BIZERRA, A. M. C.; Biorreduções de cetonas pró-quirais e nitrocompostos com células íntegras de Vigna unguiculata L. e produção enzimática de ésteres de cloranfenicol. 2012. 277 f. Tese (Doutorado em Química) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2012. / Submitted by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2014-10-17T17:45:53Z No. of bitstreams: 1 2012_tese_amcbizerra.pdf: 10747667 bytes, checksum: 0c05561fa9ec071391d1204ce9e6a6bc (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2014-11-18T16:52:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_tese_amcbizerra.pdf: 10747667 bytes, checksum: 0c05561fa9ec071391d1204ce9e6a6bc (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-18T16:52:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_tese_amcbizerra.pdf: 10747667 bytes, checksum: 0c05561fa9ec071391d1204ce9e6a6bc (MD5) Previous issue date: 2012 / This work is divided into two parts: the first related biotransformations of organic compounds with the species Vigna unguiculata, and the second on the enzymatic synthesis of esters of chloramphenicol. Reactions bioreduction of ketones and nitrocompounds with grains of Vigna unguiculata (feijão de corda). After performing a reduction of acetophenone with screnning varying the reaction conditions, we found those that led to better results for conversion and enantiomeric excess. These conditions were applied to 34 other susbtratos, including: aliphatic ketones and aromatic ring with different substituents such as nitro, methoxy, and alkyl halide in various positions, nitro, β-keto ester, a ketone α, β-unsaturated and benzonitrile. Overall, the results obtained with the biorreduções can be considered satisfactory, as well as the enantiomeric excess values. In the second part, we used the commercial lipases: CAL-B, PSL-C (I) and PSL-C Amano in acylation reactions of the drug chloramphenicol, an exhaustive study in search of optimum reaction conditions mainly exploring the activity regioselective these enzymes. Were obtained from eight derivatives of this drug, depending on the acylating agent used, seven of these, and a monoacilados, di-acylated. As acyl donor was used several vinyl esters, saturated or not and with various chain lengths. Reaction parameters such as: variations of the solvent, temperature, concentration of the acylating agent and medium were optimized to obtain these derivatives. Virtually all products were obtained in high percentages of conversion, except for those with unsaturation. It is also carried out in a bench scale procedure using the enzyme CAL-B, and significant results were obtained in all cases. At the end of the study we adopted a procedure for recycling of the same enzyme, which was proven its efficiency in reuse. / Este trabalho encontra-se dividido em duas partes: a primeira relacionada à biotransformações de compostos orgânicos com a espécie Vigna unguiculata, e a segunda, relativa à síntese enzimática de ésteres de cloranfenicol. Reações de biorredução de cetonas e nitrocompostos com grãos de Vigna unguiculata (feijão de corda). Após realizado um screnning com redução de acetofenona variando-se as condições reacionais, encontrou-se aquelas que levaram ao melhores resultados de conversão e excesso enantiomérico. Essas condições foram aplicadas para outros 34 susbtratos, entre eles: cetonas alifáticas e aromáticas com diferentes substituintes no anel como: nitro, metóxi, alquila e halogênios em várias posições, nitrocompostos, β-ceto-ésteres, uma cetona α,β-insaturada e benzonitrila. No geral, o resultados obtidos com as biorreduções podem ser considerados satisfatórios, assim como os valores de excesso enantiomérico. Na segunda parte, utilizou-se as lipases comerciais: CAL-B, PSL-C(I) e PSL-C Amano, em reações de acilação do fármaco cloranfenicol, num estudo exaustivo em busca de condições ótimas de reação explorando principalmente a atividade regiosseletiva dessas enzimas. Foram obtidos oito derivados desse fármaco, a depender do agente acilante utilizado, sendo sete destes, monoacilados e um, di-acilado. Como doador acila usou-se diversos ésteres vinílicos, saturados ou não e com diversos tamanhos de cadeia. Parâmetros reacionais como: variação do solvente, da temperatura, concentração do meio e agente acilante foram otimizados para obtenção desses derivados. Praticamente todos os produtos foram obtidos em elevados percentuais de conversão, exceto para aqueles que possuem insaturação. Realizou-se ainda um procedimento em escala de bancada utilizando a enzima CAL-B, sendo obtidos resultados bem significativos em todos os casos. Ao final do estudo adotou-se um procedimento de reciclagem desta mesma enzima, onde ficou comprovada sua eficiência no reuso.

MONTENEGRO, T. G. C. Síntese quimioenzimática de derivados do cloranfenicol e tianfenicol, e estudo químico bioguiado de fungos associados à ascidia Eudistoma vannamei. 2011. 215 f. Tese (Doutorado em Química) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2011. / Submitted by Daniel Eduardo Alencar da Silva (dealencar.silva@gmail.com) on 2014-11-28T20:22:46Z No. of bitstreams: 1 2011_tese_tgcmontenegro.pdf: 27703016 bytes, checksum: a2a48a9fea61b2acc9406d1945f1c074 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2016-01-20T23:09:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_tese_tgcmontenegro.pdf: 27703016 bytes, checksum: a2a48a9fea61b2acc9406d1945f1c074 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-20T23:09:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_tese_tgcmontenegro.pdf: 27703016 bytes, checksum: a2a48a9fea61b2acc9406d1945f1c074 (MD5) Previous issue date: 2011 / Este trabalho descreve: 1) síntese quimioenzimática de ésteres do cloranfenicol (1) e tianfenicol (2), utilizando lipases como fonte biocatalítica; 2) avaliação do potencial atitumoral de fungos marinhos isolados da ascídia Eudistoma vannamei. Na primeira parte, realizou-se a síntese enzimática de dois derivados monoacilados do cloranfenicol (1), através de reações de hidrólise de derivados diacilados, e oito derivados monoacilados do tianfenicol (2), pela acilação e hidrólise enzimática do tianfenicol e derivados diacilados, respectivamente. Os seguintes parâmetros foram variados: enzima, solvente, temperatura, pH e proporção entre solvente e agente hidrolítico e, na hidrólise enzimática dos derivados de cloranfenicol diacilados, os melhores resultados foram com a mistura de CH3CN:tampão fosfato (pH 7) na proporção de 20:80, CAL-B como biocatalisador, temperatura de 20 ºC, agitação de 250 rpm e tempo reacional de 24 h. A reação de acilação enzimática do tianfenicol (2), utilizando CAL-B como biocatalisador e ésteres vinílicos como doadores de grupos acila, se mostrou bastante eficiente, com altos índices de conversão e seletividade. Os processos forneceram unicamente os produtos de acilação da hidroxila menos impedida (3’-OH). A eficiência da enzima CAL-B reciclada na reação de acilação do tianfenicol (2) foi investigada, sendo possível concluir que esta se mantém ativa durante os cinco processos reacionais testados. A hidrólise enzimática dos derivados diacilados do tianfenicol forneceu, majoritariamente, os produtos de hidrólise na posição 3. Na segunda parte do trabalho, foram isoladas 11 cepas fúngicas (EV1 a EV11) da ascídia E. vannamei, as quais foram cultivadas em meio líquido BD (batata-dextrose) com objetivo de realizar um estudo bioguiado através da avaliação da atividade citotóxica de seus extratos e frações. Foram ensaiados os extratos acetoetílico do meio líquido e metanólico do micélio, previamente separados. Os extratos mais ativos foram os oriundos de EV10 e EV11, os quais foram identificados como Aspergillus sp. por análise molecular. O fungo EV10 foi cultivado em grande escala para fracionamento bioguiado e isolamento dos metabólitos secundários bioativos. Foi possível isolar quatro micotoxinas: meleína, cis-4-hidroximeleína, trans-4-hidroximeleína e ácido penicílico, dentre as quais, somente o ácido penicílico foi identificado como responsável pela atividade do extrato.

