Hipersensibilidade dentária (HD) é definida como uma dor decorrente de dentina exposta em resposta a fatores intra-bucais. Porém, o papel do biofilme supragengival (BS) no processo de desencadeamento e/ou aumento da HD não é totalmente esclarecido. Este estudo é um ensaio clínico de braço único cujo objetivo foi o de avaliar se, após 4 dias sem medidas mecânicas de controle do BS, a auto-percepção da hipersensibilidade dentinária é influenciada pela presença daquele. Para isto, 74 participantes (28,1±7,3 anos, 48 mulheres), com saúde gengival e ≥ 5 dentes hígidos por quadrante, foram incluídos se apresentassem recessão (REC) e/ou queixa de HD. No dia 0, avaliou-se REC, escala Schiff (ES), Escala Visual Analógica, sensibilidade tátil por meio da sonda Jay (JAY) e Índice de Sangramento Gengival (ISG). Após, realizou-se profilaxia, para remoção de cálculo e/ou BS e os participantes foram orientados a abster-se do controle mecânico do BS por 4 dias e a realizar 2 bochechos/dia (manhã e noite, 1 minuto) com solução de creme dental fluoretado (1g/9ml). No dia 4, após exame usando o Índice de Placa Visível (IPV), índice de Quigley-Hein (QH), EVA e ISG, foi realizada nova profilaxia. Regressão logística por meio de Equações de Estimação Generalizadas foi conduzida, sendo o dente a unidade de análise. Uma média de 6,00±4,08 dentes/paciente apresentou recessão e/ou queixa de HD. Na totalidade dos dentes (n=444), o acúmulo do BS não determinou aumento na queixa de HD. Quando analisados dentes com Schiff≥1 no dia 0 (n=128), a presença de BS associou-se ao aumento na EVA (OR=4,233; p=0,006) independente da presença ou extensão da REC. Conclui-se que o acúmulo do BS aumenta a auto-percepção de HD. / Dental hypersensitivity (HD) is defined as a pain arising from exposed dentin in response to intra-buccal factors. However, the role of the supragingival biofilm (BS) in the process of triggering and / or increasing HD is not fully understood. This study is a single-arm clinical trial whose objective was to evaluate whether, after 4 days without mechanical measures of BS control, the self-perception of dentin hypersensitivity is influenced by the presence of that. Seventy-four participants (28.1 ± 7.3 years, 48 women) with gingival health and ≥ 5 healthy teeth per quadrant were included if they presented recession (REC) and / or HD complaint. At day 0, REC, Schiff scale (ES), Visual Analog Scale tactile sensitivity by means of the Jay (JAY) probe and Gingival Bleeding Index (GBI) were performed. After that, prophylaxis was performed, for calculation and / or BS removal, and participants were instructed to abstain from BS mechanical control for 4 days and to perform 2 mouthwashes / day (morning and night, 1 minute) with a fluoride toothpaste slurry (1g / 9ml). On day 4, after examination using the Visible Plaque Index (IPV), Quigley-Hein Index (QH), EVA and GBI, a new prophylaxis was performed. Logistic regression using Generalized Estimation Equations was conducted, with the tooth being the unit of analysis. An average of 6.00 ± 4.08 teeth/patient presented recession and / or complaint of HD. In all teeth (n = 444), the accumulation of BS did not increase HD complaint. When teeth with Schiff≥1 on day 0 were (n = 128), the presence of BS was associated with an increase in VAS (OR = 4,233; p = 0.006) regardless of the presence or extent of REC. It is concluded that the accumulation of BS increases the self-perception of HD

Orientador: Marlise Inêz Klein / Resumo: A cárie dentária é um problema de saúde pública mundial causada por uma interação entre dieta rica em açúcar e microrganismos em biofilmes dentais. Abordagens para controlar esses microrganismos em biofilmes são necessárias. Portanto, o objetivo foi avaliar potencial antimicrobiano (cultura planctônica) e antibiofilme de doze extratos de Casearia Sylvestris (0,50 mg/mL) de diferentes biomas brasileiros (Mata Atlântica, Cerrado, Caatinga, Pampa e Pantanal) e variedades (sylvestris, lingua e intermediária) contra duas espécies encontradas em biofilmes cariogênicos (Streptococcus mutans e Candida albicans). A caracterização química dos extratos brutos foi feita via cromatografia. A atividade antimicrobiana foi determinada pela população microbiana (UFC/mL) enquanto a atividade antibiofilme pela população microbiana (UFC/mL) e biomassa dos biofilmes tratados. Para os extratos ativos para S. mutans, foi avaliado o efeito na formação inicial da matriz de glucanos (atividade de GtfB), o desprendimento após a adesão desta bactéria à película salivar e à matriz inicial de glucanos e citotoxicicidade via ensaio MTT. Também foi avaliado o potencial antimicrobiano contra S. mutans de três frações (metanol, acetato de etila e hexano; 0,25 mg/mL) oriundas dos doze extratos. Três extratos do bioma Mata Atlântica e variedade sylvestris reduziram em >50% (ou >3 logs) as contagens de células viáveis de S. mutans (vs. veículo; p <0,0001), enquanto dois extratos, pertencentes ao mesmo bioma e va... