianças como overjet e mordida cruzada também mostraram associação com TD. Conclusões: O presente estudo aponta que o traumatismo dentário em dentes decíduos é um agravo bastante prevalente, tendo associação com características oclusais e fatores socioeconômicos maternos. / An increased prevalence of traumatic dental injury (TDI) has been reported in the last few decades in worldwide. Studies indicate different factors associated with TDI in primary teeth, however maternal psychological variables and their role in the context of TDI children in preschool children should be better elucidated. Objective: The aim of this study was to identify associated factors with dental trauma in preschool children in the city of Porto Alegre, RS, Brazil. Methods: Cross sectional study. The study included 163 preschool children living in areas attached to basic health units in of a public referral hospital in Porto Alegre, RS, Brazil. The sampling was randomized, keeping the proportion of live births in 2008 in each unit. Data collection was done from December 2011 to February 2013 in the residence of the sampled households. Three previously trained and calibrated examiners (kappa ≥ 0.8) realized clinical examinations on all children in the sample to collect data on TDI and malocclusion. The mothers answered a questionnaire to collect sociodemographic data, and questions about oral habits, etiology and place of occurrence TDI. The index TDI was recorded according to the Children’s Dental Health Survey criteria. Symptoms of maternal anxiety and depression were assessed using the Beck Anxiety Inventory and Beck Depression Inventory; the Parental Bonding Index was used to evaluate parental bonding. The association of dental injuries and their possible risk factors was estimated using multinomial logistic regression using the SPSS 16.0 software. The study was approved by the ethics committee of the Hospital Group Conceição. Results: A high prevalence of dental trauma was found in the study population (49.8%), with 28.4% at the enamel level. There was no association of dental trauma to any maternal psychological variable. However, educational level and number of siblings as well as number of residents living in the same house, age and maternal work activity during the first two years of life of the children was associated with dental trauma in deciduous teeth in the selected sample. Clinical characteristics of children as overjet and crossbite also were associated to the presence of trauma. Conclusions: This study indicates that dental trauma in primary teeth is a fairly prevalent grievance, having association with occlusal characteristics and maternal socioeconomic factors.

Orientador: Eduardo Hebling / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-02T16:23:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Souza_AndreiaCristinaBredade_M.pdf: 2592570 bytes, checksum: 3e2aefee4ccf5baaad436d20f9d7fa81 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: A pigmentação rosada é uma alteração cromática dos dentes, que pode estar relacionada a mortes súbitas e violentas, resultante do extravasamento sanguineo a partir da polpa dentária, com penetração da hemoglobina ou seus subprodutos no interior dos túbulos dentinários. Fatores como a umidade, temperatura e a posição em que são encontrados os corpos são considerados como coadjuvantes no desenvolvimento do fenômeno. Neste trabalho foram utilizadas duas amostras com o objetivo de analisar as fases de formação desta alteração cromática, sendo uma amostra constituída de dentes decíduos naturalmente rosados e a outra de dentes decíduos cuja pigmentação rosada foi reproduzida experimentalmente. Após a indução da pigmentação rosada, através da injeção sanguínea a partir do ápice radicular, quando da observação da modificação cromática os elementos dentários foram submetidos em diferentes dias a uma análise histológica e outra espectrofotométrica. Os resultados obtidos através das duas análises permitiram-nos concluir que a hemoglobina íntegra é a responsável pela alteração de cor, os seus subprodutos não têm papel fundamental no desenvolvimento do fenômeno e que a sua degradação não acontece de forma única e é mais lenta do que previamente se pensava / Abstract: Pink pigmentation is a chromatic change of teeth that may be related to sudden and violent deaths. It is caused by blood flow out trom dental pulp, with the penetration of hemoglobin and its sub products into dentinal tubules. Factors such as temperature and the position of the bodies are considered to help the development of such situation. This research used two samples to analyze the phases of that chromatic change. One of the samples was a group of naturally pink deciduous teeth. The other group was deciduous teeth that the pink pigmentation was reproduced experimentally. After reproduction of pink pigmentation, these teeth were histological and spectrophotometric analyzed in different days. Therefore it was concluded that the hemoglobin is responsible for color change and its degradation happens slower that was earlier thought / Mestrado / Mestre em Odontologia Legal e Deontologia