O desenvolvimento de novos materiais para a aplicação em eletroanalítica, uma atividade extremamente atraente, visa produzir compostos com condutividade elétrica alta, estabilidade mecânica e química e grandes áreas superficiais. Assim, nesta tese foram desenvolvidos Carbonos Mesoporosos Ordenados, um tipo de material carbônico recentemente explorado para diversas aplicações devido às suas propriedades específicas e facilmente manipuláveis. A produção inicia-se com a síntese da sílica mesoporosa utilizada como template, seguida pela impregnação por molhamento incipiente utilizando moléculas que são concomitantemente, fontes de carbono e de um heteroátomo (S, N ou O). Após a polimerização e carbonização em atmosfera não-oxidante, removeu-se o template de sílica, obtendo-se um material altamente organizado de estrutura mesoporosa, caracterizado pelas análises de BET, MET e DRX em ângulos baixos. Os materiais sintetizados apresentaram área superficial grande e acessível, indicadas pelas as análises de BET, o que ofereceu uma alta eficiência de pré-concentração de analitos. A fim de garantir um carbono com características grafíticas e boa condutividade, partiu-se de fontes carbônicas aromáticas e utilizou-se o óxido de ferro como catalisador da polimerização. Com isso, obteve-se materiais com carácter grafítico, mostrado pelas análises de DRX e Raman, com excelentes propriedades elétricas e transferência eletrônica mais rápida, mostrado pelas análises eletroquímicas (VC e EIE) garantindo um material com excelente atividade eletrocatalítica. Os três diferentes tipos de dopagem geraram três materiais distintos, que diferem não apenas na composição química, mas também nas propriedades físicas, elétricas e em sua resposta eletroanalítica. Os materiais sintetizados foram aplicados na detecção do cloranfenicol, um antibiótico com propriedades antibacterianas e farmacocinéticas excelentes, porém proibido em produtos destinados ao consumo humano. A metodologia desenvolvida apresentou boa sensibilidade e limites de detecção e quantificação, além da capacidade de analisar diretamente leite em pó, sem a necessidade de etapas trabalhosas de preparo de amostra. / The development of new materials for electroanalitycal application aims to produce materials with high electric conductivity, mechanical and chemical stability, and high surface areas. So, in this thesis, it was developed Ordered Mesoporous Carbon, a carbonic material recently explored in several applications due its specific plasticity properties. The production starts with the mesoporous silica synthesis. It is used as template, followed by the incipient wetness impregnation using molecules that are both a carbon source and heteroatom precursor (S, N or O). After the polymerization and the non-oxidant atmosphere carbonization, the template was removed, what yielded a highy ordered mesoporous structure, demonstrated by BET, TEM and low-angle XRD analysis. The synthetized materials showed high and accessible surface area, demonstrated by BET, which allowed high pre-concentration efficiency with a fast diffusion process. In order to get a graphitic carbon with good conductivity, it was used aromatic carbon precursors and iron as polymerization catalyst. Consequently, a material with graphitic character was getting, as we can see at XRD and Raman, with excellent electric properties and faster electronic transference, showed by electrochemical analysis (CV and EIS), leading to a material with excellent electrocatalytic activity. The three different doping types leading to three distinct materials, which differ not only at chemical composition, but also at physical, electrics and electroanalytical properties. The materials was applied at chloramphenicol detection, an antibiotic with excellent antibacterial and pharmacokinetics properties. However, it is forbidden in edible products. The developed methodology has good sensibility, and limits of detection and quantification. In addition, was possible to analyze powder milk directly, without any other timing consuming procedure of sample preparing.