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Dental caries is a worldwide public health problem caused by an interaction between a diet rich in sugar and microorganisms in dental biofilms. Approaches to control these microorganisms in biofilms are necessary. Therefore, the objective of this study was to evaluate the antimicrobial (planktonic) and antibiofilm potential of twelve Casearia sylvestris extracts (0.50 mg/mL) from different Brazilian biomes (Atlantic Forest, Cerrado, Caatinga, Pampa and Pantanal) and variety (sylvestris, lingua and intermediate) against two species found in cariogenic biofilms (Streptococcus mutans and Candida albicans). The chemical characterization of crude extracts was done via chromatography. The antimicrobial activity was determined by the viable microbial population (CFU/mL) and the antibiofilm activity by the viable microbial population (CFU/mL) and biomass of the biofilms treated. For the extracts active for S. mutans, the effect on the initial formation of the glucan matrix (GtfB activity), the release after adhesion of this bacterium to the salivary film and the initial matrix of glucans and cytotoxicity via the MTT assay was evaluated. In addition, the antimicrobial potential against S. mutans of three fractions (methanol, ethyl acetate and hexane, 0.25 mg/mL) from the twelve extracts was also evaluated. Three extracts of the Atlantic Forest biome and sylvestris variety reduced the counts of viable S. mutans cells (vs. vehicle, p <0.0001) by >50% (or >3 logs), while two extracts bel... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Marlise Inêz Klein / Resumo: A cárie dentária é uma doença dependente de biofilme, da dieta e fatores de hospedeiro. O biofilme é uma comunidade microbiana dinâmica, coberta pela matriz extracelular (MEC). Em biofilmes cariogênicos, a MEC rica em exopolissacarídeos proporciona microambientes ácidos, causando desmineralização do esmalte. Este estudo avaliou a função de DNA extracelular (eDNA) e ácido lipoteicóico (ALT) nas propriedades estruturais e funcionais da MEC de biofilmes cariogênicos. Biofilmes monoespécie de Streptococcus mutans UA159 (cepa parental ou mutantes knockout) e mistos (UA159 cepa parental ou mutantes, Actinomyces naeslundii ATCC 12104 e Streptococcus gordonii DL-1) foram formados em discos de hidroxiapatita com película salivar, em meio com saliva e 0,1% sacarose, alternado com 0,5% sacarose+1% amido (37°C/5% CO2). O pH do meio de cultura foi verificado a cada troca. Para modular componentes da MEC foram utilizadas cepas mutantes de S. mutans para os genes lytTS (∆SMu.525 e ∆SMu.526 - eDNA), operon dltABCD (∆SMu.1538 e ∆SMu.1541 - ALT) e gtfB (exopolissacarídeos insolúveis). A população microbiana foi avaliada longitudinalmente. Nas idades do biofilme 67 e 115 h, os biofilmes foram processados para avaliar a biomassa, as proteínas totais, e os componentes da matriz: eDNA, ALT, proteínas e exopolissacarídeos solúveis (WSP) e insolúveis (ASP) em água. Os dados foram analisados com ANOVA um critério e teste de Tukey (α=0,05). Na presença de 0,5% sacarose+1% amido, o pH do meio tornou-se... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Dental caries is a disease dependent of biofilm, diet and host factors. Biofilm is a dynamic microbial community enmeshed by an extracellular matrix (ECM). In cariogenic biofilms, the ECM rich in exopolysacharides provide acidic microenvironments that cause demineralization of enamel. The present study evaluated the role of extracellular DNA (eDNA) and lipoteichoic acid (LTA) in the structural and functional properties of the matrix of cariogenic biofilm. Single-species biofilms of Streptococcus mutans UA159 (parental or knockout strains) and mixed-species (UA159 parental or mutant strains, Actinomyces naeslundii ATCC 12104 and Streptococcus gordonii DL-1) were grown onto saliva-coated hydroxyapatite discs, in medium with saliva and 0.1% sucrose, alternating with 0.5% sucrose + 1% starch (37°C / 5%CO2). The pH of spent media was verified at each medium change. The S. mutans knockout mutant strains of genes lytTS (ΔSMu.525 and ΔSMu.526 - eDNA), operon dltABCD (ΔSMu.1538 and ΔSMu.1541 - LTA) and gtfB (insoluble exopolysaccharide) were used to modulate ECM' components. The microbial population was evaluated longitudinaly. At 67 and 115 h, biofilms were processed to assess biomass, total protein and ECM components: eDNA, LTA, soluble proteins, and water soluble (WSP) and insoluble (ASP) exopolysaccharides. The data were analyzed by ANOVA one-way and Tukey test (α=0.05). In the presence of 0.5% sucrose + 1% starch the pH of spent media became more acid. During the initial stages of mixed-species biofilm development, S. gordonii prevail (p<0.05); the proportion of the three species was similar at 67 h, and S. mutans becomes the dominant species over time (p<0.05), independently of ECM' components modulation. The biomass and the total protein content of single- and mixed-species biofilms usually showed significant increases over time (p<0.05)... (Complete abstract electronic access below) / Mestre

