A Dissertation submitted to the Faculty of Health Sciences, University of the Witwatersrand, Johannesburg, in fulfillment of the requirements for the degree Of Master of Science in Medicine, 2016. / Dental stem cells (DSCs) have been identified in teeth and their supporting tissues. They represent an exclusive source of adult stem cells, easily isolated and manipulated for tissue repair and regeneration. This research project evaluated the neurogenic potential of the dental pulp stem cells (DPSCs) and stem cells from the pulp of human exfoliated deciduous teeth (SHEDs) in a South African cohort. Sixty non-carious permanent and deciduous teeth were extracted from healthy patients aged between 18 and 30 years and 5 and 10 years, at the University of the Witwatersrand's Oral Health Clinic in Johannesburg Charlotte Maxeke Academic Hospital, South Africa. The cells, isolated from the extracted pulp tissue were cultured, counted and then phenotyped by flow cytometry analysis. The cells were further expanded in a neural induction medium and immunocytochemistry analysis for Ki-67, doublecortin (DCX) and nestin were performed. Large colonies of both DPSCs and SHEDS were harvested from the extracted pulp tissues and positively cultured. Flow cytometry analysis confirmed the presence of CD44+ and CD29+ cells as well as the known mesenchymal stem cell markers CD90 and CD105. Both DPSCs and SHEDs demonstrated successful proliferation and neural differentiation. This study confirmed that DPSCs and SHEDs are highly proliferative human adult stem cells that exhibit a neurogenic potential that may contribute in the treatment of neurological disorders. / AC2017

A regeneração óssea é um processo fisiológico que promove a neoformação de tecido ósseo saudável e funcional com características idênticas antes da lesão. Entretanto, frente a defeitos críticos, o osso é incapaz de se regenerar espontaneamente. Diante destas deficiências, a bioengenharia de tecidos ósseos (BTO) é uma opção promissora para a regeneração deste tipo de defeito. A maioria das abordagens de BTO utiliza as células-tronco mesenquimais da medula óssea (BMSC), porém, a coleta de BMSC dos pacientes é um processo bastante invasivo e doloroso. Por estas desvantagens, a busca por abordagens acessíveis e menos invasivas de novas fontes de células-tronco (CT) se tornou necessária. Neste contexto, as células-tronco de polpa de dentes decíduos (SHED) foram identificadas e sua aplicação na BTO, desde então, vem sendo amplamente estudada devido ao seu potencial osteogênico e por se tratar de uma fonte não invasiva. A obtenção de células-tronco do músculo orbicular do lábio (OOMDSC) também não causa dor adicional aos indivíduos, pois os fragmentos deste tecido são rotineiramente descartados durante as cirurgias de reconstrução do lábio. No presente trabalho investigamos o potencial de diferenciação osteoblástico in vitro e in vivo das OOMDSC e comparamos com as SHED, além disto, associamos estas células a biomateriais de HA/&beta;-TCP e investigamos a sua contribuição na neoformação óssea in vivo. O imunofenótipo de cada amostra de SHED e OOMDSC foi verificado para certificar a identidade de CT mesenquimais. Em seguida, as células em cultura foram submetidas à diferenciação osteoblástica in vitro. Em 9 e 14 dias de diferenciação as OOMDSC apresentaram menor atividade de fosfatase alcalina (p<0,0001) e menor marcação de matriz extracelular mineralizada, comparado às SHED (p<0,001), enquanto que em 21 dias estas diferenças não foram mais observadas. Quando associadas a biomateriais e implantadas em defeitos críticos calvariais bilaterais em ratos Wistar, tanto OOMDSC e SHED foram capazes de induzir neoformação óssea após 50 dias de cirurgia, conforme evidenciado pela análise morfológica e por micro-CT. Todavia, as células ósseas encontradas nos sítios da neoformação óssea não eram de origem humana. A avaliação da neoformação óssea in vivo induzida por SHED assim como a sua distribuição no enxerto foi verificada também em 07, 15 e 30 dias pós-cirúrgicos. Nestes períodos não há evidência de neoformação óssea, entretanto, as SHED estão localizadas no tecido conjuntivo que se forma e preenche o enxerto. Além disto, os dados sugerem que estas células estão relacionadas à modificações na microarquitetura do biomaterial e ainda à modulação dos números dos osteoclastos, também verificada nestas amostras. Portanto, podemos concluir que as OOMDSC são tão capazes de se diferenciar em osteoblastos quanto às SHED in vitro, porém esta diferenciação é mais lenta. Os experimentos in vivo indicam que as SHED possuem maior capacidade de indução à neoformação óssea quando comparadas às OOMDSC e que, em nosso modelo, as CT humanas não se diferenciam em osteoblastos in vivo. De qualquer forma a adição das CT ao biomaterial favorece a neoformação óssea, variações de microarquitetura e modulação dos osteoclastos. O fato de as ilhas ósseas não serem de origem humana indica que as células-tronco possam estar secretando fatores de indução à osteogênese, estimulando a neoformação óssea a partir das células do hospedeiro. / Bone regeneration is a physiological process, which promotes the growth of tissue at the site of injury, with the same characteristics of the original bone. However, when faced with critical defects the bone is unable to regenerate spontaneously. Bone tissue engineering (BTE) is a promising option for regenerating this type of defect. The majority of the approaches in BTE use Bone Marrow derived Mesenchymal Stem Cells (BMSC); however, the aspiration of bone marrow is a very invasive and painful