O desenvolvimento de novos materiais para a aplicação em eletroanalítica, uma atividade extremamente atraente, visa produzir compostos com condutividade elétrica alta, estabilidade mecânica e química e grandes áreas superficiais. Assim, nesta tese foram desenvolvidos Carbonos Mesoporosos Ordenados, um tipo de material carbônico recentemente explorado para diversas aplicações devido às suas propriedades específicas e facilmente manipuláveis. A produção inicia-se com a síntese da sílica mesoporosa utilizada como template, seguida pela impregnação por molhamento incipiente utilizando moléculas que são concomitantemente, fontes de carbono e de um heteroátomo (S, N ou O). Após a polimerização e carbonização em atmosfera não-oxidante, removeu-se o template de sílica, obtendo-se um material altamente organizado de estrutura mesoporosa, caracterizado pelas análises de BET, MET e DRX em ângulos baixos. Os materiais sintetizados apresentaram área superficial grande e acessível, indicadas pelas as análises de BET, o que ofereceu uma alta eficiência de pré-concentração de analitos. A fim de garantir um carbono com características grafíticas e boa condutividade, partiu-se de fontes carbônicas aromáticas e utilizou-se o óxido de ferro como catalisador da polimerização. Com isso, obteve-se materiais com carácter grafítico, mostrado pelas análises de DRX e Raman, com excelentes propriedades elétricas e transferência eletrônica mais rápida, mostrado pelas análises eletroquímicas (VC e EIE) garantindo um material com excelente atividade eletrocatalítica. Os três diferentes tipos de dopagem geraram três materiais distintos, que diferem não apenas na composição química, mas também nas propriedades físicas, elétricas e em sua resposta eletroanalítica. Os materiais sintetizados foram aplicados na detecção do cloranfenicol, um antibiótico com propriedades antibacterianas e farmacocinéticas excelentes, porém proibido em produtos destinados ao consumo humano. A metodologia desenvolvida apresentou boa sensibilidade e limites de detecção e quantificação, além da capacidade de analisar diretamente leite em pó, sem a necessidade de etapas trabalhosas de preparo de amostra. / The development of new materials for electroanalitycal application aims to produce materials with high electric conductivity, mechanical and chemical stability, and high surface areas. So, in this thesis, it was developed Ordered Mesoporous Carbon, a carbonic material recently explored in several applications due its specific plasticity properties. The production starts with the mesoporous silica synthesis. It is used as template, followed by the incipient wetness impregnation using molecules that are both a carbon source and heteroatom precursor (S, N or O). After the polymerization and the non-oxidant atmosphere carbonization, the template was removed, what yielded a highy ordered mesoporous structure, demonstrated by BET, TEM and low-angle XRD analysis. The synthetized materials showed high and accessible surface area, demonstrated by BET, which allowed high pre-concentration efficiency with a fast diffusion process. In order to get a graphitic carbon with good conductivity, it was used aromatic carbon precursors and iron as polymerization catalyst. Consequently, a material with graphitic character was getting, as we can see at XRD and Raman, with excellent electric properties and faster electronic transference, showed by electrochemical analysis (CV and EIS), leading to a material with excellent electrocatalytic activity. The three different doping types leading to three distinct materials, which differ not only at chemical composition, but also at physical, electrics and electroanalytical properties. The materials was applied at chloramphenicol detection, an antibiotic with excellent antibacterial and pharmacokinetics properties. However, it is forbidden in edible products. The developed methodology has good sensibility, and limits of detection and quantification. In addition, was possible to analyze powder milk directly, without any other timing consuming procedure of sample preparing.

Memoria para optar al Título de Químico Farmacéutico / La utilización de antimicrobianos por parte de la industria del salmón, ha sido en respuesta a la necesidad del control de ataques de patógenos oportunistas dado los sistemas de cultivo intensivos utilizados por esta industria. En este ámbito en Chile, los fenicoles han sido ampliamente usados. El descubrimiento de los fenicoles surgió de la extracción desde Streptomyces venezuelae de cloranfenicol, posteriormente éste ha sido obtenido de forma sintética. Este descubrimiento llevó consigo el estudio de derivados tales como el tianfenicol y el florfenicol. Según la normativa vigente en Chile y en la Unión Europea, el cloranfenicol es de uso prohibido en animales de consumo humano (dado a sus serios efectos adversos) y posee un límite mínimo de funcionamiento exigido para las diferentes técnicas empleadas en su detección de 0.3 μg/kg, mientras que el tianfenicol y el florfenicol son de uso permitido y poseen un límite máximo residual de 50 y 1000 μg/kg respectivamente. El florfenicol en los últimos años, ha sido uno de los antimicrobianos más utilizados en la industria del salmón, principalmente por su espectro de acción y eficacia. Dada la similitud estructural de estos 3 fenicoles y la escasa información referente a la síntesis y contaminantes del principal agente utilizado en la industria del salmón, es posible que alguna traza de cloranfenicol y/o tianfenicol esté presente en productos farmacéuticos que contengan florfenicol como principio activo. Este estudio consistió en determinar fenicoles a nivel de residuos en materias primas y productos farmacéuticos de florfenicol. La cuantificación de florfenicol, cloranfenicol y tianfenicol se realizó por LC–MS/MS. Los espectros de primer y segundo orden y sus parámetros de fraccionamiento fueron desarrollados y optimizados como primera etapa. Posteriormente se desarrolló y optimizó un método cromatográfico para la cuantificación de estos 3 fenicoles en ausencia de matriz. Se incluyó ademas la obtención y optimización de espectros de primer y segundo orden y sus parámetros de fraccionamiento para florfenicol amina, con perspectiva a futuros estudios de determinación de fenicoles en tejidos de salmón. Finalmente, se desarrolló, optimizó y validó la detección de florfenicol, tianfenicol y cloranfenicol en productos farmacéuticos de uso veterinario de florfenicol por el método propuesto. Los porcentajes de recuperación alcanzados por el método propuesto fueron de 100.4 ± 34% (expresado en concentraciones: 1.004 ± 0.3 ng/mL), demostrando una incertidumbre de 33.9%. El método fue aplicado a muestras reales de productos farmacéuticos de uso veterinario de