O conceito de odontologia minimamente invasiva implica na remoção da dentina infectada, preservando o máximo possível as estruturas dentárias remanescentes sadias. O laser de Er:YAG pode ser usado na remoção seletiva de lesões de cárie em dentes decíduos, promovendo maior conforto para os pacientes pediátricos, devido à ausência de pressão, vibração e ruído produzido pelo método convencional. O objetivo do presente ensaio clínico randomizado (split mouth) foi avaliar a eficiência e eficácia do laser de Er:YAG para remoção seletiva de lesões de cárie em molares decíduos, análise microbiológica da dentina afetada e clínica das restaurações após o período de um ano. Os dentes das crianças (n=29) foram randomizados em dois grupos: (I) laser de Er:YAG (250 mJ/4 Hz) (II) método convencional (baixa rotação). A eficiência dos tratamentos (tempo necessário para remoção do tecido cariado) foi avaliada pela contagem do tempo empregado na remoção seletiva de lesões de cárie nos molares decíduos. A eficácia (capacidade de remoção do tecido cariado) durante a remoção seletiva de lesões de cárie foi realizada por meio de teste cego, quando o examinador empregou avaliação visual e tátil da dentina. A análise microbiológica foi realizada através da contagem de Streptococcus mutans e Lactobacillus sp encontrados na dentina afetada das cavidades. Para a análise clínica das restaurações utilizou-se o critério USPHS modificado que inclui retenção, descoloração marginal, cárie secundária e adaptação marginal, juntamente com a fotografia dos dentes restaurados, sete dias após a realização das restaurações e novamente, após um ano. Todas as cavidades foram restauradas empregando o sistema restaurador Adper Single Bond 2/Filtek Z350. Os dados obtidos foram analisados pelo t-test, Mann-Whitney e Kruskal-Wallis com nível de significância de 5%. O laser de Er:YAG foi menos eficiente e apresentou a mesma eficácia que o método convencional durante a remoção seletiva de lesões de cárie na parede pulpar dos molares decíduos. Nas paredes circundantes o método convencional foi mais eficaz. Independente do método empregado, a dentina afetada encontrada na parede pulpar dos molares decíduos apresentou similar quantidade de Streptococcus mutans e Lactobacillus sp. As restaurações realizadas foram clinicamente aceitáveis pelo critério USPHS modificado no período de um ano. Dessa forma, pôde-se concluir que a remoção seletiva de lesões de cárie utilizando o laser de Er:YAG não influenciou no comportamento clínico das restaurações realizadas. / The concept of minimally invasive dentistry implies the removal of infected dentin preserving as much as possible of the remaining healthy tooth structure. The Er:YAG laser can be used for selective caries removal in deciduous teeth while provide greater comfort to the pediatric patients due to the absence of pressure, vibration and noise produced by the bur preparation. The aim of the present clinical randomized split mouth study was to evaluate the efficiency and effectiveness of an Er:YAG laser for selective caries removal in primary molars, microbiological dentin analysis and clinical restorations after one year period. The childrens teeth (n=29) were randomized into two groups: (I) an Er:YAG laser group (250 mJ/4 Hz) and (II) a bur preparation group (low speed turbine). The efficiency of the treatments (the time necessary for the removal of carious tissue) was evaluated based on the time spent on selective caries removal in the deciduous molars. The effectiveness (caries removal capacity) during the selective caries removal was determined by means of a blind test in which the examiner performed a tactile and visual examination of the dentin. Microbiological analysis was performed by counting the Streptococcus mutans and Lactobacillus sp found in the in the affected dentin cavities. For the clinical analysis of the restorations was used the modified USPHS criteria including retention, marginal discoloration, secondary caries, and marginal adaptation in combination with photographs of restored teeth, seven days after the restorative procedure and again after one year. All cavities were restored with the Adper Single Bond 2/Filtek Z350 system. The obtained data were analyzed by t-test, Mann-Whitney and Kruskal-Wallis with a significance level of 5%. The Er:YAG laser was less efficient and had the same effectiveness as bur preparation during selective caries removal at the pulpal wall of deciduous molars. In the surrounding walls, bur preparation was the more effective method. Regardless of the method employed, the affected dentin found in the pulpal wall of deciduous molars had similar amounts of Streptococcus mutans and Lactobacillus sp. The restorations were clinically accepted by the modified USPHS criteria over a one year period. Thus, it can be concluded that selective caries removal using an Er:YAG laser has no influence on the clinical behavior of restorations.