Orientador: Marlise Inêz Klein / Resumo: Streptococcus mutans orquestra a formação de biofilmes cariogênicos através da produção da matriz extracelular que contém exopolissacarídeos (EPS), DNA extracelular (eDNA) e ácidos lipoteicóicos (LTA). EPS são um marcador de virulência para cárie, mas não está claro como os genes associados com eDNA (lytS e lytT) e LTA (dltA e dltD) afetam a virulência de S. mutans. Portanto, avaliou-se como os genes lytST, dltAD e gtfB (EPS-insolúveis) afetariam o desenvolvimento de lesões cariosas em ratos e a sobrevivência de larvas (Galleria mellonella) após infecção sistêmica e para esclarecer sua contribuição na patogenicidade dessa bactéria. Ainda, avaliou-se o efeito dos tratamentos tópicos com miricetina (afeta a síntese de EPS), composto 1771 (modula o metabolismo do LTA) e flúor (prevenção da cárie) sobre biofilmes in vitro de S. mutans. Alimentou-se os ratos com dieta cariogênica e inoculou-se com cepa parental UA159 e cepas com deleção de genes ∆lytS, ∆dltD e ΔgtfB (n=14). Após 5 semanas, avaliou-se as populações microbianas (cultivável total e S. mutans) e as lesões de cárie. Injetou-se a cepa parental e as cepas com deleção de genes ΔgtfB, ΔlytS, ΔlytT, ΔdltA e ΔdltD na hemocele de larvas e registrou-se a sobrevivência das larvas longitudinalmente (n=10). Formou-se biofilmes de S. mutans sobre discos de hidroxiapatita revestidos com película salivar e realizou-se tratamentos tópicos duas vezes ao dia: miricetina (Mir), composto 1771, flúor (F) Mir+1771, Mir+F, 1771+F, Mir+1771+... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Streptococcus mutans orchestrates the cariogenic biofilms formation through the production of an extracellular matrix that contains exopolysaccharides (EPS), extracellular DNA (eDNA), and lipoteichoic acids (LTA). EPS is a virulence marker of dental caries, but it is unclear how genes associated with eDNA (lytS and lytT) and LTA (dltA and dltD) affect S. mutans virulence. Therefore, this study evaluated how the genes lytST, dltAD and gtfB (insoluble EPS) affected the development of carious lesions in rats and the survival of larvae (Galleria mellonella) after systemic infection to clarify its contribution to the pathogenicity of S. mutans. Also, it assessed the effect of topical treatments with myricetin (affects EPS synthesis), compound 1771 (modulates LTA metabolism) and fluoride (caries prevention) on in vitro S. mutans biofilms. The rats received a cariogenic diet and were inoculated with the parental strain UA159 and its strains with deletion of genes ΔlytS, ΔdltD, and ΔgtfB (n=14). After five weeks, viable microbial populations (total cultivable and S. mutans) and caries lesions were evaluated. Larvae were inoculated by intra-hemocoel injection with the parental strain and deletion strains ΔgtfB, ΔlytS, ΔlytT, ΔdltA, and ΔdltD, and larval survival was recorded longitudinally (n=10). S. mutans in vitro biofilms were formed on saliva-coated hydroxyapatite discs and topically treated twice-daily: Myricetin (Myr), Compound 1771, Fluoride (F), Myr+1771, Myr+F, 1771+F, Myr+17... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Syfte: Syftet med studien är att utföra en metodutveckling där individuella skenor framställs för att möjliggöra en standardiserad mätning av plackansamling på titanfixturers ytor samtidigt som det ska ge möjlighet för att bibehålla god munhygien.   Material och metod: Sjuttio titanfixturer ytbehandlades på tre sätt: sandblästring, etsning och implantoplastik. Studien involverade elva deltagare och det framställdes elva gipsmodeller utifrån avtryck. Tolv individuella skenor utformades med modelleringsvax med hänsyn till varje deltagares bettförhållanden. Kallpolymeriserad ortokryl användes vid framställning av skenor och cylindrar. Totalt framställdes sjuttio cylindrar, där två öppningar skapades. För vardera individuella skena innefattades sex fixturer, en från varje behandlingsmetod. Fixturerna placerades enligt en randomisera mall som innefattade sex olika variationer. Den tolfte skenan utgick inte ifrån mallen utan där placerades fyra fixturer, två av implantoplastik, en etsad och en blästrad. Skenorna lämnades ut till de frivilliga deltagarna och användes under tre dygn.   Resultat: Metodutvecklingen för att mäta plackansamling på olika ytbehandlade fixturer med hjälp av individuella skenor i förhållande till god munhygien, gick att genomföra. Resultaten visade att den råa ytan efter sandblästring hade högst plackansamling (0,604 mm), medan implantoplastik hade lägst plackansamling (0,342 mm).  Slutsats: Inom ramen för föreliggande studie kan följande slutsats dras: Genom framställning av individuella skenor är det möjligt att mäta plackansamlingen på etsade, blästrade och implantoplastik-ytbehandlade titanfixturer. Resultaten uppvisar även en tydlig indikation på att passform och komfort är en viktig faktor för deltagarnas medverkan. / Purpose: The purpose of this study is to perform a method development where individual splints are produce to enable a standardized measurements of plaque accumulation on the surfaces of titanium fixtures, while allowing to maintain good oral hygiene.    Material and method: Seventy titanium fixtures were surface-treated in three ways; sandblasting, etching, and implantoplasty. The study involved eleven participants, and eleven gypsum models were created. Twelve individual splints were designed using modeling wax, taking into consideration each participant's occlusal conditions. Cold-polymerized orthocryl was used to fabricate the splints and cylinder. A total of seventy cylinders were prepared, each with two openings. Each individual splint included six fixtures, one from each treatment method. The fixture placement followed a randomized pattern, comprising six different variations. The twelfth splint deviated from the randomized pattern and contained four fixtures: two from implantoplasty, one etched, and one sandblasted.    