florfenicol, arrojando negativo a cloranfenicol en todos los casos, pero positivo a tianfenicol en concentraciones desde 0.419 hasta 0.475% para materias primas y entre 0.207 y 0.319% para productos terminados. A la luz de los resultados obtenidos en este trabajo, resulta apremiante la implementación de controles exigentes para la detección de impurezas en medicamentos veterinarios debido al alto impacto, tanto a nivel de salud pública como a nivel económico, que se proyecta en las exportaciones de carnes de consumo humano / In response to the attack of the control`s need from certain opportunistic pathogens by giving a intensive farming system in the salmon Industry has provoked the use of antimicrobials from that part of the Industry. On this matter that took place in Chile, phenicols have been extensively used. Through the extraction of Streptomyces venezuelae of chloramphenicol it came up the phenicols`s discovery which during the course of the years phenicols has been obtained synthetically. What this discovery did was taking within the study of derivatives such as thiamphenicol and florfenicol. According to the legislation in Chile and the European Union, chloramphenicol is exclusively forbidden in animals which can be eaten by people (due to its serious adverse effects) and it possess a minimum required performance limit for the different techniques applying in his detection of 0.3 μg/kg, while thiamphenicol and florfenicol are allowed because they have a maximum residual limit of 50 and 1000 μg/kg respectively. During the last years the florfenicol has been one of the most commonly antimicrobials used by the salmon Industry, mainly for his spectrum of action and effectiveness. Giving the structural similarity of these 3 phenicols plus the lack of information concerning to the synthesis and contaminants from the main agent used in the salmon Industry. It is possible that some traces of chloramphenicol and/or thiamphenicol may be present in pharmaceutical products which contain florfenicol as the active ingredient. The aim of this research was to determinate phenicols from the level residues in raw materials and pharmaceutical products which contain florfenicol. The quantification of florfenicol, chloramphenicol and thiamphenicol was performed by LC-MS/MS. The first step to develop the spectrum was to take them from the first and second order and fractionation parameters. Subsequently, it has developed and optimized a chromatographic method for the quantification of these 3 phenicols from the abbesses of matrix. It also was including the acquisition and optimization of spectra of first and second order and fractionation parameters for florfenicol amine, taking this into consideration for future phenicols studies for the determination in tissues of salmon. Finally, it has develop, optimize and validate the detection of florfenicol, thiamphenicol and chloramphenicol in certain pharmaceutical products which are used in veterinary of florfenicol by the suggest method. The recovery percentage reach it by the propose method was 100.4 ± 34% or in terms of concentration and 1.004 ± 0.3 ng/mL, showing a 33.9% uncertainty. The method was applied to pharmaceutical products from real samples of veterinary use of florfenicol, showing a negative chloramphenicol in all cases, but positive to thiamphenicol in concentrations from 0.419 to 0.475% for raw materials and between 0.207 and 0.319% for finished products. In the light of the results obtained in this research, it is inevitable to implement a demanding control of the detection of impurities in veterinary drugs due to the high impact, both public health and economic level, which is projected in exportations of meat through the human consumption

Orientador: Felix Guillermo Reyes Reyes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-08T03:43:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Siqueira_SilviaReginaRocha_M.pdf: 660520 bytes, checksum: 8e60644e9f793df1016b6380bbaca796 (MD5) Previous issue date: 2007 / Mestrado / Mestre em Ciência de Alimentos

O sistema microssomal hepático citocromo P- 450, compreendendo famílias e subfamílias de isoenzimas, atua no metabolismo de um grande número de substratos endógenos e exógenos e desempenha um papel central na biotransformação dos fármacos e na ativação metabólica de compostos carcinogênicos. Muitos fármacos têm a capacidade de aumentar a atividade enzimática do sistema citocromo P - 450. Outros fármacos diminuem a atividade enzimática do sistema. O primeiro fenômeno é denominado de indução enzimática e o segundo é definido como inibição enzimática. A interação medicamentosa envolvendo fármacos anestésicos tem, na alteração do tempo de sono, a principal e mais visível alteração in vivo. No presente trabalho foi estudada a influência da administração prévia de fenilbutazona e de cloranfenicol sobre a anestesia promovida pela associação de xilazina e cetamina em ratos, cães e porcos. A fenilbutazona é um antiinflamatório com propriedades indutoras semelhantes às do fenobarbital, embora em menor intensidade. O cloranfenicol é um antibiótico com reconhecida capacidade inibidora, prolongando a ação de drogas como barbitúricos, fenitoína, varfarina e digoxina. Tanto a fenilbutazona quanto o cloranfenicol são de uso freqüente no exercício da clínica em medicina veterinária. Xilazina é um agonista adrenérgico alfa-2 com propriedades analgésicas, sedativas e miorrelaxantes. A cetamina é um composto de ação cataléptica, analgésica e anestésica que produz uma anestesia denominada de dissociativa. A xilazina e a cetamina são muito utilizadas em associação para promover anestesia em diferentes espécies animais. Nesse estudo foram utilizados 54 ratos Wistar, 18 cães sem raça definida e 18 porcos cruzamento Landrace - Duroc, todos de sexo masculino. Os ratos foram separados em três grupos denominados controle (CTL), fenilbutazona (FBZ) e cloranfenicol (CLF), com 18 animais em cada grupo. Os cães e porcos foram divididos em três grupos, em cada espécie, com seis animais em cada grupo, tendo sido também denominados CTL, FBZ e CLF. No primeiro dia do experimento, os animais dos grupos CTL, FBZ e CLF foram anestesiados, recebendo xilazina, na dose de 20 mg . kg-1 para os ratos e 1 mg . kg-1 para os cães e porcos, e cetamina na dose de 50 mg . kg-1 para os ratos e 1 O mg . kg- 1 para os cães e porcos. Os fármacos foram administrados simultaneamente, na mesma seringa, por via intraperitonial (i.p.) nos ratos e por via intravenosa (i.v.) nos cães e porcos. Foram avaliados e anotados os tempos até a perda do reflexo de endireitamento e até a sua recuperação nos ratos, cães e porcos. Nesta última espécie foi registrado o tempo de retomo à ambulação. A partir do sexto dia, os animais receberam doses diárias de solução fisiológica ou fenilbutazona ou cloranfenicol, durante cinco dias. A fenilbutazona foi administrada na dose de 125 mg . kg-1 para os ratos e na dose de 25 mg . kg-1 para os cães e porcos . O cloranfenicol foi administrado na dose de 100 mg . kg-1 para os ratos e na dose de 50 mg . kg-1 para os cães e porcos. A fenilbutazona e o cloranfenicol foram administrados por via i.p. nos ratos e porcos e por via i.v. nos cães. A solução fisiológica foi administrada nos animais do grupo CTL, por via i. v .