O objetivo deste estudo foi avaliar a resistência de união à dentina de primeiros e segundos molares decíduos de sistemas adesivos baseados no condicionamento ácido total e autocondicionantes e analisar a interface de união adesiva sob microscopia eletrônica de varredura. Amostras de dentina de 35 a 65% de distância pulpar (dentina intermediária) foram obtidas do terço médio das faces vestibular e lingual/palatina de 108 molares decíduos, mediante corte com disco diamantado de dupla-face, sob refrigeração. Posteriormente, as superfícies dentinárias foram polidas com lixas de carboneto de silício de granulação 400 e 600. Cinco sistemas adesivos foram empregados nas amostras dos primeiros e segundos molares (n=15/grupo): Adper Single Bond; Prime & Bond NT; AdheSE; Clearfil SE Bond; Adper Prompt L-Pop. Os corpos de prova foram confeccionados com a resina composta Filtek Z250, com uma área de adesão de 2 mm de diâmetro. Após 24 hs de armazenagem em água destilada a 37ºC, fez-se o ensaio de tração a 0,5 mm/min. Na análise da interface de união adesiva entre sistema adesivo e dentina, 50 amostras foram preparadas com os mesmos materiais descritos acima (n=5/grupo). Não foram observadas diferenças estatisticamente significantes entre primeiros (16,02±5,23 MPa) e segundos (16,03±5,05 MPa) molares (ANOVA:p=0,2721). Os valores médios em MPa obtidos para os sistemas adesivos testados foram de 14,32±3,57 (Adper Single Bond), 15,65±3,70 (Prime & Bond NT), 19,47±7,09 (AdheSE), 17,14±5,35 (Clearfil SE Bond) e 14,22±3,20 (Adper Prompt L-Pop). O sistema adesivo AdheSE apresentou o maior valor e diferença estatisticamente significante com os demais grupos (Tukey=3,47), com exceção do Clearfil SE Bond, com o qual não diferiu estatisticamente. Nas demais comparações não foram encontradas diferenças estatísticas significativas. A análise ao microscópio eletrônico de varredura demonstrou a formação de camada híbrida e “tags” em todos os sistemas adesivos e nos dois tipos dentários / The aim of this study was to evaluate bond strength of self-etching and total-etching adhesive systems to dentin of first and second primary molars and to analyze the adhesive interface under scanning electron microscopy. Dentin samples pulp distant 35% to 65% (intermediate dentin) were obtained from buccal and lingual surfaces at the middle third of the crown of 108 primary molars by sectioning with a diamond-impregnated disc under water cooling. Dentin surfaces were polished with 400 and 600-grit silicon carbide paper under running water. Five adhesive systems were tested on the first and second primary molar surfaces (n=15/group): Adper Single Bond; Prime & Bond NT; AdheSE; Clearfil SE Bond; Adper Prompt L-Pop. Inverted, truncated cones of resin composite (Filtek Z250) were built with a 2.0 mm bonding diameter. After 24-hour storage in distilled water at 37°C, the specimens were submited to the tensile test at a crosshead speed of 0.5 mm/min. To analyze adhesive interface 50 samples were prepared with the same protocol described above (n=5/group). No differences between first (16.02±5.23 MPa) and second (16.03±5.05 MPa) primary molars bond strength values could be observed (ANOVA:P=0.2721). Bond strength mean values registered in MPa obtained were 14.32±3.57 (Adper Single Bond), 15.65±3.70 (Prime & Bond NT), 19.47±7.09 (AdheSE), 17.14 ±5.35 (Clearfil SE Bond) and 14.22±3.20 (Adper Prompt L-Pop). AdheSE adhesive system presented the greatest bond strength values statistically different to the other groups (Tukey=3.47), while no statistically significant difference was observed for Clearfil SE Bond. In the other comparisons no differences were found. Scanning electron microscopy analysis showed the presence of hybrid layer and tags in all adhesive systems on both dentin types

O objetivo deste estudo foi de tentar isolar e cultivar células da polpa de dentes decíduos humanos hígidos com diferentes graus de rizólise e avaliá-las após a expansão in vitro para parâmetros apresentados por células-tronco. Para tanto, o tecido pulpar foi obtido a partir de 30 dentes de crianças de 6 a 12 anos. A exodontia dos dentes foi indicada pelo cirurgião-dentista responsável pelo tratamento da criança. Os responsáveis pelos pacientes assinaram um termo de doação de material biológico aprovado pelo comitê de ética da UFRGS. Do total de dentes, 21 estavam em processo avançado de rizólise (grupo I), sendo que 17 possuíam raiz totalmente reabsorvida e 4 apresentavam cerca de de raiz residual. Os 9 dentes restantes não apresentavam reabsorção visível (grupo II). Todos os dentes extraídos foram imersos em meio de cultura para o transporte ao laboratório. Na capela de fluxo laminar, o tecido