Results: The method development for measuring plaque accumulation on different surface-treated fixtures using individual splints in relation to good oral hygiene, was successfully conducted. The results demonstrated that the rough surface following sandblasting exhibited the highest plaque accumulation (0,604 mm), whereas implantoplasty showed the lowest plaque accumulation (0,342 mm).    Conclusion: Within the scope of this study, the following conclusion can be drawn: By individual splints, it is possible to measure plaque accumulation on etched, sandblasted, and implantoplasty-treated titanium fixtures. The results show a clear indication that fit, and comfort are important factors for participant’s compliance.

O objetivo do presente estudo foi avaliar, in vitro, o efeito de diferentes tempos de pré-irradiação do fotossensibilizador na terapia fotodinâmica em biofilmes formados por Streptococcus mutans e Candida albicans, por meio da avaliação da carga microbiana. Os fatores em estudo foram: tempos de pré-irradiação do fotossensibilizador em 3 níveis (1, 2 ou 5 minutos). Para o controle do biofilme dentário cariogênico com aPDT foi utilizado o azul de metileno (0,01%) associado ao laser de diodo (&lambda;=660 nm). O digluconato de clorexidina (CHX a 0,12%) e a solução salina foram utilizados como controle positivo e negativo, respectivamente. O delineamento do estudo foi realizado em blocos completos e casualizados, sendo a amostra composta por 15 culturas de biofilmes de S. mutans, divididas aleatoriamente em 5 grupos e 15 culturas de C. albicans, também divididas em 5 grupos. O experimento foi realizado em triplicata (n=3) e as variáveis de resposta foram obtidas por meio de análise quantitativa da viabilidade bacteriana, expressa em unidades formadoras de colônia (UFC) por mm2 da área do espécime. Os dados obtidos foram analisados com o auxílio do teste one-way ANOVA e pós-teste de Tukey. Todas as análises foram efetuadas por meio do programa Graph Pad Prism 4.0, com nível de significância de 5%. Para o grupo de S. mutans, apenas a solução salina apresentou diferença estatisticamente significante quando comparada aos demais tratamentos (p<0.05), ou seja, o tratamento com aPDT, independentemente do tempo de irradiação aplicado, foi semelhante ao tratamento com CHX e ambos foram mais eficazes na redução do biofilme cariogênico, em comparação à solução salina. Para o grupo de C. albicans não houve diferença estatística entre os grupos (p>0.05). Portanto, pode-se concluir que o tratamento com aPDT diminuiu o número de UFCs de S. Mutans de forma semelhante à CHX, independentemente do tempo de pré-irradiação aplicado. Não foi possível constatar nenhum efeito desta terapia e dos diferentes tempos de pré-irradiação sobre o biofilme de C. albicans. Desta forma, o tempo de pré-irradiação de 1 minuto pode ser utilizado com o objetivo de reduzir a carga microbiana de S. Mutans. / The aim of the present study was to evaluate, in vitro, the effect of different pre-irradiation times of the photosensitizer in photodynamic therapy in biofilms formed by on by Streptococcus mutans and Candida albicans, through the evaluation of the microbial load. The factors under study were: times of pre-irradiation of the photosensitizer in 3 levels (1, 2 or 5 minutes). For the control of the cariogenic dental biofilm with aPDT, methylene blue (0.01%) was used in association with the diode laser (&lambda;=660 nm). Chlorhexidine digluconate (0.12% CHX) and saline were used as positive and negative controls, respectively. The study design was carried out in complete and randomized blocks. The sample consisted of 15 S. mutans biofilms cultures, randomly divided into 5 groups and 15 C. albicans cultures, also divided into 5 groups. The experiment was performed in triplicate (n = 3) and the response variables were obtained through quantitative analysis of bacterial viability, expressed in colony forming units (CFU) per mm2 of the specimen area. The data were analyzed with the aid of the ANOVA one-way test and Tukey\'s post-test. All analyzes were performed using the Graph Pad Prism 4.0 program, with a significance level of 5%. For the S. mutans group, only the saline solution presented a statistically significant difference when compared to the other treatments (p <0.05), that is, the treatment with aPDT, irrespective of the irradiation time applied, was similar to the treatment with CHX and both were more effective in reducing cariogenic biofilm compared to saline. For the group of C. albicans there was no statistical difference between the groups (p> 0.05). Therefore, it can be concluded that the treatment with aPDT reduced the number of CFUs of S. Mutans in a similar way to CHX, independently of the pre-irradiation time applied. No effect of this therapy or of the different pre-irradiation times on the C. albicans biofilm could be observed. In this way, the pre-irradiation time of 1 minute can be used to reduce the microbial load of S. mutans.