• nos cães e por via i.p. nos ratos e porcos. No décimo dia foram repetidos os procedimentos e as avaliações do primeiro dia e sacrificados todos os animais. Os fígados dos ratos foram pesados e reunidos em pool por grupo. Os fígados dos cães e porcos foram processados individualmente. Foram preparados microssomas hepáticos (GUENGERICH, 1994) e determinadas a concentração de proteínas hepáticas (LOWRY et a/., 1951), a concentração de citocromo P - 450 (OMURA & SATO, 1964a) e a velocidade de redução de NADPH- citocromo C (PHILLPS & LANGDON, 1962). Os dados foram analisados estatisticamente por ANOVA , teste de Student - Newman- Keuls e teste de Pearson. O nível de significância foi de a= 0,05. Os resultados revelaram que a fenilbutazona diminuiu o tempo de anestesia nos ratos, sem alteração nas outras duas espécies, e o cloranfenicol aumentou o tempo de anestesia nos ratos e cães, mas não nos porcos. A média dos pesos dos fígados dos ratos do grupo FBZ foi mais elevada do que a dos demais grupos. A velocidade de redução de NADPH - citocromo C foi maior no grupo FBZ nas três espécies, indicando uma situação de indução enzimática. Paralelamente, houve uma menor velocidade de redução no grupo CLF nos porcos. Foi verificada correlação inversa entre o tempo de anestesia e a atividade enzimática em ratos e porcos. / The cytochrome P - 450 system, including families and sub-families of isoenzymes, catalyzes the metabolism of a great number of endogenous and exogenous substracts and plays a central role on drug detoxification and carcinogen metabolic activation. Many drugs have the ability of increasing cytochrome P - 450 system enzymatic activity. Others decrease enzymatic activity. The first phenomenon is called enzymatic induction and the second one is defined as enzymatic inhibition. Sleeping time is the most visible in vivo alteration in drug - interaction involving anesthetic agents. lnfluence of previous administration of phenylbutazone and chloramphenicol on xylazine - ketamine anesthesia in rats, dogs and pigs was studied. Beth phenylbutazone and chloramphenicol have been widely used in veterinary practice. Phenylbutazone is an antiinflammatory compound and a phenobarbital-like enzyme inductor but less potent than the barbiturate. Chloramphenicol is an antibiotic with inhibitory properties on the cytochrome P - 450 system increasing the effects of drugs like barbiturates, phenytoin, warfarin and digoxin. Xylazine hydrochloride is an a.2 - adrenergic agonist with analgesic, sedative and muscle relaxant properties. Ketamine hydrochloride is a compound with cataleptic, analgesic and anesthetic properties producing the so called dissociative anesthesia. Xylazine and ketamine have been used in combination to promete anesthesia in different animal species. Fifty four rats were divided into three groups designed as control (CTL), phenylbutazone (PBZ), and chloramphenicol (CHP), with 18 rats in each group. Dogs (n=18) and pigs (n=18) were divided into three groups on each species, called CTL group, PBZ group, and CHP group. Each group was formed by six animais. On the first day of the experiment the animais of CTL, PBZ and CHP groups were anesthetized with xylazine (20 mg. kg-1 i.p., rats; 1 mg . kg-1 i. v., dogs and pigs) and ketamine (50 mg . kg-1 i.p., rats; 10 mg . kg-1 i.v., dogs and pigs). Latency and duration of righting reflex loss were recorded in rats, dogs and pigs. Walking ability was recorded in pigs. From the day six to day 10 the animais of CTL, PBZ and CHP groups were injected with physiologic solution, phenylbutazone (125 mg . kg-1 i.p., rats; 25 mg . kg-1 i. v., dogs; 25 mg . kg-1 i.p., pigs) and chloramphenicol (100 mg . kg-1 i.p., rats; 50 mg . kg-1 i. v. , dogs; 50 mg . kg-1 i.p., pigs). Physiologic solution was administered i. v in dogs and i.p. in rats and pigs of CTL group. The procedures of the first day were repeated on the tenth day and the animais were killed. Rat livers were weighed and pooled by group and experiment. Dog and pig livers were processed individually. Hepatic microssomes were prepared according GUENGERICH (1994). Liver protein concentration was determined by the method described by LOWRY et a/. in 1951. Cytochrome P- 450 concentration was measured according OMURA & SATO ( 1964a). NADPH - cytochrome C reduction reactions were processed as described by PHILLIPS & LANGDON (1962). Data were analyzed by ANOVA, Student- Newman- Keuls and Pearson tests. The levei of significance was established in a.= 0.05. Sleeping time was decreased by phenylbutazone in rats and increased by chloramphenicol in rats and dogs. Livers were heavier in PBZ group than in the other groups. Reduction of NADPH - cytochrome C was increased in PBZ group in ali species, indicating enzymatic induction. The same parameter showed a decrease in CHP group in pigs. There were inverse correlation between sleeping time and enzymatic activity in rats and pigs.

O sistema microssomal hepático citocromo P- 450, compreendendo famílias e subfamílias de isoenzimas, atua no metabolismo de um grande número de substratos endógenos e exógenos e desempenha um papel central na biotransformação dos fármacos e na ativação metabólica de compostos carcinogênicos. Muitos fármacos têm a capacidade de aumentar a atividade enzimática do sistema citocromo P - 450. Outros fármacos diminuem a atividade enzimática do sistema. O primeiro fenômeno é denominado de indução enzimática e o segundo é definido como inibição enzimática. A interação medicamentosa envolvendo fármacos anestésicos tem, na alteração do tempo de sono, a principal e mais visível alteração in vivo. No presente trabalho foi estudada a influência da administração prévia de fenilbutazona e de cloranfenicol sobre a anestesia promovida pela associação de xilazina e cetamina em ratos, cães e porcos. A fenilbutazona é um antiinflamatório com propriedades indutoras semelhantes às do fenobarbital, embora em menor intensidade. O cloranfenicol é um antibiótico com reconhecida capacidade inibidora, prolongando a ação de drogas como barbitúricos, fenitoína, varfarina e digoxina. Tanto a fenilbutazona quanto o cloranfenicol são de uso freqüente no exercício da clínica em medicina veterinária. Xilazina é um agonista adrenérgico alfa-2 com propriedades analgésicas, sedativas e