pulpar foi removido e incubado com colagenase tipo I e submetido a dissociação mecânica. A suspensão obtida foi semeada em placa de 12 poços e o meio de cultura trocado após 24 horas e após a cada 4 dias até a confluência de 90% ser atingida, quando eram realizadas as passagens. Na quinta e décima passagens, as células foram avaliadas pela citometria de fluxo quanto a seu fenótipo para CD29, CD34, CD44, CD45, CD90, CD117, CD133, CD146, CD184, STRO-1 e HLA-DR e para determinar a presença/ausência da expressão gênica de OCT4, por meio de RT-PCR. Nas mesmas passagens, as células foram submetidas a avaliação do seu crescimento in vitro e foram induzidas à diferenciação adipogênica, osteogênica e condrogênica. O isolamento das células foi considerado com sucesso em 25 amostras nas quais células aderidas foram verificadas após 24h. Apenas 17 destas atingiram confluência de 90%. Não foi possível estabelecer cultura do grupo II (n=9). O estabelecimento das culturas e a capacidade de proliferação foram independentes da quantidade de tecido pulpar remanescente coletado. As células nas quinta e décima passagens foram positivas para CD29, CD44 e CD90 (>95%) e para a expressão gênica de OCT-4. Positividade moderada foi vista para CD117 e CD133 e expressão inferior a 3% para CD34, CD45, HLA-DR, CD184 e STRO-1 em todas as análises. Foi pequena também, a marcação de CD146. O CD146 está relacionado com as células-tronco localizadas nos pericitos, sendo descrito como possível nicho das células-tronco pulpares. Todas as culturas foram capazes de diferenciação nas 3 linhagens celulares citadas. Portanto, as células isoladas eram células-tronco, pois foram aderentes ao plástico, positivas para marcadores característicos de células-tronco mesenquimais e pluripotentes. Considerando os baixos níveis de expressão de CD146, nós podemos sugerir que o nicho perivascular não é o único provedor das células-tronco pulpares. A facilidade de obtenção das células parece estar ligada ao processo de rizólise, visto que as células do tecido pulpar do grupo I apresentaram-se capazes de proliferação in vitro, enquanto que no grupo II esta não foi suficiente para permitir o estabelecimento das culturas. / The aim of this study was to isolate and grow cells from the pulp of human sound deciduous teeth with different levels of resorption, and evaluate stem cell parameters after growing them in vitro. Pulp tissue was removed from 30 different patients, aged from 6 to 12. A free informed term of consent was signed by the patient’s next of kin, approved by UFRGS’s Ethical Committee. From all the teeth, 21 were in advanced levels of resorption (group I): 17 had completely reabsorbed roots and 4 had ⅓ of residual roots. The 9 teeth left did not show any visible re-absorption (group II). The teeth were immersed in culture medium to be transported to the lab. In aseptic conditions, pulp tissue was removed, incubated with type I collagenase and mechanically dissociated. The suspension was seeded onto 12 well plates and the medium was changed every 4 days until the culture reached 90% confluence, when a passage was performed. The phenotype of the cells was analyzed on fifth and tenth passages, by flow cytometry for the following markers: CD29, CD34, CD44, CD45, CD90, CD117, CD133, CD146, CD184, STRO-1 and HLA-DR; and RT-PCR for OCT-4. On the same passages, cells were differentiated into adipocytes, osteoblasts and chondrocytes. Cell isolation was successful in 25 samples, where adherent cells were observed after 24h. Only 17 of these samples reached 90% confluence. It was not possible to establish cell culture from group II teeth (n=9). Cell growth and ability to proliferate in vitro were not dependent on the amount of pulp tissue that was collected. Cells on both fifth and tenth passages were positive for CD29, CD44 and CD90 (>95%) and also for the expression of OCT-4. Moderate labelling was observed for CD117 and CD133, while an expression lower than 3% for CD34, CD45, HLA-DR, CD 184 and STRO-1 was detected. Low amounts of CD146 were found in all analysis. CD146 is related to pericytes stem cells and therefore can be pulp stem cells niche. All cultures were able differentiate into all 3 cell types. According to these findings, the isolated pulp cells can be considered stem cells: they were adherent to plastic, positive for stem cell related markers and pluripotent. Considering the cells expressed low levels of CD146, we can infer that the perivascular niche isn’t the only source of pulpar stem cells. The easiness to obtain cells seems to be related to the root resorption process, because the cells from group I were able to proliferate in vitro, while group II cells were not.