procedure. Due to these disadvantages, the search for new, affordable and less invasive sources of stem cells (SC) has become necessary. In this context, stem cells from exfoliated deciduous teeth (SHED) have been identified and their application in BTE, since then, has been widely studied because they can be obtained non-invasively and due to their osteogenic potential. Stem cells from the orbicularis oris muscle (OOMDSC) are also obtained non-invasively and do not cause additional pain to individuals, because the fragments of this tissue are routinely discarded during lip reconstruction surgeries. In the present work we investigated, in vitro and in vivo, the osteoblastic differentiation potential of OOMDSC and compared with SHED; furthermore, we associated these cells with HA/&beta;-TCP scaffolds and investigate its contribution in the bone formation in vivo. The immunophenotype of each OOMDSC and SHED sample was verified to attest their mesenchymal stem cell identity. Then, cell cultures were submitted to osteoblastic differentiation in vitro. In 9 and 14 days of differentiation, OOMDSC exhibited lower alkaline phosphatase activity (p <0.0001) and lower mineralized extracellular matrix staining compared to SHED (p <0.001), whereas at 21 days, these differences were no longer observed. When associated with scaffolds and implanted into bilateral critical-sized calvarial defects in Wistar rats, both OOMDSC and SHED were able to induce bone formation after 50 days of surgery, as evidenced by morphological analysis and micro-CT. However, bone cells found at sites of bone formation were not of human origin. The evaluation of new bone formation in vivo induced by SHED as well as its distribution in the graft was performed at 07, 15 and 30 days after surgery. During these periods there was no evidence of new bone formation, however, SHED were located in the connective tissue that formed and filled the graft. Furthermore, our results suggest that these cells are related to changes in the microarchitecture of the scaffold and also to the modulation of the number of osteoclasts observed in these samples. In summary, our results suggest that OOMDSC are as capable to differentiate into osteoblasts as SHED in vitro, but this differentiation is slower. In vivo experiments indicate that SHED has a greater ability to induce bone formation when compared with OOMDSC, and that in our model, the human stem cells do not differentiate into osteoblasts in vivo. Nonetheless, the addition of SC to the scaffolds promotes bone formation, as well as variations in microarchitecture and modulation of osteoclasts. The fact that the bone islands are not of human origin indicates that the stem cells may be secreting osteogenesis-inducing factors, stimulating the host\'s cells to regenerate the defects.

The teeth are amongst the most resilient elements of the human skeleton and are thus often utilised in routine forensic investigation involving the identification of unknown remains. The teeth, however, also have other practical forensic applications. Teeth exposed to thermal stress have the potential to not only aid in identification but also in understanding the circumstances surrounding the fire. Previous investigations have drawn conclusions that if a fire flares up suddenly and intensively, the teeth burst and enamel is lost. If the blaze commences gently and burns slowly, then the first observable morphologic change is the colour. The teeth subsequently are difficult to handle, thus changes in teeth can indicate the history of exposure to thermal conditions. Children are twice as likely to become victims of house fire because of an inability to safely evacuate from areas of danger. The literature demonstrates, however, that research on the effects of incineration on teeth is mostly restricted to the permanent teeth. The apparent lack of knowledge on the effects of incineration on deciduous teeth thus necessitates further research in this area. This research project primarily aims at understanding the effect of extreme temperatures on deciduous teeth. It also aims to relate colour changes that occur post heating with fragility to aid in proper handling of samples in a forensic scenario and to determine the possibility of identifying incineration temperature based on tooth condition. The samples analysed composed of 90 deciduous teeth (45 molars and 45 anteriors) extracted as a part of clinical treatment were used for the study. The project involved exposing extracted deciduous teeth to temperatures ranging from 100°C to 1100°C for 30 minutes using a laboratory Gallenkamp oven. Unheated deciduous teeth were used as controls for the project. Post-incineration the teeth were then analysed under a stereomicroscope and SEM for morphological changes. A colorimetric analysis was also undertaken to evaluate the colour changes induced in the primary teeth due to the thermal stress. It was found that it was possible to identify the incineration temperature based on the tooth condition when the colour changes, stereomicroscopic findings and SEM images were utilised collectively. It was also concluded that the thermally induced changes observed in primary teeth occur at lower temperatures in comparison to the permanent teeth. It was also established that post-incineration deciduous teeth are fragile and show a tendency to fragment after minimal exposure to thermal stress as compared to the permanent teeth. Moreover enamel and dentin remained identifiable in primary teeth even after exposure to 1100°C for 30 minutes while cementum lost its structural morphology at 900°C.