miorrelaxantes. A cetamina é um composto de ação cataléptica, analgésica e anestésica que produz uma anestesia denominada de dissociativa. A xilazina e a cetamina são muito utilizadas em associação para promover anestesia em diferentes espécies animais. Nesse estudo foram utilizados 54 ratos Wistar, 18 cães sem raça definida e 18 porcos cruzamento Landrace - Duroc, todos de sexo masculino. Os ratos foram separados em três grupos denominados controle (CTL), fenilbutazona (FBZ) e cloranfenicol (CLF), com 18 animais em cada grupo. Os cães e porcos foram divididos em três grupos, em cada espécie, com seis animais em cada grupo, tendo sido também denominados CTL, FBZ e CLF. No primeiro dia do experimento, os animais dos grupos CTL, FBZ e CLF foram anestesiados, recebendo xilazina, na dose de 20 mg . kg-1 para os ratos e 1 mg . kg-1 para os cães e porcos, e cetamina na dose de 50 mg . kg-1 para os ratos e 1 O mg . kg- 1 para os cães e porcos. Os fármacos foram administrados simultaneamente, na mesma seringa, por via intraperitonial (i.p.) nos ratos e por via intravenosa (i.v.) nos cães e porcos. Foram avaliados e anotados os tempos até a perda do reflexo de endireitamento e até a sua recuperação nos ratos, cães e porcos. Nesta última espécie foi registrado o tempo de retomo à ambulação. A partir do sexto dia, os animais receberam doses diárias de solução fisiológica ou fenilbutazona ou cloranfenicol, durante cinco dias. A fenilbutazona foi administrada na dose de 125 mg . kg-1 para os ratos e na dose de 25 mg . kg-1 para os cães e porcos . O cloranfenicol foi administrado na dose de 100 mg . kg-1 para os ratos e na dose de 50 mg . kg-1 para os cães e porcos. A fenilbutazona e o cloranfenicol foram administrados por via i.p. nos ratos e porcos e por via i.v. nos cães. A solução fisiológica foi administrada nos animais do grupo CTL, por via i. v .• nos cães e por via i.p. nos ratos e porcos. No décimo dia foram repetidos os procedimentos e as avaliações do primeiro dia e sacrificados todos os animais. Os fígados dos ratos foram pesados e reunidos em pool por grupo. Os fígados dos cães e porcos foram processados individualmente. Foram preparados microssomas hepáticos (GUENGERICH, 1994) e determinadas a concentração de proteínas hepáticas (LOWRY et a/., 1951), a concentração de citocromo P - 450 (OMURA & SATO, 1964a) e a velocidade de redução de NADPH- citocromo C (PHILLPS & LANGDON, 1962). Os dados foram analisados estatisticamente por ANOVA , teste de Student - Newman- Keuls e teste de Pearson. O nível de significância foi de a= 0,05. Os resultados revelaram que a fenilbutazona diminuiu o tempo de anestesia nos ratos, sem alteração nas outras duas espécies, e o cloranfenicol aumentou o tempo de anestesia nos ratos e cães, mas não nos porcos. A média dos pesos dos fígados dos ratos do grupo FBZ foi mais elevada do que a dos demais grupos. A velocidade de redução de NADPH - citocromo C foi maior no grupo FBZ nas três espécies, indicando uma situação de indução enzimática. Paralelamente, houve uma menor velocidade de redução no grupo CLF nos porcos. Foi verificada correlação inversa entre o tempo de anestesia e a atividade enzimática em ratos e porcos. / The cytochrome P - 450 system, including families and sub-families of isoenzymes, catalyzes the metabolism of a great number of endogenous and exogenous substracts and plays a central role on drug detoxification and carcinogen metabolic activation. Many drugs have the ability of increasing cytochrome P - 450 system enzymatic activity. Others decrease enzymatic activity. The first phenomenon is called enzymatic induction and the second one is defined as enzymatic inhibition. Sleeping time is the most visible in vivo alteration in drug - interaction involving anesthetic agents. lnfluence of previous administration of phenylbutazone and chloramphenicol on xylazine - ketamine anesthesia in rats, dogs and pigs was studied. Beth phenylbutazone and chloramphenicol have been widely used in veterinary practice. Phenylbutazone is an antiinflammatory compound and a phenobarbital-like enzyme inductor but less potent than the barbiturate. Chloramphenicol is an antibiotic with inhibitory properties on the cytochrome P - 450 system increasing the effects of drugs like barbiturates, phenytoin, warfarin and digoxin. Xylazine hydrochloride is an a.2 - adrenergic agonist with analgesic, sedative and muscle relaxant properties. Ketamine hydrochloride is a compound with cataleptic, analgesic and anesthetic properties producing the so called dissociative anesthesia. Xylazine and ketamine have been used in combination to promete anesthesia in different animal species. Fifty four rats were divided into three groups designed as control (CTL), phenylbutazone (PBZ), and chloramphenicol (CHP), with 18 rats in each group. Dogs (n=18) and pigs (n=18) were divided into three groups on each species, called CTL group, PBZ group, and CHP group. Each group was formed by six animais. On the first day of the experiment the animais of CTL, PBZ and CHP groups were anesthetized with xylazine (20 mg. kg-1 i.p., rats; 1 mg . kg-1 i. v., dogs and pigs) and ketamine (50 mg . kg-1 i.p., rats; 10 mg . kg-1 i.v., dogs and pigs). Latency and duration of righting reflex loss were recorded in rats, dogs and pigs. Walking ability was recorded in pigs. From the day six to day 10 the animais of CTL, PBZ and CHP groups were injected with physiologic solution, phenylbutazone (125 mg . kg-1 i.p., rats; 25 mg . kg-1 i. v., dogs; 25 mg . kg-1 i.p., pigs) and chloramphenicol (100 mg . kg-1 i.p., rats; 50 mg . kg-1 i. v. , dogs; 50 mg . kg-1 i.p., pigs). Physiologic solution was administered i. v in dogs and i.p. in rats and pigs of CTL group. The procedures of the first day were repeated on the tenth day and the animais were killed. Rat livers were weighed and pooled by group and experiment. Dog and pig livers were processed individually. Hepatic microssomes were prepared according GUENGERICH (1994). Liver protein concentration was determined by the method described by LOWRY et a/. in 1951. Cytochrome P- 450 concentration was measured according OMURA & SATO ( 1964a). NADPH - cytochrome C reduction reactions were processed as described by PHILLIPS & LANGDON (1962). Data were analyzed by ANOVA, Student- Newman- Keuls and Pearson tests. The levei of significance was established in a.= 0.05. Sleeping time was decreased by phenylbutazone in rats and increased by chloramphenicol in rats and dogs. Livers were heavier in PBZ group than in the other groups. Reduction of NADPH - cytochrome C was increased in PBZ group in ali species, indicating enzymatic induction. The same parameter showed a decrease in CHP group in pigs. There were inverse correlation between sleeping time and enzymatic activity in rats and pigs.