Este estudo in situ investigou o efeito de um bochecho com lactato de cálcio aplicado previamente ao dentifrício fluoretado na desmineralização do esmalte hígido e na remineralização do esmalte com lesão de cárie artificial, bem como na composição da placa bacteriana. Durante 4 fases de 14 dias cada, 10 voluntários utilizaram dispositivos palatinos contendo 4 blocos de esmalte bovino (4X4X2.5mm): dois hígidos que foram submetidos a um baixo desafio cariogênico (H) e dois com lesão de cárie artificial (L) formada in vitro, usandose uma solução tampão de acetato (16 h, 37° C). Três vezes ao dia, logo após as refeições, a solução de sacarose a 20% era gotejada em uma fileira de blocos (H, 3 gotas/bloco), enquanto na outra fileira (L) nada foi realizado. Após 5 minutos de espera, o aparelho retornou a boca e o voluntário bochechou, durante 1 min, 10 mL de solução de lactato de cálcio 150 mM ou água deionizada (placebo). Em seguida, o voluntário removeu o aparelho e gotejou uma solução de dentifrício (1:3) com ou sem flúor (placebo) nos quatro blocos (3 gotas/bloco). Durante 1 minuto, o voluntário escovou seus dentes com o mesmo dentifrício aplicado nos blocos. Ao finalizar o tempo, o aparelho retornou a boca e por fim, enxaguou-se a boca com 10 mL de água da torneira (0,7 ppm F). As alterações do esmalte foram avaliadas pela porcentagem de alteração da dureza (%SMHC), perda mineral (\'delta\' Z) e biópsia básica para remoção de flúor fracamente ligado, solúvel em álcali. A placa bacteriana foi coletada para posterior análise de F e Ca. Os dados foram analisados por ANOVA. O uso do bochecho de Ca previamente ao dentifrício fluoretado, produziu um aumento significativo nas concentrações de F na placa e nos blocos com lesão de cárie artificial, em comparação ao uso apenas do dentifrício fluoretado. Entretanto, o bochecho prévio com Ca, não reduziu a desmineralização. / This in situ blind crossover study investigated the effect of calcium lactate rinse prior to the use fluoride (F) dentifrice on demineralization of the sound enamel and on remineralization of the artificial enamel caries, as well as on the composition of dental biofilm. During 4 phases of 14 days each, 10 volunteers wore palatal appliances containing 4 blocks of bovine enamel (4X4X2.5mm): two sound enamel blocks that were subjected to the low cariogenic challenge (H) and two other enamel blocks with artificial caries lesion (C) formed in vitro, using buffer acetate solution (16h, 37oC). Three times a day, after the meals, the volunteers dripped a fresh 20% w/v sucrose solution on sound enamel, whereas on the carious enamel no treatment was performed. After five minutes, the appliance returned into the mouth and they rinsed with 10 mL of a 150 mM calcium lactate or placebo solution, during 1 minute. In sequence, a solution of fluoride or placebo dentifrice (1:3 w/v) was dripped onto the both blocks. During 1 minute, the volunteers brushed your teeth with 0,3 g of respective dentifrice. After that the time elapsed, the appliance returned into the mouth and they rinsed the mouth with 10 mL of water (0.7 ppm F). The enamel alterations were evaluated by the percentage of surface microhardness change (%SMHC), longitudinal microhardness (% min. vol.) and alcali-soluble F analysis. The dental biofilm formed on the blocks was collected and analyzed for F and Ca. Data were analyzed by ANOVA (p<0,05). The Ca pre-rinse before the use of the F dentifrice produced a significant increase in biofilm F concentrations and in the remineralization of artificial enamel caries, in comparison to fluoride dentifrice alone. However, the Ca pre-rinse did not reduce enamel demineralization.