Orientador: Marilza Vieira Cunha Rudge / Resumo: Introdução: O Diabetes Mellitus Gestacional (DMG) está associado a repercussões a curto e longo prazo. O legado do ambiente intrauterino diabético, adquirido durante a gestação, não pode ser ignorado e esses efeitos se estendem para além do nascimento. Estudos demonstraram que a hiperglicemia altera o processo de desenvolvimento dentário, afetando a erupção dentária e a mineralização. Objetivo O objetivo foi avaliar as consequências em longo prazo da exposição intrauterina à hiperglicemia no Desenvolvimento do Esmalte Dentário nos descendente de mães com DMG. Método: Foram avaliadas crianças filhas de mães com DMG. Foi coletado questionário do histórico médico estruturado. A informação solicitada para mãe abrangeu vários aspectos, incluindo história gestacional, história de nascimento, histórico neonatal e infantil, obtidos na forma de questionários auto relatados, registros médicos e dentários. Depois que seus pais assinaram o termo de consentimento informado, as crianças foram examinadas no Ambulatório Clínico de acordo com as diretrizes da Organização Mundial de Saúde para estudos epidemiológicos sobre Saúde bucal. Uma lanterna, um espelho bucal descartável intraoral plano, instrumentos clínicos e um retrator labial infantil em forma de C foram utilizados para o exame. O número total de dentes existentes foi identificado e diferenciado por dentes decíduos ou permanentes. O exame para o diagnóstico de DDE e tipo DDE de todas as superfícies dos dentes foi realizado de acordo... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Background and objective: Gestational Diabetes Mellitus (GDM) is associated with short and long-term repercussions. The legacy of the diabetic intrauterine environment, acquired during gestation, cannot be ignored and these effects extend beyond those apparent at birth. Studies have shown that hyperglycemia alters the tooth development process, affecting tooth eruption and mineralization. Our objective was to evaluate the long-term consequences of intrauterine exposure to hyperglycemia on offspring Developmental Defects of Enamel (DDE). Method: A structured medical history questionnaire was sent. Background information solicited from the mother covered several aspects including gestational history, birth history, neonatal and infant history, obtained in the form of self-reported questionnaires, medical and dental records. After their parents signed the informed consent form, the children were examined in the Clinical Ambulatory according to the World Health Organization guidelines for epidemiological studies on oral Health. A headlight, plane intra-oral disposable mouth mirror, clinical instruments, an infant C-shaped labial retractor were used for the examination. The total number of existing teeth was identified and differentiated by deciduous or permanent teeth. The examination for the diagnosis of DDE and type DDE of the all surfaces of the teeth was performed in accordance by Federation Dental International criteria. Results: Our findings show higher rates for DDE (p<0.0... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

O presente estudo utilizou o modelo fatia-dental/matriz-polimérica para avaliar a influência do tratamento dentinário e das BMPs dentinárias na diferenciação das células-tronco da polpa de dentes decíduos (SHED). Secções transversais (1mm) foram preparadas a partir de terceiros molares humanos extraídos. Matrizes poliméricas a base de ácido poli-L-lático (PLLA) foram criadas no interior da cavidade pulpar das secções dentinárias, tratadas com solução de EDTA a 10%; NaOCl a 5.25%; ou permanecendo sem tratamento. Matrizes poliméricas confeccionadas sem as fatias dentais foram utilizadas como controle. As células (5x104) foram semeadas nas matrizes e, após 7, 14, 21 e 28 dias de cultura in vitro, a expressão de marcadores de diferenciação odontoblástica (DSPP, DMP1 e MEPE) e a proliferação celular (WST-1) foram avaliadas. Células (5x105) semeadas nas matrizes foram transplantadas em camundongos imunodeficientes e cultivadas in vivo por um período de 14 e 28 dias. Para avaliar a atividade das BMPs dentinárias, 5x104 células foram semeadas em matrizes poliméricas com fatia dental e cultivadas na presença de anticorpos anti-BMP- 2, -4, ou -7 (2 μg/ml) durante 14 dias. Adicionalmente, 5x105 células foram tratadas com rhBMP-2, -4, ou -7 (100ng/mL) por 24hs. As células cultivadas in vitro e in vivo alteraram sua expressão genética durante o curso do tempo. DSPP, DMP-1 e MEPE foram expressos por células cultivadas in vitro após 14 dias (tratamento com EDTA e dentina sem tratamento) e in vivo após 28 dias (EDTA), não sendo detectados nos grupos NaOCl e nas células cultivadas nas matrizes sem fatia dental. A proliferação foi reduzida com a diferenciação celular (p<0.05). A utilização de BMP-2/4Ab no meio de cultura exerceu um efeito inibitório na expressão dos marcadores de diferenciação celular, não ocorrendo quando do cultivo das SHED na presença de BMP-7Ab. DSPP, DMP-1 e MEPE foram expressos por células tratadas com rhBMP-2, e DSPP e DMP-1 por células tratadas com rhBMP-4 e -7. Células sem tratamento não expressaram os marcadores. O modelo fatia-dental/matriz-polimérica demonstrou ser adequado para o estudo da diferenciação de