O sistema microssomal hepático citocromo P- 450, compreendendo famílias e subfamílias de isoenzimas, atua no metabolismo de um grande número de substratos endógenos e exógenos e desempenha um papel central na biotransformação dos fármacos e na ativação metabólica de compostos carcinogênicos. Muitos fármacos têm a capacidade de aumentar a atividade enzimática do sistema citocromo P - 450. Outros fármacos diminuem a atividade enzimática do sistema. O primeiro fenômeno é denominado de indução enzimática e o segundo é definido como inibição enzimática. A interação medicamentosa envolvendo fármacos anestésicos tem, na alteração do tempo de sono, a principal e mais visível alteração in vivo. No presente trabalho foi estudada a influência da administração prévia de fenilbutazona e de cloranfenicol sobre a anestesia promovida pela associação de xilazina e cetamina em ratos, cães e porcos. A fenilbutazona é um antiinflamatório com propriedades indutoras semelhantes às do fenobarbital, embora em menor intensidade. O cloranfenicol é um antibiótico com reconhecida capacidade inibidora, prolongando a ação de drogas como barbitúricos, fenitoína, varfarina e digoxina. Tanto a fenilbutazona quanto o cloranfenicol são de uso freqüente no exercício da clínica em medicina veterinária. Xilazina é um agonista adrenérgico alfa-2 com propriedades analgésicas, sedativas e miorrelaxantes. A cetamina é um composto de ação cataléptica, analgésica e anestésica que produz uma anestesia denominada de dissociativa. A xilazina e a cetamina são muito utilizadas em associação para promover anestesia em diferentes espécies animais. Nesse estudo foram utilizados 54 ratos Wistar, 18 cães sem raça definida e 18 porcos cruzamento Landrace - Duroc, todos de sexo masculino. Os ratos foram separados em três grupos denominados controle (CTL), fenilbutazona (FBZ) e cloranfenicol (CLF), com 18 animais em cada grupo. Os cães e porcos foram divididos em três grupos, em cada espécie, com seis animais em cada grupo, tendo sido também denominados CTL, FBZ e CLF. No primeiro dia do experimento, os animais dos grupos CTL, FBZ e CLF foram anestesiados, recebendo xilazina, na dose de 20 mg . kg-1 para os ratos e 1 mg . kg-1 para os cães e porcos, e cetamina na dose de 50 mg . kg-1 para os ratos e 1 O mg . kg- 1 para os cães e porcos. Os fármacos foram administrados simultaneamente, na mesma seringa, por via intraperitonial (i.p.) nos ratos e por via intravenosa (i.v.) nos cães e porcos. Foram avaliados e anotados os tempos até a perda do reflexo de endireitamento e até a sua recuperação nos ratos, cães e porcos. Nesta última espécie foi registrado o tempo de retomo à ambulação. A partir do sexto dia, os animais receberam doses diárias de solução fisiológica ou fenilbutazona ou cloranfenicol, durante cinco dias. A fenilbutazona foi administrada na dose de 125 mg . kg-1 para os ratos e na dose de 25 mg . kg-1 para os cães e porcos . O cloranfenicol foi administrado na dose de 100 mg . kg-1 para os ratos e na dose de 50 mg . kg-1 para os cães e porcos. A fenilbutazona e o cloranfenicol foram administrados por via i.p. nos ratos e porcos e por via i.v. nos cães. A solução fisiológica foi administrada nos animais do grupo CTL, por via i. v .• nos cães e por via i.p. nos ratos e porcos. No décimo dia foram repetidos os procedimentos e as avaliações do primeiro dia e sacrificados todos os animais. Os fígados dos ratos foram pesados e reunidos em pool por grupo. Os fígados dos cães e porcos foram processados individualmente. Foram preparados microssomas hepáticos (GUENGERICH, 1994) e determinadas a concentração de proteínas hepáticas (LOWRY et a/., 1951), a concentração de citocromo P - 450 (OMURA & SATO, 1964a) e a velocidade de redução de NADPH- citocromo C (PHILLPS & LANGDON, 1962). Os dados foram analisados estatisticamente por ANOVA , teste de Student - Newman- Keuls e teste de Pearson. O nível de significância foi de a= 0,05. Os resultados revelaram que a fenilbutazona diminuiu o tempo de anestesia nos ratos, sem alteração nas outras duas espécies, e o cloranfenicol aumentou o tempo de anestesia nos ratos e cães, mas não nos porcos. A média dos pesos dos fígados dos ratos do grupo FBZ foi mais elevada do que a dos demais grupos. A velocidade de redução de NADPH - citocromo C foi maior no grupo FBZ nas três espécies, indicando uma situação de indução enzimática. Paralelamente, houve uma menor velocidade de redução no grupo CLF nos porcos. Foi verificada correlação inversa entre o tempo de anestesia e a atividade enzimática em ratos e porcos. / The cytochrome P - 450 system, including families and sub-families of isoenzymes, catalyzes the metabolism of a great number of endogenous and exogenous substracts and plays a central role on drug detoxification and carcinogen metabolic activation. Many drugs have the ability of increasing cytochrome P - 450 system enzymatic activity. Others decrease enzymatic activity. The first phenomenon is called enzymatic induction and the second one is defined as enzymatic inhibition. Sleeping time is the most visible in vivo alteration in drug - interaction involving anesthetic agents. lnfluence of previous administration of phenylbutazone and chloramphenicol on xylazine - ketamine anesthesia in rats, dogs and pigs was studied. Beth phenylbutazone and chloramphenicol have been widely used in veterinary practice. Phenylbutazone is an antiinflammatory compound and a phenobarbital-like enzyme inductor but less potent than the barbiturate. Chloramphenicol is an antibiotic with inhibitory properties on the cytochrome P - 450 system increasing the effects of drugs like barbiturates, phenytoin, warfarin and digoxin. Xylazine hydrochloride is an a.2 - adrenergic agonist with analgesic, sedative and muscle relaxant properties. Ketamine hydrochloride is a compound with cataleptic, analgesic and anesthetic properties producing the so called dissociative anesthesia. Xylazine and ketamine have been used in combination to promete anesthesia in different animal species. Fifty four rats were divided into three groups designed as control (CTL), phenylbutazone (PBZ), and chloramphenicol (CHP), with 18 rats in each group. Dogs (n=18) and pigs (n=18) were divided into three groups on each species, called CTL group, PBZ group, and CHP group. Each group was formed by six animais. On the first day of the experiment the animais of CTL, PBZ and CHP groups were anesthetized with xylazine (20 mg. kg-1 i.p., rats; 1 mg . kg-1 i. v., dogs and pigs) and ketamine (50 mg . kg-1 i.p., rats; 10 mg . kg-1 i.v., dogs and pigs). Latency and duration of righting reflex loss were recorded in rats, dogs and pigs. Walking ability was recorded in pigs. From the day six to day 10 the animais of CTL, PBZ and CHP groups were injected with physiologic solution, phenylbutazone (125 mg . kg-1 i.p., rats; 25 mg . kg-1 i. v., dogs; 25 mg . kg-1 i.p., pigs) and chloramphenicol (100 mg . kg-1 i.p., rats; 50 mg . kg-1 i. v. , dogs; 50 mg . kg-1 i.p., pigs). Physiologic solution was administered i. v in dogs and i.p. in rats and pigs of CTL group. The procedures of the first day were repeated on the tenth day and the animais were killed. Rat livers were weighed and pooled by group and experiment. Dog and pig livers were processed individually. Hepatic microssomes were prepared according GUENGERICH (1994). Liver protein concentration was determined by the method described by LOWRY et a/. in 1951. Cytochrome P- 450 concentration was measured according OMURA & SATO ( 1964a). NADPH - cytochrome C reduction reactions were processed as described by PHILLIPS & LANGDON (1962). Data were analyzed by ANOVA, Student- Newman- Keuls and Pearson tests. The levei of significance was established in a.= 0.05. Sleeping time was decreased by phenylbutazone in rats and increased by chloramphenicol in rats and dogs. Livers were heavier in PBZ group than in the other groups. Reduction of NADPH - cytochrome C was increased in PBZ group in ali species, indicating enzymatic induction. The same parameter showed a decrease in CHP group in pigs. There were inverse correlation between sleeping time and enzymatic activity in rats and pigs.