As evidências, até então disponíveis, revelam o sucesso de tipos diferentes de abordagem conservadora de lesões de cárie profundas e as reações do complexo dentino-pulpar, entre elas a formação de dentina reacional. O objetivo do presente estudo foi avaliar histologicamente o tecido pulpar de dentes decíduos humanos submetidos a diferentes abordagens conservadora. A amostra foi composta por 25 molares decíduos, divididos em 5 grupos, sendo os primeiros tratados com remoção total de tecido cariado sem exposição pulpar (RTTC), remoção parcial de tecido cariado em sessão única (RPTC) e tratamento expectante (TE), além dos controles positivo (molares hígidos) e negativo (molares com lesão de cárie ativa profunda em dentina sem tratamento restaurador). Foi realizada a quantificação de dentina reacional, da presença ou não de inflamação e reabsorção pulpar e uma análise descritiva da morfologia pulpar através da observação de cada lâmina ao microscópio. Não foi encontrada diferença estatisticamente significativa entre os grupos, entretanto houve maior formação de dentina reacional no grupo de RPTC, nos levando a entender que o tratamento menos invasivo pode ser uma alternativa terapêutica definitiva para o tratamento das lesões profundas de cárie em dentina de dentes decíduos. / The evidence available so far shows the success of the conservative approach of deep carious lesions and the reactions of the pulp-dentin complex, including the formation of reactionary dentin. The aim of this study was to evaluate histologically the pulp tissue of human deciduous teeth undergoing different conservative treatments. The sample was composed of 25 primary molars, divided into 5 groups, the first being treated with total caries removal without pulp exposure (TCR), partial caries removal in one session (PCR) and stepwise excavation (SW), and positive controls (sound molars) and negative (molars with active deep caries lesion without restorative treatment). Quantification of reactive dentin was performed, the presence or absence of resorption and inflammation and pulp descriptive analysis of the morphology of pulp through observation of each slide under a microscope. There was no statistically significant difference between the groups, but there was more reactionary dentin formation in PCR group, leading us to understand that the less invasive treatment may be an alternative therapy for the definitive treatment of deep caries lesions in dentin of deciduous teeth.

Resumo: O objetivo do trabalho foi avaliar o efeito da endotoxina associada ao formocresol em tecidos periapicais de dentes de macaco, por meio de avaliação histológica. Foram utilizados 36 pré-molares de 3 macacos, que após a abertura coronária e biopulpectomia, foram preenchidos com diferentes medicamentos: Grupo I (12 dentes): mistura de endotoxina/formocresol; Grupo II (15 dentes): endotoxina e curativo de formocresol; Grupo III (controle - 9 dentes): endotoxina. Decorridos 55 dias, os animais foram sacrificados, as peças removidas e submetidas a processamento histológico. Os resultados demonstraram que a associação endotoxina e formocresol, sendo ela na forma de mistura (grupo I) ou por introdução de endotoxina no canal e curativo de formocresol (grupo II) ocasionaram desenvolvimento de inflamação periapical severa, enquanto que a endotoxina sozinha (grupo III) provocou reação periapical moderada. De acordo com a análise estatística não houve diferença nos resultados entre o grupo I e grupo II. E foi observada diferença estatísticamente significante entre os grupos experimentais (grupo I e II) e o grupo controle (grupo III). / Abstract: The aim of this study was to evaluate the effect of endotoxin associated with formocresol on the periapical tissues from monkeys teeth, by using histological evaluation. Thirty-six premolar teeth from 3 monkeys have been used, and after the coronary opening and pulpectomy, they were filled with different medicaments: Group I (12 teeth): endotoxin associated with formocresol; Group II (15 teeth): endotoxin and cotton pullet of formocresol; Group III (control - 9 teeth): endotoxin. After 55 days, the animals were sacrificed and the teeth removed and then submitted to histological processing. The results obtained shown severe inflammation on periapical tissue on group I and on group II, and group III shown moderate inflammation on periapical tissue. / Orientador: Lizeti Toledo de Oliveira Ramalho / Coorientador: Elisa Maria Aparecida Giro / Banca: Denise Madalena Palomaria Spolidorio / Banca: Lourdes Aparecida Martins dos Santos Pinto / Banca: Maria Cristina Borsatto / Banca: Luis José Floriam / Doutor