células-tronco pulpares, sugerindo que a dentina possa fornecer um microambiente favorável para a diferenciação de celular. As proteínas ósseas morfogenéticas dentinárias BMP-2 e BMP-4 parecem exercer um papel relevante nesse processo. / The effect of dentin pre-treatments and dentin-derived BMPs on SHED differentiation was tested using the Tooth-Slice Scaffold model (TSS). Dentin slices (1mm thickness) were prepared from extracted human third molars. Biodegradable PLLA scaffolds were prepared inside the pulp chamber of the tooth-slices, treated alternatively with a 5.25% NaOCl or 10% EDTA solution, or remaining untreated (WO-T). PLLA sponge scaffolds with no tooth-slice (PSS) were used as control. SHED (5x104) were seeded in TSS and PSS and after 7, 14, 21 and 28 days in culture, RT-PCR (DSPP, DMP1 and MEPE) and WST-1 proliferation assay were performed. Additionally, cells (5x105) were seeded in TSS and PSS and transplanted into SCID mice (14 and 28 days). To verify the dentinderived BMPs bioactivity, SHED (5x104) were cultured in TSS in the presence of antihuman BMP-2, -4, and -7 antibodies for 14 days. Besides, cells in culture were treated with rhBMP-2; -4; or -7 for 24 hours. After in vitro and in vivo time course, SHED altered their genetic expression. The cells cultured in vitro in the TSS (EDTA or WO-T) expressed the differentiation markers after 14 days and maintained expression thereafter. Cell proliferation rate was reduced following the differentiation (p<0.05). Cells transplanted in vivo expressed DSPP, DMP-1 and MEPE after 28 days (EDTA). No transcripts were found in tooth-slices treated with NaOCl or in PSS groups. BMP-2/4Ab prevented the differentiation process and no inhibitory effect was detected for BMP-7Ab. After 24 hours, expression of DSPP, DMP-1 and MEPE was found for rhBMP-2, and DSPP and DMP-1 for rhBMP-4 and rhBMP-7 treated SHED, but not for untreated cells. The tooth slice scaffold model suggests that dentin can provide the environment for SHED differentiation and dentin-derived morphogenic signals BMP-2 and BMP-4 play an important role in this process.

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / O objetivo destes estudos "in vitro" e "in vivo" foi avaliar uma técnica de tratamento endodôntico de dentes decíduos, minimamente invasiva, utilizando a pasta CTZ (cloranfenicol, tetraciclina e óxido de zinco/eugenol). No estudo "in vitro" foi analisada a ação antimicrobiana da pasta CTZ, sobre microrganismos-padrão (E.coli, S.aureus, S.mutans, E.faecalis e P.aeruginosa), pelos métodos de difusão em ágar e diluição em caldo, comparativamente com o OZE (óxido de zinco e eugenol) e as pastas L&C (hidróxido de cálcio), 3 Mix (metronidazol, ciprofloxacin e minociclina e propileno glicol) e Guedes-Pinto (iodofórmio, paramonoclorofenol e Rifocort). A difusibilidade da atividade antimicrobiana da CTZ através dos túbulos dentinários de raízes dentes decíduos recém extraídos, sobre S.mutans, E.faecalis e P.aeruginosa também foi analisada. No estudo "in vivo" foi avaliado o desempenho clínico da pasta CTZ no tratamento endodôntico de dentes decíduos em comparação com o OZE. Seis crianças, com idades entre 7 e 8 anos, apresentando um dente decíduo posterior inferior com comprometimento pulpar extenso, foram alocadas aleatoriamente em dois grupos, sendo que em um foi utilizada a técnica da pasta CTZ (grupo teste) e no outro o tratamento endodôntico radical com OZE (grupo controle). O acompanhamento clínico e radiográfico foi realizado em intervalos de 2 semanas, 3 e 6 meses. Os resultados dos experimentos "in vitro" demonstraram que a pasta CTZ possui atividade antimicrobiana da comparável a da pasta 3 Mix e superior aos demais materiais sobre todos os tipos de microrganismos, exceto para a P.aeruginosa onde a CTZ apresentou uma atividade menor do que a da pasta 3 Mix apesar de ainda superior as demais. Além disso, a CTZ demonstrou atividade antimicrobiana por difusibilidade sobre o S.mutans e E.faecalis. Os resultados do experimento clínico demonstraram um desempenho similar entre a pasta CTZ e o OZE, especialmente logo após o tratamento. Esses resultados sugerem que a técnica minimamente invasiva empregando a pasta CTZ pode ser um alternativa ao tratamento endodôntico radical evitando a perda precoce de dentes decíduos, com comprometimento pulpar. Porém, um ensaio clinico com tamanho amostral adequado e acompanhamento de longa duração deve ser realizado para que se possa obter evidência conclusiva sobre a efetividade do tratamento clínico com a pasta CTZ. / The aim of these "in vitro" and "in vivo" studies was to evaluate an endodontic treatment for deciduous teeth, minimally invasive, using the CTZ paste (chloramphenicol, tetracycline and zinc oxide/eugenol). In the "in vitro" study the antimicrobial activity of the CTZ paste on standard microorganisms (E.coli , S.aureus, S.mutans, E.faecalis and P.aeruginosa) was evaluated. The agar diffusion and broth dilution methods were used and the CTZ paste was compared to the ZOE (zinc oxide/eugenol), L&C (calcium hydroxide), 3-Mix (minociclyne, ciprofloxacin, metronidazole e propylene glycol) and Guedes-Pinto (iodoform, paramonoclorophenol e Rifocort) pastes. The antimicrobial activity of the CTZ paste, through the dentinal tubules, were tested on S.mutans, E.faecalis