Orientador: Marcelo Alexandre Prado / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-21T00:42:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Valerio_PedroPrates_M.pdf: 2326955 bytes, checksum: bec4ce7e7d6feaf8b1dae322ddf0d2c7 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: O crescimento do setor aquícola no Brasil se encontra em evidência. Em 2010 o volume produtivo foi maior que 479.390 toneladas, apresentando incrementos de 15,3%, em relação à produção de 2009, e 31,2%, em relação ao triênio 2008-2010. Neste mesmo ano de 2010, a aquicultura continental brasileira registrou volumes produtivos na ordem de 394.340 toneladas, das quais 63,4% foram representadas pela soma de tilápia e carpa. Na piscicultura nacional e mundial, principalmente em regiões tropicais, a tilápia representa uma das espécies mais indicadas para o cultivo intensivo. Dados da Balança Comercial de Pescados apontam que em 2005 o volume de exportação de tilápia brasileira já se aproximava de 314,8 toneladas. Em 2010 o montante de pescado brasileiro exportado se aproximou de US$ 263 milhões. Neste período os principais países importadores foram EUA, Europa e Ásia. A Comunidade Européia estabelece barreiras à exportação do pescado brasileiro, na busca pelo atendimento a exigências quanto à comprovação de teores de contaminantes, tais quais antibióticos, em produtos importados. Quanto ao cloranfenicol, a preocupação se relaciona à proibição de seu uso em animais destinados ao consumo humano, baseada em evidências toxicológicas como a ocorrência de anemia aplástica. Outro fator que contribui para a imposição de barreiras à exportação nacional é a falta de dados analíticos relacionados a pescados brasileiros. Para determinação analítica de Cloranfenicol, o método de cromatografia líquida com detecção por espectrometria de massas (CL-EM) é exigido em função de sua sensibilidade e seletividade. Métodos rápidos e eficientes se fazem necessários. Perante tais necessidades, este trabalho desenvolveu e validou uma metodologia analítica para determinação quantitativa de resíduos de cloranfenicol em pescado. O procedimento de extração apresentou inúmeras vantagens: é rápido, direto, apresenta baixo custo, e exclui etapas adicionais de limpeza (como extração em fase sólida). Ainda, utiliza pequenas quantidades de amostra e de solvente. Na etapa de separação e detecção foi empregada a técnica cromatografia líquida de alta eficiência, acoplada à espectrometria de massas em "tandem¿ com ionização por "electrospray¿ (CLAE-ESI/EM/EM). O método se adéqua à Comissão de Decisão 2002/657/EC quanto ao número de pontos de identificação requeridos pela para substâncias com tolerância zero. O tempo de corrida cromatográfica foi igual a 9 minutos. O método é linear na faixa entre 0,03µg/kg e 0,33µg/kg, além de preciso, e exato. Recuperações variaram entre 91,33 e 108,00%. A transição de quantificação 321.9>152.1 apresentou LQ igual a 0,03µg/kg, sendo o LMDR requerido pela Commission Decision 2003/181/EC = 0,30µg/kg / Abstract: The growth of the aquaculture industry in Brazil is in evidence. In 2010, domestic production was greater than 479,390 tons, showing an increase of 15.3% compared to 2009 production, and of 31.2% compared to the period 2008-2010. In the same year, the Brazilian continental aquaculture recorded production volumes of around 394,340 tonnes, of which 63.4% were represented by the sum of tilapia and carp. Tilapia is one of the most suitable species for intensive fish farming. In 2005 the export volume of Brazilian Tilapia had already approached 314.8 tons. . In 2010 Brazil exported U.S. $ 263 million in fish. The main importers were U.S.A., Europe and Asia. The European Community establishes barriers to Brazilian exports of fish. There is a need of meeting requirements of laboratory tests in order to show levels of antibiotics in certain products. The concern in relation to chloramphenicol relates to the prohibition of its use in animals intended for human consumption, due to toxicological factors such aplastic anemia. Another factor that contributes to the imposition of trade barriers is the lack of available data concerning its presence in Brazilian fishes. For the determination of chloramphenicol in fishes, the method LC-MS (liquid chromatography with detection by mass spectrometry) is required due to its sensitivity and selectivity. Methods for the analysis of chloramphenicol should be related to speed and efficiency. Given these needs, this study developed and validated an analytical method for quantitative determination of chloramphenicol residues in fish. The extraction procedure has shown several advantages: is fast, direct, is inexpensive and eliminate additional cleanup steps (i.e. solid phase extraction). What is more, requires low amounts of sample and of solvents. For the separation and detection steps, HPLCESI/ MS/MS has been employed. The method is adequate for the number of identification points required by the Commission Decision 2002/657/EC for substances with zero tolerance,. In chromatography, the run time was equal to 9 minutes. The method is linear in the range between 0.03µg/kg and 0.33µg/kg. It is also precise, and accurate. Recoveries ranged between 91.33 and 108.00%. The quantification transition 321.9>152.1 showed a LOD and LOQ of 0.03µg/kg. The MLPR required by Commission Decision 2003/181/EC is of 0.30mg / kg / Mestrado / Ciência de Alimentos / Mestre em Ciência de Alimentos