Orientador: André Luiz Fraga Briso / Resumo: O objetivo deste trabalho foi avaliar a interação ocorrida entre um material ionomérico e o tecido dentinário, quando realizadas duas técnicas de preparo cavitário e diferentes tratamentos superficiais. Para tanto, foram utilizados 40 dentes decíduos cariados (n=10). Os preparos cavitários foram realizados pela técnica convencional, com instrumentos cortantes rotatórios ou pela técnica empregada no Tratamento Restaurador Atraumático (ART), com uso de instrumentos cortantes manuais. Para o condicionamento da superfície dentinária foram utilizados o ácido fosfórico a 37% e o poliacrílico a 12,5%. A restauração dos espécimes foi realizada com o cimento de ionômero de vidro modificado por resina Fuji II LC. O tratamento realizado em cada grupo foi: (1) curetas dentinárias + ácido fosfórico + Fuji II LC; (2) brocas + ácido fosfórico + Fuji II LC; (3) curetas dentinárias + ácido poliacrílico + Fuji II LC; (4) brocas + ácido poliacrílico + Fuji II LC. Após a descalcificação e inclusão em parafina, os espécimes foram seccionados, montados seqüencialmente em lâminas de vidro, corados pelo método de Brown & Brenn e analisados em microscópio óptico com ação de luz polarizada AXIOPHOT (ZEISS) a 400X de aumento. Os resultados foram analisados de forma quantitativa e qualitativa. Os testes estatísticos, Análise de variância a um critério e teste de Tukey ao nível de 5%, mostraram que em relação à área de interação dente-material restaurador, os espécimes do grupo IV não apresentaram formação de tags em tecido dentinário, enquanto que as demais combinações de agentes condicionadores e técnicas possibilitaram a formação de tags com comprimentos semelhantes. A análise qualitativa mostrou que ambos os grupos tratados pela técnica do ART, apresentaram uma superfície cavitária irregular, além de inúmeras colônias bacterianas ao longo de...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objective of the present study was to analyze the interaction between a ionomeric material and dentinal tissue using two cavity preparation techniques and different surface treatments. For this purpose, 40 deciduous teeth (n = 10). Cavity preparation was performed with rotary cutting instruments by the standard technique or by the technique employed in atraumatic restorative treatment (ART) using manual cutting instruments. For conditioning of the dentinal surface 37% phosphoric acid and 12.5% polyacrylic acid were used. Restoration of the specimens was performed with Fuji II LC resin-modified glass ionomer cement, and the groups were submitted to the following treatments: (1) dentinal curettes + phosphoric acid + Fuji II LC; (2) burs + phosphoric acid + Fuji II LC; (3) dentinal curettes + polyacrylic acid + Fuji II LC; (4) burs + polyacrylic acid + Fuji II LC. After decalcification and paraffin embedding, the specimens were sectioned, mounted sequentially on glass slides, stained by the method of Brown and Brenn, and analyzed under an Axiophot (Zeiss) polarized light microscope. The results were analyzed quantitatively and qualitatively by analysis of variance and by the Tukey test. With respect to the interaction area between the tooth and restorative material, specimens of group 4 showed no formation of tags in dentinal tissue, whereas the other combinations of conditioning agents and techniques led to the formation of tags of similar lengths. Qualitative analysis showed an irregular cavity surface in the two groups treated by the ART technique, in addition to numerous bacterial colonies throughout the extension of the cavities. Formation of an interaction area between dentinal tissue and ionomeric material was observed in all groups, with this interaction being more regular and showing less variation in thickness in group 2. / Mestre

O objetivo deste estudo foi de tentar isolar e cultivar células da polpa de dentes decíduos humanos hígidos com diferentes graus de rizólise e avaliá-las após a expansão in vitro para parâmetros apresentados por células-tronco. Para tanto, o tecido pulpar foi obtido a partir de 30 dentes de crianças de 6 a 12 anos. A exodontia dos dentes foi indicada pelo cirurgião-dentista responsável pelo tratamento da criança. Os responsáveis pelos pacientes assinaram um termo de doação de material biológico aprovado pelo comitê de ética da UFRGS. Do total de dentes, 21 estavam em processo avançado de rizólise (grupo I), sendo que 17 possuíam raiz totalmente reabsorvida e 4 apresentavam cerca de de raiz residual. Os 9 dentes restantes não apresentavam reabsorção visível (grupo II). Todos os dentes extraídos foram imersos em meio de cultura para o transporte ao laboratório. Na capela de fluxo laminar, o tecido pulpar foi