and P.aeruginosa. In the study "in vivo" the clinical performance of CTZ paste was acessed. Six children, aged 7 and 8 years, presenting a decayed lower primary molar decayed with pulp pathology were randomly allocated into the test group (CTZ) and in the control group (ZOE). Clinical and radiographic exams were performed after 2 weeks, 3 and 6 months of follow-up. The results of the "in vitro" experiments demonstrated that CTZ paste had an antimicrobial activity similar to the antimicrobial activity of the 3 Mix paste, with the exception of P.aeruginosa, where CTZ paste presented a worse antimicrobial activity than the 3 Mix paste. The antimicrobial activity of CTZ paste was better than the antimicrobial activity of the other tested materials. Moreover, the CTZ showed an antimicrobial activity through the dentine on S.mutans and E.faecalis. CTZ and ZOE presented a similar clinical performance especially immediately after the treatment. These results suggest that the minimally invasive technique employing the CTZ paste can be an alternative to traditional endodontic treatment and may prevent the early loss of deciduous teeth with pulp pathology. Nevertheless, a clinical trial with an adequate sample size and a longer follow-up period should be performed in order to produce conclusive evidence about the clinical effectiveness of the CTZ paste.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:01Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-02-10Bitstream added on 2014-06-13T20:44:33Z : No. of bitstreams: 1 murata_ss_dr_araca.pdf: 3025122 bytes, checksum: d6ebabe611a7dce5412ed2e2cf0535db (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A dentição decídua é passível de ser acometida por traumatismos, lesões cariosas precoces (cárie de mamadeira) ou outro tipo de injúria, que podem comprometer a vitalidade pulpar desses dentes, inclusive com rizogênese incompleta. A escassez de trabalho específico sobre o assunto, bem como a importância de solucionar adequadamente esse tipo de problema, em dentes decíduos com rizogênese incompleta, estimulam a realização de investigações sobre o assunto. Portanto, o objetivo deste estudo foi avaliar, histologicamente, a resposta dos tecidos apicais e periapicais de dentes decíduos de cães, com rizogênese incompleta, após biopulpectomia e obturação dos canais radiculares com hidróxido de cálcio em diferentes veículos. Assim, os canais radiculares de 80 dentes decíduos anteriores de 6 cães da mesma ninhada, com 50 dias de idade, e com rizogênese incompleta, foram empregados neste estudo. Após o preparo biomecânico, os canais radiculares foram obturados com os seguintes materiais: Grupo 1- pasta Vitapex (hidróxido de cálcio, iodofórmio e óleo de silicone), Grupo 2- hidróxido de cálcio acrescido de iodofórmio e soro fisiológico, Grupo 3- hidróxido de cálcio associado ao Lipiodol e, Grupo 4 - controle - dentes com canais preparados e não obturados. Trinta dias após o tratamento, os animais foram mortos e os espécimes preparados para análise histomorfológica. A análise estatística dos resultados permitiu que os materiais estudados fossem ordenados do melhor para o pior resultado da seguinte forma: a) hidróxido de cálcio acrescido de iodofórmio e soro fisiológico, b) pasta Vitapex (hidróxido de cálcio acrescido de iodofórmio e óleo de silicone), c) hidróxido de cálcio associado ao lipiodol, d) controle. / The deciduous teeth with open apex are susceptible to be traumatized by carious lesions or other offence type that can engage the pulp vitality of those teeth. The lacking of specific work on the subject, as well as the importance of solving this kind of problem appropriately stimulates the accomplishment of investigations on the subject. Therefore, the subject of this study was to evaluate, histologically, the behavior of apical tissues of deciduous dogs teeth with open apex, after biopulpectomy and root canal filling with calcium hydroxide in different vehicles. The root canals of 80 deciduous teeth, from 6 dogs of the same hatch, with 50 days of age, and with open apex, were used in this study. After the biomechanical preparation, the root canals were filled with the following materials: Vitapex - calcium hydroxide added to iodoform and silicon oil; paste of calcium hydroxide with iodoform and saline; paste of calcium hydroxide with lipiodol, and as control group, teeth with root canal prepared but not filled. Thirty days after the treatment, the animals were killed and the specimens were prepared for histomorphological analysis. The statistical analysis of the results allowed the studied materials to be ordered from the best to the worst in the following way: a) calcium hydroxide added to iodoform and saline, b) Vitapex - calcium hydroxide added to iodoform and silicon oil, c) calcium hydroxide added to Lipiodol, d) control. It was observed statistical significant difference (p=0.05) among the results of the groups of calcium hydroxide associated to iodoform and saline with the calcium hydroxide group associated to lipiodol, as well as the 3 groups filled with calcium hydroxide pastes with the control group (p=0.001). It was concluded that the 3 pastes of calcium hydroxide studied can be used as root canal filling material in the treatment of deciduous teeth with open apex.