O objetivo do presente estudo foi avaliar, em aparelhos disjuntores de Haas, a contaminação in situ por estreptococos do grupo mutans, sob a forma de colônias/biofilmes, nas diferentes superfícies (acrílico, fios, bandas e parafusos), com e sem o uso de bochechos com gluconato de clorexidina a 0,12%, por meio de Cultura Microbiana e Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV). Adicionalmente, a corrosão na área da união entre o fio, a solda de prata e a banda dos aparelhos foi avaliada por meio de Estereomicroscopia Ótica, MEV e análise em Espectrometria de Energia Dispersiva (EDS). Foram selecionados 34 pacientes de 7 a 12 anos de idade, que compareceram à clínica de Ortodontia Preventiva da FORP/USP, com necessidade de correção com aparelho disjuntor de Haas por problemas transversais da maxila (mordida cruzada posterior). Em seguida, utilizando uma tabela de números randômicos, os pacientes foram aleatoriamente divididos em dois grupos de 17 indivíduos cada (Grupos I e II). Durante todo o período de permanência dos aparelhos na cavidade bucal, no Grupo I (controle; n=17) os pacientes foram orientados a utilizar dentifrício fluoretado para escovação diária e não empregar bochechos com soluções antimicrobianas. Por outro lado, no Grupo II (experimental; n=17) os pacientes foram orientados a realizar, além da escovação diária com o uso de dentifrício fluoretado, 2 bochechos por semana com solução de gluconato de Clorexidina a 0,12% (Periogard®). Decorridos cerca de 4 meses da permanência na cavidade bucal, os aparelhos foram removidos. Sendo seccionadas, aleatoriamente, partes dos aparelhos constituídas de uma banda com fio soldado, para análise em estereomicroscopia ótica, MEV e EDS. Os resultados em estereomicroscopia foram submetidos à análise estatística por meio do teste de Fisher, com nível de significância de 5%. Em seguida, os aparelhos foram submetidos ao processamento microbiológico, em meio de cultura CaSa B, para contagem das colônias/biofilmes de estreptococos do grupo mutans. O teste estatístico não-paramétrico de Mann-Whitney foi aplicado para verificação de possíveis diferenças entre os grupos, com relação à formação de colônias/biofilmes sobre a superfície das diferentes áreas (parafuso, resina acrílica, bandas, fio vestibular e fio palatino), como também para verificar se havia diferença entre a formação de colônias/biofilmes sobre as superfícies livres (voltadas para a cavidade bucal) e as superfícies não-livres (em contato direto com a mucosa palatina e sulco gengival). O nível de significância adotado foi de 5%. Após cultura microbiana, partes dos aparelhos representativas de cada grupo foram submetidas ao processamento e análise em MEV. Os resultados obtidos evidenciaram que, com relação às colônias/biofilmes das superfícies nãolivres dos Grupos I e II, não houve diferença entre os grupos (p=0,009). No entanto, quando as superfícies livres dos Grupos I e II foram comparadas, evidenciou-se diferença significante entre os 2 grupos, em todas as áreas analisadas (parafuso, resina acrílica e bandas) (p<0,001). Os resultados da cultura microbiana foram confirmados em MEV. A análise em estereomicroscopia ótica evidenciou a presença de áreas de alteração de coloração sugestivas de corrosão na região de solda em contato com a banda e com o fio, em ambos os grupos (p=1). Os picos dos elementos químicos observados em EDS também foram semelhantes em ambos os grupos. Pôde-se concluir que o uso do gluconato de clorexidina a 0,12% (Periogard®), sob a forma de bochecho, apresentou eficácia na redução da formação de colônias/biofilmes nas superfícies livres dos aparelhos disjuntores de Haas, in situ, sem elevação nos níveis de corrosão. / The purpose of this study was to evaluate, in situ, in Haas expanders, the contamination of different surfaces (acrylic resin, wires, bands and screws) by mutans group streptococci colonies/biofilms with and without prescription of 0.12% chlorhexidine gluconate mouthwashes, by means of microbial culture and scanning electron microscopy (SEM). Additionally, the corrosion in the area of union between the appliances wire, silver soldering and band was assessed by optical stereomicroscopy, SEM and energy dispersive spectroscopy (EDS). Thirty-four children aged 7 to 12 years were selected among the patients attending the Preventive Orthodontic Clinic at FORP/USP with need of corrective orthodontics with Haas expander due to transversal problems of the maxilla (posterior crossbite). Thereafter, using a table of random numbers, the patients were randomly assigned to two groups of 17 individuals each (Groups I and II). Throughout the time that the appliances remained in the oral cavity, the patients in Group I (control; n=17) were instructed to use a fluoridated dentifrice for daily toothbrushing and not to use antimicrobial mouthwash solutions. On the other hand, in Group II (experimental; n=17), in addition to daily toothbrushing with a fluoridated dentifrice, mouthwashes with an antimicrobial agent (0.12% chlorhexidine gluconate - Periogard®) were prescribed to the patients. After approximately 4 months of maintenance in the patients mouth, the appliances were retrieved. Thereafter, components of the appliances (consisting of a band with soldered wire) were sectioned at random for analysis under optical stereomicroscopy, SEM and EDS. The results of the optical stereomicroscopy were submitted to statistical analysis using Fisher\'s test at 5% significance level. The appliances were sent to microbiology processing, in CaSa B culture medium, for counting of the number of mutans streptococci colonies/biofilms. Mann-Whitney non-parametric statistical test was applied to verify possible differences between the groups with respect to the formation of colonies/biofilms on the surface of different areas (screw, acrylic resin, bands, buccal wire and palatal wire), as well as to determine whether there were differences between the formation of colonies/biofilms on free surfaces (facing the oral cavity) and non-free surfaces (in direct contact with the palatal mucosa and gingival sulcus). The level of significance was set at 5%. After microbial culture, components of the appliances that were representative of each group were submitted technical processing and SEM analysis. The obtained results showed that there was no statistically significant difference between Groups I and II (p=0.009) regarding the formation of colonies/biofilms on the non-free surfaces. However, when the free surfaces of Groups I and II were compared, statistically significant difference was observed between these groups in all analyzed areas (screw, acrylic resin and bands) (p<0.001). The results of the microbial culture were confirmed by the SEM analysis. The optical stereomicroscopic analysis showed the existence of color alteration suggestive of corrosion in the solder region in contact with the band and with the wire in both groups (p=1). The peaks of chemical elements observed in EDS were also similar in both groups. It may concluded that the use of 0.12% chlorhexidine gluconate mouthwashes (Periogard®) showed efficacy in reducing the formation of colonies/biofilms on the free surfaces of Haas expanders, in situ, without increasing the corrosion levels.