removido e incubado com colagenase tipo I e submetido a dissociação mecânica. A suspensão obtida foi semeada em placa de 12 poços e o meio de cultura trocado após 24 horas e após a cada 4 dias até a confluência de 90% ser atingida, quando eram realizadas as passagens. Na quinta e décima passagens, as células foram avaliadas pela citometria de fluxo quanto a seu fenótipo para CD29, CD34, CD44, CD45, CD90, CD117, CD133, CD146, CD184, STRO-1 e HLA-DR e para determinar a presença/ausência da expressão gênica de OCT4, por meio de RT-PCR. Nas mesmas passagens, as células foram submetidas a avaliação do seu crescimento in vitro e foram induzidas à diferenciação adipogênica, osteogênica e condrogênica. O isolamento das células foi considerado com sucesso em 25 amostras nas quais células aderidas foram verificadas após 24h. Apenas 17 destas atingiram confluência de 90%. Não foi possível estabelecer cultura do grupo II (n=9). O estabelecimento das culturas e a capacidade de proliferação foram independentes da quantidade de tecido pulpar remanescente coletado. As células nas quinta e décima passagens foram positivas para CD29, CD44 e CD90 (>95%) e para a expressão gênica de OCT-4. Positividade moderada foi vista para CD117 e CD133 e expressão inferior a 3% para CD34, CD45, HLA-DR, CD184 e STRO-1 em todas as análises. Foi pequena também, a marcação de CD146. O CD146 está relacionado com as células-tronco localizadas nos pericitos, sendo descrito como possível nicho das células-tronco pulpares. Todas as culturas foram capazes de diferenciação nas 3 linhagens celulares citadas. Portanto, as células isoladas eram células-tronco, pois foram aderentes ao plástico, positivas para marcadores característicos de células-tronco mesenquimais e pluripotentes. Considerando os baixos níveis de expressão de CD146, nós podemos sugerir que o nicho perivascular não é o único provedor das células-tronco pulpares. A facilidade de obtenção das células parece estar ligada ao processo de rizólise, visto que as células do tecido pulpar do grupo I apresentaram-se capazes de proliferação in vitro, enquanto que no grupo II esta não foi suficiente para permitir o estabelecimento das culturas. / The aim of this study was to isolate and grow cells from the pulp of human sound deciduous teeth with different levels of resorption, and evaluate stem cell parameters after growing them in vitro. Pulp tissue was removed from 30 different patients, aged from 6 to 12. A free informed term of consent was signed by the patient’s next of kin, approved by UFRGS’s Ethical Committee. From all the teeth, 21 were in advanced levels of resorption (group I): 17 had completely reabsorbed roots and 4 had ⅓ of residual roots. The 9 teeth left did not show any visible re-absorption (group II). The teeth were immersed in culture medium to be transported to the lab. In aseptic conditions, pulp tissue was removed, incubated with type I collagenase and mechanically dissociated. The suspension was seeded onto 12 well plates and the medium was changed every 4 days until the culture reached 90% confluence, when a passage was performed. The phenotype of the cells was analyzed on fifth and tenth passages, by flow cytometry for the following markers: CD29, CD34, CD44, CD45, CD90, CD117, CD133, CD146, CD184, STRO-1 and HLA-DR; and RT-PCR for OCT-4. On the same passages, cells were differentiated into adipocytes, osteoblasts and chondrocytes. Cell isolation was successful in 25 samples, where adherent cells were observed after 24h. Only 17 of these samples reached 90% confluence. It was not possible to establish cell culture from group II teeth (n=9). Cell growth and ability to proliferate in vitro were not dependent on the amount of pulp tissue that was collected. Cells on both fifth and tenth passages were positive for CD29, CD44 and CD90 (>95%) and also for the expression of OCT-4. Moderate labelling was observed for CD117 and CD133, while an expression lower than 3% for CD34, CD45, HLA-DR, CD 184 and STRO-1 was detected. Low amounts of CD146 were found in all analysis. CD146 is related to pericytes stem cells and therefore can be pulp stem cells niche. All cultures were able differentiate into all 3 cell types. According to these findings, the isolated pulp cells can be considered stem cells: they were adherent to plastic, positive for stem cell related markers and pluripotent. Considering the cells expressed low levels of CD146, we can infer that the perivascular niche isn’t the only source of pulpar stem cells. The easiness to obtain cells seems to be related to the root resorption process, because the cells from group I were able to proliferate in vitro, while group II cells were not.