O presente estudo utilizou o modelo fatia-dental/matriz-polimérica para avaliar a influência do tratamento dentinário e das BMPs dentinárias na diferenciação das células-tronco da polpa de dentes decíduos (SHED). Secções transversais (1mm) foram preparadas a partir de terceiros molares humanos extraídos. Matrizes poliméricas a base de ácido poli-L-lático (PLLA) foram criadas no interior da cavidade pulpar das secções dentinárias, tratadas com solução de EDTA a 10%; NaOCl a 5.25%; ou permanecendo sem tratamento. Matrizes poliméricas confeccionadas sem as fatias dentais foram utilizadas como controle. As células (5x104) foram semeadas nas matrizes e, após 7, 14, 21 e 28 dias de cultura in vitro, a expressão de marcadores de diferenciação odontoblástica (DSPP, DMP1 e MEPE) e a proliferação celular (WST-1) foram avaliadas. Células (5x105) semeadas nas matrizes foram transplantadas em camundongos imunodeficientes e cultivadas in vivo por um período de 14 e 28 dias. Para avaliar a atividade das BMPs dentinárias, 5x104 células foram semeadas em matrizes poliméricas com fatia dental e cultivadas na presença de anticorpos anti-BMP- 2, -4, ou -7 (2 μg/ml) durante 14 dias. Adicionalmente, 5x105 células foram tratadas com rhBMP-2, -4, ou -7 (100ng/mL) por 24hs. As células cultivadas in vitro e in vivo alteraram sua expressão genética durante o curso do tempo. DSPP, DMP-1 e MEPE foram expressos por células cultivadas in vitro após 14 dias (tratamento com EDTA e dentina sem tratamento) e in vivo após 28 dias (EDTA), não sendo detectados nos grupos NaOCl e nas células cultivadas nas matrizes sem fatia dental. A proliferação foi reduzida com a diferenciação celular (p<0.05). A utilização de BMP-2/4Ab no meio de cultura exerceu um efeito inibitório na expressão dos marcadores de diferenciação celular, não ocorrendo quando do cultivo das SHED na presença de BMP-7Ab. DSPP, DMP-1 e MEPE foram expressos por células tratadas com rhBMP-2, e DSPP e DMP-1 por células tratadas com rhBMP-4 e -7. Células sem tratamento não expressaram os marcadores. O modelo fatia-dental/matriz-polimérica demonstrou ser adequado para o estudo da diferenciação de células-tronco pulpares, sugerindo que a dentina possa fornecer um microambiente favorável para a diferenciação de celular. As proteínas ósseas morfogenéticas dentinárias BMP-2 e BMP-4 parecem exercer um papel relevante nesse processo. / The effect of dentin pre-treatments and dentin-derived BMPs on SHED differentiation was tested using the Tooth-Slice Scaffold model (TSS). Dentin slices (1mm thickness) were prepared from extracted human third molars. Biodegradable PLLA scaffolds were prepared inside the pulp chamber of the tooth-slices, treated alternatively with a 5.25% NaOCl or 10% EDTA solution, or remaining untreated (WO-T). PLLA sponge scaffolds with no tooth-slice (PSS) were used as control. SHED (5x104) were seeded in TSS and PSS and after 7, 14, 21 and 28 days in culture, RT-PCR (DSPP, DMP1 and MEPE) and WST-1 proliferation assay were performed. Additionally, cells (5x105) were seeded in TSS and PSS and transplanted into SCID mice (14 and 28 days). To verify the dentinderived BMPs bioactivity, SHED (5x104) were cultured in TSS in the presence of antihuman BMP-2, -4, and -7 antibodies for 14 days. Besides, cells in culture were treated with rhBMP-2; -4; or -7 for 24 hours. After in vitro and in vivo time course, SHED altered their genetic expression. The cells cultured in vitro in the TSS (EDTA or WO-T) expressed the differentiation markers after 14 days and maintained expression thereafter. Cell proliferation rate was reduced following the differentiation (p<0.05). Cells transplanted in vivo expressed DSPP, DMP-1 and MEPE after 28 days (EDTA). No transcripts were found in tooth-slices treated with NaOCl or in PSS groups. BMP-2/4Ab prevented the differentiation process and no inhibitory effect was detected for BMP-7Ab. After 24 hours, expression of DSPP, DMP-1 and MEPE was found for rhBMP-2, and DSPP and DMP-1 for rhBMP-4 and rhBMP-7 treated SHED, but not for untreated cells. The tooth slice scaffold model suggests that dentin can provide the environment for SHED differentiation and dentin-derived morphogenic signals BMP-2 and BMP-4 play an important role in this process.