It is well established that biofilm formed on tooth surfaces is the major culprit for caries and periodontal disease development. The critical early event of biofilm formation is the specific interaction of microorganisms with the acquired enamel pellicle. This pellicle is formed from adsorbing proteins from saliva, and perhaps also from gingival crevicular fluid. The purpose of this project was two fold: first, to investigate the extent of serum protein adsorption in a salivary protein environment, and second, to investigate the colonization of salivary pellicles by early microbial colonizers. Hydroxyapatite (HA) was incubated with saliva and serum and adsorbing proteins were identified by LC-ESI-MS/MS. To investigate competition among salivary and serum proteins for adsorption to HA proteins were labeled with specific CyDyes, mixed in various ratios and incubated with HA. The early phase of oral biofilm formation in vivo was studied on teeth exposed to the oral environment. The harvested biofilm samples were analyzed with the Human Oral Microbiome Identification Microarray containing 407 different microbial probes. In the pure saliva- and serum-derived pellicles eighty-two and eighty-four proteins were identified. Concomitant presence of salivary and serum proteins showed that salivary protein adsorbers effectively competed with serum proteins adsorbers for the HA surface. Specifically acidic proline-rich protein, cystatin, statherin and amylase proteins in saliva competed off apolipoprotein, C-reactive protein, peroxiredoxin-1 and albumin. In vivo evidence supported the replacement of serum proteins by salivary proteins. The studies with oral biofilm formed in vivo led to the identification of 92 species with streptococci being the most abundant early colonizers. High frequency detection was furthermore made with Haemophilus parainfluenzae, Gemella haemolysans, Slackia exigua and Rothia species. Eight uncultivated phylotypes were detected. While there is a significant amount of serum protein emanating from the gingival sulcus, their ability to participate in dental pellicle formation is likely reduced in the presence of strong salivary protein adsorbers. Furthermore, the early pellicle colonizers exhibit considerable bacterial diversity and include non-cultivable species. These findings will be helpful in designing target-specific approaches for the prevention of and/or intervention in diseases exhibiting an oral-biofilm-based etiology.

O objetivo do presente estudo foi avaliar, em aparelhos disjuntores de Haas, a contaminação in situ por estreptococos do grupo mutans, sob a forma de colônias/biofilmes, nas diferentes superfícies (acrílico, fios, bandas e parafusos), com e sem o uso de bochechos com gluconato de clorexidina a 0,12%, por meio de Cultura Microbiana e Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV). Adicionalmente, a corrosão na área da união entre o fio, a solda de prata e a banda dos aparelhos foi avaliada por meio de Estereomicroscopia Ótica, MEV e análise em Espectrometria de Energia Dispersiva (EDS). Foram selecionados 34 pacientes de 7 a 12 anos de idade, que compareceram à clínica de Ortodontia Preventiva da FORP/USP, com necessidade de correção com aparelho disjuntor de Haas por problemas transversais da maxila (mordida cruzada posterior). Em seguida, utilizando uma tabela de números randômicos, os pacientes foram aleatoriamente divididos em dois grupos de 17 indivíduos cada (Grupos I e II). Durante todo o período de permanência dos aparelhos na cavidade bucal, no Grupo I (controle; n=17) os pacientes foram orientados a utilizar dentifrício fluoretado para escovação diária e não empregar bochechos com soluções antimicrobianas. Por outro lado, no Grupo II (experimental; n=17) os pacientes foram orientados a realizar, além da escovação diária com o uso de dentifrício fluoretado, 2 bochechos por semana com solução de gluconato de Clorexidina a 0,12% (Periogard®). Decorridos cerca de 4 meses da permanência na cavidade bucal, os aparelhos foram removidos. Sendo seccionadas, aleatoriamente, partes dos aparelhos constituídas de uma banda com fio soldado, para análise em estereomicroscopia ótica, MEV e EDS. Os resultados em estereomicroscopia foram submetidos à análise estatística por meio do teste de Fisher, com nível de significância de 5%. Em seguida, os aparelhos foram submetidos ao processamento microbiológico, em meio de cultura CaSa B, para contagem das colônias/biofilmes de estreptococos do grupo mutans. O teste estatístico não-paramétrico de Mann-Whitney foi aplicado para verificação de possíveis diferenças entre os grupos, com relação à formação de colônias/biofilmes sobre a superfície das diferentes áreas (parafuso, resina acrílica, bandas, fio vestibular e fio palatino), como também para verificar se havia diferença entre a formação de colônias/biofilmes sobre as