As evidências, até então disponíveis, revelam o sucesso de tipos diferentes de abordagem conservadora de lesões de cárie profundas e as reações do complexo dentino-pulpar, entre elas a formação de dentina reacional. O objetivo do presente estudo foi avaliar histologicamente o tecido pulpar de dentes decíduos humanos submetidos a diferentes abordagens conservadora. A amostra foi composta por 25 molares decíduos, divididos em 5 grupos, sendo os primeiros tratados com remoção total de tecido cariado sem exposição pulpar (RTTC), remoção parcial de tecido cariado em sessão única (RPTC) e tratamento expectante (TE), além dos controles positivo (molares hígidos) e negativo (molares com lesão de cárie ativa profunda em dentina sem tratamento restaurador). Foi realizada a quantificação de dentina reacional, da presença ou não de inflamação e reabsorção pulpar e uma análise descritiva da morfologia pulpar através da observação de cada lâmina ao microscópio. Não foi encontrada diferença estatisticamente significativa entre os grupos, entretanto houve maior formação de dentina reacional no grupo de RPTC, nos levando a entender que o tratamento menos invasivo pode ser uma alternativa terapêutica definitiva para o tratamento das lesões profundas de cárie em dentina de dentes decíduos. / The evidence available so far shows the success of the conservative approach of deep carious lesions and the reactions of the pulp-dentin complex, including the formation of reactionary dentin. The aim of this study was to evaluate histologically the pulp tissue of human deciduous teeth undergoing different conservative treatments. The sample was composed of 25 primary molars, divided into 5 groups, the first being treated with total caries removal without pulp exposure (TCR), partial caries removal in one session (PCR) and stepwise excavation (SW), and positive controls (sound molars) and negative (molars with active deep caries lesion without restorative treatment). Quantification of reactive dentin was performed, the presence or absence of resorption and inflammation and pulp descriptive analysis of the morphology of pulp through observation of each slide under a microscope. There was no statistically significant difference between the groups, but there was more reactionary dentin formation in PCR group, leading us to understand that the less invasive treatment may be an alternative therapy for the definitive treatment of deep caries lesions in dentin of deciduous teeth.

O objetivo deste estudo foi de tentar isolar e cultivar células da polpa de dentes decíduos humanos hígidos com diferentes graus de rizólise e avaliá-las após a expansão in vitro para parâmetros apresentados por células-tronco. Para tanto, o tecido pulpar foi obtido a partir de 30 dentes de crianças de 6 a 12 anos. A exodontia dos dentes foi indicada pelo cirurgião-dentista responsável pelo tratamento da criança. Os responsáveis pelos pacientes assinaram um termo de doação de material biológico aprovado pelo comitê de ética da UFRGS. Do total de dentes, 21 estavam em processo avançado de rizólise (grupo I), sendo que 17 possuíam raiz totalmente reabsorvida e 4 apresentavam cerca de de raiz residual. Os 9 dentes restantes não apresentavam reabsorção visível (grupo II). Todos os dentes extraídos foram imersos em meio de cultura para o transporte ao laboratório. Na capela de fluxo laminar, o tecido pulpar foi removido e incubado com colagenase tipo I e submetido a dissociação mecânica. A suspensão obtida foi semeada em placa de 12 poços e o meio de cultura trocado após 24 horas e após a cada 4 dias até a confluência de 90% ser atingida, quando eram realizadas as passagens. Na quinta e décima passagens, as células foram avaliadas pela citometria de fluxo quanto a seu fenótipo para CD29, CD34, CD44, CD45, CD90, CD117, CD133, CD146, CD184, STRO-1 e HLA-DR e para determinar a presença/ausência da expressão gênica de OCT4, por meio de RT-PCR. Nas mesmas passagens, as células foram submetidas a avaliação do seu crescimento in vitro e foram induzidas à diferenciação adipogênica, osteogênica e condrogênica. O isolamento das células foi considerado com sucesso em 25 amostras nas quais células aderidas foram verificadas após 24h. Apenas 17 destas atingiram confluência de 90%. Não foi possível estabelecer cultura do grupo II (n=9). O estabelecimento das culturas e a capacidade de proliferação foram independentes da quantidade de tecido pulpar remanescente coletado. As células nas quinta e décima passagens foram positivas para CD29, CD44 e CD90 (>95%) e para a expressão gênica de OCT-4. Positividade moderada foi vista para CD117 e CD133 e expressão inferior a 3% para CD34, CD45, HLA-DR, CD184 e STRO-1 em todas as análises. Foi pequena também, a marcação de CD146. O CD146 está relacionado com as células-tronco localizadas nos pericitos, sendo descrito como possível nicho das células-tronco pulpares. Todas as culturas foram capazes de diferenciação nas 3 linhagens celulares citadas. Portanto, as células isoladas eram células-tronco, pois foram aderentes ao plástico, positivas para marcadores característicos de células-tronco mesenquimais e pluripotentes. Considerando os baixos níveis de expressão de CD146, nós podemos sugerir que o nicho perivascular não é o único provedor das células-tronco pulpares. A facilidade de obtenção das células parece estar ligada ao processo de rizólise, visto que as