Submitted by TAWANA PASCON null (tawpascon@hotmail.com) on 2018-02-17T18:56:32Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_Mestrado_Taw_PPG_PGO.pdf: 3100379 bytes, checksum: b43e9c75d93ca60cd8d3f8276eda1634 (MD5) / Approved for entry into archive by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br) on 2018-02-20T17:24:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 pascon_t_me_bot.pdf: 3100379 bytes, checksum: b43e9c75d93ca60cd8d3f8276eda1634 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-02-20T17:24:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 pascon_t_me_bot.pdf: 3100379 bytes, checksum: b43e9c75d93ca60cd8d3f8276eda1634 (MD5) Previous issue date: 2017-12-19 / Introdução: O Diabetes Mellitus Gestacional (DMG) está associado a repercussões a curto e longo prazo. O legado do ambiente intrauterino diabético, adquirido durante a gestação, não pode ser ignorado e esses efeitos se estendem para além do nascimento. Estudos demonstraram que a hiperglicemia altera o processo de desenvolvimento dentário, afetando a erupção dentária e a mineralização. Objetivo O objetivo foi avaliar as consequências em longo prazo da exposição intrauterina à hiperglicemia no Desenvolvimento do Esmalte Dentário nos descendente de mães com DMG. Método: Foram avaliadas crianças filhas de mães com DMG. Foi coletado questionário do histórico médico estruturado. A informação solicitada para mãe abrangeu vários aspectos, incluindo história gestacional, história de nascimento, histórico neonatal e infantil, obtidos na forma de questionários auto relatados, registros médicos e dentários. Depois que seus pais assinaram o termo de consentimento informado, as crianças foram examinadas no Ambulatório Clínico de acordo com as diretrizes da Organização Mundial de Saúde para estudos epidemiológicos sobre Saúde bucal. Uma lanterna, um espelho bucal descartável intraoral plano, instrumentos clínicos e um retrator labial infantil em forma de C foram utilizados para o exame. O número total de dentes existentes foi identificado e diferenciado por dentes decíduos ou permanentes. O exame para o diagnóstico de DDE e tipo DDE de todas as superfícies dos dentes foi realizado de acordo com os critérios Federação Internacional Dental. Resultados: Nossos resultados mostram incidência elevada de DDE (p<0,001) e hipoplasia em crianças de mães com diabetes gestacional (p = 0,043). A análise com o modelo logístico ajustado para gênero, etnia e Índice de Massa Corporal do recém-nascido mostra risco maior de DDE (OR 3,04 1,34 ± 6,92, p<0,001) e Opacidade Demarcada (OR 12,54 1,73 ± 90,87, p = 0,012) em prole pré-exposta a DMG. O diagrama da cronologia intrauterina de formação de esmalte dental foi construído e contêm um conjunto de dados consistentes sobre o início e a formação final do esmalte dental. Conclusão: O DMG foi associado aos efeitos adversos do Defeito de Desenvolvimento de Esmalte (DDE) nos descendentes, e o tipo DDE associado foi a Opacidade Demarcada. A prevalência de DDE foi significativamente maior nos descendentes de mães com DMG e o tipo de DDE que apresentou maior proporção foi hipoplasia. Houve maior proporção de dentes com DDE nos descendentes de mães com DMG, na dentição decídua houve proporção significativamente maior para os tipos Opacidade Demarcada e Hipoplasia no grupo DMG e na dentição permanente teve significativamente maior proporção para o tipo Opacidade Difusa no grupo DMG. / Background and objective: Gestational Diabetes Mellitus (GDM) is associated with short and long-term repercussions. The legacy of the diabetic intrauterine environment, acquired during gestation, cannot be ignored and these effects extend beyond those apparent at birth. Studies have shown that hyperglycemia alters the tooth development process, affecting tooth eruption and mineralization. Our objective was to evaluate the long-term consequences of intrauterine exposure to hyperglycemia on offspring Developmental Defects of Enamel (DDE). Method: A structured medical history questionnaire was sent. Background information solicited from the mother covered several aspects including gestational history, birth history, neonatal and infant history, obtained in the form of self-reported questionnaires, medical and dental records. After their parents signed the informed consent form, the children were examined in the Clinical Ambulatory according to the World Health Organization guidelines for epidemiological studies on oral Health. A headlight, plane intra-oral disposable mouth mirror, clinical instruments, an infant C-shaped labial retractor were used for the examination. The total number of existing teeth was identified and differentiated by deciduous or permanent teeth. The examination for the diagnosis of DDE and type DDE of the all surfaces of the teeth was performed in accordance by Federation Dental International criteria. Results: Our findings show higher rates for DDE (p<0.001) and Hypoplasia for offspring of mothers with gestational diabetes (p = 0.043).The analysis with the logistic model adjusted for gender, ethnicity and body mass index of the newborn, shows a higher risk of DDE (OR 3.04; 95% CI 1.34, 6.92; p<0.001) and Demarcated Opacity (OR 12.54; 95% CI 1.73.90.87; p = 0.012) in offspring pre-exposed to GDM. Intrauterine chronology of dental enamel formation diagram was developed and contains a grouped consistent data about start and final dental enamel formation. Conclusion: GDM was associated with the adverse effects of DDE on offspring, and the type DDE was Demarcated Opacity. The prevalence of DDE was significantly higher in the offspring of GDM mothers and type DDE that presented the highest proportion was Hypoplasia. It can also be concluded that there was a higher proportion of teeth with DDE in offspring of GDM mothers, in the deciduous dentition there was a significantly higher proportion for the type Demarcated Opacity and Hypoplasia in the GDM and in permanent dentition had a significantly higher proportion for the type Opacity Diffuse in GDM.