superfícies livres (voltadas para a cavidade bucal) e as superfícies não-livres (em contato direto com a mucosa palatina e sulco gengival). O nível de significância adotado foi de 5%. Após cultura microbiana, partes dos aparelhos representativas de cada grupo foram submetidas ao processamento e análise em MEV. Os resultados obtidos evidenciaram que, com relação às colônias/biofilmes das superfícies nãolivres dos Grupos I e II, não houve diferença entre os grupos (p=0,009). No entanto, quando as superfícies livres dos Grupos I e II foram comparadas, evidenciou-se diferença significante entre os 2 grupos, em todas as áreas analisadas (parafuso, resina acrílica e bandas) (p<0,001). Os resultados da cultura microbiana foram confirmados em MEV. A análise em estereomicroscopia ótica evidenciou a presença de áreas de alteração de coloração sugestivas de corrosão na região de solda em contato com a banda e com o fio, em ambos os grupos (p=1). Os picos dos elementos químicos observados em EDS também foram semelhantes em ambos os grupos. Pôde-se concluir que o uso do gluconato de clorexidina a 0,12% (Periogard®), sob a forma de bochecho, apresentou eficácia na redução da formação de colônias/biofilmes nas superfícies livres dos aparelhos disjuntores de Haas, in situ, sem elevação nos níveis de corrosão. / The purpose of this study was to evaluate, in situ, in Haas expanders, the contamination of different surfaces (acrylic resin, wires, bands and screws) by mutans group streptococci colonies/biofilms with and without prescription of 0.12% chlorhexidine gluconate mouthwashes, by means of microbial culture and scanning electron microscopy (SEM). Additionally, the corrosion in the area of union between the appliances wire, silver soldering and band was assessed by optical stereomicroscopy, SEM and energy dispersive spectroscopy (EDS). Thirty-four children aged 7 to 12 years were selected among the patients attending the Preventive Orthodontic Clinic at FORP/USP with need of corrective orthodontics with Haas expander due to transversal problems of the maxilla (posterior crossbite). Thereafter, using a table of random numbers, the patients were randomly assigned to two groups of 17 individuals each (Groups I and II). Throughout the time that the appliances remained in the oral cavity, the patients in Group I (control; n=17) were instructed to use a fluoridated dentifrice for daily toothbrushing and not to use antimicrobial mouthwash solutions. On the other hand, in Group II (experimental; n=17), in addition to daily toothbrushing with a fluoridated dentifrice, mouthwashes with an antimicrobial agent (0.12% chlorhexidine gluconate - Periogard®) were prescribed to the patients. After approximately 4 months of maintenance in the patients mouth, the appliances were retrieved. Thereafter, components of the appliances (consisting of a band with soldered wire) were sectioned at random for analysis under optical stereomicroscopy, SEM and EDS. The results of the optical stereomicroscopy were submitted to statistical analysis using Fisher\'s test at 5% significance level. The appliances were sent to microbiology processing, in CaSa B culture medium, for counting of the number of mutans streptococci colonies/biofilms. Mann-Whitney non-parametric statistical test was applied to verify possible differences between the groups with respect to the formation of colonies/biofilms on the surface of different areas (screw, acrylic resin, bands, buccal wire and palatal wire), as well as to determine whether there were differences between the formation of colonies/biofilms on free surfaces (facing the oral cavity) and non-free surfaces (in direct contact with the palatal mucosa and gingival sulcus). The level of significance was set at 5%. After microbial culture, components of the appliances that were representative of each group were submitted technical processing and SEM analysis. The obtained results showed that there was no statistically significant difference between Groups I and II (p=0.009) regarding the formation of colonies/biofilms on the non-free surfaces. However, when the free surfaces of Groups I and II were compared, statistically significant difference was observed between these groups in all analyzed areas (screw, acrylic resin and bands) (p<0.001). The results of the microbial culture were confirmed by the SEM analysis. The optical stereomicroscopic analysis showed the existence of color alteration suggestive of corrosion in the solder region in contact with the band and with the wire in both groups (p=1). The peaks of chemical elements observed in EDS were also similar in both groups. It may concluded that the use of 0.12% chlorhexidine gluconate mouthwashes (Periogard®) showed efficacy in reducing the formation of colonies/biofilms on the free surfaces of Haas expanders, in situ, without increasing the corrosion levels.