células do tecido pulpar do grupo I apresentaram-se capazes de proliferação in vitro, enquanto que no grupo II esta não foi suficiente para permitir o estabelecimento das culturas. / The aim of this study was to isolate and grow cells from the pulp of human sound deciduous teeth with different levels of resorption, and evaluate stem cell parameters after growing them in vitro. Pulp tissue was removed from 30 different patients, aged from 6 to 12. A free informed term of consent was signed by the patient’s next of kin, approved by UFRGS’s Ethical Committee. From all the teeth, 21 were in advanced levels of resorption (group I): 17 had completely reabsorbed roots and 4 had ⅓ of residual roots. The 9 teeth left did not show any visible re-absorption (group II). The teeth were immersed in culture medium to be transported to the lab. In aseptic conditions, pulp tissue was removed, incubated with type I collagenase and mechanically dissociated. The suspension was seeded onto 12 well plates and the medium was changed every 4 days until the culture reached 90% confluence, when a passage was performed. The phenotype of the cells was analyzed on fifth and tenth passages, by flow cytometry for the following markers: CD29, CD34, CD44, CD45, CD90, CD117, CD133, CD146, CD184, STRO-1 and HLA-DR; and RT-PCR for OCT-4. On the same passages, cells were differentiated into adipocytes, osteoblasts and chondrocytes. Cell isolation was successful in 25 samples, where adherent cells were observed after 24h. Only 17 of these samples reached 90% confluence. It was not possible to establish cell culture from group II teeth (n=9). Cell growth and ability to proliferate in vitro were not dependent on the amount of pulp tissue that was collected. Cells on both fifth and tenth passages were positive for CD29, CD44 and CD90 (>95%) and also for the expression of OCT-4. Moderate labelling was observed for CD117 and CD133, while an expression lower than 3% for CD34, CD45, HLA-DR, CD 184 and STRO-1 was detected. Low amounts of CD146 were found in all analysis. CD146 is related to pericytes stem cells and therefore can be pulp stem cells niche. All cultures were able differentiate into all 3 cell types. According to these findings, the isolated pulp cells can be considered stem cells: they were adherent to plastic, positive for stem cell related markers and pluripotent. Considering the cells expressed low levels of CD146, we can infer that the perivascular niche isn’t the only source of pulpar stem cells. The easiness to obtain cells seems to be related to the root resorption process, because the cells from group I were able to proliferate in vitro, while group II cells were not.

O objetivo do presente estudo foi avaliar por meio de observações clínicas e radiográficas a resposta in vivo do complexo dentino-pulpar de dentes decíduos humanos após a realização da remoção parcial e total do tecido cariado. Quarenta e nove molares decíduos de crianças com idades entre 5 a 9 anos foram criteriosamente selecionados. Os dentes foram divididos em dois grupos: Grupo I remoção parcial do tecido cariado; Grupo II remoção total do tecido cariado. As avaliações clínicas e radiográficas foram realizadas nos períodos de 4 a 6 meses do pós-operatório. A reprodutibilidade intra-examinador foi determinada pelo teste Kappa. O teste exato de Fisher foi utilizado para determinar a diferença estatística entre os grupos. Todos os dentes apresentaram sucesso clínico no período de avaliação de 4 a 6 meses. A avaliação radiográfica mostrou 94,2% e 89,6% de sucesso no Grupo I e no Grupo II, respectivamente. Os resultados radiográficos não mostraram diferença estatisticamente significativa nos grupos estudados em nenhum dos critérios avaliados (p>0,05). Com base nos resultados obtidos para amostra estudada, e de acordo com a metodologia aplicada, a remoção parcial do tecido cariado exibiu resultados clínicos e radiográficos satisfatórios, sugerindo que a abordagem minimamente invasiva para remoção de cárie dentária pode substituir a remoção total do tecido cariado quando indicada corretamente. / The aim of this study was to evaluate through clinical and radiographic observation the in vivo response of the dentin pulp complex of human deciduous teeth after the partial and total removal of the caries. Forty-nine deciduous molars in children with the age between 5 and 9 years old were carefully selected. The teeth were divided in two groups: Group I partial removal of caries; Group II total removal of caries. Clinical and radiographic evaluations were performed during the period of 4 to 6 months after procedure. The intra-examiner reproducibility was determined by the Kappa test. The exact fisher test was used to determine the statistical difference between the groups. All teeth showed clinical success in the evaluation period of 4 to 6 months. The radiographic evaluation showed 94,2% and 89,6% of success rate in Group I and in Group II, respectively. Radiographic results did not show statistically significant differences between the studied groups (p>0,05). Based on the obtained results to this sample, and according to the applied methodology, the partial removal of the caries showed satisfactory clinical and radiographic results, suggesting that the minimally invasive approach to the removal of dental caries might substitute the total removal of the caries when correctly indicated.