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / O objetivo destes estudos "in vitro" e "in vivo" foi avaliar uma técnica de tratamento endodôntico de dentes decíduos, minimamente invasiva, utilizando a pasta CTZ (cloranfenicol, tetraciclina e óxido de zinco/eugenol). No estudo "in vitro" foi analisada a ação antimicrobiana da pasta CTZ, sobre microrganismos-padrão (E.coli, S.aureus, S.mutans, E.faecalis e P.aeruginosa), pelos métodos de difusão em ágar e diluição em caldo, comparativamente com o OZE (óxido de zinco e eugenol) e as pastas L&C (hidróxido de cálcio), 3 Mix (metronidazol, ciprofloxacin e minociclina e propileno glicol) e Guedes-Pinto (iodofórmio, paramonoclorofenol e Rifocort). A difusibilidade da atividade antimicrobiana da CTZ através dos túbulos dentinários de raízes dentes decíduos recém extraídos, sobre S.mutans, E.faecalis e P.aeruginosa também foi analisada. No estudo "in vivo" foi avaliado o desempenho clínico da pasta CTZ no tratamento endodôntico de dentes decíduos em comparação com o OZE. Seis crianças, com idades entre 7 e 8 anos, apresentando um dente decíduo posterior inferior com comprometimento pulpar extenso, foram alocadas aleatoriamente em dois grupos, sendo que em um foi utilizada a técnica da pasta CTZ (grupo teste) e no outro o tratamento endodôntico radical com OZE (grupo controle). O acompanhamento clínico e radiográfico foi realizado em intervalos de 2 semanas, 3 e 6 meses. Os resultados dos experimentos "in vitro" demonstraram que a pasta CTZ possui atividade antimicrobiana da comparável a da pasta 3 Mix e superior aos demais materiais sobre todos os tipos de microrganismos, exceto para a P.aeruginosa onde a CTZ apresentou uma atividade menor do que a da pasta 3 Mix apesar de ainda superior as demais. Além disso, a CTZ demonstrou atividade antimicrobiana por difusibilidade sobre o S.mutans e E.faecalis. Os resultados do experimento clínico demonstraram um desempenho similar entre a pasta CTZ e o OZE, especialmente logo após o tratamento. Esses resultados sugerem que a técnica minimamente invasiva empregando a pasta CTZ pode ser um alternativa ao tratamento endodôntico radical evitando a perda precoce de dentes decíduos, com comprometimento pulpar. Porém, um ensaio clinico com tamanho amostral adequado e acompanhamento de longa duração deve ser realizado para que se possa obter evidência conclusiva sobre a efetividade do tratamento clínico com a pasta CTZ. / The aim of these "in vitro" and "in vivo" studies was to evaluate an endodontic treatment for deciduous teeth, minimally invasive, using the CTZ paste (chloramphenicol, tetracycline and zinc oxide/eugenol). In the "in vitro" study the antimicrobial activity of the CTZ paste on standard microorganisms (E.coli , S.aureus, S.mutans, E.faecalis and P.aeruginosa) was evaluated. The agar diffusion and broth dilution methods were used and the CTZ paste was compared to the ZOE (zinc oxide/eugenol), L&C (calcium hydroxide), 3-Mix (minociclyne, ciprofloxacin, metronidazole e propylene glycol) and Guedes-Pinto (iodoform, paramonoclorophenol e Rifocort) pastes. The antimicrobial activity of the CTZ paste, through the dentinal tubules, were tested on S.mutans, E.faecalis and P.aeruginosa. In the study "in vivo" the clinical performance of CTZ paste was acessed. Six children, aged 7 and 8 years, presenting a decayed lower primary molar decayed with pulp pathology were randomly allocated into the test group (CTZ) and in the control group (ZOE). Clinical and radiographic exams were performed after 2 weeks, 3 and 6 months of follow-up. The results of the "in vitro" experiments demonstrated that CTZ paste had an antimicrobial activity similar to the antimicrobial activity of the 3 Mix paste, with the exception of P.aeruginosa, where CTZ paste presented a worse antimicrobial activity than the 3 Mix paste. The antimicrobial activity of CTZ paste was better than the antimicrobial activity of the other tested materials. Moreover, the CTZ showed an antimicrobial activity through the dentine on S.mutans and E.faecalis. CTZ and ZOE presented a similar clinical performance especially immediately after the treatment. These results suggest that the minimally invasive technique employing the CTZ paste can be an alternative to traditional endodontic treatment and may prevent the early loss of deciduous teeth with pulp pathology. Nevertheless, a clinical trial with an adequate sample size and a longer follow-up period should be performed in order to produce conclusive evidence about the clinical effectiveness of the CTZ paste.